中国汉族人群中KIR分布规律及其在HLA相合亲缘造血干细胞移植中的作用

目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）在中国汉族人群中的分布规律及其对人类白细胞抗原（HLA）相合亲缘移植预后的影响。方法采用PCR序列特异性引物（SSP）分型技术检测HLA及KIR基因型。检测了150例汉族人群中KIR的基因型分布、74例异基因造血干细胞移植供受者对KIR及HLA基因型,并对45例接受HLA相合亲缘移植、非去除T细胞异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）的恶性血液病患者病例资料进行回顾性分析。结果KIR2DL1的基因分布频率为100％,KIR2DL2为20％,KIR2DL3为100％,KIR3DL1为95％。96％的供者携带与allo-HSCT关系密切的3组KIR受体。45例HLA相合亲缘供者中,36例患者KIR不合,占总人数的80％,其中35例患者KIR2DL1不合,1例KIR2DL2／2DL3不合,31例KIR3DL1不合。HLA相合亲缘供者移植患者中KIR2DL1不合组的急性移植物抗宿主细胞病（aGVHD）发生率（31％）明显低于KIR相合组（70％）,差异有统计学意义（P=0．029）。急性髓性白血病中KIR及KIR2DL1不合组的aGVHD发生率（18％）明显低于KIR相合组（75％）,差异有统计学意义（P=0．03）,淋巴系统疾病中差异无统计学意义。结论绝大多数中国北方汉族人群携带与allo—HSCT关系密切的3组KIR受体,HLA相合亲缘供者HSCT后供受者间KIR不合组aGVHD发生率明显下降。     

KIR/HLA受配体模式及抑制性KIR的表达对单倍体造血干细胞移植的影响

目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体/人类白细胞抗原（KIR/HLA）受配体模式及移植后抑制性杀伤免疫球蛋白类受体（iKIR）的表达对单倍体造血干细胞移植预后的影响。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（SSP-PCR）方法,对14对HLA半相合供/受者移植前进行KIR与HLA分型,同时分析KIR/HLA的受配体模式,用四色流式细胞技术对其中8例患者在移植后检测CD158a（KIR2DL1）、CD158b（KIR2DL2）、CD158e（KIR3DL1）的表达。结果 3例受者表达供者所有iKIR相应配体HLA-C2、C1、Bw4,此3对供受者即为KIR配体相合组;另外11对存在KIR配体缺失的供受者则为KIR配体迷失组。KIR配体迷失组患者移植后中性粒细胞及血小板重建时间较KIR配体相合组均较晚,但差异无统计学意义（P〉0.05）。KIR配体迷失组患者移植后2年持续缓解率和2年总生存率高于KIR配体相合组,但差异无统计学意义（P〉0.05）。移植后监测iKIR发现受者均表达供者型iKIR,4例患者复发时监测NK细胞及iKIR表达明显降低。结论在HLA半相合造血干细胞移植中,移植后动态监测iKIR的表达可预示复发,KIR/HLA受配体错配可能有助于提高移植后缓解率和总生存率。     

异基因造血干细胞移植中异源反应性NK细胞作用机制的研究

异基因造血干细胞移植中天然杀伤细胞(NK)表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)-配体不相合可以产生异源反应性NK细胞,单倍体相合及无关供者造血干细胞移植中KIR不相合有利于改善预后,HLA相合同胞供者造血干细胞移植中活化型及抑制型KIR相互作用,共同影响预后.     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其配体对亲缘供者造血干细胞移植预后的影响

目的 检测杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其配体-人类白细胞抗原Ⅰ (HLA-Ⅰ)基因分布频率,评估两者的相互作用对亲缘供者造血干细胞移植(HSCT)预后的影响.方法 采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测87对亲缘供者HSCT供受者(半倍体相合40对,同胞完全相合47对)的HLA-Cw及供者KIR基因型.结果 87例正常供者均携带抑制型KIR2DL1、2DL2/L3、2DLd、3DL2和3DL3,基因频率为1;其次是3DL1,基因频率为96.6%;激活型KIR基因频率不一.87例受者的C1表达率为97.7%,而C2、Bw4、HLA-A3/A11的表达率不一.半倍体相合HSCT中KIR-HLA配体不合34例,相合6例;HLA-HLA配体相合31例,不合9例.同胞完全相合HSCT中KIR-HLA配体不合42例,相合5例.KIR-HLA配体不合组移植后2年无病生存率力(71.5±6.5)%,明显高于相合组的(50.0 ± 10.7)%(P < 0.05).结论 激活型KIR的基因频率明显低于抑制型KIR基因频率,抑制型KIR2DL1、3DL1、3DL2可能对NK细胞同种反应性起主要作用.KIR-HLA配体不合亲缘供者HSCT患者的无病生存率明显高于KIR-HLA配体相合者.     

