p38 MAPK抑制剂在实验性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的作用

目的 探讨p38 MAPK特异性抑制剂SB203580在迟发性脑血管痉挛(CVS)形成中的可能作用机制.方法 24只兔均分为四组:空白对照组枕大池注入生理盐水;其余3组采用枕大池二次注血法建立兔蛛网膜下腔出血(SAH)模型.SAH组为模型对照;二甲基亚砜(DMSO)组枕大池注入载体DMSO; SB组枕大池注入SB203580.采用免疫组化和RT-PCR法检测血管壁IL-6、细胞间黏附分子1(ICAM-1)蛋白和mRNA表达.结果 SAH组和DMSO组基底动脉壁IL-6、ICAM-1蛋白和mRNA表达均较对照组明显上调(P＜0.05);SB组在基底动脉痉挛改善的同时,基底动脉壁IL-6、ICAM-1蛋白和mRNA表达较SAH组和DMSO组明显下调(P＜0.05).结论 SB203580明显抑制SAH后脑血管壁IL-6、ICAM-1的表达,提示p38MAPK可能通过SAH后脑血管壁炎症反应参与了SAH后CVS形成的病理过程.     

蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛中 TNF-α和NF-кB 的表达变化

目的：检测蛛网膜下腔出血（以下简称 SAH）后迟发性脑血管痉挛中TNF-α和NF-кB的表达变化。方法56只中国白兔随机分成3组：对照组（ n ＝8）：不做枕大池穿刺注血,处死;SAH组（ n ＝24）：在第0天和第2天分二次枕大池注射自体动脉血,分别在第1次注血后第4天、第7天和第14天分三批处死,每组8只;假手术组（ n＝24）：只做枕大池穿刺不注血,第4天、第7天和第14天处死,每组8只。通过计算动脉口径比判断基底动脉痉挛程度,使用免疫组化和免疫蛋白印迹的方法检测迟发性脑血管痉挛中TNF-α和NF-кB的表达变化。结果枕大池注血方法可以造成SAH后迟发性脑血管痉挛模型。 NF-κB 和 TNF-α在注血后第4天表达开始增加（ P ＜0．01）,在第7天达到最高值（ P ＜0．01）,第14天降到对照组水平。结论蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛中NF-κB及 TNF-α表达增加,炎症反应在此过程中起着重要作用。     

蛛网膜下腔出血后血管痉挛与S100b基因表达的相关性

目的：观察蛛网膜下腔出血（SAH）模型大鼠基底动脉中S100b基因表达的情况,探讨S100b与SAH后血管痉挛（CVS）的相关性。方法：健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、假手术组和模型组。将模型组大鼠断尾取血0.3mL经环枕膜注入枕大池,假手术组以同样方法注入等量生理盐水。3d后断髓处死取基底动脉,通过HE染色观察基底动脉的病理变化;采用RT-PC法检测S100b mRNA表达量,蛋白质印迹（Western Blot）染色法测定S100b蛋白含量。结果：模型组大鼠基底动脉的管腔明显变小,对照组和假手术组无明显改变;S100b在对照组和假手术组都有少量表达,但两组无显著性差异（P〉0.05）;与假手术组相比,模型组大鼠基底动脉中S100b mRNA及蛋白的表达显著增高（P〈0.01）。结论：蛛网膜下腔出血后S100b基因表达显著增高,并且和血管痉挛的发生成正相关。     

紧密连接蛋白1在实验性大鼠蛛网膜下腔 出血后脑血管痉挛中的作用

目的 观察实验性蛛网膜下腔出血（SAH）后基底动脉壁中紧密连接蛋白1（ZO-1）的表达变化及与脑血管 痉挛（CVS）的相关性。方法 60只健康雄性SD大鼠随机分成SAH组、假注血组,其中SAH组根据不同时间点再分 为1 d、3 d、5 d、7 d、14 d等亚组;利用枕大池二次注血法构建大鼠SAH模型,假注血组仅注入等量生理盐水,每组10 只。HE染色观察基底动脉病理及管壁形态学变化,运用免疫组化染色及Western blot分析基底动脉壁中ZO-1的表 达水平。结果 HE染色光镜下发现SAH组基底动脉均存在不同程度的狭窄及内皮紊乱,其中在SAH 后3 d最为显 著,其管腔内径约为假注血组的44%,管壁厚度约为假注血组的3.5倍,之后基底动脉狭窄程度逐渐降低,至14 d时 大致恢复正常。免疫组化染色及Western blot结果示SAH组基底动脉壁中ZO-1的表达均存在不同程度的下降,其中 在第3 天时降至最低,之后逐渐恢复,至第14 天时基本接近正常。相关性分析表明,ZO-1的表达与基底动脉管腔内 径呈正相关（r=0.719,P＜0.05）,与管壁厚度呈负相关（r=-0.686,P＜0.05）。结论 SAH后ZO-1的表达明显下降,下 降趋势与不同时相CVS程度变化相一致,提示ZO-1可能在SAH后CVS的发生过程中发挥重要作用,其机制可能是 通过影响缝隙连接功能,使血管收缩信号传导增强。     

