骨新康对大鼠成骨细胞及破骨细胞活性的研究

目的:观察骨新康对新生大鼠成骨细胞及破骨细胞活性影响。方法:SD大鼠灌胃给药3 d取得含药血清。分离成骨细胞及破骨细胞体外培养,MTT法检细胞活性,AKP检测成骨细胞分化程度,用骨吸收陷窝数量评价破骨细胞活性。结果:与对照组相比,含骨新康血清剂量依赖性地促进成骨细胞增殖;与生理盐水组相比,10%,20%骨新康组含药血清显著促进成骨细胞分泌碱性磷酸酶(P<0.01),抑制骨陷窝的生成。结论:骨新康通过促进成骨细胞的增殖和分化,抑制破骨细胞的活性,对临床骨质疏松的防治具有积极意义。     

淫羊藿总黄酮对体外培养骨细胞功能的影响

目的 :观察淫羊藿总黄酮 (HEF)对体外培养成骨细胞以及破骨细胞功能的影响。方法 :分别用酶消化法和体外机械分离法获得新生SD大鼠成骨细胞、破骨细胞 ,在培养液中分别加入不同浓度的HEF ,观察成骨细胞的增殖功能、分化功能和矿化功能。以抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞数目、形态 ,Image ProPlus图像软件分析骨片上骨吸收陷窝的数目和面积。结果 :增殖率测定HEF浓度为 10 - 4mol·L- 1时与对照组比较差异有非常显著意义 (P <0 .0 1) ;碱性磷酸酶活性浓度≥ 10 - 8mol·L- 1,差异有显著意义 ;矿化结节面积/孔HEF 10 - 10mol·L- 1组和 10 - 4mol·L- 1组与对照组相比均增加(P <0 .0 1)。骨片培养 3d ,吸收陷窝计数的结果显示 ,各浓度对破骨细胞吸收功能均有抑制作用 ,仅10 - 4mol·L- 1组有统计学意义 (P <0 .0 5 )。陷窝面积 10 - 10 mol·L- 1组和 10 - 4mol·L- 1组与对照组相比 ,均无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论 :HEF可以通过影响成骨细胞增殖、分化、矿化促进骨形成 ;而在体外减少破骨细胞数目 ,减弱破骨细胞吸收功能。     

骨形成肽羧基端衍生物G35I对成骨细胞和破骨细胞的体外影响

目的：探讨骨形成肽羧基端衍生物G35I在体外对成骨细胞和破骨细胞的影响。方法：利用体外人成骨细胞和骨髓来源大鼠破骨细胞培养和RT—PCR方法进行研究。结果：(1)G35I在体外可以刺激人胚胎长骨来源的成骨细胞的增生。(2)G35I在10-7mol／L可以刺激骨髓来源的破骨细胞样细胞的诱导分化形成，而在其他浓度(10^-8-10^-11mol／L)此作用不明显。(3)G35I在10^-7mol／L条件下可以抑制成骨细胞骨保护素的表达，且在72h作用最明显。结论：骨形成肽羧基端衍生物G35I在不同浓度时对骨代谢的两种功能细胞均有一定作用。     

淫羊藿苷和仙茅苷协同抑制破骨细胞的形成、分化和骨吸收功能

目的 研究淫羊藿苷和仙茅苷配伍抑制破骨细胞形成、分化和骨吸收的相互作用关系.方法 用1,25-(0H)2Vitamin D3和地塞米松;或人巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导骨髓单核细胞使其分化为破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色进行阳性破骨细胞鉴定;磷酸苯二钠法测定抗酒石酸酸性磷酸酶活性;将破骨细胞和骨片共同培养,以计算机图像分析测定骨吸收陷窝的面积;以Hoechst 33258和罗丹明-鬼笔环肽染色,激光共聚焦显微镜观察破骨细胞肌动蛋白环(F-actin Ring)的形态;用Western-blot分析细胞骨架相关蛋白的表达.结果 淫羊藿苷和仙茅苷在1×10-6mol/L浓度下可协同抑制破骨细胞的形成、降低抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,减少破骨细胞在骨片上形成的骨吸收陷窝面积,抑制破骨细胞骨架F-actin环的构建及其调控因子Rho GTPases和灶性黏附激酶(focal adhesion kinase,FAK)的表达.结论 淫羊藿苷和仙茅苷协同抑制破骨细胞性的骨吸收,为药对淫羊藿仙茅的配伍提供了实验依据.     

