RNA干扰沉默Ki67基因对裸鼠肾癌细胞移植瘤生长及凋亡的影响

目的应用RNA干扰(RNAi)技术沉默Ki67基因,探讨其对裸鼠人肾癌细胞移植瘤细胞生长及凋亡的影响。方法建立裸鼠人肾癌细胞移植瘤模型,随机分组,于肿瘤内分别注射生理盐水0.2 ml(C组)、pSilencer空质粒20μg/只(P组)、pSilencer-Ki67重组质粒20μg/只(PK组),每隔2天注射一次,共7次。取肿瘤测量体积,免疫组化染色检测Ki67的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 PK组移植瘤体积明显小于C、P组,移植瘤细胞Ki67表达率也明显降低,肿瘤细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论应用RNAi技术沉默Ki67基因可以降低人肾癌细胞裸鼠移植瘤Ki67基因表达,同时引起细胞凋亡进而抑制肿瘤的生长。     

AQP1基因沉默对前列腺癌PC-3细胞的影响

目的:探讨水通道蛋白1(AQP1)基因沉默对在前列腺癌PC-3细胞的作用.方法:培养PC-3细胞至对数生长期,随机分为质粒转染组和质粒空白组.针对AQP1基因设计合成小片段RNA,并构建高效表达载体.利用转染试剂Lipo-fectamineTM2000用脂质体介导的基因转染技术将质粒转染入PC-3细胞.RT-PCR检测PC-3细胞AQP1mRNA的表达情况及激光共聚焦观察室观察、拍照AQP1表达的情况,转染后72h.将鼠龄为6周的60只BALB/C-nu/nu雄裸鼠随机分成两组,其中正常对照组30只,转染组30只.转染组把转染后的前列腺癌PC-3细胞注射裸鼠腋窝处皮下;对照组把未经转染的前列腺癌PC-3细胞注射到裸鼠腋窝处皮下.每日观察肿瘤生长及体重情况,裸鼠饲养6周处死,完整取出移植瘤瘤体测量体积和重量.结果:与质粒空白组相比,转染组应用RNA干扰技术后AQP-1在前列腺癌PC-3细胞系中mRNA的水平降低,与对照组相比,转染组裸鼠移植瘤体积为(573.39±175.24) mm3明显小于对照组(1482.50±327.86) mm3,(P＜0.05).转染组肿瘤重量为(0.55±0.11)g明显小于对照组(1.31±0.29)g,差别具有统计学意义(P＜0.05).结论:AQP-1广泛的表达在正常前列腺组织和前列腺癌组织中,对内环境稳态起着重要的作用.更多的AQP-1促进了前列腺癌细胞的增长,抑制AQP-1的表达可以使前列腺癌移植瘤生长减慢,体积减小.     

靶向DcR3的siRNA抑制人结肠癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的以脂质体为载体,探讨靶向诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)的siRNA对人结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法裸鼠背部皮下种植结肠癌SW480细胞,建立结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型。针对靶标DcR3基因,利用Dharmacon公司软件设计并合成siRNA序列,通过瘤体局部多点注射脂质体与DcR3 siRNA混合物,将DcR3 siRNA转染到裸鼠背部皮下移植瘤内。同时设立阴性对照组和空白对照组。观察肿瘤治疗前后体积变化,评价DcR3 siRNA对肿瘤的抑制作用;比较肿瘤治疗前后的细胞形态学改变;免疫组织化学及RT-PCR检测DcR3基因表达;原位细胞凋亡检测肿瘤的凋亡情况。结果治疗组肿瘤体积明显小于对照组,肿瘤组织内坏死面积增大,细胞凋亡率显著增高,DcR3蛋白表达水平降低。治疗过程中裸鼠生长良好,无明显毒性反应。结论脂质体介导的DcR3 siRNA对裸鼠皮下结肠癌SW480细胞移植瘤有明显抑制、杀伤作用,细胞凋亡是DcR3 siRNA所致肿瘤细胞死亡的重要形式。     