自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体在脐带血移植治疗白血病中的作用

目的 探讨自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）在脐带血移植中的作用。方法总结23例脐带血移植治疗白血病病例,应用序列特异引物聚合酶链反应（PCR—SSP）基因分型方法,检测患者外周血和脐带血的人类白细胞抗原（HLA）-C等位基因分型和KIR基因分型,随访其植活率和长期生存率,分析KIR对脐带血移植的影响和产生的作用。结果 通过检测发现KIR基因在23位供者中的表达呈现多态性。在17例髓性白血病组中,如果供受双方KIR抑制性受体与其配体HLAC不匹配,其植活率和长期生存率高于匹配组（64％vs50％,73％vs50％）,且复发率降低（9％vs16％）。如果患者HLA-Cwl或HLA-Cw2亚群缺失,其移植后的植活率和长期生存率长于HLA．Cw1／Cw2双表达组（65％VS50％,70％VS50％）。HIJA-Cw8（＋）对于预后的影响与不含Cw8组并无明显区别。KIR2DL2与KIR2DS2呈连锁表达,供者中其双表达共4例移植病例全部长期无病生存。结论 KIR及其配体HLA-C对脐带血移植治疗白血病起到重要作用。供受双方KIR／HLA-C不匹配组,患者HIJA-Cw1或HIJA-Cw2亚群缺失组,供者KIR2DL2与KIR2DS2双表达组提示预后好。     

KIR及苴HLA配体与肾移植急性排斥反应的关系

目的 探讨供受者对杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其人类白细胞抗原(HLA)配体所介导信号传导通路在肾移植受者术后发生急性排斥反应(AR)中可能的作用.方法 回顾性分析53对肾移植供受者对HLA和KIR基因型,受者按照术后肾功能状态分为急性排斥组(n=19)和肾功能稳定组(n=34),探讨供者HLA、受者KIR基因型以及受者KIR/供者HLA配体组合型与肾移植急性排斥反应发生的相关性.结果 供者HLA、受者KIR基因表现型频率在急排组和稳定组的分布:供者HLA基因型HLA-CI/2、HLA-A3、HLA-A11、HLA-Bw4在两组间分布无显著统计学差异(P>0.05).受者KIR2DL2/2DS2在急排组表达低于稳定组(26.3% vs 55.9%,P=0.038),受者KIR基因组合型AA类型在急排组表达低于稳定组(31.6% vs 67.6%,P=0.011).供者HLA-Cw、受者KIR基因组合型术后急性排斥反应发生率:供者HLA-C1/C1类型低于非HLA-C1/C1类型(31.6% vs 46.7%,P>0.05).受者KIR基因组合型AA类型低于非AA类型(20.7% vs 52.2%.P=0.011).受者KIR/供者HLA配体组合型匹配情况:肾功能稳定组中KIR2DL2/HLA-C1和KIR2DL2/HLA-C1信号匹配率较急性排斥组高(P=0.030,P=0.028).结论特定的KIR/HLA配体组合型(如KIR2DL2/HLA-C1、KIR2DL2/HLA-C1)可以降低肾移植术后急性排斥反应的发生率.良好的供者HLA和受者KIR配型选择有利于同种异体肾移植的预后.     

