惊厥性脑损伤海马内自噬相关蛋白LC3表达情况

目的 探讨神经元自噬相关蛋白LC3在反复惊厥大鼠脑损伤中的表达及其意义. 方法 随机将60只SD大鼠分成对照组和反复惊厥组,其中反复惊厥组根据最后一次惊厥至取材时间的不同(0、3、6、12、24h)分为5个亚组,每组10只.采用戊四氮诱导大鼠惊厥的方法制作模型,每日1次,共7次.采用HE染色检测海马细胞损伤情况,免疫组织化学方法检测大鼠海马内LC3的表达情况. 结果 对照组大鼠海马神经细胞形态正常,萎缩、缺失、细胞核溶解、碎裂等少见；反复惊厥组大鼠海马神经细胞的核浓缩、核碎裂等损伤在6、12、24 h明显高于对照组,以24 h最为显著,两组比较,差异有统计学意义；对照组海马内LC3蛋白弱阳性表达,反复惊厥组LC3蛋白阳性细胞呈密集分布,其表达强度明显高于对照组,两组比较,差异有统计学意义. 结论 大鼠惊厥脑损伤与神经元自噬有关,神经细胞自噬可能会加重惊厥性脑损伤.     

亚硒酸钠对肺癌A549细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3的作用

目的观察亚硒酸钠对肺癌细胞株A549细胞株自噬相关蛋白Beclin1、LC3的作用。方法将人肺癌A549细胞株分为0、0.5、2.5、5.0、8.0μmol/L亚硒酸钠共5组,用不同浓度的亚硒酸钠培养液培养24h、48h后,用免疫细胞化学染色和Western blot印迹法检测亚硒酸钠对自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达的影响。结果人肺癌A549细胞株用不同浓度的亚硒酸钠培养24h,48h后,细胞数量逐渐减少,细胞肿胀,变大变圆,染色质凝集、核固缩并断裂。免疫细胞化学和Western blot印迹法结果均显示:随着亚硒酸钠浓度增加,肺癌A549细胞中Beclin1和LC3蛋白免疫细胞化学染色的平均光密度(MOD)有明显提高(P0.05)。结论亚硒酸钠可以抑制肺癌A549细胞生长,诱导肺癌A549细胞自噬。     

毒死蜱对SD大鼠海马神经元自噬相关蛋白表达的影响

目的:分析毒死蜱对大鼠海马神经元自噬相关蛋白表达的影响,探讨自噬在急性毒死蜱中毒中枢神经损伤中的作用。方法:于2018年10月,将35只雄性清洁级SD大鼠根据观察时间点随机分成7组,即0.5 d、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d组和对照组,每组5只。各观察组采用81.5 mg/kg毒死蜱一次性灌胃处理,对照组给予...     

自噬基因Beclin1过表达诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡的研究

目的:探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达对其体外生长活性的影响。方法:构建自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,将其稳定转染SKOV3细胞,实现Beclin 1在SKOV3中的过表达;用MTT法分析Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,用流式细胞仪检测凋亡和自噬情况,电镜和荧光显微镜下观察自噬现象。结果:pcD-NA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后Beclin 1在mRNA和蛋白水平均高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组。Beclin 1在SKOV3中的稳定过表达后G1期细胞明显增多,S期细胞比例明显减少,细胞增殖受到抑制,凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后MDC标记的自噬囊泡平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在电镜下可见大量自噬囊泡形成。在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC标记的自噬囊泡明显增加。结论:自噬基因Beclin1过表达可诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。     

NF-YA与LC3在卵巢子宫内膜异位囊肿在位内膜中的表达

目的研究核转录因子NF-YA和微管相关蛋白轻链(LC3)在卵巢子宫内膜异位囊肿在位内膜及正常子宫内膜中的表达情况,探讨NF-YA及LC3在卵巢子宫内膜异位囊肿致病机制中的作用及意义。方法选取2015年11月-2016年3月,在中国医科大学附属盛京医院行诊刮术留取的30例卵巢子宫内膜异位囊肿患者在位内膜组织为试验组;另选取20例正常子宫内膜组织为对照组。采用蛋白免疫印迹检测NF-YA和LC3的表达水平。结果 NF-YA在试验组患者中的相对表达量为(0.253±0.099),在对照组患者中的相对表达量为(0.658±0.084),两组差异有统计学意义(P=0.00)。LC3在试验组患者中的相对表达量为(0.375±0.077),在对照组患者中的相对表达量为(0.526±0.044),两组比较差异有统计学意义(P=0.00)。结论NF-YA和LC3的低表达可能是子宫内膜异位症(EM)的致病因素之一,NF-YA可能参与调控自噬基因LC3的表达。     