α-双炔失碳酯对前列腺癌LNCaP裸鼠移植瘤生长影响的研究

目的研究α-双炔失碳酯(α-anordrin)对前列腺癌雄激素依赖细胞系LNCaP裸鼠皮下移植瘤生长的影响并探讨其作用机制。方法建立前列腺癌雄激素依赖细胞系LNCaP裸鼠皮下移植瘤模型,将27只荷瘤裸鼠按肿瘤体积大小平均分为3组:对照组、α-双炔失碳酯1mg.kg-1组、5mg.kg-1组。皮下注射给药,隔天一次,给药周期30天,每隔5天测量肿瘤体积。于末次给药24h后摘眼球取血,测量血浆睾酮(T)、前列腺特异膜抗原(PSA)水平;取睾丸、精囊腺和前列腺称重;取肿瘤称重,并对瘤组织进行组织病理学检查和免疫组化Ki67、PCNA检测。计算肿瘤体积,抑瘤率,绘制生长曲线。结果α-双炔失碳酯给药组肿瘤体积、重量均小于给药组,1mg.kg-1组抑瘤率为34%(P<0.05),5mg.kg-1组抑瘤率为25%(P>0.05);给药组和对照组间血浆PSA含量无明显差别,PCNA和Ki67阳性表达率亦无差别。给药组裸鼠血浆T水平、睾丸、精囊腺重量显著低于对照组(P<0.01),前列腺重量亦有减轻。结论α-双炔失碳酯在低剂量下即可对前列腺癌雄激素依赖细胞系LNCaP裸鼠皮下移植瘤的生长产生抑制作用,并能显著降低裸鼠血浆T水平,抑制其性腺的正常生长。其抗肿瘤的机制可能与抑制体内雄激素分泌有关。     

PITX2 shRNA对卵巢癌细胞H08910裸鼠移植瘤凋亡的影响

目的探讨PITX2基因沉默对人卵巢癌细胞株H08910裸鼠移植瘤凋亡的影响。方法将重组PITX2 shRNA plasmid转染人卵巢癌细胞株H08910细胞,通过裸鼠移植瘤实验观察PITX2基因沉默对裸鼠移植瘤的生长抑制作用,同时,利用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法检测PITX2基因沉默对caspase-3、cytochrome-c和caspase-9表达的影响。结果与对照组(空载体组和未转染组)相比,PITX2 shRNA plasmid转染组人卵巢癌细胞株H08910细胞生长速度减慢,肿瘤体积缩小(P<0.05),而且caspase-3、cytochrome-c和caspase-9的表达明显升高(P<0.05)。结论 PITX2基因沉默可通过促进肿瘤细胞的凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长。     

红景天苷通过AKT/mTOR信号通路对结肠癌细胞SW480增殖、凋亡和裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探究红景天苷(salidroside, SAL)对结肠癌细胞SW480增殖、凋亡和裸鼠移植瘤生长的影响。方法 采用0、25、50、100μmol·L^-1剂量红景天苷处理SW480细胞,将细胞随机分为4组：SAL 0μmol·L^-1组、SAL 25μmol·L^-1组、SAL 50μmol·L^-1组和SAL 100μmol·L^-1组。克隆形成实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase-3、Caspase-9、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平。建立结肠癌裸鼠移植瘤模型,裸鼠随机分为2组：Control组和Salidroside 50 mg·kg^-1组,检测裸鼠肿瘤重量,TUNEL染色检测裸鼠肿瘤细胞凋亡率,免疫组化染色检测Ki67、Caspase-3阳性细胞数。结果 体外实验中,与SAL 0μmol·L^-1组相比较,SAL...     

白细胞介素-12抗NK/T细胞淋巴瘤的活性及其机制研究

目的研究白细胞介素-12(IL-12)的抗NK/T细胞淋巴瘤活性及机制。方法培养NK/T细胞淋巴瘤的YTS细胞株并分为对照组、IL-12组、NC siRNA组、JAK2 siRNA组、空白质粒组、JAK2表达质粒组,用含有0.625、1.25、2.5、5.0、10.0、20.0 ng·mL^-1 IL-12的培养基处理或转染NC siRNA、JAK2 siRNA、空白质粒、JAK2表达质粒,检测细胞活力、细胞凋亡、细胞周期及细胞中JAK2及STAT3的表达;选择C57小鼠并建立移植瘤模型,随机分为对照组及IL-12组后,测定移植瘤质量及JAK2、STAT3的表达。结果在YTS细胞中,IL-12以及JAK2 siRNA能够抑制细胞活力、细胞周期及细胞中p-JAK2、p-STAT3的表达,诱导细胞凋亡(P<0.05);转染JAK2的表达质粒能够使20.0 ng·mL^-1的IL-12抑制细胞活力、细胞周期、细胞中p-JAK2、p-STAT3表达及诱导细胞凋亡的作用减弱;在移植瘤小鼠中,IL-12干预后,移植瘤质量及移植瘤中p-JAK2、p-STAT3的表达均明显下降(P<0.05)。结论IL-12具有抗NK/T细胞淋巴瘤的活性且其机制与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活有关。     

