杜仲提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

目的 观察杜仲提取物对缺血再灌注损伤大鼠脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的影响。方法 采用大鼠大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型,造模前以杜仲提取物不同剂量连续ig给药14 d,缺血2 h,再灌注24 h后,观察杜仲提取物对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能症状,脑梗死范围改变,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测脑缺血再灌注损伤大鼠海马TNF-α、IL-1β及iNOS mRNA的表达。结果 杜仲提取物可显著改善脑梗死范围(P<0.05),下调海马TNF-α、IL-1β及iNOS mRNA的表达(P<0.05)。结论 杜仲提取物可下调大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β及iNOS mRNA的表达产生抗局灶性脑缺血再灌注损伤作用。     

血府逐瘀汤对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织NE活性、IL-1β及TNF-α表达的影响

目的观察血府逐瘀汤预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤早期中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性及脑组织中白介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉局灶性缺血再灌注损伤动物模型。将建模成功的40只大鼠随机分为观察组与对照组各20只。测量各组神经功能缺损评分,观察组:将血府逐瘀汤按人与大鼠体表面积折算动物等效药量,按生药25g/(kg·d),灌胃,连续灌胃3d。对照组同期给予等量的葡萄糖生理盐水灌胃,3d后再次测量各组神经功能缺损评分后腹腔麻醉断头杀死大鼠,手术摘取梗死侧脑组织200mg,制组织匀浆,离心,取上清液保存。酶联免疫吸附法检测脑组织匀浆中NE活性及脑组织中IL-1β及TNF-α表达。结果建模成功后喂药前,2组神经功能缺损评分差异无统计学意义(P>0.05)。喂药后,观察组神经功能缺损评分为(1.76±0.43)分低于对照组的(3.07±0.59)分,差异有统计学意义(P<0.05)。3d后,观察组脑组织中NE活性、IL-1β、TNF-α较对照组均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血府逐瘀方能够降低脑缺血再灌注后大鼠神经功能缺损程度,其机制可能与降低缺血再灌注后脑组织中NE活性及减少脑组织中IL-1β及TNF-α表达的影响有关。     

rhG-CSF增加实验性脑缺血周围区微管相关蛋白的表达

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(Reeomhinant human gmnulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)对脑梗死周围区的微管相关蛋白(Microtubule-associated protein 2,MAP-2)表达的影响。方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,观察rhG-CSF对神经功能缺损评分的影响；应用半定量逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学方法分别测定梗死周围区MAP-2的mRNA和蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,治疗组的神经功能缺损评分较低,脑缺血周围区MAP-2的mRNA和蛋白表达增高。结论rhG-CSF可以促进脑缺血周围区的微管相关蛋白的表达,从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

山楂叶总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的探讨

目的:探讨山楂叶总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法:采用改良Zea Longa’s法制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。将健康雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、尼莫地平组、山楂叶总黄酮(HLF)低、中、高剂量组6组。用神经功能评分评价大鼠脑缺血再灌注后行为障碍;用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定梗死灶面积;用相应试剂盒测定脑组织内白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:模型组缺血脑组织内的IL-1β、TNF-α含量显著升高,与假手术组相比差异有显著性,尼莫地平组和HLF组能明显降低缺血脑组织内IL-1β、TNF-α含量,与模型组相比有显著差异,HLF高剂量组和尼莫地平组缺血脑组织内IL-1β、TNF-α含量与HLF与低剂量组相比也有显著差异。结论:HLF可能通过抑制缺血再灌注后炎症反应过程而起到抗脑缺血再灌注损伤作用。     

天麻素对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用研究

目的 探讨天麻素(Gastrodine,Gas)对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及机制.方法 线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血2h后再灌注.天麻素(5,10,20 mg/kg)再灌注同时腹腔给药,再灌注后24 h,测定大鼠神经功能缺失评分和脑梗死体积,伊文思蓝法观察血脑屏障破坏程度,Western blot检测梗死半暗带皮层组织炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白表达.结果 天麻素(10,20 mg/kg)能改善大鼠脑缺血后神经功能缺失,减小脑梗死体积,降低血脑屏障的通透性.天麻素(20 mg/kg)对梗死半暗带皮层组织TNF-α表达的抑制率为24％,对IL-1β表达的抑制率为34％,对IL-6表达水平的抑制率为38％.结论 天麻素可降低血脑屏障的通透性,其通过减低炎症反应而对局灶性脑缺血损伤发挥保护作用.     

