加巴喷丁对癫痫持续状态大鼠海马区神经元凋亡的影响

目的研究加巴喷丁(GBP)对癫痫持续状态(SE)大鼠海马区神经元凋亡的影响。方法SD大鼠48只随机分为对照组、戊四氮致痫组(PTZ组)、GBP组、GBP干预组(干预组),每组12只。戊四氮溶液60 mg.kg-1.d-1腹腔注射诱发SE。干预组致痫后给予GBP 600 mg.kg-1.d-1;GBP组仅给予GBP 600 mg.kg-1.d-1;对照组和PTZ组给予0.9%氯化钠溶液灌胃。采用头皮针状电极单极导联法观察大鼠痫性放电的脑电图。缺口末端标记法(TUNEL)检验凋亡阳性细胞。结果 TUNEL阳性细胞在PTZ组显著高于对照组(P<0.01);GBP组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);干预组表达低于PTZ组(P<0.05)。结论戊四氮致SE大鼠海马CA1和CA3区神经元TUNEL阳性细胞显著增加,GBP能显著减少TUNEL阳性细胞。     

地黄寡糖对谷氨酸诱导海马神经元损伤的影响

目的观察地黄寡糖对谷氨酸诱导海马神经元损伤的影响。方法将培养7～9d的SD大鼠海马细胞进行NSE鉴定,然后随机分为:正常组(control);单纯地黄寡糖用药组(ROS);谷氨酸损伤组(Glu);谷氨酸损伤前地黄寡糖预处理组(ROS+Glu)。采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,比色法测定培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)含量,流式细胞术测定细胞凋亡率。结果0.1mmol·L-1谷氨酸作用于海马神经元24h,出现明显细胞损伤,细胞存活率下降,培养液中LDH含量明显增加,细胞凋亡率增高(P<0.01);4、20、100mg·L-1的地黄寡糖可不同程度的改善谷氨酸损伤引起的神经细胞形态的改变,提高细胞存活力,减少LDH的漏出,降低细胞凋亡率,并呈一定的剂量依赖性。4、20、100mg·L-1单纯地黄寡糖组与正常组间各指标差异没有显著性(P>0.05)。结论谷氨酸能诱导海马原代细胞的凋亡,地黄寡糖能有效保护海马神经细胞免受谷氨酸诱导的细胞损伤。     

人参皂苷Rb_1对癫痫大鼠海马神经元的影响

目的：探讨人参皂苷Rb1对青霉素所致癫痫大鼠作用。方法：将大鼠随机分为正常（A）组、模型（B）组及人参皂苷Rb1（C）组。采用青霉素制作癫痫模型制作方法,观察B组及C组大鼠癫痫发作潜伏期及发作持续时间,并测定各组大鼠海马组织（SOD）、（MDA）含量。结果：C组大鼠发作潜伏期较B组明显延长（P〈0.01）,发作时间显著缩短（P〈0.05）。C组大鼠SOD活性与B组相比显著升高（P〈0.01）,与A组比较明显降低（P〈0.05）。C组MDA含量与B组比较显著降低（P〈0.01）,与A组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：人参皂苷Rb1可通过抗氧化机制发挥抗癫痫作用。     

复方二精灵多糖对谷氨酸诱导的海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨中药复方二精灵多糖(EJL)预防阿尔茨海默病的机制。方法实验分为正常对照组、模型(100μmol.L-1谷氨酸诱导)组、阳性对照组(50μmol.L-1多奈哌齐)及EJL实验组(0.5,1.0,2.0及3.0g.L-1)。体外培养9d的海马神经元先用各药物预处理一定时间后,加入谷氨酸。采用MTT法、Hoechst 33258荧光染色、流式细胞术和Western蛋白质印迹法等方法检测细胞凋亡。结果MTT检测发现,随着EJL浓度的增加,细胞的存活率也增加;与模型组〔(59.6±4.6)%〕比较,EJL2.0及3.0g.L-1组细胞存活率明显升高〔(82.8±2.8)%和(89.4±4.1)%;n=3,P<0.05〕。荧光染色观察形态学变化发现,EJL预处理组凋亡细胞明显减少。FITC-Annexin Ⅴ和PI双染,在直方图中可以发现,模型组的凋亡率为32.33%,EJL预处理组则分别为24.33%,22.01%及12.12%。Western蛋白质印迹法结果显示,与模型组比,EJL2.0g.L-1预处理可以显著提高Bcl-2蛋白表达量,减少Bax蛋白表达量。结论EJL对海马神经元有一定的保护作用。     

