钙通道拮抗剂和钙调素拮抗剂对白血病耐药细胞的耐药基因和细胞内Ca^2＋浓

目的：探讨白血病药细胞的发生机制与细胞内钙离子关系。方法：分别用Ｆｕｒａ－２／Ａｍ方法测定细胞内游离钙浓度及ｄｏｔ杂交法测定细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达，结果：ＣＡｓ有降低肿瘤细胞内Ｃａ＾２＋浓度和降低ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达的作用。ＣａＭＡｓ是无降低Ｃａ＾２＋浓度的作用，但可使ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达降低，从而了Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞的耐药性，结论：细胞内Ｃａ＾２＋浓度的变化可能与ＭＤＲ产生有一定关系；ＣＡｓ     

白血病细胞耐药基因mdr1和多药耐药相关蛋白的表达水平的研究

用ＲＴ－ＰＣＲ方法对５４例不同时期不同类型的白血病患者进行ｍｄｒ１及多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）的检测及１２例Ｐ－ｇｐ免疫组化检测，结果表明：在初发组三者的阳性表达分别为３３．３％、３３．３％和２５％。复发组三者的阳性表达分别为７９．１％、５４．２％和６２．５％。提示复发患者的耐药现象是与ｍｄｒ１、ＭＰＲ和Ｐ－ｇｐ有密切相关的，同时也说明人体内ｍｄｒ１及ＭＲＰ存在一定的内在表达性     

钙调素拮抗剂对镉接触小鼠脑突触小体蛋白质合成的影响

采用体外高速梯度离心分离提取的小鼠脑空触小体,观察钙调素拮抗剂对镉接触突触小体中＾３Ｈ－亮氨酸掺入蛋白质合成的影响。结果表明镉（Ｃｄ）抑制＾３Ｈ－亮氨酸掺入突触小体蛋白质合成,＾３Ｈ－亮氨酸掺入量与镉浓度呈负相关,这一作用可被钙调素拮抗剂氯丙嗪一定程度上拮抗,提示钙调素参与镉的毒性作用机制。     

白血病细胞多药耐药与细胞凋亡的关系

目的 :探讨白血病细胞多药耐药 (MDR)与细胞凋亡的关系。方法 :在体外用化疗药物阿霉素 (ADM)诱导白血病细胞株 K5 6 2 MDR的产生 ,用 As2 O3诱导细胞的凋亡 ,采用流式细胞仪检测细胞表面 P糖蛋白 (P- gp)的表达 ;荧光定量 PCR检测 MDR1 m RNA;通过流式细胞仪检测Anexin- V判断凋亡细胞数量的多少 ;观察 MDR与细胞凋亡的关系。结果 :5 μm ol/ L 的 ADM能诱导 K5 6 2细胞 MDR的产生 ,随着作用时间的延长 ,P- gp/ MDR1 m RNA的表达逐渐升高 ;P- gp/MDR1 m RNA的表达与细胞凋亡呈负相关 (r=0 .6 8,P<0 .0 1 ) ;在 As2 O3作用下 ,细胞凋亡增加的同时 ,P- gp的表达下调。结论 :抗癌药物能诱导白血病细胞 MDR的产生 ,细胞的耐药性与凋亡抑制相关 ,诱导细胞的凋亡能减低白血病细胞的 MDR。     

新型钙调素拮抗剂对体外人脑恶性星形细胞瘤细胞增殖的抑制

采用生长曲线、集落形成试验、蛋白含量测定、超微结构检查、流式细胞术及~3H-TdR掺入试验,观察了新型钙调素持抗剂O-4-Z氧基-丁基-小檗胺[O-(4-ethoxyl-butyl),berb-amine,EBB]对TJ861人脑恶性星形细胞瘤体外细胞系增殖的影响,发现EBB抑制这种细胞的增殖。EBB与化疗药BCNU联合应用有协同作用。     

RNAi对白血病细胞mdr-1基因和多药耐药表型的影响

目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)对慢性粒细胞白血病急变细胞系K562/AO2细胞mdr1基因的抑制和耐药表型的逆转作用。方法:选择合成封闭mdr-1基因的小干扰序列(si-MDR1),以1个碱基突变的si-MDR1-mut为对照序列,在脂质体介导下转染至K562/AO2细胞系。RT-PCR和Western blot检测mdr1 mRNA及P-gp蛋白水平,流式细胞术分析细胞内柔红霉素(daunorubicin,DNR)积累量,并以四甲基唑蓝快速比色法(MTT)反映K562/AO2对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙药物敏感性的变化。结果:实验证实该序列能高效封闭K562/AO2细胞内mdr-1基因表达,增加细胞内化疗药物DNR积累量,增强K562/AO2细胞对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙的敏感性。结论:RNAi可以通过抑制mdr1基因表达,逆转K562/AO2细胞耐药表型。     

多药耐药基因及相关蛋白基因在急性白血病中的表达

多药耐药基因（Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅ,ｍｄｒ１）和多药耐药相关蛋白基因（Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ—ａｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅ,ＭＲＰ）的过度表达是引起急性白血病（ＡＬ）多药耐药（Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒ...     