霉酚酸对肝细胞自噬相关因子表达的影响

目的 比较日本爆发性丙型肝炎病毒1型(hepatitis C virus Japanese fulminant hepatitis-1,HCV JFH-1)感染的Huh7细胞中细胞自噬因子在霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)处理组与对照组的表达差异,探讨MPA对肝细胞自噬相关因子的调节影响.方法 用HCV JFH-1感染Huh7细胞,用5μg/ml的霉酚酸处理细胞24 h,用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)和蛋白免疫印迹法测定细胞内HCV、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated-protein 1 light chain,MAP1-LC3B,简写LC3B)、自噬相关因子3(autophagy-related gene 3,ATG3)和自噬相关因子7(autophagy-related gene 7,ATG7)的信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)和蛋白相对表达量,比较上述因子在处理组和对照组之间的差异.结果 在核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)和蛋白水平上,MPA可以降低HCV在Huh7细胞中的表达并且降低自噬标记物LC3B mRNA和LC3 B-II的蛋白质表达(均有P＜0.001);MPA可以使Huh7细胞中的自噬相关因子 ATG3和ATG7的mRNA和蛋白相对表达量下降(P ＜0.001;P =0.003;P=0.010;P =0.002).结论 MPA可以抑制HCV JFH-1在Huh7细胞中的复制和细胞自噬,并且可以下调自噬因子ATG3和ATG7的表达,推测MPA可能通过调节自噬关键因子表达来抑制细胞自噬从而拮抗HCV的复制.     

自噬活性相关蛋白Cathepsin-D、LC3表达与宫颈鳞状细胞癌新辅助化疗耐药关系的研究

目的:探讨自噬活性相关蛋白Cathepsin-D、LC3表达与宫颈鳞状细胞癌耐药之间的关系。方法:选取宫颈鳞状细胞癌BOMP方案新辅助化疗敏感病例36例和耐药病例54例,应用免疫组织化学方法检测Cathepsin-D、LC3的表达,并对其临床病理参数进行对比分析。结果:Cathepsin-D在敏感组宫颈鳞状细胞癌中的阳性表达率为36%,在耐药组中阳性表达率为77%,差异有统计学意义(P<0.001);其表达水平与分化程度、浸润深度明显相关(r=-0.874,P<0.05和r=0.827,P<0.001),与临床分期、肿瘤体积、淋巴结转移无明显相关(P>0.05);LC3在敏感组宫颈癌中的表达率为87.1%,耐药组阳性表达率为78.5%,差别无统计学意义(P>0.05),其表达水平与肿瘤体积、临床分期明显相关(r=0.915,P<0.05和r=0.789,P<0.001),与分化程度、淋巴结转移、浸润深度之间无明显相关(P>0.05);两者在敏感组表达无相关性,在耐药组的表达存在明显相关(P<0.05)。结论:自噬活性改变参与宫颈鳞状细胞癌的发生发展和BOMP方案新辅助化疗的耐药机制,Cathepsin-D在其中发挥主要作用。     

饮水砷暴露大鼠血清炎症因子及肺泡灌洗液中自噬相关蛋白NBR1与P62的表达

目的观察亚砷酸钠对大鼠血清炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和肺泡灌洗液中自噬相关蛋白NBR1、P62的影响。方法将32只健康SPF级雄性SD大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(超纯水)组和10、100、1 000μg/L亚砷酸钠染毒组,每组8只。采用自由饮用方式染毒,连续染毒28 d。测定大鼠血清中IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α的浓度和肺泡灌洗液中NBR1和P62的水平。结果与对照组比较,各浓度亚砷酸钠染毒组大鼠血清中IL-1β、IL-6的水平和10、100μg/L亚砷酸钠染毒组大鼠血清中IL-8水平及10μg/L亚砷酸钠染毒组大鼠血清中TNF-α水平较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,大鼠血清中IL-6、IL-8和TNF-α的浓度均呈先升高后下降趋势。与对照组比较,100、1 000μg/L亚砷酸钠染毒组大鼠肺泡灌洗液中NBR1的水平和10、100μg/L亚砷酸钠染毒组大鼠肺泡灌洗液中P62的水平较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,大鼠肺泡灌洗液中NBR1、P62的浓度均呈先升高后下降趋势。亚砷酸钠染毒大鼠血清IL-6与肺泡灌洗液中P62呈正相关(r=0.399,P0.05),血清TNF-α与肺泡灌洗液中NBR1呈正相关(r=0.452,P0.05)。结论炎症因子和细胞自噬参与亚砷酸钠致大鼠肺损伤,大鼠肺部损伤可能与细胞自噬受到抑制和炎症因子增多有关。     