大豆苷元对谷氨酸体外诱导海马神经元损伤大鼠的保护作用

［摘要］目的探讨大豆苷元对谷氨酸体外诱导原代培养大鼠海马神经元损伤的作用及机制. 方法通过对海马神经元的超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）生化测试及胞内游离钙浓度测定,观察大豆苷元对谷氨酸诱导海马神经元损伤的作用. 结果大豆苷元呈浓度依赖性的拮抗由400 μmol&;#8226;L 1谷氨酸诱导的［Ca2+］i 增高、MDA生成,并提高SOD活性.结论大豆苷元对谷氨酸体外诱导大鼠海马神经细胞损伤具有保护作用,可能与缓解胞内Ca2+超载、提高神经元抗氧化能力有关.     

大鼠海马神经元癫痫样放电模型的构建

目的探讨“无镁细胞外液”诱导体外培养大鼠海马神经元产生癫痫样放电的可行性,以期建立难治性癫痫离体细胞模型。方法选取24h内新生Wistar大鼠,分离海马神经元后进行原代培养,体外培养至第12天时,用“无镁细胞外液”处理3h,应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元的放电情况。结果在培养第12天时,神经元突起间彼此接触形成神经网络。在“无镁细胞外液”处理3h后神经元产生稳定的放电,恢复正常细胞培养液培养24h,神经元仍可检测到自发的“癫痫样放电”。结论体外培养第12天海马神经元,在“无钱细胞外液”处理后可形成稳定的自发性癫痫样放电,为今后在细胞分子水平研究癫痫发病机制提供了一种理想模型。     

异丙酚预处理对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨异丙酚预处理对缺氧/复氧后大鼠海马神经元凋亡的影响。方法取离体培养的大鼠海马神经元,随机分成5组:正常组(A)组。CoCl2组(B)组:加入300μmol·L-1(下同)CoCl2处理4h,然后更换正常的培养基培养24h,之后更换无血清的培养基培养。脂肪乳组(C)组:加入10%脂肪乳剂90μl预处理1h后同B组。异丙酚组(D)组:加入100μmol·L-1异丙酚1h后同B组。7-NI组(E)组:如D组,但加入CoCl2的同时加入3·3μl7-NI(25g·L-1)处理4h。MTT法测定细胞增殖,流式细胞技术测定细胞的凋亡。RT-PCR技术检测神经型一氧化氮合酶和凋亡相关基因的表达情况。结果脂肪乳组与CoCl2组比较,各项指标相似(P>0·05);异丙酚可增加神经元的增殖能力,减少凋亡(P<0·05或P<0·01),上调神经型一氧化氮合酶和凋亡抑制基因bcl-2的表达,下调促凋亡基因cyclinD1的表达。而这些调节作用可被神经型一氧化氮合酶抑制剂7-NI抑制(P<0·05或P<0·01)。结论100μmol·L-1异丙酚预处理对缺氧/复氧后大鼠海马神经元有保护作用,神经型一氧化氮合酶和凋亡相关基因在其中起重要作用。     

氯胺酮诱导大鼠海马神经元凋亡及机制

目的 研究氯胺酮对SD大鼠海马神经元的凋亡诱导作用,并探究其作用机制.方法 培养SD大鼠海马神经元细胞,将对数生长期的大鼠海马神经元分为对照组(不加氯胺酮)和实验组(加氯胺酮且其终浓度分别为10、20 μmol/L).24h后,缩胆囊素8肽(CCK-8)法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测蛋白phospho-细胞外信号调节蛋白激酶(P-ERK)、Bax、Bcl-2的表达.结果 10、20 μmol/L实验组神经元的存活率分别为(73.7±1.5)％和(58.2±2.4)％,明显低于对照组的(97.2±1.8)％(P＜0.05);凋亡率分别为(24.5±7.4)％和(34.7±4.9)％,明显高于对照组的(4.7±2.3)％(P＜0.05);P-ERK、Bax表达量增加,Bcl-2表达量减少.结论 氯胺酮能够诱导大鼠海马神经元凋亡,可能是通过激活P-ERK、改变Bax/Bcl-2比值实现的.     

