ELISA方法测定纤维连结蛋白的临床应用

本文报告用抗人纤维连结蛋白单克隆抗体建立的ELISA方法对三组病人体内Fn水平测定的结果。实验结果表明肺部肿瘤、炎症时血浆和胸水内Fn较正常人明显为高,尤以肺癌为著,肝脏疾患和截瘫病人体内Fn水平低于正常人。反映了该两组病人肝功能和免疫功能的下降。     

应用双夹心ELISA检测脑脊液中纤维结合蛋白

<正> 纤维结合蛋白(Fibronectin,Fn)是一组大分子糖蛋白,广泛存在于细胞表面、细胞外液、结缔组织及大都份基膜上。近年来国内外学者已从医学各分支学科角度做了大量的基础和临床研究工作。神经系统疾病时,血液及脑脊液中纤维结合蛋白量的变化及与疾病愈合和转归的可能关联更是神经病学学者所关注的。然而由于测定灵敏度的限制,至今尚未见到应用ELISA方法检测脑脊液中Fn的报告。     

临床胃粘膜活检及胃癌手术标本纤维连结蛋白的定位观察

采用免疫组化及免疫电镜技术对临床胃粘膜活检及胃癌手术标本进行了纤维连结蛋白(FN)的定位观察。结果,FN见于胃粘膜上皮细胞和部分癌细胞内以及各种基底膜、间质中。肠化及异型增生上皮细胞FN染色增强,胃癌细胞和其基膜FN减少缺失且与癌细胞分化程度相关,胃癌间质FN丰富,尤其以癌浸润前缘明显。本文着重讨论了胃癌FN改变与癌细胞生物学特性的关系。     

纤维连结蛋白启动子的克隆及转录活性的研究

目的：克隆纤维连结蛋白（FN） 启动子和检测其转录活性，并初步研究增加SV40增强子对其转录活性的影响。方法:从正常人gDNA中克隆FN启动子，驱动氯霉素乙酰转移酶报告基因表达，构建成有SV40增强子和无SV40增强子两个重组体报告载体。利用脂质体介导的转染技术导入HT1080细胞，检测各重组体的瞬时表达，确定克隆FN启动子转录活性和SV40增强子对其转录活性的影响。 结果:克隆的FN启动子在HT1080细胞中活性比SV40启动子稍强，在加入SV40增强子时活性提高了约6倍。 结论:成功的克隆FN启动子，在HT1080细胞中有活性，通过增加SV40增强子能大大提高其活性，为运用FN启动子和特异性靶细胞治疗各种遗传性疾病提供了一定基础。     

测定人血清纤维连接蛋白含量的双抗体夹心ELISA法的建立

４株经细胞融合获得的针对纤维连接蛋白（Ｆｎ）的单克隆抗体，经ＥＬＩＳＡ抗体相加试验和抗体竞争试验证实，为作用于Ｆｎ不同位点的单克隆抗体。选择其中２株单克隆抗体，应用于测定人血清Ｆｎ含量的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法．其批内差异为４．５％，批间差异为５．９％．建立的标准曲线相关系数为０．９８２，测定１３２例献血员血清Ｆｎ合量为０．２５５±０．０２８ｍｇ／ｍｌ，与文献报道相符．     

骨肉瘤骨连结蛋白免疫组化研究

应用多克隆抗体bONⅡ检测30例骨肉瘤中骨连结蛋白的表达,旨在探讨它在骨肉瘤诊断中的意义。结果显示:所有骨肉瘤均呈阳性反应,骨样组织中的基质亦为阳性。对照组中软骨肉瘤,尤文肉瘤和骨恶性淋巴瘤为阴性,骨恶性纤维组织细胞瘤和巨细胞瘤中的多核瘤巨细胞显弱阳性。结果表明骨连结蛋白免疫组化染色对骨肉瘤的诊断,特别是骨样基质缺乏或不易确定的骨肉瘤诊断,以及对小细胞型骨肉瘤和其它小圆细胞骨肿瘤的鉴别诊断具有重要的实用价值。     

检测金属硫蛋白夹心法ELISA的建立和初步应用

采用两种能识别兔杆金属硫蛋白Ⅱ分子上不同抗原决定簇的单克隆抗体建立了夹心法ＥＬＩＳＡ。鉴定表明，该法测定兔ＭＴ的灵敏度为２０ｎｇ／ｍｌ批内和批间变异系数分别为１２．２％和９．３％，用于测定人体ＭＴ也有较好的灵敏性和可靠性。     

建立ELISA法检测烧伤患者血清纤维连接蛋白活性

目的 :建立ELISA法检测烧伤患者血清纤维连接蛋白 (Fn)结合明胶活性并阐明其意义。方法 :采用明胶包被ELISA法 ,包被、封闭、加入待检血清、抗人Fn抗体、HRP SPA及TMB显色 ,测定 345例烧伤患者及 37例健康人血清Fn活性。结果 :该ELISA法敏感度高、特异性强、重复性好。检测烧伤患者血清发现Fn活性随着烧伤面积和深度的增加而降低 ,特重度烧伤患者Fn活性较健康人显著降低 (P <0 0 5 ) ,烧伤合并感染者血清Fn活性较未感染者降低。结论 :患者血清Fn活性下降与烧伤面积、深度和机体感染有关。测定Fn活性的ELISA方法学确立为阐明血清活性Fn在疾病中免疫生物学意义提供实验手段     

