胰岛素样生长因子受体抑制剂对宫颈癌细胞的抑制作用

目的本实验的目的就是研究AG1024对宫颈癌Siha细胞株的增殖抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其机制。方法不同浓度水平(0～20μM)的AG1024作用于宫颈癌Siha细胞株,选用不同实验方法观察形态学和分子生物学特性的改变。四唑盐比色实验(MTT方法)观察不同浓度AG1024宫颈癌Siha细胞增殖的影响;流式细胞术检测不同药物浓度诱导宫颈癌Siha细胞株的凋亡;蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测不同药物处理后一些凋亡相关蛋白表达水平的变化,包括ERK和pro-caspase-3。结果 MTT结果显示AG1024可以剂量依赖性地抑制宫颈癌Siha细胞株的增殖,流式细胞术提示AG1024可以明显促进宫颈癌Siha细胞株的凋亡,Western Blotting结果显示AG1024对于增加ERK的磷酸化水平,上调caspase-3的表达。结论 AG1024可以明显抑制宫颈癌Siha细胞株的增殖并促进其凋亡,激发caspase级联反应,促使凋亡。这为AG1024在临床化疗上的应用提供了理论依据。     

干扰MACC1协同Wnt信号通路抑制剂对舌鳞癌细胞转移潜能的影响

目的探讨干扰结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer 1, MACC1)协同Wnt信号通路抑制剂对舌鳞癌细胞转移潜能的影响。方法以不同浓度的Wnt信号通路抑制剂XAV939处理舌鳞癌细胞,MTT法检测细胞增殖变化。舌鳞癌细胞感染MACC1 shRNA慢病毒,Real-time PCR和Western blot法检测干扰效果。以XAV939处理下调MACC1后的舌鳞癌细胞,MTT法测定细胞增殖变化,划痕愈合实验检测细胞运动能力,MTT法检测细胞黏附能力,Transwell小室实验检测细胞的侵袭和迁移,Western blot法检测细胞中MMP-9及E-cadherin、vimentin蛋白表达水平。结果不同浓度的Wnt信号通路抑制剂XAV939处理后的舌鳞癌细胞增殖能力降低。MACC1 shRNA慢病毒感染后的舌鳞癌细胞中MACC1表达水平降低。下调MACC1和Wnt信号通路抑制剂XAV939处理后的舌鳞癌细胞增殖[100.00%vs(79.81±6.92)%、(50.89±8.30)%]、运动[(76.25±3.47)%vs(51.63±4.20)%、(40.25±3.18)%]、黏附[100.00%vs(77.28±3.50)%、(65.17±5.26)%]、侵袭(80.20±9.33 vs 47.62±6.24、38.25±4.69)、迁移能力(95.36±4.27 vs 63.75±4.51、52.81±3.62)和MMP-9、vimentin蛋白水平均降低,E-cadherin蛋白水平升高,并且两者联合处理后对舌鳞癌细胞增殖[(79.81±6.92)%、(50.89±8.30)%vs(38.69±7.14)%]、运动[(51.63±4.20)%、(40.25±3.18)%vs(31.07±2.24)%]、黏附[(77.28±3.50)%、(65.17±5.26)%vs(52.96±3.21)%]、侵袭(25.14±2.11 vs 47.62±6.24、38.25±4.69)、迁移(35.87±2.05 vs 63.75±4.51、52.81±3.62)能力抑制作用更强。结论干扰MACC1协同Wnt信号通路抑制剂能够下调舌鳞癌细胞增殖、运动、黏附、侵袭、迁移能力。     

内质网应激反应基因表达调控的多样性

内质网通过激活未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR),包括蛋白合成暂停、内质网分子伴侣和折叠酶等蛋白表达上调、诱导内质网相关性降解(ER-associated degradation,ERAD),以至细胞功能不能恢复,最后诱导内质网相关性细胞凋亡,清除受损细胞,保护机体生存。所有这些内质网相关反应都是各种应激信号刺激内质网,引起多种内质网应激基因表达的结果。转录、翻译以及翻译后加工各个环节对内质网应激时基因的表达产生调控,且方式各不相同。     