Defective group-II metaboropic glutamate receptors in the hippocampus of spontaneously depressed rats

Spontaneously depressed flinders sensitive line (FSL) rats showed a reduced expression of mGlu2/3 metabotropic glutamate receptors in the hippocampus, as compared to "non-depressed" flinders resistant line (FRL) rats. No changes in mGlu2/3 receptor protein levels were found in other brain regions, including the amygdala, hypothalamus, and cerebral cortex. Biochemical analysis of receptor signalling supported the reduction of mGlu2/3 receptors in the hippocampus of FSL rats. Accordingly, the selective mGlu2/3 receptor agonist, LY379268 (1muM) reduced forskolin-stimulated cAMP formation by 56% and 32% in hippocampal slices from FRL and FSL rats, respectively. In addition, LY379268 enhanced 3,5-dihydroxyphenylglycine-stimulated inositol phospholipid hydrolysis from 65% to 215% in hippocampal slices from FRL rats, whereas it was inactive in slices from FRL rats. We also examined the behavioural response of FSL rats to systemic injection of LY379268 (0.5mg/kg, i.p., once a day for 1-21 days) by measuring the immobility time in the forced swim test, which is known to be increased in these rats. LY379268 was administered alone or combined with the classical antidepressant, chlorimipramine (10mg/kg, i.p.). LY379268 alone had no effect at any of the selected time-points, whereas chlorimipramine alone reduced the immobility time only after 21 days of treatment. In contrast, when combined with LY379268, chlorimipramine reduced the immobility time during the first 14 days of treatment. These data support the view that mGlu2/3 receptors might be involved in the pathophysiology of depressive disorders, and that pharmacological activation of these receptors may shorten the latency of antidepressant medication.     

新生儿缺氧缺血性脑病模型鼠脑皮质、海马细胞凋亡的研究

目的 证实和比较新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）发病过程中皮质、海马神经元凋亡的现象和差异。方法 通过HIE动物模型,应用原位末端标记技术（TUNEL）、电镜对皮质、海马细胞凋亡出现时间和强度进行了对应比较。结果 电镜下显示核膜皱缩、染色质边集;原位末端标记显现阳性着色细胞。经计量分析发现皮质和海马出现凋亡高峰时间不一致,皮质18h点、海马40h点凋亡最明显。结论 证实了HIE中神经细胞凋亡的存在;皮质、海马对缺氧缺血的反应有时间和程度的差异。提示HIE有迟发性神经元死亡的作用机理存在。     

DOPA causes glutamate release and delayed neuron death by brain ischemia in rats

DOPA seems to be a neuromodulator in striata and hippocampal CA1 and a neurotransmitter of the primary baroreceptor afferents terminating in the nucleus tractus solitarii (NTS) and baroreflex pathways in the caudal ventrolateral medulla and rostral ventrolateral medulla in the brainstem of rats. DOPA recognition sites differ from dopamine (DA) D(1) and D(2) and ionotropic glutamate receptors. Via DOPA sites, DOPA stereoselectively releases by itself neuronal glutamate from in vitro and in vivo striata. In the cultured neurons, DOPA and DA cause neuron death via autoxidation. In addition, DOPA causes autoxidation-irrelevant neuron death via glutamate release. Furthermore, DOPA released by four-vessel occlusion seems to be an upstream causal factor for glutamate release and resultant delayed neuron death by brain ischemia in striata and hippocampal CA1. Glutamate has been regarded as a neurotransmitter of baroreflex pathways. Herein, we propose a new pathway that DOPA is a neurotransmitter of the primary aortic depressor nerve and glutamate is that of secondary neurons in neuronal microcircuits of depressor sites in the NTS. DOPA seems to release unmeasurable, but functioning, endogenous glutamate from the secondary neurons via DOPA sites. A common following pathway may be ionotropic glutamate receptors-nNOS activation-NO production-baroreflex neurotransmission and delayed neuron death. However, we are concerned that DOPA therapy may accelerate neuronal degeneration process especially at progressive stages of Parkinson's disease.     

