整合素αvβ3对体外骨肉瘤细胞增殖与侵袭力的影响

目的 研究整合素αvβ3在骨肉瘤细胞增殖和侵袭性生长中的作用，为以整合素αvβ3为靶点治疗人骨肉瘤提供实验依据。方法 ①采用MTT比色法和PCNA免疫组化检测法，观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的MG 63骨肉瘤细胞增殖的影响；②建立Boyden小室细胞侵袭模型，观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的骨肉瘤细胞侵袭能力的影响。 结果 ①整合素αvβ3抗体对体外培养的MG 63骨肉瘤细胞的增殖有明显的抑制作用，其作用表现出明显的量效关系(P＜0.05)；②整合素αvβ3抗体显著降低体外培养的MG 63骨肉瘤细胞的侵袭能力，其作用亦表现出明显的量效关系（P＜0.05）。 结论 整合素αvβ3对骨肉瘤细胞的恶性增殖和侵袭性生长具有促进作用，其为抗整合素αvβ3治疗骨肉瘤提供了实验依据。     

High glucose enhance expression of matrix metalloproteinase—2 in smooth muscle cells

目的:通过用高糖对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞进行干预,观察其对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法:用组织贴块法体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,分组后分别予以葡萄糖0,1,5g/L进行干预。分别提取细胞总RNA和总蛋白分别进行逆转录PCR(RT-PCR),Westernblotting检测,同时取出条件培养基经酶谱法(zymography)检测分泌于培养基中的MMP-2活性。结果:经mRNA,蛋白和酶活性检测,均发现在葡萄糖浓度为5g/L时,MMP-2的表达水平较对照和1g/L时明显增加。结论:高糖促进血管平滑肌细胞和内皮细胞内MMP-2表达,提示血管细胞外基质的降解在糖尿病患者动脉粥样硬化发生机制中起着一定作用。     

α干扰素增强顺铂诱导的骨肉瘤细胞凋亡

目的探讨α干扰素对顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及其机制。方法使用α干扰素和顺铂单独或联合处理骨肉瘤U2OS(p53正常)和MG63细胞(p53突变),通过MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测凋亡,Hochest 33258荧光染色检测凋亡形态学变化,RT-PCR检测p53的mRNA表达,Western blot法检测p53、p21、Mdm2、Bax、Bcl-2和PARP蛋白水平的表达。结果药物处理72 h,α干扰素单独对U2OS和MG63细胞的生长无影响,但在U2OS而非MG63细胞中增强顺铂引起的生长抑制和凋亡,并增强凋亡形态学改变和PARP裂解。α干扰素+顺铂可增强p53和Bax的表达,减弱Bcl-2的表达,对p21的表达无影响,α干扰素没有增强顺铂引起的p53的mRNA表达。结论α干扰素通过p53通路在骨肉瘤U2OS细胞中增强顺铂诱导的生长抑制和凋亡。     

ERK1/2信号通路在3种骨肉瘤细胞中的作用和表达水平的研究

目的 观察细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)激动剂表皮生长因子(EGF)和抑制剂PD98059对3种骨肉瘤细胞株U2OS、MG63、UMR106的增殖影响以及ERK1/2基因和蛋白在3种细胞株中的表达水平，筛选出ERK1/2基因和蛋白表达最高的骨肉瘤细胞株用于后续实验研究。方法 采用细胞计数和CCK8法分别测定U2OS、MG63、UMR106细胞的生长情况，同时使用EGF和PD98059分别干预3种细胞株，观察其对3种骨肉瘤细胞增殖的影响；采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测3种细胞株中ERK1/2基因的表达；采用Western-blot检测3种细胞株中ERK1/2蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达情况。结果 细胞计数和CCK8结果均显示，U2OS和UMR106在正常情况下培养48 h可达最佳生长状态，而MG63细胞的最佳生长状态时间为24 h; EGF在干预细胞24 h和48 h均能使U2OS、MG63、UMR106细胞增殖，而PD98059在干预细胞24 h和48 h均能使3种细胞的增殖受到抑制(P<0.05)。RT-qPCR结果显示在培养48 h后，U2OS细胞中的E...     