MAP1LC3B表达促进结直肠癌侵袭转移的体外研究

目的探讨MAP1LC3B在结直肠癌(CRC)中的表达与侵袭转移及自噬的作用机制。方法采用免疫组织化学方法检测92例结直肠癌组织中MAP1LC3B的表达情况,结合临床病理及随访资料进行分析。体外构建慢病毒pLKO.1-MAP1LC3B-siRNA干扰质粒,转染HCT-116细胞株,对照组转染空质粒;采用MTT和侵袭小室实验检测细胞增殖侵袭能力。免疫荧光观察细胞形态。定量RT-PCR和Western blot方法检测MAP1LC3B、mTOR、ATG5和HIF-1α蛋白表达水平。结果 MAP1LC3B高表达存在于82.6%(76/92)癌组织,高于癌旁组织中的阳性率11.95%(11/92),差异有统计学意义(P<0.05);MAP1LC3B蛋白高表达与肝转移、TNM分期和不良预后具有显著相关性(P<0.05);抑制MAP1LC3B表达降低HCT-116细胞侵袭能力;并促进细胞发生自吞噬;下调mTOR、ATG5和HIF-1α蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MAP1LC3B是CRC新的预后指标;MAP1LC3B调控mTOR、ATG5和HIF-1α表达介导自吞噬的作用分子机制在CRC侵袭转移中起重要作用。     

卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白3表达对颗粒细胞凋亡及卵母细胞发育潜能的影响

目的:探讨卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白3(Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3)表达对颗粒细胞凋亡及卵母细胞发育潜能的影响。方法:收集2016年5月—2017年4月因输卵管性不孕行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕的80例患者的卵巢颗粒细胞,根据妊娠结局分为临床妊娠组40例、未妊娠组40例。采用免疫细胞化学、蛋白质印迹(Western blotting)方法检测2组患者颗粒细胞GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)方法检测2组患者GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3基因表达,并进行相关性分析。结果:GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3在2组颗粒细胞中均有表达,其中临床妊娠组GOLPH3、Bcl-2的表达高于未妊娠组(P0.05),而Bax、Caspase-3的表达低于未妊娠组(P0.05)。相关性分析显示,GOLPH3表达与Bcl-2表达呈显著正相关(P0.001),与Bax、Caspase-3表达呈显著负相关(均P0.001),与优质胚胎数、优质囊胚数、可利用胚胎数呈显著正相关(均P0.001)。结论:卵巢颗粒细胞中GOLPH3表达水平可能通过Bcl-2、Bax、Caspase-3凋亡信号转导通路调控颗粒细胞凋亡作用,并进而对卵母细胞的发育潜能产生影响。     

HT-2毒素对软骨细胞SIRT1及自噬与凋亡通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨HT-2毒素对体外培养软骨细胞沉默信息调节因子1（SIRT1）及自噬与凋亡通路相关蛋白表达的影响。方法:采用体外培养方法,取1~2日龄SD乳鼠第三代软骨细胞,采用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原免疫荧光染色法进行细胞鉴定;CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,根据细胞存活率选取2、4、8 ng/ml HT-2毒素用于后续...     

自噬相关分子Beclin1和LC3在糖尿病足多重耐药金黄色葡萄球菌感染中的作用

目的:探讨自噬相关分子Beclin1和LC3在糖尿病足多重耐药金黄色葡萄球菌感染中的作用。方法:选取2017年3月至12月间杭州市余杭区第一人民医院收治的金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足患者62例为糖尿病足感染组,同期在本院就诊的足部烧伤患者38例为对照组。分离、鉴定金黄色葡萄球菌并进行药敏试验,根据耐药情况将糖尿病足感染...     