蛇床子素对AD大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 探讨蛇床子素对AD大鼠海马神经元凋亡的影响.方法 采用侧脑室注射Aβ25-35制作AD大鼠模型,并以不同剂量的蛇床子素进行干预,应用HE染色、TUNEL法染色和免疫组化法染色,观察蛇床子素对AD模型大鼠海马神经元凋亡、凋亡相关蛋白表达的影响.结果 对照组极少见凋亡细胞,Bcl-2和Bax蛋白表达极少;模型组视野内凋亡细胞与对照组比较明显增多,Bcl-2和Bax蛋白表达增多,且Bax蛋白表达升高幅度更大;与模型组相比,蛇床子素组凋亡细胞数减少,Bcl-2蛋白表达增多,Bax蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值升高.结论 蛇床子素调节AD大鼠海马凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,升高Bcl-2/Bax比值,具有抗凋亡、保护海马神经元的作用,这可能是其改善学习记忆障碍作用的机制之一.     

海马M_2受体调节杏仁核内谷氨酸的释放与学习记忆的研究

目的研究海马内M1和M2受体对学习记忆功能的影响及其可能机制。方法SD大鼠分为3组,分别海马内注射等体积的M1-ASODN(M1-AS组)、M2-ASODN(M2-AS组)和生理盐水(对照组),以被动逃避反应的步入潜伏期作为衡量学习记忆功能的指标,以CZE-LIFD法检测杏仁核内游离谷氨酸的浓度。结果M1-ASODN缩短步入潜伏期,为对照组的25%(P<0.01),M2-ASODN使步入潜伏期较对照组增加了75%(P<0.05)。双侧海马内注射ASODN后与对照组相比,M2-AS组杏仁核内谷氨酸的含量增加164%(P<0.01),而M1-AS组无变化(P>0.05)。结论海马内M受体参与恐惧性记忆的调节,M2受体抑制学习记忆,M1受体促进学习记忆。海马内M2受体可能通过调节杏仁核内谷氨酸含量的变化介导被动逃避反应的记忆过程。     

戊四唑急性癫痫模型海马病理组织的变化

目的观察大鼠戊四唑急性癫痫模型造模后不同时间海马神经元损伤程度的变化。方法大鼠腹腔注射10 g·L-1(64 mg·kg-1)戊四唑1次,诱发大鼠急性癫痫发作,分别于注射戊四唑后24、72、120、144 h将大鼠麻醉,灌流取脑,采用尼氏染色及免疫组化染色观察大鼠海马神经元损伤程度。结果与空白对照组相比,腹腔注射戊四唑后海马神经元损伤程度随着时间的延长逐渐加重。结论戊四唑急性致痫模型大鼠海马神经元损伤的最大差异出现在腹腔注射戊四唑后120 h附近,可以将其作为药效学研究的海马组织取材时间。     

快速老化痴呆模型小鼠海马细胞凋亡检测及金属硫蛋白3对其的影响

目的：研究快速老化痴呆模型小鼠（SAMP8）海马CA1区神经元细胞凋亡的变化及不同浓度的金属硫蛋白3（MT3）对其的影响．并且与金属硫蛋白1（MT1）作用相比较。方法：给予7月龄SAMP8小鼠腹腔注射age浓度的MT3及MT1,28d后灌注取脑。进行海马CA1区Tunel试剂盒染色。结果：8月龄的SAMP8小鼠海马区神经元细胞凋亡指数明显高于对照组SAMR1小鼠。高浓度MT3组凋亡指数最低,差异有统计学意义。相同浓度MT3组和MT1对照组间差异无统计学意义。结论：SAMP8小鼠海马结构存在大量的神经元细胞凋亡;MT3有抑制细胞凋亡的作用,并有浓度依赖关系;MT3和MT1对细胞凋亡的影响无差异。