大鼠急性坏死性胰腺炎肠黏膜屏障功能障碍的观察

目的: 观察急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肠黏膜屏障功能的变化。方法: SD大鼠80只随机分为假手术组(n=40)和ANP组(n=40)。胆胰管内逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液制作ANP模型。观察大鼠胰腺和回肠的病理变化,动态测定肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)、内毒素水平及肠系膜淋巴结和门静脉血细菌移位率。结果: 模型制作后2h血清IFABP明显升高,6h达到峰值(P<0.01),24h后降低。早期内毒素水平有明显升高,48h达到峰值(P<0.01)。肠系膜淋巴结细菌移位在ANP24h后明显升高,48h达到6/8只(P=0.013),门静脉血细菌移位48h达到3/8只(P=0.216)。结论: ANP早期肠黏膜屏障功能受损,引发肠道细菌和内毒素移位,IFABP可能是ANP早期肠黏膜屏障功能受损的预警指标。     

大鼠急性坏死性胰腺炎时P物质在肠壁上的表达及其与肠黏膜通透性的关系

目的:了解急性坏死性胰腺炎(ANP)时大鼠回肠组织中P物质的表达及其与肠黏膜通透性的关系。方法:健康成年SD大鼠随机分为对照组40只和ANP组40只,对照组开腹后只翻动胰腺,ANP组大鼠胰胆管恒速逆行注射5%牛黄胆酸钠制成ANP大鼠模型,分别于制模成功后8、12、16和20 h处死大鼠采取标本。用同位素法测定肠黏膜通透性,免疫组织化学方法检测P物质在回肠组织中的表达水平和组织学定位。结果:ANP组大鼠回肠组织中P物质的表达以及肠黏膜通透性(99mTc-DT-PA排泄率)较对照组明显增加(P<0.05)。P物质在回肠组织中的表达与肠黏膜通透性呈明显正相关(r=0.66,P<0.01)。结论:ANP时大鼠回肠组织中P物质表达升高,且随时间延长而增加,其表达与大鼠肠黏膜通透性呈正相关。     

Occludin在重症急性胰腺炎小鼠肠黏膜屏障损伤中表达的实验研究

目的:探讨occludin蛋白在重症急性胰腺炎(SAP)小鼠肠黏膜屏障功能损伤中作用的调控机制。方法:采用雨蛙肽和内毒素联合注射法制备小鼠重症急性胰腺炎模型。分为3组:对照组、模型组、二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)干预组,18 h后处死动物,比较各组的腹腔内大体改变、肠黏膜病理改变,肠道通透性的变化,肠上皮紧密连接蛋白oc-cludin、NF-κB mRNA表达。结果:重症急性胰腺炎造成了小鼠腹腔内明显炎症反应,肠管水肿,肠黏膜水肿,肠道通透性显著增高,NF-κB特异性阻断剂PDTC能降低肠道损伤,改善肠黏膜水肿,上调肠上皮紧密连接蛋白occludin的表达,降低NF-κB mRNA表达,显著降低肠道通透性,occludin与NF-κB mRNA表达呈显著负相关。结论:紧密连接蛋白oc-cludin在SAP时肠道屏障功能损伤过程中起重要作用。这一作用可能是通过NF-κB的调节作用实现的。     

盐酸戊乙奎醚减轻大鼠创伤失血性休克后肠道黏膜的损伤

目的：观察盐酸戊乙奎醚处理创伤失血性休克大鼠后肠道屏障形态学和通透性的变化。方法24只雄性SD大鼠按随机原则分为假创伤休克（Sham）组、常规复苏（Cont）组和常规复苏联合盐酸戊乙奎醚（Pene）处理组,观察小肠黏膜形态学变化,以判定肠道屏障功能状况。结果 Sham组肠道黏膜层上皮细胞结构完整,肠腔侧微绒毛排列紧密、整齐,固有层有少量淋巴细胞,仅偶见膜通透性增高的“暗细胞”;Cont组黏膜上皮细胞可见明显的损伤性改变,表现为水肿、坏死,甚至糜烂、脱落,较多炎症细胞浸润,上皮细胞表面微绒毛脱落、细胞膜破损、胞质基质外溢、线粒体肿胀,“暗细胞”明显增多;Pene组肠黏膜形态学损伤性改变明显减轻,仅见少量“暗细胞”。结论以盐酸戊乙奎醚处理常规复苏的创伤失血性休克大鼠,可明显减轻肠道黏膜的形态学损伤,降低休克复苏后肠道黏膜上皮细胞膜通透性的改变,保护了肠道屏障功能。     