血清胃饥饿素摄食抑制因子-1水平与产后抑郁的关系

目的 检测胃饥饿素(Ghrelin)、摄食抑制因子1(nesfatin-1)在待产孕妇血清中表达情况,探讨Ghrelin、nesfatin-1与产后抑郁的相关性.方法 连续收集2018年12月—2019年10月在本院产科住院待产的孕妇140例,于产后42 d进行爱丁堡产后抑郁量表(EPDS)评估抑郁症状,分为抑郁组和对...     

自噬相关基因Beclin1和Atg5在宫颈癌中的表达及临床意义

目的探讨良、恶性宫颈癌及正常宫颈组织中自噬相关基因Beclin1和Atg5的表达情况,分析其在宫颈癌病程发生发展中的作用。方法将广东省廉江市人民医院收治的91例患者分为宫颈癌组、上皮内瘤变组和正常宫颈组,分别取各组宫颈组织并通过western blot、免疫组化及PCR法检测Beclin1和Atg5的表达情况。结果Beclin1和Atg5在宫颈癌组中mRNA和蛋白表达水平均显著低于正常宫颈组和上皮内瘤变组。结论宫颈癌组织中Beclin1和Atg5表达较正常宫颈组织显著下降,提示宫颈癌的发生发展可能与自噬相关基因Beclin1和Atg5的活性降低有关。     

细胞周期蛋白B1和自噬标记蛋白Beclin1在宫颈癌组织中的表达及意义

目的 探讨细胞周期蛋白B1(CCNB1)和自噬标记蛋白Beclin1在宫颈癌组织中的表达及意义。方法 选取2018年1月—2021年6月在台州市第一人民医院妇科住院的60例宫颈癌患者的标本,采用实时荧光定量PCR(RTPCR)法检测60例宫颈癌组织及60例癌旁组织CCNB1 mRNA和Beclin1 mRNA,采用免疫组织化学（SP）法检测宫颈癌组织及癌旁组织中的CCNB1和Beclin1,用SPSS 22.0软件对结果进行统计学分析。结果 与癌旁组织相比较,宫颈癌组织中CCNB1 mRNA表达水平升高（P<0.05）,Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。宫颈癌组织CCNB1阳性率高于癌旁组织（P<0.05）,Beclin1阳性率低于癌旁组织（P<0.05）。分化程度越低、有淋巴结转移、TNM分期越高、浸润深度越深的CCNB1表达越高（P<0.05）,Beclin1表达越低（P<0.05）。结论 CCNB1在宫颈癌组织中表达上调,Beclin1在宫颈癌组织中表达下调,与宫颈癌的发生发展有关。     

邻苯二甲酸二丁酯对大鼠卵巢颗粒细胞中细胞凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)对大鼠卵巢颗粒细胞中细胞凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法体外培养25 d雌性SD大鼠卵巢颗粒细胞,分别加入DBP使终浓度分别(0、5、20、80μmol/L),培养24 h。采用放射免疫方法测定雌二醇(estradiol,E2)和孕酮(progestone,P)的水平;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测卵巢颗粒细胞中Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达。结果 DBP染毒后颗粒细胞分泌的E2及P水平下降,各剂量DBP均可降低颗粒细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P0.05),且表达量与DBP剂量呈反比,同时,DBP可以增加颗粒细胞中Bax mRNA和蛋白的表达(P0.05),且表达量与DBP剂量呈正比。结论 DBP可导致大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,且Bcl-2/Bax比例失调可能是导致其凋亡的机制。     

PI3K在MG132诱导卵巢癌细胞自噬中作用的研究

目的:研究PI3K通路在蛋白酶体抑制剂MG132诱导卵巢癌细胞自噬中的作用。方法:MG132处理多种卵巢癌细胞(SKOV3、OVCAR3、A2870)后,光镜观察胞质内囊泡的形成,吖啶橙(AO)染色观察酸性囊泡的形成,Western blot检测自噬特异性蛋白LC3的变化。PI3K抑制剂(渥曼青霉素与3-MA)联合MG132处理多种卵巢癌细胞后,AO染色及West-ern blot检测自噬的变化。采用shRNA技术下调OVCAR3细胞的Beclin 1表达,MG132处理细胞,AO染色观察酸性囊泡的形成。结果:在多种卵巢癌细胞系中,MG132可诱导酸性囊泡形成及LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化增强,PI3K抑制剂与MG132联合应用与单独应用MG132相比自噬水平无改变。下调卵巢癌细胞中Beclin 1表达后,MG132诱导的囊泡形成无改变。结论:MG132通过PI3K非依赖性途径诱导多种卵巢癌细胞发生自噬。     