重组MMP-2对人肾系膜细胞Fkn基因表达和分泌的影响

目的观察重组基质金属蛋白酶-2(MMP-2)对人肾系膜细胞(HRMC)趋化因子Fkn mRNA表达的影响。方法用重组MMP-2干预体外培养的HRMC,逆转录PCR检测Fkn mRNA表达,ELISA法检测HRMC上清液中Fkn蛋白含量。结果 HRMC的Fkn mRNA表达水平随MMP-2浓度增加而增加(P<0.05),上清液中Fkn蛋白含量随MMP-2浓度增加而降低(P<0.05)。结论重组MMP-2可以增加Fkn mRNA的表达,而降低上清液中Fkn蛋白含量。     

糖基化终产物对小鼠成骨样细胞基质金属蛋白酶2分泌的影响

目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对小鼠成骨样细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)分泌的影响.方法 用不同浓度的AGEs(50、100、200、400 mg/L)干预培养的小鼠成骨样细胞(MC3T3-E1)24 h和用200 mg/L的AGEs干预MC3T3-E1不同时间(12、24、48 h),以无血清培养基(α-MEM)和相应浓度的牛血清白蛋白(BSA)为对照.用Western blot法检测小鼠成骨样细胞上清中MMP-2蛋白的表达.结果 不同浓度和不同时间的AGEs干预的MMP-2分泌水平明显高于对照组(P<0.01).结论 AGEs以时间及浓度依赖的方式增加小鼠成骨样细胞MMP-2分泌,AGEs可能通过调节成骨细胞MMP-2的分泌参与骨质疏松的发病.     

胰腺癌细胞中GDNF对MMP-9表达的影响

目的探讨胰腺癌细胞中胶质细胞源神经营养因子(GDNF)对基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的影响。方法用DMEM培养基进行人胰腺癌细胞株MIAPaCa-2和Capan-2细胞培养,利用RT-PCR、Westernblot和ELISA法研究胰腺癌细胞中GDNF对MMP-9mRNA及蛋白表达的影响。结果 RT-PCR实验发现胰腺癌细胞中GDNF能上调MMP-9mRNA的表达,Westernblot法、ELISA法检测结果表明胰腺癌细胞中GDNF能上调MMP-9蛋白的表达,且于GDNF浓度为100μg/L,作用48h时达最大值。结论 GDNF具有上调胰腺癌细胞MMP-9表达的作用,从而增强胰腺癌细胞的侵袭能力。     

维替泊芬影响骨肉瘤MG63细胞增殖和迁移侵袭的作用机制

目的探讨维替泊芬影响骨肉瘤 MG63细胞增殖及迁移侵袭的的作用机制。方法体外培养骨肉瘤 MG63细胞,采用人胆囊收缩素 /缩胆囊素八肽(CCK?8)检测不同浓度(0、2、4、6、8、10 μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤 MG63细胞增殖影响;流式细胞术分析(0、2、4、6、8 μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤 MG63细胞周期分布及凋亡的影响;划痕实验和 TranswellTM侵袭实验检测(0、2、4、6、8 μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤 MG63细胞迁移及侵袭能力的影响;蛋白质印迹法(Western Blot)检测(0、2、4、6、8 μmol/L)维替泊芬对 Hippo信号通路中 Yes?相关蛋白 1(YAP1)、 TEA转录因子 1(TEAD1)、磷酸化 Yes?相关蛋白 1(pYAP1)的蛋白表达水平。结果 CCK?8结果显示维替泊芬能够抑制骨肉瘤 MG63细胞的增殖, 24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(6.592±0.121)μmol/L、(4.668±0.075)μmol/L、(2.953±0.078)μmol/L,并呈时间、浓度依赖性;流式细胞术结果表明维替泊芬以浓度依赖的方式诱导骨肉瘤 MG63细胞凋亡,使骨肉瘤 MG63细胞周期阻滞于 G0/G1期;划痕实验和 TranswellTM侵袭实验结果表明维替泊芬可抑制 MG63细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法结果显示维替泊芬处理的 MG63细胞中 YAP1、TEAD1蛋白表达水平降低,而 pYAP1蛋白表达水平保持不变。结论维替泊芬能抑制骨肉瘤 MG63细胞增殖、促进细胞凋亡、导致细胞周期阻滞,以及抑制细胞迁移和侵袭,并且下调 YAP1及 TEAD1表达,维替泊芬阻碍 YAP1和 TEAD1相互作用可能是抗骨肉瘤的作用机制。     

