肉桂醛对神经胶质瘤U251细胞生物学行为的影响

目的 探讨肉桂醛对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法 体外培养胶质瘤细胞系U251细胞,分为对照组、低剂量肉桂醛组（40μmol/L）和高剂量肉桂醛组（80μmol/L）。采用平板克隆和CCK-8试验检测细胞增殖水平;流式细胞术分析细胞凋亡率;Transwell小室实验和细胞划痕试验评估细胞迁移和侵袭水平;免疫印迹法分析凋亡相关蛋白、PI3K/Akt和Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达。结果 肉桂醛明显抑制胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、迁移能力（P<0.05）,促进细胞凋亡（P<0.05）;抑制Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、cycling D、C-Myc、β-catenin表达（P<0.05）,促进Cleaved-Caspase-3、Bax表达（P<0.05）;而且,随剂量增大,肉桂醛的作用明显增强（P<0.05）。结论 肉桂醛抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移,促进细胞凋亡,其机制可能与下调PI3K/Akt和Wnt/β-catenin信号通路有关。     

白藜芦醇阻断TGF-β1/Smad信号通路抑制脑胶质瘤细胞迁移侵袭及上皮间质转化

目的 探究白藜芦醇对人脑胶质瘤细胞黏附、迁移、侵袭、上皮间质转化(EMT)及转化生长因子-β 1(TGF-β 1)/Smads信号通路的调控作用。方法 体外培养人脑胶质瘤T98G细胞,分为对照组(不做干预)、实验组(12.5μmol·L^-1白藜芦醇组、25μmol·L^-1白藜芦醇组、50μmol·L^-1白藜芦醇组)、5-氟尿嘧啶组(50 mg·L^-1的5-氟尿嘧啶)、抑制剂组(50μmol·L^-1白藜芦醇+10μmol·L^-1 TGF-β 1/Smad通路抑制剂LY2109761)和激活剂组(50μmol·L^-1白藜芦醇+10μmol·L^-1TGF-β 1/Smad通路激活剂SRI-011381),干预24 h。用细胞计数试剂盒比色(CCK-8)、倒置显微镜、黏附实验、划痕实验、Transwell小室及蛋白印迹(Wb)法对细胞活力、形态、黏附、迁移、侵袭能力及EMT和TGF-β 1/Smad信号通路相关蛋白表达水...     

白藜芦醇通过下调CD44表达抑制胶质瘤U251细胞增殖和侵袭

目的 探讨白藜芦醇对脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响及可能的分子调控机制。方法 体外培养胶质瘤U251细胞,分别用浓度为0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L白藜芦醇继续培养48 h,参考Lipofectamine2000TM说明书将pcDNA3.1/CD44(CD44过表达)、pcDNA3.1（过表达对照）等质粒转染胶质瘤U251细胞并培养24 h进行后续实验。利用CCK-8法检测细胞增殖,利用Transwell实验检测细胞侵袭;RT-PCR和免疫印迹法检测细胞CD44、CyclinD1、CDK4、MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达。结果 白藜芦醇明显抑制U251细胞的增殖和侵袭能力（P<0.05）,而且呈浓度依赖性（P<0.05）;所以,用150μmol/L白藜芦醇进行CD44干预实验。白藜芦醇明显抑制U251细胞CD44、CyclinD1、CDK4、MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达（P<0.05）,而且呈浓度依赖性（P<0.05）。CD44过表达明显抑制白藜芦醇对胶质瘤U251细胞增殖和侵袭的抑制作用（P<0....     