玉郎伞多糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制初探

目的:研究玉郎伞(YLS)多糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制.方法:Wistar雄性大鼠灌胃YLS多糖高、中、低剂量(0.6,0.3,0.15 g·kg-1·d-1),连续7 d,末次给药60 min后采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h再灌注24 h后对大鼠神经功能进行评分,并测定脑梗死体积、脑含水量、脑组织中白细胞介素-β(IL-β)和肿瘤坏死因子-α[(TNF-α)的含量.实验同时设尼莫地平(0.02 g·kg-1·d-1)阳性对照组和假手术组,每组10只.结果:与脑缺血再灌注模型组相比,YLS多糖能够改善大鼠的神经功能障碍,降低脑梗死体积和脑含水量,降低脑组织中的IL-1β和TNF-α含量.结论:玉郎伞多糖对大鼠急性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与降低脑组织中的IL-1β和TNF-α含量有关.     

GSTT对大鼠脑缺血再灌注损伤模型脑组织IL-1、TNF-αmRNA水平的影响

目的:观察蒺藜总皂苷(gross saponins from tribulus terrestris,GSTT)对大鼠脑缺血再灌注损伤模型IL-1、TNF-α在mRNA水平表达影响的实验研究。方法:SD大鼠40只,适应性喂养一周后,随机分为:正常对照组;MCAO模型组;大、小剂量GSTT治疗组。制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血2h,再灌注24h后,检测大鼠神经功能评分;预处理组大鼠术前7d,按照GSTT大、小剂量给予治疗,Real-time方法检测IL-1、TNF-α在mRNA水平的表达。结果:与正常对照相比较,模型组,大、小剂量GSTT治疗组,大鼠神经功能平分较高(P<0.05);与模型组相比较,大、小剂量GSTT治疗组,明显上调IL-1、同时显著下调TNF-α在mRNA水平的表达(P<0.05);且大治疗组效果更加显著。结论:GSTT抑制炎症因子IL-6表达的同时,促进抗炎因子TNF-α的表达,从而实现其对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后神经元的拮抗保护作用。     

益气通络解毒胶囊抗脑缺血性再灌注损伤的作用及其机制

本文观察了益气通络解毒胶囊抗脑缺血再灌注损伤的作用及其机制。选用SD大鼠,随机分为假手术组,模型组,益气通络解毒胶囊高、中、低剂量组,尼莫地平组,每组10只。采用大鼠大脑中动脉局灶性栓塞(MCAO)模型,观察对大鼠神经缺损功能的恢复,脑梗死体积,缺血侧脑组织SOD活力、MDA含量、NO含量和NOS活力,Bcl-2和Bax蛋白表达,血清中IL-1β、IL-6和TNFα等炎症因子含量,以及缺血侧脑组织IL-1βmRNA表达的影响。结果表明,益气通络解毒胶囊可显著地减轻MCAO模型大鼠的神经功能缺损症状,促进神经功能缺损症状的恢复;显著地缩小大鼠MCAO后脑组织梗死体积,降低脑梗死体积百分率;显著地提高缺血再灌注后大鼠脑组织中SOD活性、明显降低MDA含量、NO含量和NOS活力,减轻自由基对脑的损伤;上调Bcl-2蛋白、下调Bax蛋白表达;明显降低血清中IL-1β、IL-6和TNFα等炎症因子的含量以及缺血侧脑组织IL-1βmRNA表达水平。益气通络解毒胶囊具有明显抗细胞凋亡、抗氧化和抗炎等作用,对大鼠脑缺血性损伤具有明显的保护作用。     