Survivin基因沉默对裸鼠人卵巢癌细胞移植瘤凋亡的影响

目的探讨survivin基因沉默对人卵巢癌细胞株SKOV3裸鼠移植瘤凋亡的影响。方法将重组survivin shRNA plasmid转染人卵巢癌细胞株SKOV3细胞,通过裸鼠移植瘤实验比较survivin基因沉默对裸鼠移植瘤的生长抑制作用,荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法检测与凋亡密切相关的cytochrome-c、caspase-9和caspase-3基因的表达。结果裸鼠移植瘤实验显示,与对照组(空载体组和未转染组)相比,survivin shRNA plasmid转染组人卵巢癌细胞株SKOV3细胞生长速度减慢,肿瘤体积缩小(P<0.05);荧光定量PCR和蛋白印迹法结果都显示,与对照组相比,survivin shRNA plasmid转染组cytochrome-c、caspase-9和caspase-3的表达明显升高(P<0.05)。结论 survivin基因沉默可通过促进肿瘤细胞的凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长。     

肿瘤易感基因101的裸鼠荷瘤实验

目的探讨胃癌细胞SGC7901中高表达的肿瘤易感基因101（TSG101）对肿瘤增殖的作用及机制。方法将不同TSG101表达水平的胃癌细胞亚系接种于裸鼠体内,观察移植瘤生长状况及相关因子的表达。结果 TSG101转染组裸鼠的移植瘤体积明显高于空质粒组与未转染组（P〈0.05）。TSG101转染组瘤组织切片中血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达明显高于空质粒组和未转染组（P〈0.05）。结论 SGC7901细胞中高表达的TSG101可能通过上调VEGF的表达增强胃癌细胞增殖。     

大肠癌裸鼠移植瘤实验模型的建立及T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1封闭载体的治疗作用

目的 通过建立大肠癌SW620细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1( Tiam1)封闭载体在动物体内的治疗作用.方法 构建编码一条短发夹RNA的Tiam1质粒表达封闭载体,并用之转染SW620细胞;应用Hoechst 33342荧光染色技术观察细胞形态学变化.将皮下接种SW620细胞的裸鼠分为3组,每组8只,在接种后第2周分别瘤内注射生理盐水(对照组)、HK错配链(HK组)和Tiam1封闭载体(Tiam1组).第16天处死各组裸鼠,取出移植瘤移重.结果 通过DNA测序证实封闭载体构建成功.SW620细胞经Tiam1封闭载体转染后,细胞核可见凋亡小体.对照组平均移植瘤重量(2.84±0.27)g,HK组(2.89±0.18)g,Tiam1组(1.47±0.20)g,Tiam1组与其他2组比较差异有统计学意义(P＜0.01),而HK组和对照组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 所构建的Tiam1封闭载体能有效抑制大肠癌裸鼠皮下移植瘤生长.     

雷公藤甲素自微乳对荷人前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用研究

目的 研究雷公藤甲素自微乳对荷人前列腺癌PC-3细胞裸鼠移植瘤的抑制作用。方法 构建荷人前列腺癌PC-3细胞裸鼠移植瘤,分为模型组、雷公藤甲素组、雷公藤甲素自微乳组、空白辅料组,灌胃给药,每2天1次,连续18 d,每3天测定瘤体积;给药结束后处死裸鼠,比较各组裸鼠的体质量、肝脏与瘤块质量,计算抑瘤率,并对瘤块组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）进行免疫组化研究。结果 与模型组相比,雷公藤甲素和雷公藤甲素自微乳均可抑制肿瘤体积的增长;与雷公藤甲素相比,雷公藤甲素自微乳可以提高抑瘤率,降低肿瘤组织中VEGF的表达水平,对肿瘤抑制作用更佳,且未发现明显的毒性反应;空白辅料组对肿瘤无抑制作用。结论 自微乳给药系统可以提高雷公藤甲素的抗肿瘤作用,安全性良好。     