多药耐药基因多态性与儿童急性淋巴细胞白血病长期生存的相关性

目的：探讨多药耐药基因MDR1基因多态性在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）中的发生情况,及其与患儿长期生存的相关性。方法采用多重单碱基延伸单核苷酸多态性基因分型技术检测176例ALL患儿MDR1 C3435T、C1236T、G2677T／A位点的基因型分布特点,分析其与患儿长期（5年）生存的相关性。结果MDR1 C3435T中C／C、C／T、T／T基因型分别有67、94、15例;MDR1 C1236T中C／C、C／T、T／T基因型分别有23、82、71例;G2677T／A中G／T、T／T、T／A、G／G、G／A、A／A基因型分别有66、17、28、37、24、4例。本组176例患儿总体生存率为77.3%（136／176）。MDR1 C3435T中C／C、C／T、T／T基因型患儿的5年无事件生存（EFS）率分别为79.57%、83.33%、33.33%,其中携带T／T基因型患儿的5年EFS率低于携带C／C和C／T基因型的患儿（χ2＝15.301,P＝0.002）。 MDR1 C1236T中C／C、C／T、T／T基因型患儿的5年EFS分别为52.00%、81.71%、71.93%,其中携带C／C基因型患儿的5年EFS率低于携带C／T和T／T基因型的患儿（χ2＝17.800,P＝0.001）。结论 MDR1基因多态性与儿童ALL的EFS相关,携带MDR1 C3435T中T／T、MDR1 C1236T中C／C基因型的患儿长期生存率较低。     

RT-PCR定量检测急性白血病多药耐药基因(MDR1)的表达

 用定量RT一PCR方法检测了急性白血病在初治、复发时MDRI的表达水平,并探讨其临床意义。     

多源耐药基因表达水平的检测在儿童白血病中的临床意义

应用逆转录ＰＣＲ结合同位素定量分析，对３２例儿童白血病患者的多源耐药基因表达水平进行了研究。结果显示，初发病人的表达均较低，复发病人表达较高，缓解期病人表达程度介于两者之间，为探讨多源耐药基因表达水平与临床化疗之间的相关性及逆转克服多源耐药性药物的应用，提供了一定的理论依据。     

沉默 MDR1 基因表达逆转白血病耐药HT9细胞对大蒜素的耐药性

目的:利用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体沉默耐药细胞HT9中MDR1基因表达,从而逆转人早幼粒白血病细胞株HT9对大蒜素的耐药性。方法:根据MDR1基因序列设计shRNA片段,构建靶向MDR1基因的pSilencer3.1-shMDR1表达载体,稳定转染HT9细胞,real-time PCR检测细胞中MDR1 mRNA的表达,Western blotting检测HT9细胞中P-糖蛋白(MDR1基因编码)的表达,MTT法检测细胞存活率,琼脂糖凝胶电泳检测经大蒜素处理后HT9细胞的凋亡,电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞术检测细胞周期。结果:成功构建靶向MDR1的表达载体pSilencer3.1-shMDR1,稳定转染HT9细胞形成HT9-shMDR1细胞系,HT9-shMDR1细胞中MDR1 mRNA表达显著降低[(0.027±0.002)vs(0.110±0.005),P<0.01],P-糖蛋白表达也明显降低[(0.856±0.014)vs(1.454±0.027),P<0.05]。大蒜素对HT9-shMDR1细胞的IC50较对未转染组HT9细胞明显降低[(26.66±0.59)vs(52.75±0.64)μg/ml,P<0.01],HT9-shMDR1细胞对大蒜素耐药的相对逆转率为(49.45±1.86)%。与未转染组HT9细胞相比,经大蒜素处理后HT9-shMDR1细胞凋亡的DNA片段更为明显,电镜下可见细胞凋亡特有的半月体形成。大蒜素处理不影响未转染组HT9细胞和对照质粒转染后HT9细胞(HT9-neo细胞)的细胞周期,但大蒜素处理使HT9-shMDR1细胞的S期细胞比例减少[(31.40±2.13)%vs(53.80±1.87)%,P<0.01],G2/M期细胞比例增多[(35.62±2.06)%vs(9.37±2.09)%,P<0.01]。结论:靶向MDR1的干扰表达载体pSilenc-er3.1-shMDR1能够抑制MDR1基因的表达,从而逆转HT9细胞对大蒜素的耐药性。     