金钱草提取物通过调控miR-129-5p表达对脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用

摘要：目的:探讨金钱草提取物对脑缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用及分子机制。方法:将大鼠随机分为7组:假手术组、缺血再灌注组、金钱草提取物低、中、高剂量组(300,600,900 mg·kg-1)、金钱草提取物+anti-miR-NC组(900 mg·kg-1)、金钱草提取物+anti-miR-129-5p组(900 mg·kg-1),每组9只。除假手术组外,其余各组建立大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血模型。建模成功后,各给药组灌胃给予相应剂量药物,假手术组及缺血再灌注组给予等量生理盐水。采用神经行为缺损评分评估脑损伤情况,氯化三苯基四氮唑染色法检测脑梗死体积,采用检测试剂盒分别检测丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒分别检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）含量,实时荧光定量PCR检测微小核糖核酸（miR）-129-5p表达水平。结果:与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠神经行为评分、脑梗死体积、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高,SOD、CAT活性及miR-129-5p表达水平显著降低（P<0.05）;与缺血再灌注组相比,金钱草提取物低、中、高剂量组大鼠神经行为评分、脑梗死体积、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低,SOD、CAT活性及miR-129-5p表达水平显著升高,且呈剂量依赖性（P<0.05）。干扰miR-129-5p表达逆转了金钱草提取物对缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用。结论:金钱草提取物可能通过上调miR-129-5p抑制脑缺血再灌注大鼠脑损伤。     

红景天苷对缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用

目的研究红景天苷对缺血再灌注大鼠脑组织损伤的保护作用。方法用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO-I/R)模型,在缺血和再灌注即刻分别给予红景天苷5 mg·kg~(-1)进行保护。脑缺血1.5 h再灌注24 h后用Zea-Longa标准进行神经功能评分;TTC染色法测定大鼠脑梗死面积;用南京建成生物工程研究所的试剂盒检测大鼠脑组织内超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)的活性;用Western blot法测大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。结果红景天苷能缩小MCAO-I/R大鼠脑梗死面积(P<0.05),减轻脑神经功能损伤(P<0.05),提高脑内SOD的活性(P<0.05),降低MPO (P<0.01)和TNF-α水平(P<0.05)。结论红景天苷可以通过增加自由基的清除、降低白细胞浸润、减少炎症因子的表达,从而减轻缺血再灌注脑组织的损伤。     

左旋四氢巴马汀对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内肿瘤坏死因子-α白细胞介素-1β表达的影响

目的探讨左旋四氢巴马汀(L-THP)对脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法采用大脑中动脉阻塞法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。将90只SD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组(I-R)、L-THPI组(I-R+L-THP50mg/kg)、L-THPⅡ组(I-R+L-THP25mg/kg)、L-THPⅢ组(I-R+L-THP12.5mg/kg),每组又分为缺血3h再灌注3、6、24h。每组15只SD大鼠,每时间点5只SD大鼠。采用11分法分别对大鼠进行行为缺陷评分;采用免疫组织化学法测定肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的表达。结果模型组各时间点神经行为学评分、TNF-α、IL-1β的表达均增加,数值6h较3h增高,24h最高,与3h相比差异有统计学意义(P<0.05)。L-THP各剂量组能明显改善上述指标,L-THP大、中剂量与模型组各时间点相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论在脑缺血再灌注损伤24h内,以24h损伤更为严重。L-THP对脑保护作用可能与抑制炎症反应有关。     

黄芪提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎症因子及细胞凋亡的作用

目的研究黄芪提取物(EA)对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法采用线栓法大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,以免疫组化法观察EA对缺血再灌注后大鼠脑组织中TNFα表达的影响、以放免法观察对IL1β水平的影响、以TUNEL法观察对脑组织细胞凋亡的影响。结果与模型组比较,EA(20、40、80mg·kg-1,ig)能减少TNFα的表达、降低IL1β水平和减少细胞凋亡数。结论EA对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织中TNFα及IL1β的升高和神经元的凋亡有明显的抑制作用。     