白头翁皂苷D对胶质瘤细胞转移和凋亡的影响及机制研究

目的 探究白头翁皂苷D （PSD）对胶质瘤细胞U251MG转移和凋亡的影响及可能机制。方法 采用CCK-8试剂盒检测正常星形胶质细胞和U251MG细胞活力;选用0.0、1.0、2.0及5.0 μmol/L PSD处理U251MG,将细胞分为4组：PSD 0.0 μmol/L组、PSD 1.0 μmol/L组、PSD 2.0 μmol/L组和PSD 5.0 μmol/L组。划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell检测细胞侵袭能力;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡状况;RT-PCR检测mRNA表达水平;蛋白免疫印迹检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）、血管内皮生长因子（VEGF）、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、肝细胞生长因子受体（c-MET）蛋白表达水平。结果 PSD抑制正常星形胶质细胞和胶质瘤细胞U251MG细胞活力。与PSD 0.0 μmol/L组相比较,PSD 1.0、2.0及5.0 μmol/L组细胞迁移率降低（P<0.01）,MMP-2、uPA、PAI-1、VEGF、c-MET蛋白水平降低（P<0.05）,PSD 1.0 μmol/L组细胞侵袭数降低（P<0.05）,PSD 2.0及5.0 μmol/L组细胞侵袭数降低（P<0.01）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白水平升高（P<0.05）。结论 PSD通过靶向c-MET抑制胶质瘤细胞U251MG迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。     

CREPT对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制

目的 探讨肿瘤高表达细胞周期相关蛋白（CREPT）对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 体外培养人胶质瘤细胞株U373、U251、A172、U87-MG、SHG44,并构建过表达或沉默CREPT的U251细胞;免疫印迹法检测蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 U251细胞CREPT蛋白表达水平最高,SHG44细胞最低。沉默CREPT后,U251细胞增殖、侵袭和迁移能力明显下降（P<0.05）,p-Wnt和p-β-catenin蛋白表达水平下降（P<0.05）。过表达CREPT后,U251细胞增殖、侵袭和迁移能力明显增强（P<0.05）,p-Wnt和p-β-catenin蛋白水平明显升高（P<0.05）。Wnt/β-catenin通路抑制剂KYA1797K可逆转过表达CREPT对细胞增殖、侵袭和迁移的影响（P<0.05）。结论 CREPT可能通过激活Wnt/β-catenin通路促进胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和迁移。     

左旋丁基苯酞对乳鼠脑胶质细胞氧糖剥夺/复氧后脑胶质细胞数量及IL-1β蛋白表达的影响

目的观察左旋丁基苯酞(L-3-n-butylphthalide,l-NBP)对原代培养乳鼠脑胶质细胞氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)后脑胶质细胞数量及白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达的影响。方法采用DMEM培养基体外培养乳鼠脑胶质细胞,免疫细胞化学鉴定培养细胞类型,建立脑胶质细胞OGD/R损伤模型,通过测定细胞OGD/R时乳酸脱氢酶(LDH)释放量,评估脑胶质细胞OGD模型。OGD 24h/R 24 h后,采用MTT法测定脑胶质细胞数量,并观察l-NBP对OGD 24 h/R 24 h后脑胶质细胞数量的影响;采用间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组脑胶质细胞IL-1β蛋白表达。结果 OGD 4 h组、OGD 8 h组、OGD 12 h组、OGD 24 h组脑胶质细胞LDH释放量均比正常对照组明显增多(P<0.01);OGD不同时间组组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。OGD 24 h/R 24 h后脑胶质细胞数量较对照组明显增加(P<0.01);l-NBP 500μmol/L组脑胶质细胞数量较OGD 24 h/R 24 h组明显减少(P<0.05)。OGD 24 h/R 24 h组IL-1β蛋白表达比对照组明显增多(P<0.05);l-NBP 100和500μmol/L组IL-1β蛋白表达较OGD 24 h/R 24 h组明显减少(P<0.05)。结论 l-NBP能减少乳鼠脑胶质细胞OGD/R后细胞数量以及IL-1β蛋白的表达。     

β-淀粉样肽对人SH-SY5Y细胞突触素、发动蛋白Ⅰ及衔接蛋白180表达的影响

目的 探讨β-淀粉样肽(Aβ)对人SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞突触素(Syn)、发动蛋白Ⅰ (Dyn Ⅰ)及衔接蛋白180(AP180)表达的影响。 方法 分别应用0.01、0.1、1、2及5μmol/LAβ1-42处理SH-SY5Y细胞,对照组细胞不加任何处理。MTT法检测细胞增殖情况,Western blotting 检测0.5、1μmol/L Aβ1-42处理组及对照组细胞Syn、DynⅠ和AP180蛋白表达,RT-PCR检测1 μmol/L Aβ1-42处理组及对照组细胞Syn、DynⅠ和AP180 mRNA表达。 结果 0.1 μmol/L Aβ1-42处理细胞即可出现细胞增殖率下降,并呈剂量依赖性负性相关关系,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05); 0.5 μmol/L Aβ1-42处理细胞可见DynⅠ蛋白表达降低,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);1 μmol/L Aβ1-42处理细胞可见Syn、DynⅠ蛋白及mRNA表达均降低,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);但未见AP180蛋白及mRNA表达水平发生改变。 结论 Aβ1-42可引起人SH-SY5Y细胞Syn和DynⅠ表达降低,该改变可能与AD发病中学习记忆能力减退有关。     