白术内酯Ⅰ对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡的影响

目的：研究白术内酯Ⅰ（atractylenolide Ⅰ）对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-3、p53、Bcl-2表达的影响。方法：建立SGC-7901裸鼠移植瘤模型,观察白术内酯Ⅰ对肿瘤生长的影响;TUNEL法检测移植瘤组织中的细胞凋亡;Western blotting检测瘤组织中Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3及p53蛋白表达。结果：白术内酯Ⅰ不同程度抑制裸鼠SGC-7901移植瘤的生长,与对照组比较,给药后肿瘤体积（TV,tumor volume）、相对肿瘤体积（RTV,relative tumor volume）和相对肿瘤增殖率[T/C（%）,T_RTV/C_RTV]明显下降;移植瘤组织中凋亡细胞明显增多;白术内酯Ⅰ上调移植瘤组织中Bax、cleaved caspase-3及p53的蛋白表达,下调Bcl-2 的蛋白表达。结论：白术内酯Ⅰ能明显抑制人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤的生长,分子机制主要包括增加Bax、cleaved caspase-3、p53蛋白表达,减少Bcl-2蛋白表达,最终导致肿瘤细胞凋亡。     

In vivo antitumor effect of ascorbic acid, lysine, proline and green tea extract on human prostate cancer PC-3 xenografts in nude mice: evaluation of tumor growth and immunohistochemistry

BACKGROUND: Matrix metalloproteinases (MMPs), vascular endothelial growth factor (VEGF), Ki 67 (proliferative protein) and constituents of ECM play a critical role in angiogenesis, and are crucial in neoplastic invasion and metastasis. Based on the antitumor properties of certain nutrients, we investigated the effect of a diet containing lysine, proline, arginine, ascorbic acid and green tea extract on the growth of tumors induced by implanting human prostate cancer PC-3 cells in athymic nude mice and on the expression of MMPs, VEGF, Ki 67 and fibronectin in these tumors, as well as the production of mucin (by PAS staining). MATERIALS AND METHODS: Male nude mice (n =12) were inoculated with 3x10(6) prostate cancer PC-3 cells and randomly divided into two groups; Group A was fed a regular diet and Group B was fed a regular diet supplemented with 0.5% of the nutrient mixture (NM). Four weeks later, tumors were excised, weighed and processed for histology. RESULTS: The results showed inhibition of tumor growth in Group B. Histological studies revealed inhibition of MMP-9 and VEGF secretion and mitosis in Group B tissues. CONCLUSION: Nutrient supplementation strongly suppressed the growth of tumors without any adverse effects in nude mice, suggesting strong potential as an anticancer agent.     

紫花牡荆素对人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响及其机制

目的研究紫花牡荆素（CAS）对人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。方法建立人宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤模型,并随机分成5组,每组5只：生理盐水组、顺铂组、低剂量CAS组、中剂量CAS组和高剂量CAS组。观察和比较各组裸鼠移植瘤的体积和重量,裸鼠体重的变化,裸鼠血清乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、肌酐值和外周血白细胞计数的变化;FCM测定瘤组织细胞凋亡率;Westernblot分析瘤组织细胞内p21和cyclinB1的蛋白表达。结果CAS可显著抑制人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤的体积和重量的增加,呈作用剂量和时间依赖性;而对裸鼠的体重、谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酐值和外周血白细胞计数均无明显的影响。CAS作用16天后,裸鼠移植瘤细胞的凋亡率呈剂量依赖性增加,cyclinBl的蛋白表达降低,p21的蛋白表达增高。结论CAS具有抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的作用,可能与其降低cyclinB1的蛋白表达,增加p21的蛋白表达,促进细胞凋亡有关。     

Novel Molecular Targets of Azadirachta indica Associated with Inhibition of Tumor Growth in Prostate Cancer