微生物感染对稽留流产患者自噬相关蛋白Beclin1、LC3及P62表达水平的影响

目的 探讨微生物感染对稽留流产患者自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及P62表达水平的影响。方法 选取2017年9月-2020年9月海口市妇幼保健院收治稽留流产患者90例,根据患者术前宫颈分泌物感染情况或者血清免疫球蛋白M(IgM)阳性情况分为感染组和未感染组,采用酶联免疫法检测患者术前血清Beclin1、LC3和P62水平,采用蛋白印迹法检测患者流产绒毛组织中Beclin1、LC3和P62蛋白表达情况,使用受试者工作特征曲线(ROC)分析术前血清Beclin1、LC3、P62水平及其联合检测时对微生物感染稽留流产的预测效能。结果 感染组中解脲支原体感染21例(40.38%)、沙眼衣原体18例(34.62%)、TORCH感染13例(25.00%),感染组患者术前血清Beclin1、LC3水平和流产绒毛组织Beclin1、LC3蛋白表达均高于未感染组(P<0.05),而术前血清P62水平和流产绒毛组织P62蛋白表达均低于未感染组(P<0.05);术前血清Beclin1、LC3、P62及其联合检测对感染稽留流产的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.789...     

NRF2通过抑制ROS诱导的自噬减轻卵巢颗粒细胞损伤

通过研究核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2, NRF2)对卵巢颗粒细胞的作用及可能机制, 为预防卵巢早衰提供依据。本文为细胞实验研究设计, 于2022年1—12月在湖南师范大学附属长沙市妇幼保健院的医学实验中心完成。通过4-乙烯基环己烯二环氧(VCD)处理人卵巢颗粒细胞KGN细胞构建颗粒细胞损伤模型。先以不同浓度的VCD处理KGN细胞, 采用细胞计数试剂(CCK-8)检测卵巢细胞增殖情况。CCK8确定半抑制(IC50)后, 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中雌二醇和孕酮的含量, 活性氧(ROS)检测试剂盒检测卵巢细胞中ROS的含量, 实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测NRF2的mRNA表达水平, 免疫印迹检测NRF2的蛋白表达水平。进一步通过慢病毒转染构建NRF2干扰(siNRF2)和过表达(NRF2-OE)细胞模型, 通过检测激素水平、氧化应激指标(ROS、SOD、GSH-Px)和自噬情况(LC3B水平)以分析调控NRF2对VCD处理细胞模型的影响。结果显示, VCD干预后以时间依赖...     

自噬及凋亡因子在慢性氟中毒大鼠肝脏中表达

目的 探讨自噬相关因子LC3A、Beclin-1及凋亡因子Bcl-2、Bax在慢性氟中毒大鼠肝脏中的表达意义。方法 将36只健康SD大鼠按体重随机分为对照组、低氟组、高氟组,分别用含氟量<1 mg/L的自来水和含氟5、50 mg/L的含氟水饲养6个月,观察氟斑牙形成情况;测定尿氟、骨氟含量以及大鼠肝功能;苏木素-伊红染色观察肝脏病理形态学改变;免疫组织化学法检测大鼠肝组织中微管相关蛋白轻链3A （LC3A）、哺乳动物ATG6同源蛋白（Beclin-1）及B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤/白细胞基因伴随蛋白x （Bax）的蛋白表达水平。结果 与对照组比较,低、高氟组大鼠尿氟含量分别为[（2.18±0.14）、（2.40±0.19） mg/L]、骨氟含量分别为[（237.42±18.48）、（248.00±14.72） mg/kg]均明显升高（P<0.05）;染氟组大鼠肝脏肝细胞索排列紊乱,肝细胞肿大,部分肝细胞胞质透亮,呈空泡样改变;与对照组比较,染氟组大鼠血清中谷丙转氨酶活性及谷草转氨酶活性明显升高（P<0.05）;低、高氟组大鼠肝脏LC3A[（35.35±2.71）、（44.10±6.72）]、Beclin-1[（57.56±12.1）、（74.76±18.67）]及Bax[（51.1±9.23）、（62.32±10.3）]蛋白表达明显高于对照组,Bcl-2蛋白表达分别为[（55.18±8.36）、（39.05±6.91）]明显低于对照组（P<0.05）。结论 过量氟可激活大鼠肝组织中自噬和凋亡因子,自噬和凋亡可能共同参与慢性氟中毒所致肝脏损伤的发病过程。