大黄苷元注射抗大鼠脑缺血损伤炎性级联反应

目的评价大黄苷元抗脑缺血损伤作用,并从细胞因子水平及表达方面探讨其抑制脑缺血炎性级联反应机制。方法将大鼠分为假手术组、模型组、川芎嗪组、大黄苷元组(低、中、高剂量)。线栓法制备大鼠局灶性脑缺血6h模型。观察神经症状积分、脑组织含水量、梗死面积,放射免疫法测定脑组织TNF-α、IL-1β、TGF-β水平,免疫组织化学法测定TNF-α、VCAM-1表达,原位杂交法测定VCAM-1-mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经症状积分和脑含水量及梗死面积增加,脑组织TNF-α和IL-1β水平增高(P<0·01)、TGF-β水平降低(P<0·01),TNF-α和VCAM-1的表达增强(P<0·01)。与模型组比较,川芎嗪组和大黄苷元低剂量、中剂量组神经症状积分和脑含水量及梗死面积明显降低,大黄苷元低剂量组较中、高剂量组和川芎嗪组尤为明显。大黄苷元低剂量组和川芎嗪组TNF-α和IL-1β水平及TNF-α、ICAM-1表达明显降低,TGF-β水平增高(P<0·01),大黄苷元低剂量组较川芎嗪组尤为明显。结论由多种细胞因子如TNF-α、IL-1β、ICAM-1介导的炎性级联反应增强和TGF-β的保护作用减弱是脑缺血损伤的重要机制。大黄苷元抗脑缺血损伤作用机制可能是通过抑制缺血脑组织炎性级联反应和提高脑保护因子如TGF-β水平而实现的。     

丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注损伤炎性细胞因子的作用

目的观察丹皮酚对局灶性脑缺血再灌注损伤后炎症因子TNF-α和IL-1β的作用,并探讨其作用机制。方法采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型。缺血2h,再灌注22h后,测定缺血侧脑组织及血清中TNF-α和IL-1β的含量。结果丹皮酚组大鼠脑组织及血清中TNF-α和IL-1β含量较模型组下降,尤以高剂量组降低最为明显。结论丹皮酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制炎症因子生成有关。     

脂氧素A_4对大鼠局部永久性脑缺血的保护作用

目的探讨脂氧素A4(lipoxinA4,LXA4)对大鼠局部永久性脑缺血损伤的保护作用。方法健康成年SD♂大鼠,体重200～250g,随机分为4组:假手术组(Sham),缺血模型组(Model),LXA410ng治疗组,LXA4100ng治疗组。用改良线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉永久性缺血模型。Sham组插入栓线仅约10mm。大鼠于放线栓成功后10min内给予右侧侧脑室内注射等容量的LXA4(5μl)或生理盐水(5μl)。缺血24h后,评价神经功能缺损情况;2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色观察脑梗死范围;分光光度计法测定缺血侧脑皮质丙二醛(MDA)含量和髓过氧化物酶(MPO)活性;ELISA法检测缺血侧皮质肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)的含量;HE染色观察脑组织病理学改变。结果LXA410ng、100ng能明显改善神经功能损伤症状,减少大鼠局部永久性缺血后脑梗死体积百分比,降低脑组织MPO活性以及MDA、TNF-α和IL-1β的含量,减轻脑组织病理学损伤,且LXA4100ng组在改善大鼠神经功能及抑制皮质TNF-α的表达上明显优于10ng组。结论LXA4对大鼠局部永久性脑缺血损伤有一定保护作用。     

DATS通过NF-κB抑制LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达

目的探讨二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-1β表达的信号转导机制。方法体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预。反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表达,电泳迁移率改变分析(EMSA)检测细胞核因子-κB(NF-κB)活性,Western blot检测细胞磷酸化(p-IκB)及非磷酸化IκB的表达。结果LPS刺激MH-S细胞可导致TNF-α、IL-1β mRNA、p-IκB表达增加及NF-κB活性升高。用DATS(0.1、0.5、2.5、5.0mg.L-1)预处理细胞30min后再给予LPS刺激,可使TNF-α、IL-1β mRNA表达降低,并呈剂量依赖性;升高的NF-κB活性及p-IκB表达均显不同程度的抑制。单独DATS对TNF-α、IL-1β mRNA表达及NF-κB活性无影响。结论DATS可通过抑制IκB磷酸化及NF-κB活化,进而下调LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β mRNA表达。     