Hugl-1通过激活RhoA促进脑胶质瘤细胞的侵袭和迁移

目的探讨人源幼虫巨大致死性基因编码的蛋白(Hugl-1)对人脑胶质瘤细胞侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法应用脑胶质瘤U251和U87细胞设立过表达GFP组(对照组)和过表达GFP-Hugl-1组(Hugl-1组)。采用消化实验和贴壁实验检测细胞的黏附能力;以鬼笔环肽免疫荧光实验检测细胞骨架;采用划痕实验、Transwell实验以及明胶酶谱实验研究胶质瘤细胞的侵袭、迁移能力及其可能机制;以细胞组分分离、GST。pull down以及蛋白免疫印迹实验检测过表达Hugl-1对小G蛋白RhoA的水平与活性的影响。结果(1)稳定表达Hugl-1的U251细胞较对照组细胞难以消化,贴壁速度更快,细胞聚团减少(P<0.05)。(2)血清剥夺再给予血清刺激后,与对照组细胞相比,Hugl-1组细胞的板状伪足伸展速度更快且更多。(3)Hugl-1组细胞的迁移与侵袭能力均高于对照组(均P<0.05)。其中,迁移实验显示,15251细胞Hugl-1组24h的迁移细胞数量较对照组增加了(34±6)%(P<0.05);Transwell实验显示,U251和U87细胞中Hugl-1组的侵袭细胞数量分别较对照组增加了(30±7)%和(100±11)%(均P<0.05)。(4)明胶酶谱实验结果显示,过表达Hugl-1增加了MMP2的活性(P<0.05)。(5)过表达Hugl-1能促进U251细胞小G蛋白RhoA转位到细胞膜被激活(P<0.05)。(6)下调RhoA可降低U251细胞的侵袭能力(P<0.05),并能部分逆转Hugl-1促进U251细胞侵袭的作用(P<0.05)。结论Hugl-1可通过调节小G蛋白RhoA促进脑胶质瘤细胞的侵袭和迁移。     

槐定碱通过Wnt/β-catenin信号通路抑制人胶质瘤U87细胞迁移、侵袭

目的 探讨槐定碱对人胶质瘤U87细胞迁移、侵袭能力的影响及其作用机制。方法 体外培养人胶质瘤U87细胞,加入槐定碱[0 mg/ml（对照组）,1.0 mg/ml,2.0 mg/ml,3.0 mg/ml]共培养24 h,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,免疫印迹法检测细胞β-catenin、E-cadherin、Vimentin和MMP-9蛋白表达,RT-PCR检测细胞Vimentin、MMP-9 mRNA表达。结果 槐定碱明显抑制U87细胞迁移、侵袭能力（P<0.001）,而且随浓度增加抑制作用明显增强（P<0.001）。槐定碱明显抑制U87细胞β-catenin蛋白、Vimentin和MMP-9 mRNA和蛋白表达（P<0.01）,明显增强E-cadherin蛋白表达（P<0.01）,而且随浓度增加抑制作用明显增强（P<0.01）。结论 槐定碱能抑制人胶质瘤U87细胞的迁移和侵袭,机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性,阻断细胞上皮间质转化过程。     