白藜芦醇调节VEGF/Wnt/β-catenin通路对食管癌细胞的抑制作用

目的探讨白藜芦醇(Resveratrol,RES)调节VEGF/Wnt/β-catenin通路对食管癌细胞的抑制作用。方法用0、25、50、100μmol/L白藜芦醇处理食管癌KYSE150细胞株、TE-1细胞株和Eca-109细胞株培养72 h后,CCK-8法检测食管癌细胞的存活率;流式细胞仪法检测细胞凋亡和细胞周期;ELISA法检测细胞上清液中VEGF表达;Western blot法检测食管癌细胞wnt3a、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平。结果白藜芦醇可以显著降低KYSE150细胞、TE-1细胞和Eca-109细胞的存活率,且随白藜芦醇的剂量升高而逐渐降低;可以显著促进KYSE150细胞、TE-1细胞和Eca-109细胞凋亡,且随白藜芦醇的剂量升高而逐渐升高;差异有统计学意义(P0.05)。白藜芦醇可以显著下调食管癌KYSE150细胞株、TE-1细胞株和Eca-109细胞株VEGF、wnt3a、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平,且随白藜芦醇的剂量升高而逐渐降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论白藜芦醇下调VEGF/Wnt/β-catenin通路的表达来有效抑制食管癌细胞增殖作用。     

三氧化二砷对大肠癌细胞的生长抑制作用

目的观察三氧化二砷（ＡＳ_２Ｏ_３）对大肠癌细胞株ＳＷ６２０的生长抑制作用并初步探讨其机制．方法大肠癌细胞株ＳＷ６２０用不同浓度ＡＳ_２Ｏ_３处理．①ＭＴＴ法观察不同浓度ＡＳ_２Ｏ_３作用不同时间后对ＳＷ６２０细胞生长的影响；②增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）单抗ＬＳＡＢ免疫组化染色－流式细胞仪检测 ＰＣＮＡ阳性细胞百分比．结果①ＡＳ_２Ｏ_３明显抑制大肠癌细胞株ＳＷ６２０细胞增殖，其作用随ＡＳ_２Ｏ_３浓度增加和作用时间延长而增加；②随ＡＳ_２Ｏ_３浓度增加，ＰＣＮＡ阳性细胞百分比逐渐下降（ｐ＜０． ０５）结论二氧化二砷可明显抑制大肠癌细胞株 ＳＷ６２０的生长，调控 ＤＮＡ合成及细胞增殖的 ＰＣＮＡ蛋白合成降低可能是 ＡＳ_２Ｏ_３的作用机制之一．     

选择性环氧合酶-2抑制剂对结肠癌细胞的生长抑制作用及机制探讨

目的：研究NS-398（一种选择性环氧合酶-2抑制剂）对结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用并探讨其机制。方法：通过MTT法检测细胞的增殖情况,通过流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,通过RT-PCR检测bcl-2mRNA和baxmRNA表达,通过共聚焦激光扫描显微镜观察细胞骨架成分F-actin的变化。结果：NS-398对结肠癌HT-29细胞生长的抑制具有时间和剂量依赖性。流式细胞术结果显示NS-398可剂量依赖地诱导HT-29细胞凋亡,使其停滞于G0/G1期。经不同浓度的NS-398处理72h后,bcl-2mRNA在HT-29细胞的表达降低,bcl-2／bax比值降低。细胞骨架成分F-actin主要分布在HT-29细胞核周围,呈环状结构,NS-398作用后细胞核周围的环状结构消失。结论：NS-398可显著抑制结肠癌细胞的体外生长并诱导其凋亡,这与下调bcl-2／bax比值以及细胞骨架的破坏有关。     

脂肪细胞内质网应激反应蛋白与肥胖的关系

肥胖是2型糖尿病、冠心病、高脂血症、非酒精性脂肪肝等多种慢性疾病的基础病,属于代谢综合征类疾病。肥胖与内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)和脂肪组织中未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)的激活有关[1]。近来国内外对应激反应蛋白在脂肪细胞ERS反应中的作用机制进行了大量的研究。     

内质网应激反应介导细胞凋亡的机制研究进展

内质网是细胞内重要的细胞器 ,参与蛋白质翻译后的修饰、折叠和寡聚化 ,还参与脂质代谢和类固醇激素的合成、钙的储存 ,未折叠或错误折叠蛋白的增多、胞内钙的失衡引起的内质网的应激反应 ,以及由过强的内质网应激反应诱导的细胞凋亡 ,这是与死亡受体和线粒体介导细胞凋亡不同的一条途径 ,主要由caspase 12活化引起caspase级联反应所介导。     