血清透明质酸ELISA检测方法的建立及临床初步应用

采用透明质酸特异结合蛋白(Hyaluronate binding protein,HABP)为透明质酸(Hyaluronate,HA)抗体,建立了血清HA 的夹心ELISA 检测方法。关键步骤为HABP 的提纯及其酯化生物素的标记,并利用亲合素生物素系统放大提高其灵敏度。临床初步应用提示,尿毒症和慢性肝病患者血清HA 含量明显高于正常人。本方法简便、快速、重复性好,灵敏度可达2.5ng/ml,可适用于HA 的临床和基础研究。     

抗凝血酶受体单克隆抗体的制备与鉴定

采用杂交瘤技术，获得了４株稳定分泌抗凝血酶受体单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。４株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１κ链。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与人凝血酶、凝血酶原和ＨＣＶ多肽反应。４株杂交瘤细胞培养上清液效价为３．２×１０－２～１．２８×１０－３，腹水效价为１．６×１０－６～５．１２×１０－７。     

HIV核心抗原p24检测方法的建立及应用

ＨＩＶ感染的检测在预防ＡＩＤＳ传播方面有重要作用。本研究以重组抗原ｐＧ１免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了５株识别ＨＩＶ核心抗原ｐ２４的杂交瘤细胞株Ｄ３，１Ｈ１，２Ｇ１０，３Ｈ５和４Ｈ６。经鉴定这５株ＭｃＡｂ与其它病毒抗原无交叉反应，分别识别３个不同的抗原表位。应用两株识别不同表位的ＭｃＡｂ２Ｇ１０和３Ｈ５建立了检测ＨＩＶｐ２４抗原的夹心ＥＬＩＳＡ法，并初步检测了２４份ＨＩＶ抗体阳性血清。     

测定尿激酶含量夹心法ELISA的建立

采用两种识别不同抗原决定簇的抗尿激酶(UK)单克隆抗体建立了测定人 UK 含量的夹心法ELISA.本法灵敏度为0.15ng/ml,批内 CV4.3%,批间 CV8.7%,平均回收率98%.应用本法测定了部分正常细胞和肿瘤细胞株培养上清中的 UK 含量,肿瘤细胞培养上清 UK 量明显高于正常细胞.测定82名正常人血浆中 UK 含量,其结果为1.31±0.6ng/ml.     

一种简便快速筛选双位点单克隆抗体方法的建立

本文建立了一种无需对单克隆抗体(McAb)进行纯化和酶标记,利用市售酶标记抗体既可筛选双位点McAb的简易方法。其基本原理是,首先将待筛选McAb与酶标抗体制成McAb-酶标抗体复合物,再以此复合物作示踪剂进行夹心ELISA。若夹心孔OD492值高于第一、二阴性对照孔之和者, 提示所筛选McAb可能为双位点抗体。文中还对应用该方法时的注意事项进行了讨论。     

分泌抗CRF单克隆抗体杂交瘤的建立及初步鉴定

采用淋巴细胞杂交瘤技术，获得了５株稳定分泌抗促肾上腺皮质激素释放因子（ＣＲＦ）的ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株。５株单克隆抗体均为ＩｇＧ２，且均识别ＣＲＦ羧基端。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与ＡＣＴＨ、ＦＳＨ、ＮＰＹ、ＬＨ反应。５株杂支瘤腹水效价在１０－４～１０－５，亲和常数在５×１０７ｍｏｌ／Ｌ－１～１×１０９ｍｏｌ／Ｌ－１。     

一种检测可溶性白细胞介素2受体夹心法ELISA的建立

采用两种识别不同表位的小鼠抗人白细胞介素2受体(IL-2R)单克隆抗体(McAb),在国内首次建立了检测可溶性IL-2R(sIL-2R)的夹心法ELISA,并进行了初步应用。结果显示:本法特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便,能检出正常人、某些患者血清中以及细胞培养上清中sIL-2R,可用于基础和临床免疫学研究。     

治疗用抗人T淋巴细胞McAb（WuT3）功能试验方法的研究

为评价治疗用抗人Ｔ淋巴细胞单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＷｕＴ３和ＯＫＴ３的免疫抑制作用，进行了兔皮内移植物抗宿主反应（ＧＶＨＲ）的研究。对试验方法的有关因素：如胎牛血清（ＦＣＳ）和环磷酰胺对ＧＶＨＲ的影响，淋巴细胞浓度和局部反应大小的关系，以及反应出现高峰的时间等进行了观察。建立和稳定了试验方法，并用此方法对ＷｕＴ３和ＯＫＴ３的免疫抑制作用进行了对比。结果表明，两种ＭｃＡｂ均可抑制ＧＶＨＲ，并对ＷｕＴ３和ＷｕＴ４两种ＭｃＡｂ联合应用的效果进行了初步探讨。     

人胎盘层粘连蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的获得能特异性识别人层粘连蛋白（hLN）的单克隆抗体（McAb）。方法用纯化的人层粘连蛋白（hLN）作抗原免疫Balb/C小鼠,以细胞融合、酶联免疫吸附实验（ELISA）筛选和克隆化技术获得抗hLN的杂交瘤细胞株;用生物学方法鉴定杂交瘤细胞,用免疫学方法鉴定McAb的特异性。结果获得4株稳定分泌抗人LN的杂交瘤细胞株（2A1、3B5、2C4、4D1）,培养上清的ELISA效价分别为：1∶512、1∶1024、1∶512、1∶256;腹水效价分别为：1×10^6、1×10^7、1×10^6、1×10^5;采用ELISA相加法表明2A1、4D1与3B5、2C4识别的hLN上的抗原决定簇和识别的不同,4株单抗均属实IgG。结论成功建立了4株稳定分泌抗人LNMcAb的杂交瘤细胞株,它们分别识别hLN上2个不同的抗原位点,有望作为hLN定量检测的特异性抗体。