载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌耐药细胞MDR1表达的研究

目的 :构建含多药耐药基因MDR1的短发夹状RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)表达质粒 ,观察对肝癌耐药细胞Bel 740 2 /R的MDR1mRNA的抑制作用。方法 :利用分子克隆技术 ,将含MDR1的双链DNA ,与经双酶切后的载体PGE 1连接 ,构建pshRNA MDR1重组质粒 ,在脂质体的介导下转染肝癌耐药细胞株Bel 740 2 /R ;RT PCR分析MDR1mRNA的表达 ,MTT法检测细胞对药物的敏感性 ,流式细胞仪检测细胞内罗丹明 12 3 (Rh12 3 )的潴留和P gp的表达。结果 :PCR和DNA测序证实了表达质粒构建成功 ,并能明显地抑制MDR1mRNA的表达 ;对盐酸表柔比星和顺铂的半数抑制浓度IC50明显降低 ,P <0 0 5 ;P gp的表达阳性率降低了 5 7 3 % ;细胞内Rh12 3的浓度显著增高 ,P <0 0 5。结论 :构建的pshRNA MDR1表达质粒能有效地降低肝癌耐药细胞MDR1mRNA和P gp的表达。     

子宫内膜癌MDR基因的表达与临床意义

目的　探讨子宫内膜癌多药耐药基因的表达与临床病理学特征的关系。方法　采用免疫组织化学ABC法检测 50例子宫内膜癌组织与 2 6例正常或各型增生子宫内膜组织MDR基因的表达。结果　正常或各型增生子宫内膜存在MDR基因的表达 ,子宫内膜癌MDR基因的阳性表达率为 48% ,其中组织学分级G1 、G2 级MDR的表达显著高于G3级 ,手术分期Ⅰ期MDR基因的表达显著低于Ⅱ～Ⅳ期 ,MDR的表达与肌层浸润的深度无关。结论　子宫内膜癌抗药性可能与MDR基因的表达有关 ,其化疗时应选择敏感药物以增强化疗疗效     

非小细胞肺癌中MDR_1和MDRP基因的表达及意义

目的　探讨多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MDRP)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及意义。方法　采用逆转录多聚酶链反应(RTPCR),对33例NSCLC组织及相应癌旁组织中MDR1和MDRP基因表达进行检测。结果　癌组织中MDR1和MDRP阳性率(分别为69.7%和63.6%)明显高于癌旁组织(36.4%和30.3%,P<0.01);两基因的表达水平也显著高于癌旁肺组织(P<0.001,P<0.01);术前化疗者的MDR1和MDRP基因表达水平明显高于未化疗者(P<0.05)。结论　NSCLC具有内源性和获得性耐药性,检测MDR1和MDRP基因表达可指导临床化疗,并预测预后。     

47例原发性乳腺癌多药耐药MDR1基因表达及其临床意义

[目的]探讨原发性乳腺癌多药耐药MDR1基因的表达及其临床意义.[方法]采用荧光定量RT-PCR法检测47例乳腺癌组织及15例正常对照(包括5例乳腺纤维腺瘤、10例癌旁组织)MDR1基因的表达.[结果]乳腺癌MDR1基因表达阳性率为46.8%,与病人年龄、肿瘤大小、淋巴结转移与否、ER、PR状况、绝经与否无关.对照组中无MDR1基因表达.[结论]乳腺癌MDR1基因的表达可作为乳腺癌化疗耐药的评价指标,能否作为判断预后的独立指标尚需进一步研究.     

ＭＤＲ１基因多态性与肝癌易感性的关系

目的：探讨ＭＤＲ１基因位点单核苷酸多态性与肝癌易感性的关系。方法：采用病例对照研究,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲ ＲＦＬＰ）基因型分析技术测定原发性肝癌组及正常健康对照组各１００例ＭＤＲ１基因Ｇ２６７７Ｔ／Ａ位点。以χ２检验比较ＭＤＲ１多态基因型及相关危险在病例与对照之间分布的差异,采用非条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析多态基因型与肝癌发生危险度的关系。结果：肝癌组ＭＤＲ１基因２６７７Ａ携带型低于健康对照组（Ｐ＜０.０５）;经Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析发现２６７７Ａ携带型的个体患肝癌的危险显著降低,２６７７Ａ携带型暴露于危险因素下患肝癌风险降低。肝癌组ＭＤＲ１基因２６７７Ｔ携带型高于健康对照组（Ｐ＜０.０５）;经Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析发现２６７７Ｔ携带型的个体患肝癌的危险增加,２６７７Ｔ携带型暴露于危险因素下患肝癌风险增高。结论：ＭＤＲ１基因２６７７Ａ多态性可能是防止肝癌形成的保护因素,２６７７Ｔ多态性可能是肝癌形成的易感因素。     