阿魏酸对蛛网膜下腔出血模型大鼠脑干组织和基底动脉细胞凋亡的影响

目的:探讨阿魏酸对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠脑干组织神经细胞和基底动脉细胞凋亡的影响。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、SAH模型组,阿魏酸低(20 mg·kg^-1)、中 (40 mg·kg^-1)和高(80 mg·kg^-1)剂量组,采用枕大池内新鲜自体动脉血二次注入法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型,术后各治疗组灌胃给药7 d,假手术组和模型组均给予等体积生理盐水。分别采用TUNEL技术和免疫组化法观察脑干组织神经细胞凋亡和基底动脉细胞中caspase-3的表达。结果:与假手术对照组比较,SAH大鼠脑干组织中神经细胞凋亡阳性率明显升高(P<0.01),基底动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞中caspase-3表达显著增加(P<0.01),而SAH大鼠灌胃服用阿魏酸7 d后,阿魏酸低、中和高剂量组(20,40,80 mg·kg^-1)大鼠脑干组织中神经细胞凋亡率均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01),动脉基底血管内皮细胞和平滑肌细胞中caspase-3阳性表达率明显降低。结论:阿魏酸通过抑制脑干组织和基底动脉细胞中凋亡相关基因的表达,从而达到对SAH大鼠脑功能的保护作用。     

血小板源性生长因子受体-β在蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的作用

目的观察兔蛛网膜下腔出血(SAH)后基底动脉的血小板源性生长因子受体-β(PDGFR-β)的表达变化规律,从侧面反映血小板源性生长因子(PDGF)-BB在SAH后脑血管痉挛(CVS)的作用。方法采用枕大池二次注血法建立稳定的兔CVS模型,应用HE染色、透射电镜、免疫组化技术等方法,观察兔基底动脉的超微结构变化及PDGFR-β的表达时间窗,并通过测量管径的变化来判断CVS的严重程度。结果电镜结果提示SAH组的基底动脉部分内皮细胞脱落,紧密联接打开,内皮间隙扩大;内弹力膜扭曲、断裂;平滑肌细胞胞浆空泡状,排列紊乱;外膜可见大量中性粒细胞、单核细胞浸润;管腔狭窄呈急性期收缩和迟发性痉挛双相改变;免疫组化结果提示对照组的PDGFR-β无阳性表达,SAH组的PDGFR-β表达升高,在第5、7天时最为明显(P<0.01),第10天后表达稍下降,但仍高于对照(P<0.05)。结论 PDGFR-β在SAH后CVS中基底动脉的表达呈现一定的时序性,提示PDGF-BB在迟发性脑血管痉挛的发生发展中起作用。     