利用分化的SH-SY5Y细胞观察加兰他敏对ADAM10和ADAM17表达的影响

目的观察经胆碱酯酶抑制剂加兰他敏处理的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中解整合素样金属蛋白酶(ADAM)10和ADAM17以及可溶性淀粉样前体蛋白α(sAPPα)表达,探讨加兰他敏干预淀粉样前体蛋白(APP)代谢途径的可能机制。方法 SH-SY5Y细胞经全反式维甲酸诱导分化后,分别在含0.3、0.9或10μmol/L加兰他敏的无血清培养基中培养18h。以Western blot方法检测细胞内APP、ADAM10、ADAM17和sAPPα水平。结果 10μmol/L加兰他敏组ADAM17蛋白相对分子质量(Mr)80 000条带表达量(2.0670±0.0903)高于对照组(1.0000±0.0864,P<0.01),亦高于0.3、0.9μmol/L加兰他敏组(分别为1.4422±0.0374、1.8592±0.1018,均P<0.05);ADAM17蛋白Mr 130 000条带表达量(1.5938±0.0476)高于对照组、0.3和0.9μmol/L加兰他敏组(分别为1.0000±0.0523、1.2533±0.0658、1.4724±0.0576,均P<0.05)。与对照组(1.0000±0.0603)比较,0.3、0.9和10μmol/L加兰他敏组sAPPα蛋白的表达量(分别为1.4192±0.1256、1.6779±0.1055和2.3872±0.1495)均增高(均P<0.01)。0.3、0.9和10μmol/L加兰他敏组APP和AD-AM10蛋白水平与对照组比较,均无统计学差异(P>0.05)。结论加兰他敏可使ADAM17表达增加,促进APP代谢过程中sAPPα生成。     

Rho激酶抑制剂Y-27632对人U87胶质瘤细胞侵袭能力的影响

目的观察Rho激酶(ROCKS)特异性抑制剂Y-27632对体外培养的U87胶质瘤细胞侵润能力的影响。方法体外培养U87胶质瘤细胞,采用Transwell体外细胞侵润实验,用浓度分别为0、10、25、50μmol/L的Y-27632处理U87细胞,检测下室中洗脱液的吸光度值(OD值)比较不同浓度的Rho激酶抑制剂Y-27632对人U87胶质瘤细胞侵袭能力的影响。实验结果用SPSS 17.0进行方差分析。结果 Transwell小室培养的U87胶质瘤细胞洗脱液的OD值分别为(0.28±0.052)、(0.22±0.046)、(0.17±0.023)、(0.12±0.034)。其中当Y-27632浓度为25μmol/L时其OD值与对照组统计学处理差异有统计学意义(P<0.05);50μmol/L时其OD值与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);25μmol/L组与50μmol/L组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论适当浓度下Rho激酶抑制剂Y-27632能明显抑制U87胶质瘤细胞的体外侵润能力。     

姜黄素通过IGF-1/Akt/FoxO3a通路保护鱼藤酮诱导PC12细胞的PD模型

目的探究姜黄素(Cur)对鱼藤酮(Ro)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法建立鱼藤酮诱导的PC12细胞的帕金森病模型,利用姜黄素进行干预。实验分组为空白对照组,鱼藤酮模型组(终浓度:0.1μmol/L),姜黄素干预组(终浓度:0.5μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L)。MTT比色法检测细胞活力,AO/EB荧光染色法观察细胞的凋亡情况,AnnexinⅤ-FITC/P双染检测细胞凋亡,Western-blot法检测细胞内IGF-1、Akt、FoxO3a的蛋白表达。结果 MTT结果显示:鱼藤酮组较对照组细胞活力明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01),0.5μmol/L和1.0μmol/L姜黄素干预组可减轻0.1μmol/L鱼藤酮对PC12细胞增殖活力的影响,明显抑制了鱼藤酮对PC12细胞凋亡的诱导作用,与鱼藤酮组比较差异有统计学意义(P<0.01)Western-blot结果示:鱼藤酮组较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01),0.5μmol/L和1.0μmol/L姜黄素干预组IGF-1、磷酸化的Akt(p-Akt)、磷酸化的FoxO3a(p-FoxO3a)表达与鱼藤酮组比明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。以上结果均显示5.0μmol/L和10μmol/L姜黄素干预组与鱼藤酮组比较差异无统计学意义(P>0.05);结论适宜浓度的姜黄素对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的PD模型具有保护作用,其保护作用呈浓度依赖性,其保护作用的机制可能与激活IGF-1/Akt/FoxO3a通路有关。     