蛋白磷酸酯酶2A通过MAPK信号通路抑制宫颈癌细胞侵袭

目的:探讨蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)在宫颈癌细胞侵袭中的作用及其可能机制。方法:常规培养Hela细胞,通过药物或基因调节PP2A水平,药物实验中将Hela细胞分为3组,即正常对照组(DMSO处理,n=6)、DES组(10nM PP2A激动剂DES处理,n=6)和OA组(10nM PP2A抑制剂OA处理,n=6);质粒转染组中将Hela细胞分为对照组(DsRed组,n=6)、wtPP2A组(n=6)和siPP2A组(n=6),按分组要求转染相应质粒。采用小室穿孔实验观察其对Hela细胞侵袭的影响;蛋白免疫印迹实验(Western Blot)观察其对MAPK信号通路的作用。结果:研究发现上调PP2A可显著抑制Hela细胞侵袭,而下调PP2A则显著促进Hela细胞侵袭;激活PP2A可去磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶家族(p-JNK, p-p38和p-ERK MAPK)及金属蛋白酶9(MMP-9)。结论:PP2A可能通过去磷酸化MAPK信号通路下调MMP-9起调节宫颈癌细胞侵袭的作用。     

基于通路活性的抗癌药物敏感性预测

通路数据库是系统分析基因功能,联系基因组信息和功能信息的知识库,通路作为基因功能集合能够提高预测模型的预测能力和解释能力。本研究通过整合KEGG通路数据和CCLE基因表达谱推断通路活性并结合药物数据建立药物敏感性预测模型。在推断通路活性时,并没有把通路简单地作为基因集合,而是选择通路中的高连接度基因,取高连接度基因的平均表达水平作为通路活性值,合并每个通路的活性向量得到通路活性矩阵,然后输入到弹性网进行药物敏感性预测。实验结果表明,对于大多数药物,使用基于通路中高连接度基因的计算分析方法更有利于药物敏感性预测,同时能识别出更多与药物相关基因的通路。     

三氧化二砷对肝癌细胞生长抑制作用差异性探讨

目的:观察三氧化二砷对肝癌SMMC-7721和BEL-7402细胞生长抑制作用差异性并且探讨其可能的作用机理。方法:应用细胞培养和台盼蓝拒染法观察不同时间和不同浓度的三氧化二砷对肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402细胞生长的抑制作用,比较生长抑制率的差异并用谷胱甘肽检测试剂盒测定两种肝癌细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量。结果:三氧化二砷浓度为0.50μmol/L、作用时间为24h可显著抑制肝癌细胞系BEL-7402的生长,抑制作用呈时间、剂量依赖性;对SMMC-7721细胞,三氧化二砷浓度为2.00μmol/L、作用时间为24h才出现抑制细胞生长作用,二者的生长抑制率存在显著差异,0.25-2.00μmol/LAs2O3作用72h后,BEL-7402细胞的生长抑制率均高于SMMC-7721细胞(P＜0.05)。检测SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH含量分别为(50.8±5.2)μmol/gprotein和(18.7±1.4)μmol/gprotein,存在明显差异。结论:三氧化二砷抑制肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402的生长存在显著的差异;BEL-7402细胞对三氧化二砷非常敏感性,可能与其细胞内谷胱甘肽含量较低,细胞的氧化还原解毒系统不足有关。     

WT1反义寡核苷酸对卵巢癌细胞的抑制作用

目的观察WT1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用。方法以人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,应用ASODN技术,将WT1-ASODN转染到SKOV3细胞中,利用MTT法检测WT1寡核苷酸的最适作用浓度和作用时间及WT1反义寡核苷酸对SKOV3细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测分析WT1反义寡核苷酸对SKOV3细胞周期和细胞凋亡的影响。结果脂质体介导的WT1反义寡核苷酸在体外能够明显抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,诱导细胞凋亡。结论 WT1反义寡核苷酸能诱导卵巢癌细胞凋亡,从而抑制卵巢癌细胞的增殖,可望成为一种卵巢癌临床有效的治疗方法。     

脂肪干细胞对脑缺血损伤大鼠氧化应激反应的抑制作用

目的探讨大鼠脂肪干细胞(ADSCs)对脑缺血损伤大鼠氧化应激反应的抑制作用。方法原代培养SD大鼠的ADSCs,检测增殖及抗原表达等特性。制备SD大鼠局灶性脑缺血模型,脑缺血后24h经立体定位仪局部移植Brd U标记的ADSCs。细胞移植14d检测各项指标:m NSS评分检测神经功能,TTC染色法观察脑梗死体积,免疫组化法观察Brd U阳性细胞的分布,HE染色观察脑组织病理改变,检测脑组织氧化应激产物MDA及蛋白羰基含量,Western Blotting检测Mn SOD和Cu Zn SOD的表达水平。结果 ADSCs增殖能力强并表达干细胞相关抗原。ADSCs移植后脑缺血模型大鼠的mN SS评分明显降低,脑梗死体积明显减小,脑组织内可见BrdU阳性细胞;病理形态明显改善,氧化应激产物MDA、蛋白羰基含量及MnS OD、CuZ nS OD表达量明显下调。结论 ADSCs可以通过抑制氧化应激反应修复脑缺血损伤大鼠脑组织的病理改变,改善神经系统功能。     