腺苷酸活化蛋白激酶在重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障损伤机制中的作用

目的 探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)在重症急性胰腺炎SD大鼠肠道紧密连接损伤中的作用.方法 给予SD大鼠腹腔注射不同剂量的20％ L-精氨酸溶液,分别制备大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)及轻症急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)模型,通过检测血清淀粉酶水平、胰腺病理改变以证实胰腺炎模型构建成功.对SAP 大鼠分别给予AMPK抑制剂Compound C和谷氨酰胺灌胃处理,小肠组织切片染色观察大鼠小肠组织损伤情况;FITC-Dextran通透实验检测肠道通透性;免疫组化和Western blot方法分别检测肠黏膜细胞αSNAP、AMPK和紧密连接蛋白occludin的表达情况.结果 病理切片证实胰腺炎模型构建成功,并且抑制AMPK后明显降低重症急性胰腺炎的病理损伤;SAP大鼠肠黏膜损伤明显,而加入AMPK抑制剂Compound C或肠黏膜保护剂谷氨酰胺可明显抑制SAP大鼠肠黏膜损伤;SAP组建模48 h(410.25± 7.80)的肠道通透性相对于对照组(0.51±0.61)显著增强(P＜0.05),而加入AMPK抑制剂Compound C48 h的Com组(372.95 ±9.33)或肠黏膜保护剂谷氨酰胺的Gin组(367.93±18.90) (P ＜0.05),可明显降低SAP大鼠肠道通透性;重症急性胰腺炎时,αSNAP表达下调(P＜0.05),而AMPK表达明显增强(P＜0.05),加入AMPK抑制剂可以明显上调occludin的表达(P＜0.01),提示AMPK对occludin蛋白存在负性调控.结论 AMPK信号在大鼠重症急性胰腺炎肠黏膜损伤中过度活化,可通过负性调控occludin蛋白的表达导致肠黏膜损伤,从而促进肠黏膜通透性增强.     

复方大黄片对脓毒症患者血浆D-乳酸及前降钙素表达的影响

手术、感染、炎性肠病等多种应激状态或疾病,均可造成肠道黏膜屏障损害,表现为肠道黏膜萎缩、破损、肠道黏膜通透性增高,严重时可致毒素和细菌移位,发生肠源性感染和多脏器功能衰竭。近年来,肠源性感染作为一种重要的病理生理现象已引起人们的广泛关注。本文作者观察应用复方大黄片对脓毒症患者肠黏膜通透性的保护作用。现报告如下。     

复方大黄片对脓毒症患者血浆D-乳酸及前降钙索表达的影响

手术、感染、炎性肠病等多种应激状态或疾病，均可造成肠道黏膜屏障损害，表现为肠道黏膜萎缩、破损、肠道黏膜通透性增高，严重时可致毒素和细菌移位，发生肠源性感染和多脏器功能衰竭。近年来，肠源性感染作为一种重要的病理生理现象已引起人们的广泛关注。本文作者观察应用复方大黄片对脓毒症患者肠黏膜通透性的保护作用。现报告如下。     

急性坏死性胰腺炎早期肠源性感染的实验研究

目的 通过PUC18质粒载体菌（JM109）示踪法，观察急性坏死性胰腺炎（ANP）时肠屏障损伤与肠道细菌移位情况，探讨ANP继发感染的机理。方法 杂种犬15只于定植PUC18质粒菌JM109后，分ANP组（n=8)和对照组（n=7)。采用气相色谱法测定尿中甘露醇和乳果糖的含量，测定血中二胺氧化酶（DAO）活性和内毒素（LPS）浓度；每日血培养；第7天活杀后，各组脏器标本作细菌培养，肠粘膜菌群分析，所有而氨苄青霉素菌作质粒DNA分析结果 ANP犬肠粘膜上皮绒毛破损，肠通透性显著增加，血浆DAO活性下降，肠道微生态出现明显紊乱，血和脏器出现细菌移位，血中LPS浓度升高1-3倍，ANP犬胰腺中PUC18质粒菌移位率为87.5%。结论 本研究提示，ANP后肠屏障功能严重受损，发生肠道细菌移位。肠源性感染是ANP继发感染的根源。     