阿仑磷酸钠和辛伐他汀对体外培养成骨细胞的影响

目的探讨辛伐他汀和阿仑磷酸钠对体外培养成骨细胞的影响。方法分离3周龄成骨细胞，体外培养时以辛伐他汀和阿仑磷酸钠刺激，观察成骨细胞碱性磷酸酶水平和成骨细胞增殖率。结果辛伐他汀、阿仑磷酸钠可以促进成骨细胞增殖，增加碱性磷酸酶的分泌，二者共同作用后作用更显著。结论辛伐他汀和阿仑磷酸钠能促进成骨细胞增殖和分泌碱性磷酸酶，可以联合作用促进骨形成。     

蛇床子总香豆素抑制大鼠多核破骨细胞的形成和分化

目的：研究蛇床子总香豆素（TCFC）对破骨细胞的作用,探讨其抗骨质疏松的作用机制。方法：采用原代培养的成骨细胞和骨髓单核细胞联合培养的方法,在1,25－（OH）2,维生素D3和地塞米松作用下,使骨髓单核细胞分化形成破骨细胞,通过相差显微镜下的形态观察,抗酒石酸酸性磷酸酶染色和骨片上骨吸收陷窝的形成来鉴定破骨细胞,磷酸苯二钠法测定破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,计算机图像分析技术测定骨片上破骨性骨吸收陷窝的面积,原子吸收光谱法测定破骨细胞和骨片联合培养的培养上清中钙的浓度。结果：蛇床子总香豆素（TCFC）2.5-25mg/L抑制破骨细胞的形成和分化。TCFC0.25-25mg/L作用24－72h,可以显著抑制抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,TCFC25mg/L作用48h和72h分别可使其降低26．3％和24．1％,TCFC25mg/L可使破骨细胞在骨片上形成的吸附陷窝的面积减少25．05％,骨片中Ca^2 的释放减少41．73％,结论：TCFC通过抑制破骨细胞的形成,抗酒石酸酸性磷酸酶的活性和骨吸收作用减少骨质丢失。     

福莫特罗对雌激素刺激大鼠成骨细胞分化与增殖的影响

目的 研究β_2肾上腺素受体阻滞剂福莫特罗对雌激素刺激大鼠成骨细胞分化与增殖的影响.方法 将不同浓度的福莫特罗加入到含雌激素(17β-E_2)培养的第二代大鼠成竹细胞中,分别于培养3、6、9、12 d后,用PNPP法检测成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性,采用ELISA方法检测骨钙素浓度,用MTT法检测成骨细胞的增殖率.结果 福莫特罗可降低雌激素刺激成骨细胞碱性磷酸酶活性,并抑制成骨细胞细胞增殖,尤其当其浓度为10~(-5)及10~(-5)mol/L时.并降低成骨细胞骨钙素.结论 福莫特罗能够显著抑制雌激素刺激大鼠成骨细胞的分化和增殖作用.     

他汀类药物对TNFa诱导成骨细胞生长抑制的保护作用

目的比较4种他汀类药物对TNF-诱导的小鼠成骨细胞(MC3T32-E1)生长抑制的影响。方法小鼠成骨细胞MC3T3-E1用DMEM+10%胎牛血清培养,细胞活性用MTT法测定。结果 TNFα(1~100 ng.mL 1)呈浓度和时间依赖抑制MC3T3-E1细胞生长;低浓度的辛伐他汀(10 10~10 7mol.L 1)、氟伐他汀(10 10~10 6mol.L 1)和阿托伐他汀(10 8~10 6mol.L 1)处理MC3T3-E1细胞72 h后能明显促进成骨细胞生长,而低浓度的罗舒伐他汀(10 10~10 7mol.L 1)无作用,在高浓度(10 6~10 5mol.L 1)时抑制MC3T3-E1的生长;用辛伐他汀、氟伐他汀和阿托伐他汀与TNF-α(10 ng.mL 1)共同培养MC3T3-E1细胞72 h,呈浓度依赖逆转TNF-α诱导的MC3T3-E1生长抑制,而罗舒伐他汀在低浓度时显示较强的逆转作用,在高浓度(10 6mol.L 1)时无作用或促进TNFα诱导的MC3T3-E1生长抑制。结论辛伐他汀、氟伐他汀和阿托伐他汀(10 10~10 7mol.L 1)能促进MC3T3-E1细胞生长,逆转TNFα诱导的MC3T3-E1生长抑制;而罗舒伐他汀高浓度(10 6~10 5mol.L 1)时抑制MC3T3-E1的生长,在低浓度时能明显逆转TNF-α诱导的成骨细胞生长抑制。     

