奶粉与保健食品中坂崎肠杆菌检验方法研究

坂崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)为肠杆菌科、肠杆菌属的革兰阴性小杆菌。坂崎肠杆菌最初以婴儿配方奶粉作为传播媒介导致新生儿出现脑膜炎、败血病、小肠结肠炎坏死等症状，Urmenyi和Franklin在1961年率先报道由坂崎肠杆菌引起的2例脑膜炎。各国为了保护境内婴儿健康的需要，逐步加强对奶粉中坂崎肠杆菌的监控力以降低奶粉污染坂崎肠杆菌所带来的风险。尽快研究奶粉、保健食品中坂崎肠杆菌的检验方法，     

从进口原料奶粉中检出坂崎肠杆菌

目的：检测进口原料奶粉中是否污染坂崎肠杆菌。方法：参照GB／T4789．6-2003致泻性大肠埃希氏菌检验和美国FDA《婴幼儿奶粉中坂崎肠杆菌检测方法》部分。结果：5份进口原料奶粉样品中有2份检出坂崎肠杆菌。结论：本文提示对进口原料奶粉检测坂崎肠杆菌的重要性。     

实时荧光PCR对奶粉中坂崎肠杆菌的检测

目的：研究奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法。方法：针对坂崎肠杆菌16s-23s rDNA间区序列（ITS）设计一对SYBRGreenⅠ染料法引物、一对TaqMan探针法引物及探针，建立奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法，并对实时荧光PCR法、传统方法及PCR方法进行比较。结果：用10株坂崎肠杆菌，18株近源菌验证试验表明，本文所建立的两种实时荧光PCR方法特异性强；加菌试验表明，奶粉中坂崎肠杆菌有1．1cfu／100g时就可检出，灵敏度高；检验时间仅需2d。结论：本文提出的奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法可在实际工作推广。     

奶粉中坂崎肠杆菌检测方法研究

目的：寻找一种快速简便的奶粉中坂崎肠杆菌的检测方法。方法：通过对不同增菌液及分离平板的试验比较，选择对坂崎肠杆菌的检测适宜的预增菌液及分离平板。结果：通过参考菌株的添加试验，灭菌蒸馏水和缓冲蛋白胨水作为检测的预增菌液，增菌效果差异没有显著性，将34株肠杆菌科细菌的参考菌株分别划线接种于显色培养基琼脂（Xα—GlcA）、山梨醇麦康凯琼脂（SMAC）、四甲基伞形酮培养基（NA＋α—MUG）和结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂（VRBGA），选择性分离效果最好的是XαGlcA。结论：推荐使用无菌蒸馏水作为检测的预增菌液，Xα—GlcA或VRBGA为分离平板，API 20E生化试剂盒或VITEK进行生化鉴定。     

奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测

婴儿配方奶粉常因阪崎肠杆西(Enterobaeter sakazakii)污染而成为婴儿感染发病的主要原因"[1,2].为快速、高效对奶粉中阪崎肠杆菌进行检测和监控,本实验针对阪崎肠杆菌外膜蛋白A(ompA)基因[3]设计引物,建立PCR检测方法,并对人工污染细菌的奶粉进行检测,为奶粉中阪崎肠杆菌检测提供新的手段.现将结果报告如下.     

具有EIECO112ac相同抗原阴沟肠杆菌的分离与鉴定

1991年11月,我们在疾病防治、食品监测工作中,从引起数人食物中毒的变质奶粉中分离出与侵袭性大肠菌(EIEC)0_(112ac)诊断血清凝集良好,形态、生物学特性相似于侵袭性大肠菌和阴沟肠杆菌,经噬菌体裂解等试验,确定为阴沟肠杆菌,现将结果报告如下: 1 材料与方法 1.1 菌株来源 该菌从引起一家五口人食物中毒的某乳品厂生产的速溶全脂加糖奶粉     

奶粉中阪崎肠杆菌分离鉴别方法研究

阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）可引发婴儿、早产儿脑膜炎、败血症及坏死性结肠炎，散发和暴发病例在全球范围均有报道。国际相关组织认为，奶粉中的阪崎肠杆菌与沙门菌一样。是导致幼儿感染、死亡的主要原因，已有报道从婴幼儿配方奶粉中检出阪崎肠杆菌。因此，有效地从奶粉中分离阪崎肠杆菌，准确鉴别尤为重要，本根据所有阪崎肠杆菌菌株均产生α-葡萄苷酶的原理，在营养琼脂中添加5-溴-4-氯3-吲哚-α-葡萄苷作为底物，月桂基硫酸盐作为抑制剂，制成改良显色培养基，检测80份市售奶粉，同时使用肠杆菌科细菌生化鉴定试剂（AP120E），对可疑菌株进行鉴别并分析遇到的问题。现报告如下。     