野生型p53对肺癌细胞生长的抑制作用

目的探讨外源性野生型p53对肺癌细胞生长的抑制作用. 方法通过向肺癌细胞中分别转染携带有荧光蛋白基因的野生型P53基因和突变型P53基因,而后用荧光显微镜观察荧光蛋白表达;中性红和MTT染料摄入法测定细胞生长活性. 结果 p53蛋白与绿色荧光蛋白之融合蛋白表达定位在胞浆和胞膜;经中性红和MTT两种方法测定,外源性野生型p53对肺癌细胞生长具有抑制作用;OD值分别为 0.71 ±0.081(OD540)和0.65±0.059(OD490),均低于对照组(p<0.05). 结论 p53外显子5～8可在肺癌细胞中获得表达并对细胞生长活性有抑制作用.     

基因Hath1表达对结肠癌细胞的抑制作用

目的研究Hath1基因对结肠癌细胞体外增殖的抑制作用。方法用trizol试剂提取肿瘤细胞总RNA,定量逆转录PCR法检测Hath1在结肠癌细胞和正常组织细胞中的表达;MTS和流式细胞仪法分别检测Hath1在结肠癌细胞中的增殖率和凋亡百分率;构建IEC-6稳定表达Hath1siRNA细胞系,检测Hath1siRNA对IEC-6细胞生长的影响。结果在正常人的小肠与结肠组织及大鼠小肠上皮细胞IEC-6中有着比较高水平的Hath1的表达,而在4株结肠癌细胞中Hath1的表达都很低。在表达Hath1的4株结肠癌细胞SW480、HT29、LS174T、SW620中,其细胞增殖率分别被抑制了38.5%、23.4%、55%、35.6%。在LS174T细胞中Hath1不能有效地诱导肿瘤细胞发生凋亡,但是可以显著地提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。siRNA干扰试验进一步证明了Hath1起到肿瘤抑制基因的作用。结论 Hath1不能有效地诱导肿瘤细胞发生凋亡,但是可以显著地提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

野生型p53对肺癌细胞生长的抑制作用

目的　探讨外源性野生型p5 3对肺癌细胞生长的抑制作用 .方法　通过向肺癌细胞中分别转染携带有荧光蛋白基因的野生型P5 3基因和突变型P5 3基因 ,而后用荧光显微镜观察荧光蛋白表达 ;中性红和MTT染料摄入法测定细胞生长活性 .结果　p5 3蛋白与绿色荧光蛋白之融合蛋白表达定位在胞浆和胞膜 ;经中性红和MTT两种方法测定 ,外源性野生型p5 3对肺癌细胞生长具有抑制作用 ;OD值分别为 0 .71± 0 .0 81(OD540 )和 0 .6 5± 0 .0 5 9(OD490 ) ,均低于对照组 (p <0 .0 5 ) .结论　p5 3外显子 5～ 8可在肺癌细胞中获得表达并对细胞生长活性有抑制作用 .     

端粒酶抑制剂对葡萄膜黑色素瘤细胞生长的抑制作用

Objective To study the restrain effects of two telomerase inhibitors included IFN-α2b (interferon-α2b)and CDDP(cisplatin;cis-dichlorodiamine platinum)to uveal melanoma cells of human eyes,and to provide theory bases for chemotherary of uveal melanoma.Methods Applied IFN-α2b and CDDP to the primary cultured uveal melanoma cells of human eyes individually with different concentration and duration,and compared with control group.Morphological changes were observed by inverted optical and electronic microscope,and the restrain effects were detected by MTT.Results More and more morphological changes of restraint and apoptosis of cells were observed with the increasing concentration and duration of IFN-α 2b and CDDP.When action durations were 72 h.the cells were inhibited with the concentration more than 500 IU/ml(IFN-α 2b)and 1.00 mg/L(CDDP)respectively.The cells restrain rates were(66.1±4.7)%and(74.0+3.3)%with the concentration more than 5000 IU/ml(IFN-α2b)and 10 mg/L (CDDP),and the rates were higher than before(P<0.001).When concentrations were 5000 IU/ml(IFN-α2b)and 10.00 mg/L(CDDP),cells were inhibited at 48 h and the restrain rates were(67.9±8.1)%and(76.5±1.61%at 72 h,respectively,(P相似文献