HLA配型不合情况下造血干细胞移植的新方法

目的:采用新方法进行非体外去除T细胞的人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)配型不合造血干细胞移植.方法:58例血液恶性肿瘤患者,33例为高危或难治复发白血病,接受了至少一个HLA位点不合的家庭供者造血干细胞移植.移植物为经粒细胞集落刺激因子(granulocyte clony-stimulating factor, G-CSF)动员的骨髓以及外周血造血干细胞,而无需体外去除T细胞.移植物抗宿主病(graft-versus-host-disease, GVHD)预防采用环孢菌素A 霉酚酸酯 短程甲氨喋呤方案.结果:所有患者均获得持久、完全供者植入.58例患者中发生Ⅱ度及以上急性GVHD 22例(37.9%),其中Ⅲ度和Ⅳ度急性GVHD分别为2例和1例,其严重程度与HLA不合程度无相关;42例可评估患者中,慢性GVHD为26例(61.9%),广泛型和局限型分别为11例和15例.复发9例,除1例外均为复发、难治白血病患者.死亡14例,其中7例死于疾病复发,另7例死于移植相关合并症,其中严重感染和间质性肺炎各2例,巨细胞病毒性脑炎、病毒型肝炎和急性GVHD死亡各1例.中位随访10月(2～37.5月),58例患者中42例无病存活(disease-free survival, DFS),高危患者2年DFS明显低于标危患者,分别为63.2%和77.6%(P= 0.04).DFS与供受者间HLA配型不合程度、急性GVHD严重程度及回输干细胞数量无关.结论:(1)无需体外去除T细胞的新方法可克服HLA屏障、安全有效地用于HLA不合的移植;(2)G-CSF动员的外周血干细胞可安全用于HLA不合的造血干细胞移植.     

血液输注与脱离输血依赖在异基因造血干细胞移植中的研究

目的评价接受异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者移植期间红细胞(RBC)和血小板(Plt)输注需求的影响因素。方法回顾性分析接受allo-HSCT患者的血液制品使用情况。结果 79.7%的患者在移植后6个月内脱离了输血依赖。无关供者组脱离输注时间明显延长(P<0.05),HLA不全相合组脱离输注时间亦明显延长(P<0.05)。与淋巴瘤和骨髓增生异常综合征患者比较,白血病患者移植后脱离输注时间明显缩短。与相关供者组比较,移植后60 d无关供者组需要更多的Plt输注(P<0.05)。结论尽管移植后中性粒细胞快速植入,但无关供者组Plt恢复时间明显延迟。如何降低无关供者和HLA配型不合供者为来源的移植输血成本值得进一步探讨。     

亲缘间HLA半相合外周血造血干细胞移植治疗急性白血病的临床研究

目的探讨HLA半相合外周血造血干细胞移植（PBSCT）治疗急性白血病的疗效及安全性。方法4例急性白血病患者行HLA不全相合PBSCT,其中急性淋巴细胞白血病2例,急性非淋巴细胞白血病-M4b1例、M4EO1例,移植时均处于完全缓解状态。HLA配型1、2个位点不合各1例,3个位点不合2例。预处理方案由全身照射或白消胺、阿糖胞苷、环磷酰胺、司莫司汀组成。移植物抗宿主病（GVHD）的预防采用环胞素A、甲氨蝶呤、霉酚酸酯、抗胸腺细胞球蛋白四联方案。结果患者移植过程顺利,4例患者均获得造血功能重建并达完全供者植人。3例出现Ⅰ度急性GVHD,1例出现Ⅱ度急性GVHD。1例并发巨细胞病毒间质性肺炎,2例并发真菌肺炎。至今2例患者分别无病存活30月和15月,1例目前为移植后4月,1例死亡。结论HLA半相合PBSCT疗效较好、安全可行,为无HLA完全相合供者的白血病患者提供了新的治疗手段。     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性与强直性脊柱炎的关联性

目的：探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体（killer cell immunogloblin like receptors,KIRs）基因多态性与强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的关联性。方法：采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR SSP）法,分析86例AS患者和412例无血缘关系的正常人中迄今发现的14个KIR基因和假基因KIRZ的基因频率、基因型和单倍型。结果：AS患者组活化型KIR3DS1、抑制型KIR2DL2和KIR2DL5的基因频率较对照组显著升高（P＜0.05）;携带2个或2个以上活化型KIR基因的AS患者明显高于对照人群;其余各KIR的基因频率差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：活化性/抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因的失衡可能与AS的发生相关。     