市售国产婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌污染情况调查

目的了解成都市市售国产婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌污染情况,为制定婴幼儿配方奶粉阪崎肠杆菌的限量标准提供科学依据。方法对2006-09/2007-03采集的80份市售婴幼儿配方奶粉进行菌落总数、大肠菌群及阪崎肠杆菌的检测,并对分离的阪崎肠杆菌进行药敏试验。结果所有检测样品中,有5份样品检出阪崎肠杆菌,阳性率为6.25%,且其中4份样品的菌落总数、大肠菌群均合格。分离的阪崎肠杆菌对常用抗生素普遍敏感。结论市售国产婴幼儿配方奶粉中存在少量阪崎肠杆菌污染,应尽快制定婴幼儿配方奶粉中适宜的阪崎肠杆菌微生物限量标准和相应检验方法。     

奶粉中阪崎肠杆菌分离株表型特征分类

阪崎肠杆菌（Enterobactersakazakii）属于肠杆菌属的1个新种。本采用目前应用最广、在微生物鉴定方面得到公认的肠杆菌科细菌生化鉴定试剂（APl20E）分析了阪崎肠杆菌的生化反应特性，并利用阴沟肠杆菌噬菌体进行裂解试验测定了阪崎肠杆菌的易感性，对奶粉中18株阪崎肠杆菌分离株和4株美国典型菌种保藏中心（ATCC）参考菌株进行了表型分类。旨在对奶粉中阪崎肠杆菌分离株的表型特征进行分类，以便准确地对其鉴别。现报告如下。     

兰州市市售婴幼儿配方奶粉中肠杆菌及其它细菌的检测分析

目的:了解兰州市市售婴幼儿配方奶粉中肠杆菌及其它细菌的污染状况。方法:采用传统微生物学分离和鉴定方法就98份兰州市市售婴幼儿配方奶粉的带菌情况加以检测。结果:从5份样品中分离出6种细菌(占检测样品总数的5.10%),包括:产酸克雷伯菌、肺炎克雷伯菌、无花果沙雷氏菌、泛菌属某些种、施氏假单胞菌及洋葱伯克氏菌,其中前4种细菌为肠杆菌科细菌(占分离菌株的87.50%),后2种属于其它细菌科(占分离菌株的12.50%)。结论:兰州市市售的婴幼儿配方奶粉中存在着以肠杆菌为主的多种细菌污染,会对婴幼儿健康构成潜在危害。     

食品及环境分离的阪崎肠杆菌药敏分析

目的了解分离自配方奶粉和婴幼儿食品及奶粉生产环境的阪崎肠杆菌的药物敏感性和耐药性。方法采用纸片扩散法对19株分离自配方奶粉和婴幼儿食品及奶粉生产环境的阪崎肠杆菌进行11大类29种抗生素的药敏实验。结果 19株阪崎肠杆菌对青霉素G、苯唑西林、万古霉素等3种抗生素耐药,对临床常用针对肠杆菌科的抗生素敏感。结论临床中应加强该菌的监测,同时加强对预防用药和临床用药的重视,以减少阪崎肠杆菌多重耐药性的产生。     

成都市市售国产婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌污染情况调查

目的了解成都市市售的国产婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的污染情况。方法对2006年9月至2007年3月采集的80份市售婴幼儿配方奶粉进行菌落总数、大肠菌群及阪崎肠杆菌的检测,并对分离的阪崎肠杆菌进行药敏试验。结果所有检测样品中,有5份样品检出阪崎肠杆菌,阳性率为6.25%,且其中4份样品的菌落总数、大肠菌群均合格。分离的阪崎肠杆菌对常用抗生素普遍敏感。结论中国市售的国产婴幼儿配方奶粉中存在少量的阪崎肠杆菌污染。     

国产婴幼儿配方奶粉及婴幼儿米粉中阪崎肠杆菌分离株的药敏分析

目的:了解北京地区市售国产婴幼儿配方奶粉及婴幼儿米粉中阪崎肠杆菌分离株的药物敏感性及耐药性。方法:采用纸片扩散法对11株分离自婴幼儿配方奶粉及婴幼儿米粉中的阪崎肠杆菌进行8大类17种药敏实验。结果:11株阪崎肠杆菌对苯唑西林和一代头孢菌素(头孢噻吩)100%耐药,对替卡西林、亚胺培南、头孢他定、头孢吡肟、阿莫西林/克拉维酸、环丙沙星高度敏感。结论:针对性使用抗生素,减少阪崎肠杆菌耐药,为临床提供合理用药依据。     

从酱腌菜中检出一株阪崎肠杆菌

目的 了解我市酱腌菜中阪崎肠杆菌的污染状况.方法 按照GB 4789.40-2010《食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》对30份酱腌菜进行阪崎肠杆菌分离培养.结果 检出1株阪崎肠杆菌,检出率为3.3％.结论 说明阪崎肠杆菌不仅存在于婴幼儿奶粉中,其他食品中也存在,对人体存在较大的安全隐患.     