上调LRIG1对胶质瘤U251细胞侵袭、迁移的影响

目的 探讨上调LRIG1表达对胶质瘤U251细胞侵袭及迁移的影响。方法 体外培养U251细胞，应用LipofectamineTM 2000试剂盒将质粒pLRIG1-GFP（pLRIG1-GFP组）及其空载pEGFP-N1质粒（pEGFP-N1组）转染U251细胞，G418挑选具有抗性的细胞并扩增，以供进一步实验。另选择不转染任何质粒U251细胞作为空白对照组。qRT-PCR、免疫印迹法检测LRIG1及细胞上皮-间充质转化（EMT）标志蛋白SNAI2、E-cadherin、N-cadherin和vimentin的mRNA和蛋白表达；应用Transwell小室实验检测U251细胞侵袭和迁移能力。结果 成功构建高表达LRIG1的胶质瘤U251细胞，荧光显微镜下可见细胞散发绿色荧光。pLRIG1-GFP组LRIG1 mRNA及蛋白表达水平明显高于pEGFP-N1组和空白对照组（P<0.05），而后两组之间均无统计学差异（P>0.05）。pLRIG1-GFP组侵袭和迁移细胞数明显低于pEGFP-N1组和空白对照组（P<0.05），而后两组之间均无统计学差异（P>0.05）。pLRIG1-GFP组SNAI2、N-cadherin、vimentin mRNA及蛋白表达水平明显低于pEGFP-N1组和空白对照组（P<0.05），而E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显高于pEGFP-N1组和空白对照组（P<0.05）；后两组之间均无统计学差异（P>0.05）。结论 上调LRIG1，抑制U251细胞侵袭和迁移，其机制可能与调控细胞EMT过程有关。     

Aβ_(1-42)寡聚体对α-syn过表达SHSY5Y~(A53T)细胞自噬功能的影响

目的构建人A53T突变型α-突触核蛋白过表达的SHSY5Y细胞模型,观察Aβ_(1-42)寡聚体对细胞的毒性作用和自噬功能的影响。方法利用慢病毒稳转方法构建A53T突变型α-突触核蛋白过表达的SHSY5Y细胞及空载体对照细胞,RT-qPCR方法检测SHSY5Y细胞中α-突触核蛋白mRNA的表达。用Aβ_(1-42)寡聚体干预两组细胞24 h,CCK-8法检测Aβ_(1-42)寡聚体对细胞增殖的影响,Western Blot检测细胞自噬相关蛋白的表达水平。结果慢病毒转染SHSY5Y细胞后,过表达组细胞内α-突触核蛋白表达水平较正常细胞组及开载体对照组增加,差异有统计学意义(P0.001);人A53T突变型α-突触核蛋白过表达不影响细胞的增殖;不同浓度Aβ_(1-42)寡聚体(0、0.5μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)处理细胞24 h后,细胞增殖抑制率成浓度依赖性;Aβ_(1-42)寡聚体处理后,α-突触核蛋白过表达组细胞LC3-Ⅱ,Beclin-1自噬蛋白表达水平较对照组细胞显著降低(P0.05)。结论人A53T突变型α-突触核蛋白过表达不影响的SHSY5Y细胞增殖,Aβ_(1-42)寡聚体对α-突触核蛋白过表达细胞具有显著毒性,对细胞的损伤机制可能通过抑制细胞自噬功能。     

西洛他唑对人血管内皮细胞增殖及P38MAPK表达的抑制作用

目的 观察西洛他唑(CLZ)对体外培养的血管内皮细胞(VEC)增殖和磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达的影响.方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞饵(HUVECs)株EA.hy926,应用10、30、100、300 μmo/L CLZ作用24h(同时设空白对照组)后采用MTT法检测HUVECs的增殖状态,Western blotting检测细胞磷酸化P38MAPK蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,30、100、300 μmo/L CLZ组细胞A值降低,且30、100、300μmo/L CLZ组之间比较细胞A值依次降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);与空白对照组比较,30、100、300 μmol/L CLZ组细胞磷酸化P38MAPK蛋白的表达下降,且300 μmol/L CLZ组细胞磷酸化P38MAPK蛋白表达低于30μmol/L CLZ组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CLZ对体外培养的VEC增殖和磷酸化P38MAPK蛋白的表达均有明显的抑制作用.     