急腹症Ⅲ号对呼吸机相关性肺炎大鼠肠道通透性及细菌移位的影响

目的观察急腹症Ⅲ号对呼吸机相关性肺炎模型大鼠肠黏膜屏障的影响,并探讨其作用机制。方法选择清洁型雄性SD大鼠100只,随机分为5组。急腹症Ⅲ号组:VAP(呼吸机相关性肺炎)模型,每日灌胃急腹症Ⅲ号2 m L;谷氨酰胺组:VAP模型,每日灌胃谷氨酰胺颗粒2 m L;急腹症Ⅲ号联合谷氨酰胺组:VAP模型,每日灌胃急腹症Ⅲ号及谷氨酰胺颗粒各2 m L;安慰剂组:VAP模型,每日灌胃生理盐水2 m L;空白对照组:无特殊处理,每日灌胃生理盐水2 m L。术后第5天收集尿液,采用乳果糖/甘露醇法评价肠黏膜通透性,第6天处死大鼠取肠系膜淋巴结进行培养。结果肠道通透性方面,安慰剂组较空白对照组L/M(乳果糖/甘露醇)明显增大(P0.05),其余三个干预组与空白对照组相似,急腹症Ⅲ号组L/M大于谷氨酰胺组,但差异无统计学意义。细菌移位方面,安慰剂组明显高于空白对照组(P0.01),其余三组阳性率均低于安慰剂组(P0.05)。培养结果主要为肠道寄生菌(大肠杆菌为主)。结论呼吸机相关性肺炎模型破坏了大鼠的小肠黏膜结构并增加了肠道通透性,出现肠道细菌移位。院内制剂急腹症Ⅲ号可使肠黏膜通透性减小,促进肠黏膜结构修复,减少肠道菌群移位。谷氨酰胺和急腹症Ⅲ号联合使用对肠道黏膜结构保护作用并没有更加明显。     

急性坏死性胰腺炎肠道超微结构改变和褪黑素的保护作用

目的 观察急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肠道超微结构及其通透性的变化,探讨褪黑素(MT)对肠道屏障功能(IBF)的影响.方法 将72只SD大鼠随机分成ANP组、MT组、假手术组(SO组),各24只.ANP组和MT组大鼠采用胰胆管末端穿刺逆行注入5%牛磺胆酸钠制备ANP模型.MT组于制模前腹腔注射MT溶液.术后4、12、24、48 h处死动物,用ELISA法测血清肠脂肪酸结合蛋白(IFABP),光镜下观察末端回肠病理改变,电镜下观察回肠组织超微结构变化,TUNEL法观察肠上皮细胞凋亡情况.结果 SO组大鼠胰腺及回肠黏膜未见明显病理改变,回肠组织超微结构无明显变化,TUNEL法检查未见明显细胞凋亡;ANP组大鼠光镜下可见回肠柱状上皮细胞坏死、绒毛脱落,回肠超微结构异常最明显,上皮细胞微绒毛排列紊乱且短矮,TUNEL法提示回肠上皮凋亡细胞较多,以绒毛顶端为主;MT组大鼠病理改变、超微结构异常均较ANP组减轻,上皮凋亡细胞较ANP组减少.ANP组大鼠各时点血清IFABP水平较SO组显著升高,差异有统计学意义(P均＜0.05);而MT组大鼠各时点血清IFABP水平较ANP组显著下降,差异亦有统计学意义(P均＜0.05).结论 ANP可导致IBF障碍,肠上皮细胞有不同程度的坏死和凋亡.提示ANP发病早期肠道上皮细胞凋亡和增生之间失去平衡是IBF障碍的病理机制之一.予以MT干预,可以改善ANP发病后的肠道病理改变和肠道超微结构异常,其作用途径可能是通过抗氧化作用及抑制炎症反应,有待进一步的研究证实.     