被抑制的阪崎肠杆菌快速复苏的研究

目的:本实验旨在探索婴儿配方奶粉中被抑制的阪崎肠杆菌快速复苏的方法,提高奶粉中阪崎肠杆菌的阳性检出率.方法:通过冷热处理预知浓度的阪崎肠杆菌,人为造成菌细胞受损,生化反应特性改变,再用修复培养基使菌细胞复原.结果:通过热处理,阪崎肠杆菌死亡率为99.90%,细菌生化反应改变17.2%,细菌名称改变58.3%;通过冷处理,阪崎肠杆菌死亡率18.90%,细菌生化反应改变6.1%,细菌名称改变33%;变异的阪崎肠杆菌经丙酮酸盐修复后,细菌生化反应特性恢复69.7%,阪崎肠杆菌恢复63.6%.结论:推荐使用丙酮酸盐修复培养基作为奶粉预增菌液,能提高婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的阳性检出率.     

进口奶制品阪崎肠杆菌检测情况与分析

目的：了解进口奶制品阪崎肠杆菌的污染分布情况，为奶制品进口把关提供科学依据。方法：采用SN/T1632.1-2005方法，对经汕头口岸进口的奶制品共220份样品进行阪崎肠杆菌检验，并对检验结果进行统计分析。结果：从220份的样品中检出阪崎肠杆菌7株，检出率为3.20%；受阪崎肠杆菌污染最严重的是产自新西兰的食用全脂工业奶粉，共检出6份，检出率为12.8%，而所有婴幼儿奶粉均未检出。结论：来自新西兰的食用全脂工业奶粉和来自澳大利亚的钙美健高钙奶粉中阪崎肠杆菌污染较严重，需加大抽样检测比例，并加强检验监管力度。     

奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法的建立

[目的]建立奶粉中阪崎肠杆菌的PCR检测方法。[方法]根据阪崎肠杆菌zpx基因设计引物建立PCR检测方法,进行方法的特异性验证和灵敏度检测,并对模拟样品和实际奶粉样品进行检测。[结果]所建立的阪崎肠杆菌PCR检测方法的纯菌检测灵敏度达102cfu/ml,6株阪崎肠杆菌菌株PCR扩增均可扩增出180bp的目的条带,而31株非阪崎肠杆菌则无目的条带出现;模拟阪崎肠杆菌污染样品经前增菌后均可检出;对实际样品的检测显示该方法与传统的分离培养方法具有较好的一致性。[结论]该方法灵敏度高,特异性强,快速、简便,易于推广,可很好地应用于奶粉中阪崎肠杆菌的检测和鉴定。     

应用VITEK 32检验奶粉中阪崎肠杆菌的探讨

目的阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）是乳制品中新发现的引起广泛关注的一种致病菌，加强对该菌的检验，对预防与控制由该菌所致的感染流行十分重要。方法采用中华人民共和国出入境检验检疫行业标准：SN／T1632．1—2005《奶粉中阪崎肠杆菌检验方法》第1部分：奶粉中阪崎肠杆菌的分离与计数方法，应用VITEK32（全自动微生物鉴定和药敏分析仪）进行检验。结果从原产法国的婴幼儿营养配方奶粉中检出阪崎肠杆菌。结论检出菌株与质控菌株的生化特征基本一致，该方法可使样品中极少量的阪崎肠杆菌被检测和定量。     

婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌与阪崎肠杆菌分离株的药敏分析

目的研究中国婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌及阪崎肠杆菌分离株的药物敏感性。方法采用纸片扩散法测定15株细菌对氨苄西林、头孢唑林、环丙沙星、阿米卡星等8大类共24种抗生素的敏感性。结果 2009年自30份婴幼儿奶粉样品中共分离得到15株肠杆菌科细菌,经生化鉴定,其中肺炎克雷伯菌8株(53.3%),阪崎肠杆菌7株(46.7%)。药敏结果显示:所有菌株对β-内酰胺类抗生素均有不同程度的耐药性,对氟喹诺酮类和氨基糖甙类均敏感。分别有1株肺炎克雷伯菌和1株阪崎肠杆菌几乎对所有头孢类抗生素耐药。结论婴幼儿配方奶粉中肺炎克雷伯菌和阪崎肠杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性较强,其多重耐药性不断的出现对婴幼儿构成了极大的危害。     

PCR快速检测奶粉中阪崎肠杆菌研究

目的：针对当前国内外传统检测方法都存在时间长、检测结果假阳性突出等问题，建立阪崎肠杆菌快速检测法。方法：根据阪崎肠杆菌中寡-1，6-葡萄糖苷酶基因设计引物建立PCR方法，并进行PCR反应的灵敏度、特异性实验以及模拟实际样品的最低检出限测定。结果：纯菌检测灵敏度达10^2 cfu／ml，阪崎肠杆菌菌株PCR扩增均为阳性，阴性对照菌株未扩增出特异性条带；单独接种阪崎肠杆菌（3．5—4．5 cfu／100g）和混合接种大肠杆菌或沙门菌的人工模拟污染奶粉样品中分别在增菌26h和28h时，阪崎肠杆菌均可以检出。结论：该方法灵敏度高、快速、特异性强，可以很好地应用于奶粉以及其他食品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定。