不同TGF-β表达量的hAMSCs尾静脉移植对异种周围神经移植小鼠坐骨神经功能的影响

目的探讨不同转化生长因子-β(TGF-β)表达量的人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)尾静脉移植对异种周围神经移植小鼠坐骨神经功能的恢复作用。方法从健康剖宫产产妇志愿捐献的新鲜羊膜中分离出hAMSCs,并进行纯化及鉴定。构建上调和下调TGF-β表达的慢病毒质粒,并转染纯化的hAMSCs,构建出稳定的上调或下调TGF-β表达的hAMSCs。分离并剪去C57BL/6小鼠的部分坐骨神经,将SD大鼠的坐骨神经分离剪取并移植至小鼠的坐骨神经缺损处,构建出异种周围神经移植小鼠模型。将模型小鼠按随机数字表分为对照组、未修饰的hAMSCs治疗组、高表达TGF-β的hAMSCs治疗组、低表达TGF-β的hAMSCs治疗组,每组10只。各组于造模前1 d分别经尾静脉注射磷酸盐缓冲液或相应的hAMSCs重悬液进行移植治疗。于治疗后第14天时采用DigGait步态分析系统评估各组小鼠的坐骨神经功能恢复情况。结果治疗后第14天时,高表达TGF-β的hAMSCs治疗组小鼠的坐骨神经功能指数(-25.820±0.286)明显高于低表达TGF-β的hAMSCs治疗组(-33.413±0.920)和未修饰的hAMSCs治疗组(-30.755±0.421),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高表达TGF-β的hAMSCs尾静脉移植能够更有效地改善异种周围神经移植小鼠的坐骨神经功能,其可能成为周围神经损伤治疗的新突破口。     

异甘草素对SHG44人脑胶质瘤干细胞增殖和分化的影响

目的探讨不同浓度异甘草素对SHG44人脑胶质瘤干细胞增殖和分化的影响及机制。方法实验分为二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对照组,异甘草素(10~160μmol/L)诱导组,氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰)-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯(N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-1-alanyl]-S-ph,DAPT)(2.0μmol/L)阻断剂组,异甘草素+阻断剂组(10~160μmol/L+2.0μmol/L DAPT),采用CCK-8法、免疫荧光染色、Western blot及Real-time PCR分别检测细胞抑制率、相关分化蛋白及Notch1通路相关基因表达情况。结果异甘草素在12~48 h,随着浓度增加,细胞抑制率减弱(P0.05),且分化细胞越多,干细胞减少;72 h后随着浓度增加,细胞抑制率增强(P0.05),分化细胞及干细胞同时减少;隔日加药至第7 d时,经统计分析胶质瘤干细胞球数目减少、直径减小(与对照组比),且P0.05。异甘草素作用72 h后:与对照组比较,随着异甘草素浓度的增加Nestin蛋白表达量逐渐下调(P0.05);与对照组比较,10、40、160μmol/L组GFAP蛋白表达水平均上调(P0.05),且40μmol/L组GFAP蛋白表达量较其他浓度组均较高,(P0.05);与对照组比较,10、40、160μmol/L组β-TubulinⅢ蛋白表达水平均上调(P0.05),且10μmol/L组β-TubulinⅢ蛋白表达量较其他浓度组均较高(P0.05)。Notch1通路阻断剂作用后,与对照组比较,各异甘草素组和阻断剂组Notch1、RBP-JK及Hes1基因表达均显著下调(P0.05);与异甘草素组比较,Notch1、RBP-JK及Hes1基因表达在异甘草素加DAPT组及阻断剂组显著下调(P0.05);与阻断剂组比较,Notch1、RBP-JK及Hes1基因表达在异甘草素加DAPT组显著下调(P0.05)。结论异甘草素能诱导SHG44人脑胶质瘤干细胞向星形胶质细胞和神经元细胞分化,且能抑制其增殖,可能与下调Notch1信号通路中的Notch1、RBP-JK及Hes1有关。     