基因重组碱性成纤维细胞生长因子对急性坏死性胰腺炎犬肠道细菌移位的影响

目的探讨基因重组碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对急性坏死性胰腺炎（ＡＮＰ）犬肠道细菌移位的影响。方法杂种犬２３只,分对照组（ｎ＝７）、ＡＮＰ组（ｎ＝８）和ｂＦＧＦ组（ｎ＝８）。ｂＦＧＦ组犬复制ＡＮＰ模型后,每日静脉注射ｂＦＧＦ（５μｇ／ｋｇ）。结果ｂＦＧＦ治疗后,ＡＮＰ犬肠粘膜损伤明显减轻,脏器细菌培养阳性率下降５０％,细菌移位数量减少９３．３％－９６．７％,肠粘膜蛋白质、ＤＮＡ含量显著增加（Ｐ＜０．０５）,丙二醛含量明显减少（Ｐ＜０．０５）。结论ｂＦＧＦ可显著减少ＡＮＰ时肠道细菌移位,其机制可能是通过增加肠粘膜蛋白质合成,促进肠粘膜损伤修复。     

急性坏死性胰腺炎肠通透性及病理改变实验观察

目的观察急性坏死性胰腺炎（ＡＮＰ）犬肠通透性变化及肠粘膜病理改变。方法１５只杂种犬,分为ＡＮＰ组（ｎ＝８）和对照组（ｎ＝７）,经主胰管注入牛磺胆酸钠和胰蛋白酶复制ＡＮＰ模型。用气相色谱法检测尿中乳果糖／甘露醇（Ｌ／Ｍ）比值,第７天剖杀,取回肠粘膜作病理观察。结果ＡＮＰ犬尿中Ｌ／Ｍ比值高出对照组２～１０倍。肠粘膜顶端上皮脱落,脱落处有大量细菌侵入,微绒毛部分脱落,面积减少。血浆内毒素水平高出对照组１～２倍,二胺氧化酶活性下降,细菌移位率１００％。结论ＡＮＰ时肠粘膜严重受损,监测尿中Ｌ／Ｍ比值变化可反映早期肠粘膜损伤。     

谷氨酰胺对大鼠急性坏死性胰腺炎肠道细菌移位的影响

目的 观察谷氨酰胺（ＧＬＮ）对急性坏死性胰腺炎（ＡＮＰ）大鼠肠道细菌称位的影响。方法 将实验大鼠１２０只,随机分成对照组、ＡＮＰ组及ＧＬＮ组,每组各４０只,ＡＮＰ模型采用结扎胰胆管诱发,ＧＬＮ组制作ＡＮＰ后灌入ＧＬＮ,观察３组肠粘膜组织学和ＤＮＡ含量,肠系膜淋巴结,胰腺组织细菌培养及吖啶橙标记菌实验。结果 ＡＮＰ后７２ｈ,肠粘膜出现明显损伤,ＤＮＡ含量下降,肠系膜淋巴结,胰腺组织细菌培养计数明显升     

急性坏死性胰腺炎后肠道细菌与胰腺感染关系的研究

为探讨急性坏死性胰腺炎（ANP）的感染源，将PUC18质粒菌JM109置入15只犬肠道内，定植后，随机分为胰腺炎组（n＝8）及对照组（n＝7）。每日抽血作细菌培养。第7天活杀后，作脏器细菌培养。对耐氨苄青霉素菌株进行酶切分析及琼脂糖凝胶电泳。结果显示，除肾及脾脏外，其余脏器均发现有JM109菌移位，以胰腺移位率最高（6／8）；血培养及腹水中同样找到质粒菌JM109，发病后24h血培养阳性率高达4／8。提示肠道细菌移位是继发性胰腺感染的感染源。     

急性坏死性胰腺炎早期肠源性感染的实验研究

目的通过ＰＵＣ１８质粒载体菌（ＪＭ１０９）示踪法,观察急性坏死性胰腺炎（ＡＮＰ）时肠屏障损伤与肠道细菌移位情况,探讨ＡＮＰ继发感染的机理。方法杂种犬１５只于定植ＰＵＣ１８质粒菌ＪＭ１０９后,分ＡＮＰ组（ｎ＝８）和对照组（ｎ＝７）。采用气相色谱法测定尿中甘露醇和乳果糖的含量：测定血中二胺氧化酶（ＤＡＯ）活性和内毒素（ＬＰＳ）浓度：每日血培养;第７天活杀后,各组脏器标本作细菌培养,肠粘膜菌群分析,所有耐氨苄青霉素菌作质粒ＤＮＡ分析。结果ＡＮＰ犬肠粘膜上皮绒毛破损,肠通透性显著增加,血浆ＤＡＯ活性下降,肠道微生态出现明显紊乱,血和脏器出现细菌移位,血中ＬＰＳ浓度升高１－３倍,ＡＮＰ犬胰腺中ＰＵＣ１８质粒菌移位率为８７．５％。结论本研究提示,ＡＮＰ后肠屏障功能严重受损,发生肠道细菌移位,肠源性感染是ＡＮ－Ｐ继发感染的根源。     