异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血的疗效研究

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗重型再生障碍性贫血(SAA)的疗效.方法 8例SAA患者接受allo-HSCT,其中1例接受亲缘白细胞抗原(HLA)全相合allo-HSCT,4例接受单倍体相合allo-HSCT,3例接受非血缘全相合allo-HSCT.预处理方案:非亲缘及亲缘全相合移植采用氟达拉滨(FLU)+环磷酰胺(CTX)+抗人T淋巴细胞球蛋白(ATG);单倍体相合移植采用FLU+CTX+马利兰(BU)+ATG/抗胸腺细胞球蛋白.移植物抗宿主病(GVHD)预防:亲缘全相合移植采用联合免疫抑制剂的方法预防,环孢素A(CSA)+短程氨甲蝶呤(MTX),单倍体相合及非亲缘全相合除以上药物外,加用CD25单克隆抗体和霉酚酸酯(MMF).结果 患者全部获得造血重建,中性粒细胞≥0.5×109/L的时间为10～17 d,中位时间为12.5 d;血小板≥20×109/L的时间为9～25 d,中位时间为13.8 d,植入证据检测证明为完全供者造血.5例合并巨细胞病毒(CMV)血症,3例合并出血性膀胱炎,2例发生急性和慢性Ⅰ～Ⅲ度GVHD,1例合并中枢神经系统感染及纯红再障.8例全部存活,存活时间为9～38个月,中位存活时间为20个月.结论 亲缘、非亲缘全相合及单倍型相合的allo-HSCT均是治愈SAA的有效方法,可为患者提供长期生存的机会.     

CD25抗体在HLA全相合同胞供者异基因造血干细胞移植中的应用

目的:探讨CD25单克隆抗体(巴利昔单抗)在HLA全相合同胞供者异基因造血干细胞移植中的应用价值。方法:对3例白血病患者进行HLA全相合同胞供者异基因外周血造血干细胞移植,应用巴利昔单抗预防aGVHD,增加了造血干细胞输入剂量,观察造血重建和aGVHD情况。结果:3例患者均顺利重建造血,红系恢复明显加快,无1例需要输血,无1例病人发生感染。3例均发生Ⅰ-Ⅱ度aGVHD,无严重aGVHD发生。结论:巴利昔单抗在HLA全相合同胞供者异基因造血干细胞移植中的应用是可行的,值得进一步加大病例数进行研究。     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性与鼻咽癌的关联性

目的探索杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）基因多态性与鼻咽癌（NPC）发生的关联性。方法采用聚合酶链反应（PCR）／系列特异性引物（SSP）方法,对比43例广东籍汉族鼻咽癌患者和53例籍贯种族都匹配的正常对照KIR基因位点的多态性。结果共检出目前已知的16个KIR基因,在检测的全部个体中,3DL3、3DL2及2DL4出现频率均为100％。广东籍鼻咽癌病例组中2DL2、2DS1、2DS3、2DS4的基因频率比正常对照组显著升高（P值分别为0．035、0．002、0．C107、0．001）,而其他各KIR基因频率差异无统计学意义。结论2DL2,2DS1、2DS3、2DS4基因频率升高可能与NPC发病相关。     

不同KIR亚型与HLA-Cw相互作用后对NK细胞的异源反应及移植预后的影响

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)在移植中的地位越来越明显,KIR亚型与HLA-I类分子,尤其是HLA-Cw之间的相互作用对自然杀伤(NK)细胞及移植预后的影响有着不同的见解,本文主要对这从KIR的亚型与HLA-C的相互识别作用对自然杀伤细胞及移植预后这一点予以综述。     