Advanced prostate cancer has significant long-term morbidity, and there is a growing interest in alternative and complimentary forms of therapy that will improve the outcomes of patients. Azadirachta indica (common name: neem) contains multiple active compounds that have potent anti-inflammatory and anticancer properties. The present study investigates the novel targets of the anticancer activity of ethanol extract of neem leaves (EENL) in vitro and evaluates the in vivo efficacy in the prostate cancer models. Analysis of the components in the EENL by mass spectrometry suggests the presence of 2',3'-dehydrosalannol, 6-desacetyl nimbinene, and nimolinone. Treatment of C4-2B and PC-3M-luc2 prostate cancer cells with EENL inhibited the cell proliferation. Genome-wide expression profiling, using oligonucleotide microarrays, revealed genes differentially expressed with EENL treatment in prostate cancer cells. Functional analysis unveiled that most of the up-regulated genes were associated with cell death, and drug metabolism, and the down-regulated genes were associated with cell cycle, DNA replication, recombination, and repair functions. Quantitative PCR confirmed significant up-regulation of 40 genes and immunoblotting revealed increase in the protein expression levels of HMOX1, AKR1C2, AKR1C3, and AKR1B10. EENL treatment inhibited the growth of C4-2B and PC-3M-luc2 prostate cancer xenografts in nude mice. The suppression of tumor growth is associated with the formation of hyalinized fibrous tumor tissue and the induction of cell death by apoptosis. These results suggest that EENL-containing natural bioactive compounds could have potent anticancer property and the regulation of multiple cellular pathways could exert pleiotrophic effects in prevention and treatment of prostate cancer.     

血管生成抑制剂联合分化诱导剂治疗结肠癌的实验研究

目的通过建立人LOVO细胞结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,研究血管生成抑制剂（TNP-470）联合分化诱导剂（RA）抗结肠癌生长的效应,二者是否具有协同效果。方法建立人LOVO细胞结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,模型建立后分组治疗,按治疗方式分为对照组、TNP-470组、RA组和联合组（TNP-470＋RA）至治疗结束时处死裸鼠,测量皮下移植瘤重量,计算抑瘤率;检测肿瘤组织结肠癌细胞凋亡指数（AI）。结果裸鼠皮下移植瘤瘤重、抑瘤率,联合组和对照组及TNP-470组、RA组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）,且TNP-470组、RA组和对照组之间差异亦有统计学意义（P〈0.05）。治疗组与对照组癌细胞AI比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;且联合组与RA组和TNP-470组癌细胞的AI比较,差异也有统计学意义（P〈0.05）。结论血管生成抑制剂TNP-470与分化诱导剂RA联合治疗结肠癌裸鼠皮下移植瘤比TNP-470或RA单药治疗具有更强的抑瘤作用,TNP-470通过抑制肿瘤血管生成,切断肿瘤细胞的血供和营养供给,抑制结肠癌裸鼠皮下移植瘤的生长;而RA通过诱导肿瘤细胞凋亡,降低VEGF的表达抑制肿瘤的生长,二者联和应用,抗肿瘤效应明显增强。     

Regression of prostate cancer xenografts by RLIP76 depletion

RLIP76 plays a central role in radiation and chemotherapy resistance through its activity as a multi-specific ATP-dependent transporter which is over-expressed in a number of types of cancers. RLIP76 appears to be necessary for cancer cell survival because both in vitro cell culture and in vivo animal tumor studies show that depletion or inhibition of RLIP76 causes selective toxicity in malignant cells. RLIP76 induces apoptosis in cancer cells through the accumulation of endogenously formed GS-E. The results of our in vivo studies demonstrate that administration of RLIP76 antibodies, siRNA or anti-sense to mice bearing xenografts of PC-3 prostate cancer cells leads to near complete regression of established subcutaneous xenografts with no apparent toxic effects. Since anti-RLIP76 IgG (which inhibit RLIP76-mediated transport), siRNA and antisense (which deplete RLIP76) showed similar tumor regressing activities, our results indicate that the inhibition of RLIP76 transport activity at the cell surface is sufficient for observed anti-tumor activity. These studies indicate that RLIP76 serves a key effector function for the survival of prostate cancer cells and that it is a valid target for cancer therapy.