ZFX基因在骨肉瘤中的表达及其作用机制

目的　探讨X 染色体偶联锌指蛋白（ZFX）基因在骨肉瘤中的表达及其作用机制。方法　采用手术切除后存档的人骨肉瘤组织及瘤旁组织石蜡包埋标本50 例,通过Western blot 检测其中ZFX 的表达。体外培养人骨肉瘤MG63 细胞,分别用ZFX 小干扰RNA（ZFX- siRNA）和阴性对照（siRNA-NC）转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,各组细胞培养48 h后,用Western blot 检测细胞中ZFX、Bcl-2、Bax、β-catenin、CyclinD1 蛋白表达变化;CCK-8 检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果　ZFX 基因在骨肉瘤组织中的蛋白表达显著高于瘤旁组织（P<0.01）;siRNA-NC 组细胞增殖活力、凋亡率及ZFX、Bcl-2、Bax、β-catenin、CyclinD1 蛋白表达与对照组比较无显著差异（P>0.05）;ZFX-siRNA 组细胞活力及ZFX、Bcl-2、β-catenin、CyclinD1 蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Bax 蛋白表达显著高于对照组（P<0.01）。结论　ZFX 基因在人骨肉瘤组织中高表达,可能通过促进人骨肉瘤MG63 细胞增殖并抑制其凋亡在其发生发展过程中发挥重要的作用,其机制可能与Wnt 信号通路的激活有关。     

葛根素对人骨肿瘤细胞株 MG63 的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的 探讨葛根素对人骨肉瘤细胞株MG63的作用及其机制。方法 取对数生长期的MG63细胞分别用不同浓度的葛根素处理(0,25,50,100 mmol·L^-1)。细胞培养48 h后,利用MTT检测MG63细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR检测PI3K、AKT、Bax、Bcl-2、p53 和 p21 mRNA水平。Western blotting 检测PI3K、AKT、Bax、 Bcl-2、p53和p21表达水平。结果 葛根素浓度依赖性的诱导MG63细胞增殖抑制、凋亡和 Bax 表达,减少PI3K、AKT、Bcl-2、p53和p21表达。结论 葛根素可通过抑制PI3K/AKT/p53信号通路而诱导MG63细胞增殖抑制和凋亡。     

慢病毒介导的解整合素-金属蛋白酶17RNA干扰对气道上皮细胞MMP-9表达及NF-κB活性的影响

目的探讨脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的TNF-α/NF-κB信号转导机制及慢病毒介导的解整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)RNA干扰(RNAi)对MMP-9表达的影响。方法构建ADAM17 siRNA慢病毒载体、包装重组慢病毒。以NF-κB抑制剂(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)或TNF-α拮抗剂(etanercept)预处理HBE4-E6/E7细胞,以LPS刺激HBE4-E6/E7细胞24 h。以重组慢病毒感染HBE4-E6/E7细胞72 h后,以LPS或TNF-α刺激HBE4-E6/E7细胞24 h。以半定量RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达;以酶联免疫吸附试验检测TNF-α蛋白含量;以Western blot检测MMP-9蛋白表达;以凝胶阻滞分析实验检测NF-κB活性。结果 LPS或TNF-α刺激均明显增加HBE4-E6/E7细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P<0.05);etanercept和PDTC均明显抑制LPS诱导的MMP-9表达及NF-κB活性(P<0.05)。慢病毒介导的ADAM17 RNAi明显降低LPS诱导的HBE4-E6/E7细胞上清液中TNF-α蛋白含量(P<0.05),亦明显降低MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P<0.05),但不能降低TNF-α诱导的MMP-9mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P>0.05)。PDTC明显抑制TNF-α诱导的MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P<0.05)。结论 TNF-α/NF-κB信号通路参与调控LPS诱导的气道上皮细胞MMP-9的表达,ADAM17通过调节TNF-α释放在其信号通路上游起到重要作用。     

胃泌素对胃癌细胞增殖和COX-2表达的影响

目的 探讨胃泌素和胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对胃癌细胞株SGC-7901增殖和环氧化酶2(COX-2)表达的调控作用.方法 SGC-7901细胞接种于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中常规培养24 h后,换无血清培养基继续培养24 h,加入胃泌素(终浓度为0.1、1、10、100 nmol/L)或胃泌素(100 nmol/L)加丙谷胺(终浓度为1、10、100、1000 μmol/L),分别培养24、48和72 h;MTT比色分析细胞增殖,Western blot检测COX-2蛋白表达.结果 胃泌素呈时间和剂量依赖性地促进SGC-7901细胞增殖,而丙谷胺抑制了胃泌素诱导的细胞增殖.胃泌素增加COX-2在SGC-7901细胞的表达,丙谷胺有效抑制胃泌素诱导的COX-2表达.结论 胃泌素通过胃泌素受体诱导COX-2表达促进胃癌细胞增殖.     