吡哆醇对脑淋巴引流阻滞所致SAH后神经细胞凋亡加重的影响

目的探讨脑淋巴引流阻滞(CLB)对蛛网膜下腔出血(SAH)后神经细胞凋亡的影响和吡哆醇的缓解作用及相关机制。方法健康成年Wistar大鼠,随机分为正常对照组、SAH组、SAH+CLB组、SAH+CLB+吡哆醇组、SAH+CLB+生理盐水组。采用枕大池2次注血法建立SAH模型。于第2次注血3 d后检测相关指标。SAH+CLB+吡哆醇组于CLB术前30 min按50 mg.kg-1腹腔注射吡哆醇生理盐水溶液,每天以上述半量重复注射2次。采用TUNEL荧光标记法检测原位凋亡情况;免疫组织化学激光共聚焦检测大鼠皮层神经细胞Caspase-3和Bcl-2的蛋白表达。结果①与正常对照组比较,其余各组大鼠TUNEL阳性细胞表达均明显升高,而SAH+CLB组和SAH+CLB+生理盐水组又明显高于SAH组(P<0.01),SAH+CLB+吡哆醇组与SAH+CLB组比较表达有所减弱(P<0.01)。②与正常对照组比较,其余各组大鼠皮层神经细胞Caspase-3蛋白表达均明显升高,而SAH+CLB组和SAH+CLB+生理盐水组最高,与SAH组比较差异具有显著性(P<0.01),SAH+CLB+吡哆醇组与SAH+CLB组比较表达有所减弱(P<0.01)。③与正常对照组比较,其余各组大鼠皮层神经细胞Bcl-2蛋白表达均明显升高,而SAH+CLB组和SAH+CLB+生理盐水组明显低于SAH组(P<0.01),SAH+CLB+吡哆醇组较SAH+CLB组表达增强。结论脑淋巴引流阻滞可以通过Caspase-3高表达和Bcl-2低表达加重SAH后大鼠皮层神经细胞的凋亡,而吡哆醇具有一定的缓解作用。     

枕大池注入促红细胞生成素在兔蛛网膜下腔出血的脑保护作用

目的研究枕大池单次注入促红细胞生成素(EPO)对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛和神经细胞损伤的影响。方法30只新西兰白兔随机分为3组,假手术组(Sham组)、蛛网膜下腔出血组(SAH组)和EPO组(n=10)。Sham组穿刺,其它两组行枕大池一次穿刺注血造模。30min后假手术组和出血组从枕大池注入生理盐水(0·10ml·kg-1),EPO组注入EPO(200IU·kg-1,0·10ml·kg-1)。所有动物在造模后48h处死,使用CAST体视学图像分析系统测量分析并比较不同组间基底动脉管腔面积、收缩系数以及海马CA1区正常神经元密度。结果与SAH组相比,EPO组食欲明显改善(P<0·05),体重增加(P<0·05),基底动脉管腔面积明显增加(P<0·01),收缩系数减小(P<0·01),海马CA1神经元密度值也增加(P<0·05)。结论枕大池单次小剂量注入EPO可以预防SAH后脑血管痉挛,减轻脑神经细胞损伤。     

CGRP经鼻用药促进蛛网膜下腔出血后脑血供和VEGF表达

目的探讨经鼻给予降钙素基因相关肽(CGRP)对蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血供和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法将Wistar大鼠随机分入正常对照组、SAH组、经鼻生理盐水(NS)+SAH、经鼻CGRP+SAH组。用枕大池两次注入自体动脉血法制作SAH模型,CGRP和NS经鼻腔给予。用激光多普勒血流计检测皮层局部脑血流量(rCBF)动态变化;于第2次枕大池注血后3d,将大鼠处死取脑制作冰冻切片,用免疫荧光结合激光共聚焦显微镜检测大脑皮层VEGF蛋白表达。结果解剖学观察表明SAH模型制作成功。SAH组和经鼻NS+SAH组大鼠大脑皮层rCBF持续下降,经鼻CGRP+SAH组大脑皮层rCBF下降的程度较轻。第2次枕大池注血后3d,SAH组和经鼻NS+SAH组大鼠大脑皮层VEGF蛋白表达增多,经鼻CGRP+SAH组大鼠大脑皮层VEGF蛋白表达进一步增强。结论CGRP经鼻用药可缓解SAH脑血供下降,并促进血管新生。     

枕大池注入硫酸镁对兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的逆转及脑保护作用

目的:研究枕大池注入硫酸镁注射液是否能逆转兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛以及脑组织损伤。方法:采用兔一次性注血的方法建立蛛网膜下腔出血模型。将30只新西兰大白兔随机分为3组:假手术组、模型组和MgSO4组。前二组于术后24h枕大池注入0.1mL.kg-1生理盐水,后一组注入0.1mL.kg-14%MgSO4。48h后处死兔取基底动脉以及海马组织行病理检查,测定基底动脉管腔横切面积和海马CA1区正常神经元密度。结果:以基底动脉管腔横切面积及海马CA1区正常神经元密度为指标,模型组低于假手术组和MgSO4组(P<0.01),而后二组比较无明显差异(P>0.05)。结论:枕大池注入硫酸镁注射液可能具有逆转兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛以及脑血管痉挛所致海马神经元损伤作用。