RhG-CSF对糖尿病及非糖尿病大鼠缺血性脑卒中预后及神经生长因子表达的影响

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对缺血大鼠神经生长因子蛋白表达的影响,并观察糖尿病对其影响。方法应用线栓法制作糖尿病及非糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞模型后,将大鼠随机分为两组,治疗组连续sc rhG-CSF(50μg·kg-1·d-1),对照组注射等量生理盐水,进行神经功能缺损评分;计数神经细胞凋亡数量,检测NGF蛋白的表达。结果治疗组大鼠的神经功能缺损评分及缺血周边区域的TUNEL阳性细胞数均低于对照组的(P<0.01),而神经生长因子蛋白免疫阳性细胞多于对照组的(P<0.01);非糖尿病组较糖尿病组更明显。结论 rhG-CSF可增加缺血性脑卒中后周边区域的神经生长因子蛋白的表达,同时抑制神经细胞凋亡,最终改善神经功能预后;糖尿病可加重脑梗死。     

雷公藤内酯醇对大鼠脑局灶性缺血再灌注后脑组织肿瘤坏死因子-α含量变化的影响

目的　观察雷公藤内酯醇 (TL)是否通过降低脑组织内肿瘤坏死因子 (TNF α)含量而减少白细胞浸润 ,从而改善局灶性脑缺血再灌注所致的神经功能缺失。方法　大鼠ipTL 0 .2或 0 .4mg·kg- 1·d- 1,连续 4d。d 4给药前行右侧大脑中动脉缺血 1h再灌注 2 4h。行为观察行大鼠神经功能缺损评分 ;放射免疫法检测缺血再灌注侧大脑皮层TNF α含量。病理切片观察缺血再灌注侧脑微血管内附壁中性粒细胞计数。结果　与损伤模型组比较 ,TL处理组大脑皮质TNF α含量明显减少 ,神经功能受损程度明显改善。脑微血管内附壁中性粒细胞计数明显减少。结论　TL有抑制缺血再灌注脑组织内TNF α生成 ,降低其含量的作用 ,从而抑制白细胞浸润 ,改善受损的神经功能     

山茱萸环烯醚萜苷对创伤性脑损伤模型大鼠脑内炎症反应的影响

目的：观察创伤性脑损伤模型大鼠在山菜萸环烯醚萜苷（cornus iridoid glycosides,CIG）治疗后脑组织中炎症反应尤其是炎性细胞因子的变化,以探讨CIG的脑保护作用及其机制。方法：SD大鼠灌胃给予不同剂量的CIG（30、60、120mg·kg^-1·d^-1）,连续7d;用自由落体打击（Feeney法）造成大鼠创伤性脑损伤模型,继续给药,分别于伤后24、72h取脑;用HE染色法观察大脑皮层的形态学变化,用免疫组织化学法检测炎性细胞因子TNF—α、IL-1β的表达,并对其免疫反应阳性细胞的数量和面积进行图像分析和统计学分析。结果：HE染色显示模型组大脑皮层病理形态改变严重,CIG治疗组的病理改变与模型组相比明显减轻。免疫组织化学法发现,TNF-α、IL-1β阳性细胞主要分布在挫伤灶的周围,模型组TNF-α、IL-1β表达水平明显高于假手术组,伤后24、72h都持续高表达。CIG治疗组TNF-α、IL-1β表达水平比模型组明显降低,且有一定的剂量依赖性,尤其以伤后72hCIG的抑制作用更加显著。结论：CIG可能通过抑制炎性细胞因子的表达,减轻炎症反应,从而发挥对创伤性脑损伤后的脑保护作用。