谷氨酰胺(GLN)对烧伤大鼠肠道粘膜损伤的保护作用

目的：观察肠饲谷氨酰胺（GLN）对烧伤大鼠肠粘膜的保护作用。方法：采用30%Ⅲ°烧伤大鼠早期肠道喂养模型，将20只大鼠随机分为GLN组（n =10）和NON-GLN（n =10）组，一周后处死动物，无菌取肠系膜淋巴结行细菌培养，统计细菌移位率；取门静脉血检测内毒素；对回肠粘膜行光镜检查，并用显微图像分析仪对大鼠回肠粘膜的厚度、绒毛高度和隐窝深度进行计算机图像分析。结果：GLN组大鼠回肠粘膜的厚度、绒毛高度和隐窝深度较NON-GLN组明显增加；GLN组门静脉血内毒素含量及GLN组肠系膜淋巴结细菌移位率明显低于NON-GLN组。结论：提示肠道补充GLN能有效地维护严重烧伤后肠道粘膜的结构，减少细菌移位和减少内毒素进入门静脉。     

Effects of lactulose on intestinal endotoxin and bacterial translocation

Objective To investigate the effects of lactulose on intestinal bacterial overgrowth (IBO), bacterial translocation (BT), intestinal transit and permeability in cirrhotic rats.
Methods BT in all animals was assessed by bacterial culture of mesenteric lymph node (MLN), liver and spleen, and IBO was assessed by a jejunal bacterial count of the specific organism. Intestinal permeability was determined by the 24-hour urinary 99mTc-diethylenetriaminepentaacetate (99mTc-DTPA) excretion, and intestinal transit was determined by measuring the distribution of 51Cr in the intestine.
Results BT and IBO were found in 48% and 80% of the cirrhotic rats, respectively, while not in the control rats. Cirrhotic rats with IBO had significantly higher levels of intestinal endotoxin higher rates of bacterial translocation, shorter intestinal transit time and higher intestinal permeability than those without IBO. It was also found that BT was closely associated with IBO and injury of the intestinal barrier. Compared with the placebo group, lactulose-treated rats had lower rates of BT and IBO, which was closely associated with increased intestinal transit and improved intestinal permeability by lactulose.
Conclusions Our study indicate that endotoxin and bacterial translocation in cirrhotic rats may attribute to IBO and increased intestinal permeability. Lactulose that accelerates intestinal transit and improves intestinal permeability might be helpful in preventing intestinal bacterial and endotoxin translocation.     

Effects of lactulose on intestinal endotoxin and bacterial translocation in cirrhotic rats

Objective To investigate the effects of lactulose on intestinal bacterial overgrowth (IBO), bacterial translocation (BT), intestinal transit and permeability in cirrhotic rats.Methods BT in all animals was assessed by bacterial culture of mesenteric lymph node ( MLN), liver and spleen, and IBO was assessed by a jejunal bacterial count of the specific organism. Intestinal permeability was determined by the 24-hour urinary ^99mTc-diethylenetriamine pentaacetatic acid (^99mTc-DTPA) excretion, and intestinal transit was determined by measuring the distribution of ^51Cr in the intestine.Results BT and IBO were found in 48% and 80% of the cirrhotic rats, respectively, while not in the control rats. Cirrhotic rats with IBO had significantly higher levels of intestinal endotoxin higher rates of bacterial translocation, shorter intestinal transit time and higher intestinal permeability than those without IBO. It was also found that BT were closely associated with IBO and injury of the intestinal barrier. Compared with the placebo group, lactulose-treated rats had lower rates of BT and IBO,which were closely associated with increased intestinal transit and improved intestinal permeability by lactulose.Conclusions Our study indicate that endotoxin and bacterial translocation in cirrhotic rats may attribute to IBO and increased intestinal permeability. Lactulose that accelerates intestinal transit and improves intestinal permeability might be helpful in preventing intestinal bacterial and endotoxin translocation.