shRNA沉默多药耐药胃癌细胞7901/VCR MDR1基因表达的实验研究

目的利用RNAi技术干扰胃癌多药耐药细胞（7901/VCR）多药耐药基因（MDR1）的表达,为临床肿瘤的基因治疗奠定基础。方法根据MDR1的碱基序列设计并合成两对短发夹RNA,构建重组载体,用阳离子脂质体法体外转染7901/VCR;采用MTT法检测转染胃癌细胞的生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,RT-PCR和Western blot检测转染前后MDR1 mRNA和蛋白表达的变化。结果成功构建RNAi质粒载体,转染后细胞IC50明显降低（P〈0.05）;G1期细胞增加,S期细胞减少（P〈0.05）;MDR1 mRNA转录水平下降（P〈0.05）,P-糖蛋白（P-gp）的表达水平降低（P〈0.05）。结论RNAi能明显抑制胃癌细胞7901/VCR MDR1mRNA和P-gp蛋白的表达,进而对肿瘤细胞多药耐药性有明显的逆转作用,为基因治疗提供了一种新的手段。     

康莱特注射液对多药耐药人白血病细胞株作用的实验研究

目的　观察康莱特注射液 (KL T)对耐药人白血病细胞 K5 6 2 /adr和 K5 6 2 /vcr的作用。方法　 (1) MTT法检测耐药细胞对 KL T及多种化疗药物的敏感性 ,观察 KL T对紫杉醇 (泰素 )、泰索帝、乐沙定的化学增敏作用。(2 )运用流式细胞仪检测 KL T作用过程中细胞的凋亡及 P- gp蛋白表达情况。结果　 (1)人白血病耐药细胞对 KL T有轻度抗性。 (2 ) KL T能明显增强多药耐药细胞对化疗药物的敏感性 ,其逆转作用呈剂量依赖关系。 (3) KL T能诱导人白血病细胞凋亡。(4 ) KL T不能降低耐药细胞 P- gp蛋白表达。结论　 KL T能明显逆转多药耐药人白血病细胞株的耐药性 ,并能诱导其凋亡 ,KL T的化学增敏作用机制可能与 P- gp蛋白表达无关。     

非小细胞肺癌中多药耐药基因的表达及意义

探讨多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达、意义及相关关系。方法:采用原位分子杂交对113例NSCLC组织中MDR1和MRP基因mRNA的表达进行检测。结果:MDR1和MRP基因mRNA在NSCLC组织中的阳性表达率分别为51.3%(58/113)、80.5%(91/113),二者与NSCLC肿瘤组织类型、分化程度、淋巴结转移、TNM分期等无关(P>0.05)。MDR1和MRP的协同阳性(MDR1⁺/MRP⁺)表达率为48.7%(55/113),二者在NSCLC中的表达之间存在明显相关(P<0.01)。结论:MDR1和MRP是NSCLC原发性多药耐药的重要参与因素,二者联合检测对临床NSCLC的化疗具有指导意义。     

肺癌患者FLK-1、LRP和MDR1的表达与临床研究

目的:探讨血管内皮生长因子受体 (Flk 1),肺耐药蛋白 (LRP)基因以及多药耐药基因 (MDR1)蛋白与肺癌患者临床及病理指标的关系。方法:用免疫组化技术(ABC法)对原发性肺癌组织中三种基因的表达进行检测。结果: 70例肺癌中,非小细胞肺癌MDR1阳性率 49. 2% (29 /59),明显高于小细胞肺癌 (SCLC) 18. 2% (2 /11)(P<0. 05);非小细胞肺癌LRP阳性率 69. 5% (41 /59),明显高于小细胞肺癌 27. 3% (3 /11) (P<0. 05)。腺癌中MDR1与LRP的表达明显高于鳞癌(P<0. 05)。LRP与Flk 1在NSCLCs中共同表达 49. 2% (29 /59),LRP的表达与肺癌的组织学分级相关,MDR1和LRP的表达与肺癌的组织学类型有关,Flk 1与TNM分期相关,均有统计学意义(P<0. 05)。Flk 1 LRP均阳性、FLK 1 LRP MDR1均阳性、中药治疗、复发与患者的生存率有关(P<0. 05)。结论:FLK 1、LRP和MDR1基因蛋白产物的检测对肺癌患者的诊治和预后评估有积极意义。