阻断转化生长因子-β信号通路对胶质瘤血管生成拟态的抑制作用

目的 探讨阻断转化生长因子-β(TGF-β)信号通路对胶质瘤血管生成拟态(VM)的影响及其可能机制. 方法 三维培养人脑胶质瘤细胞系U251、SHG44,观察U251培养上清、TGF-β因子对SHG44细胞形成VM的影响;比较0μg/mL(PBS组)、15 μg/mL(Ab15组)、30 μg/mL (Ab30组)TGF-β中和抗体对U251、SHG44细胞形成VM的影响;酶联免疫吸附法(ELISA)检测空白组、PBS组、Ab15组,Ab30组U251培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)及血小板衍生生长因子(PDGF)的表达以及空白组、TGF-β组、PBS组、Ab15组,Ab30组SHG44细胞上清VEGF、PDGF的表达. 结果 三维培养时,U251细胞排列形成VM,SHG44细胞并不形成VM,而仅仅相互聚集成大小不等的细胞集落;U251培养上清可以诱导SHG44细胞形成VM,且在培养24～48 h最为明显,TGF-β因子不能诱导SHG44细胞形成VM;PBS组、Ab15组、Ab30组U251细胞环状结构数量依次降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与U251上清共培养的SHG44细胞在加入TGF-β中和抗体后,3组细胞形成环状结构数量也依次降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与空白组和PBS组比较,Ab15组、Ab30组U251细胞上清中VEGF、PDGF浓度下降,差异有统计学意义(P＜0.05),与空白组和TGF-β组相比,PBS组、Ab15组、Ab30组SHG44细胞上清中两种因子浓度均增高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 抑制TGF-β信号通路可以使胶质瘤VM形成能力下降,这可能与VEGF及PDGF表达减少有关.     

转化生长因子β1、血清应答因子和波形蛋白在脑胶质瘤中的表达及相关性

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)、血清应答因子(SRF)和波形蛋白在脑胶质瘤中的表达及相关性。方法采用免疫组织化学染色法分别检测脑胶质瘤组织(胶质瘤组)和正常脑组织(正常对照组)中TGF-β1、SRF和vimentin的表达情况。结果 TGF-β1、SRF、波形蛋白在胶质瘤组中阳性表达率显著高于正常对照组(P0.05~0.01)。高级别患者的TGF-β1、SRF、波形蛋白阳性率显著高于低级别患者(均P0.05)。胶质瘤组不同性别、年龄、部位、肿瘤大小患者的TGF-β1、SRF、波形蛋白阳性率差异无统计学意义(均P0.05)。SRF分别与TGF-β1及波形蛋白在脑胶质瘤组织中的表达呈正相关(r=0.348,P=0.002;r=0.506,P=0.000)。结论 TGF-β1、SRF和波形蛋白在脑胶质瘤中的表达显著增高,其在脑胶质瘤的发生、发展中可能起到重要的调控作用,并与脑胶质瘤的恶性程度关系密切。     

甲基-β-环糊精干扰脂质微区影响脑胶质瘤细胞系C6侵袭和迁移的体外研究

目的观察甲基-β-环糊精(MβCD)破坏脂质微区结构对经体外培养的大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞侵袭和迁移能力的影响。方法采用MβCD(5mmol/L)破坏经体外培养的大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞膜脂质微区,通过Transwell细胞侵袭和迁移实验检测细胞侵袭性和迁移能力;Western blotting检测细胞膜脂质微区结构蛋白Caveolin-1和膜受体表皮生长因子受体表达水平的变化。结果干扰组大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞Caveolin-1和表皮生长因子受体表达水平明显低于对照组(P=0.000,0.001)。对照组大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞穿过聚碳酸酯微膜数目为(54.00±9.59)个/视野,干扰组为(23.94±5.56)个/视野,两组比较差异有统计学意义(P=0.000)。对照组大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞迁移至空白端的细胞数目为(134.00±9.68)个/视野,干扰组为(88.00±6.22)个/视野,两组比较差异有统计学意义(P=0.000)。结论甲基-β-环糊精破坏脂质微区结构后可降低经体外培养的大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞的侵袭性和迁移能力,其机制可能与降低Caveolin-1和表皮生长因子受体等多种膜蛋白和受体表达水平有关。