重组MMP-2干预后人肾系膜细胞对单核细胞趋化及黏附的影响

目的 观察重组基质金属蛋白酶2 (MMP-2)干预后人肾系膜细胞(HRMCs)对单核细胞U937趋化及黏附的影响.方法 分别用不同浓度(0、0.625、1.25、2.5、5 ng/ml)重组MMP-2干预体外培养的HRMCs,6h后行U937趋化及黏附实验.用不同浓度(0、0.5、1、2、3、4、5 ng/ml)重组MMP-2干预HRMCs,6h后采用RT-PCR、Western blot检测HRMCs的fractalkine (Fkn) mRNA及其蛋白表达.结果 0、0.625、1.25、2.5、5ng/ml重组MMP-2干预后,每高倍视野的趋化U937细胞数分别为6.55士0.51、14.21±0.95、23.54±1.56、34.48±1.47、48.52±3.55,黏附U937细胞数分别为4.67±0.88、3.33±0.33、2.67±0.56、2.00±0.34、1.33士0.45.Fkn mRNA及蛋白表达水平随MMP-2干预浓度的增加而增加.结论 重组MMP-2干预后,HRMCs对U937的趋化作用增强,黏附作用减弱.     

血管生成素-2在骨肉瘤及MG63细胞株中的表达

目的 研究血管生成素-2(Ang-2)在骨肉瘤患者和骨肉瘤细胞株MG63的表达情况.方法 手术切除的69例骨肉瘤患者骨标本为骨肉瘤组,正常骨组织(创伤性截肢/指)标本12例为对照组.通过RT-PCR 和Western blot 法,检测骨肉瘤患者、正常对照组以及MG63细胞株中Ang-2的表达情况.结果 骨肉瘤组及MG...     

IFN-γ对MMP-2和TIMP-2在HL-60细胞中表达的影响

目的研究白血病细胞株HL-60中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶天然抑制剂-2(TIMP-2)的表达及细胞因子干扰素(IFN-γ)对MMP-2和TIMP-2转录水平的调节。方法分别在HL-60细胞生长的不同时期(1~5d)收集细胞,采用半定量RT-PCR方法,分析白血病细胞株HL-60中MMP-2和TIMP-2 mRNA的表达水平;以不同浓度的IFN-γ作用于HL-60细胞,24、48h后RT-PCR检测MMP-2和TIMP-2mRNA水平的变化。结果细胞接种后24h MMP-2的mRNA水平最高。IFN-γ各个浓度组对MMP-2 mRNA表达均有抑制作用(P<0.05),且随着作用浓度的增高mRNA表达减少;能够增强TIMP-2mRNA表达(P<0.05)。结论明确了白血病细胞株HL-60株在转录水平表达MMP-2和TIMP-2;IFN-γ对MMP-2 mRNA水平有明显的抑制作用,而对TIMP-1mRNA水平有增强作用。     

下调miR-19b表达对骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移及Wnt/β-Catenin通路的影响

摘要：目的:探讨下调miR-19b表达对骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移能力的影响,并探讨可能机制。方法:采用脂质体转染法转染人骨肉瘤MG63细胞,实验分为空白组、miR-19b inhibitor NC组、miR-19b inhibitor组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况,通过Transwell小室法检测各组细胞侵袭、迁移情况,通过免疫印迹(WB)法检测侵袭、迁移以及Wnt/β-连环蛋白(β-Catenin)通路相关蛋白表达情况。结果:与空白组、miR-19b inhibitor NC组相比,miR-19b inhibitor组miR-19b相对表达量、转染后48 h、72 h吸光度(A)值、侵袭与迁移细胞数、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Wnt、细胞核β-Catenin表达水平显著降低(P<0.05),细胞质β-Catenin表达水平显著升高(P<0.05)。结论:下调miR-19b表达可能通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路激活,从而抑制骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移。     