抗人T淋巴细胞兔免疫球蛋白预防异基因造血干细胞移植中急性移植物抗宿主病的临床研究

目的探讨异基因造血干细胞移植中抗人T淋巴细胞兔免疫球蛋白（ATG）联合环孢霉素A（CsA）、霉酚酸酯（MMF）、甲氨蝶呤（MTX）对促进移植植入和预防急性移植物抗宿主病（aGVHD）的作用。方法15例恶性血液病及5例重型再生障碍性贫血（SAA）患者实施血缘相关供者异基因造血干细胞移植,其中8例为人类白细胞抗原（HLA）配型全相合,12例HLA配型为单倍体相合。在移植前5d至前2d应用ATG 10．0mg／kg。供者应用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）5μg／（kg·d）,连续应用5d后采集外周血干细胞,单个核细胞（MNC）计数中位数为5．3×10^8／kg,CD34^＋细胞计数中位数为6．0×10^6／kg。结果移植后所有受者均获得造血重建,中性粒细胞（ANC）≥0．5×10^9／L和血小板（Plt）≥20×10^9／L中位时间分别为12d和14d。出现aGVHD7例,其中Ⅰ度皮肤aGVHD 3例;Ⅱ度肠道aGVHD 2例;Ⅲ度及Ⅳ度肠道aGVHD各1例。结论ATG在促进造血干细胞的植入,预防aGVHD的发生和降低其严重程度方面具有明显的效果。     

间充质干细胞联合单倍体异基因造血干细胞移植治疗27例重型再生障碍性贫血临床疗效

目的 回顾性分析重型再生障碍性贫血（severe aplastic anemia,SAA）行脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）联合单倍体异基因造血干细胞移植（haploidentical stem cells transplantatio,haplo-HSCT）治疗的临床疗效.方法 总结解放军总医院第一附属医院血液科2007年1月-2013年12月住院收治的27例SAA患者进行UC-MSCs联合haplo-HSCT治疗的资料,观察移植后细胞植入、移植物抗宿主病（graft-versus-host disease,GVHD）发生率及严重程度和2年总生存率（overall survival,OS）.结果 干细胞全部植入成功,无MSC回输不良事件发生.白细胞及血小板植入时间分别为12（8～ 21）d及14（10～26）d;Ⅱ～Ⅳ度和Ⅲ/Ⅳ度aGVHD发生率分别为40.7％和22.2％,cGVHD发生率为50.0％,广泛性仅为15.4％;2年OS为76.3％.结论 UC-MSCs联合haplo-HSCT对无全相合亲缘或无关供者的SAA患者疗效可行有效,可作为SAA患者挽救治疗选择.     

单倍体相合异基因造血干细胞移植治疗肾上腺脑白质营养不良

目的 X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-linked adrenoleukodystrophy,ALD)是一种严重的遗传性疾病,导致神经系统迅速恶化和过早死亡,异基因造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)仍然是唯一能阻止该疾病神经症状的治疗方法。然而,许多患者缺乏合适的人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)匹配相关供体,必须依赖替代供体作为干细胞来源,故本研究探讨采用单倍体相合异基因造血干细胞移植治疗肾上腺脑白质营养不良患儿。方法 2014年12月至2018年12月, 8例无HLA完全相合供体的ALD儿童接受了单倍体异基因造血干细胞移植治疗。预处理方案主要用药为马利兰(9.6 mg/kg)、环磷酰胺(200 mg/kg)和氟达拉滨(90 mg/m ²),预防移植物抗宿主病的药物包括抗人胸腺细胞免疫球蛋白、环孢菌素A、霉酚酸酯和短疗程甲氨蝶呤。 结果 8例患儿均接受父亲来源的单倍体异基因造血干细胞移植治疗。患儿中位年龄为8岁(范围5~12岁),供者中位年龄为36(32~40)岁。干细胞来源采用粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)动员的骨髓联合动员后的外周血采集物,总有核细胞中位数为10.89 (9.40~12.16)×10 ⁸/kg, CD34 ⁺细胞中位数为7.06(0.74~7.80)×10 ⁶/kg。中性粒细胞植入发生在移植后11 d(范围8~13 d),血小板植入中位时间为移植后10 d(范围8~12 d), 所有患儿在植入时均获得完全的供体细胞嵌合。4例患儿患有Ⅱ~Ⅳ级急性移植物抗宿主病,1例患儿患有慢性移植物抗宿主病,均无重度慢性移植物抗宿主病(graft-versus-host disease GVHD)发生。所有患儿中发生2例巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)血症,2例EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)血症。总体来看,7例患儿无严重相关移植合并症发生且均生存,1例患儿移植后125 d癫痫后脑疝死亡。 结论 初步观察表明,采用这种新方案的单倍体异基因干细胞移植能成功地实现ALD患者的完全供体嵌合;根据我们的经验,单倍体相合异基因造血干细胞移植治疗肾上腺脑白质营养不良是安全可行的。