Amicoumacin B对MG63细胞bmp-2转录及蛋白表达作用的研究

目的研究amicoumacin B（04-5195A）对骨形态形成蛋白因子Ⅱ（BMP-2）的作用。方法采用RT-PCR技术，考察amicoumacin B对人骨肉瘤MG63细胞bmp-2基因转录的影响；应用流式细胞分析技术研究amicoumacin B对MG63细胞BMP-2蛋白表达水平的影响。结果与未给药组相比，amicoumacin B给药组MG63细胞的bmp-2基因mRNA水平和BMP-2蛋白水平均呈现明显升高。结论首次证明amicoumacin B有上调bmp-2基因表达的作用。     

特异沉默人核糖核苷酸还原酶M2基因对人骨肉瘤细胞生物学特性的影响

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)基因表达对入骨肉瘤细胞Saos-2生物学影响及分子机制.方法 利用小干扰RNA技术,观察沉默Saos-2细胞中RRM2基因的表达,用实时荧光定量PCR(Real time-PCR)及Western blot技术检测人骨肉瘤细胞Saos-2和人正常成骨细胞hFOB1.19的mRNA及蛋白的表达;用CCK-8方法检测si-RRM2对Saos-2细胞增殖的影响;用Transwell细胞迁移系统检测si-RRM2对Saos-2细胞迁移能力的影响;用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测Saos-2细胞凋亡;采用Western blot技术检测细胞周期调控因子细胞周期素D1(Cyclin D1)和抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白水平变化.结果 Saos-2细胞RRM2 mRNA和蛋白比hFOB1.19细胞高表达;用si-RRM2转染Saos-2细胞后,Real time-PCR结果证实能时间及剂量依赖性下调RRM2基因表达;CCK-8方法结果显示下调RRM2基因会时间及剂量依赖性抑制Saos-2增殖,而人正常成骨细胞增殖抑制没有显著变化;Transwell细胞迁移系统检测显示下调RRM2基因后,显著抑制了Saos-2的迁移能力;si-RRM2联合化疗药物阿霉素促进Saos-2细胞凋亡;Western blot结果显示沉默RRM2后细胞周期调控因子Cyclin D1和抗凋亡蛋白Bcl-2均下调.结论 RRM2的过表达与人骨肉瘤细胞Saos-2的高增殖和迁移能力有关,抑制RRM2的功能是治疗人骨肉瘤的一个潜在的治疗策略.     

利多卡因调控微小RNA-195对骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

目的 探讨利多卡因(lidocaine)对骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及其可能的作用机制.方法 研究于2018年5―12月,体外培养骨肉瘤MG63细胞,不同浓度的利多卡因干预MG63细胞,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测MG63细胞存活率及顺铂半抑制浓度(IC50值);流式细胞术检测细胞凋亡率;实时...     

原阿片碱对人肝星状细胞HSC-LX2增殖的抑制作用及机制研究

目的:考察原阿片碱对人肝星状细胞HSC-LX2增殖的抑制作用,并对其机制进行初步探讨。方法:采用MTT法测定25、50、100、200、400、500μmol/L原阿片碱作用24 h对HSC-LX2细胞增殖的影响,计算细胞增殖抑制率。另取HSC-LX2细胞分为对照组(含5%胎牛血清的1640培养基)和原阿片碱低、中、高浓度组(100、200、400μmol/L),作用24 h后,流式细胞术测定细胞凋亡率;荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)mRNA的相对表达量,Western blot法测定细胞中α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-2蛋白的相对表达量。结果:25、50、100、200、400、500μmol/L原阿片碱对HSC-LX2细胞的增殖抑制率分别为0、6.9%、18.7%、34.2%、48.9%、53.9%。与对照组比较,原阿片碱低、中、高浓度组细胞中CollagenⅠ、TIMP-1 mRNA相对表达量和α-SMA蛋白相对表达量均显著降低,MMP-2蛋白相对表达量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);原阿片碱中、高浓度组细胞的凋亡率和MMP-2 mRNA相对表达量显著升高,α-SMA、CollagenⅢmRNA相对表达量和CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白相对表达量均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:原阿片碱可抑制HSC-LX2细胞增殖,诱导其凋亡,可降低α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、TIMP-1表达,升高MMP-2表达有关。