葛根素促进体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化过程中对cAMP/PKA信号通路的影响

目的 研究葛根素对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rats osteoblast,ROBs)增殖和分化及cAMP/PKA信号通路的影响.方法 体外分离培养ROBs,观察不同浓度(1×10-4～1 ×10-8 mol/L)葛根素对ROBs增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响;分析葛根素对骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP-2)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、成骨特异性转录因子-2(Runx-2)和Oxterix mRNA表达水平的影响;观察1×10-6 mol/L葛根素对BMP-2、Col-Ⅰ、Runx-2、Oxterix、PKA和磷酸化PKA(p-PKA)蛋白表达水平,测定细胞中cAMP的变化.结果 细胞增殖结果显示1×10-7 mol/L ROBs细胞浓度高于对照组,1×10-4 mol/L组ROBs细胞浓度低于对照组(P＜0.01).1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L组ROBs ALP活性均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).1×10-6 mol/L葛根素处理ROBsRunx-2、Oxterix、BMP-2、Col Ⅰ mRNA和蛋白及p-PKA、cAMP表达水平均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).结论 1×10-6 mol/L葛根素为促进ROBs增殖和分化的最适浓度,其可促进体外培养ROBs分化过程中cAMP/PKA信号通路的激活.     

补肾方骨青颗粒对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响

目的 探讨补肾方骨青颗粒对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响.方法 体外诱导破骨前体细胞系RAW264.7向破骨细胞分化,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞数目,图像分析计算骨吸收陷窝面积,荧光定量RT-PCR检测骨青颗粒对破骨细胞骨吸收功能标志性基因水平.结果 与对照组相比,骨青颗粒可显著抑制TRAP染色阳性细胞的产生,减少破骨细胞骨吸收陷窝的面积,明显降低破骨细胞骨吸收功能标志性基因[组织蛋白酶K(Ctsk)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)]mRNA的表达.结论 骨青颗粒可显著抑制破骨细胞的分化及骨吸收功能.     

辛伐他汀对成骨细胞分化和成骨基因的影响

目的 探讨辛伐他汀对成骨细胞分化及成骨基因表达的影响.方法 选取成骨肉瘤细胞株 MG-63,采用不同浓度辛伐他汀（0.0625、0.125、0.25、0.5和 1.0 μmol/L）处理成骨细胞,ALP活性检测辛伐他汀对成骨细胞分化作用的影响;实时定量 RT-PCR和免疫印迹检测细胞成骨基因 mRNA的表达.结果 通过不同浓度辛伐他汀处理成骨细胞后,不同浓度辛伐他汀组与对照组比较,成骨细胞ALP 活性差异均有统计学意义 （ P〈0.05）,其中 0.25 μmol/L 浓度组作用对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响最为显著.采用 0.25 μmol/L辛伐他汀处理成骨细胞后,辛伐他汀组与对照组比较,成骨细胞骨钙蛋白、ALP、I型胶原 mRNA表达差异均有统计学意义 （ P〈0.05）.结论 辛伐他汀可能通过上调成骨基因mRNA的表达水平来促进其分化,这为他汀类药物治疗骨质疏松症提供新的干预靶点.     

地黄活性成分梓醇对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

目的检测地黄活性成分梓醇对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法制备不同浓度地黄活性成分梓醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型;用MTT法测定不同浓度的梓醇溶液的促细胞增殖作用;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察不同浓度的梓醇溶液的促细胞分化作用;以Vonkos-sa钙化染色法了解不同浓度的梓醇溶液的促细胞钙化作用。结果梓醇在1×10-7～1×10-9mol·L-1浓度范围内培养24及48h促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-148及72h提高成骨细胞株MC3T3-E1细胞内碱性磷酸酶的活性。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养8及12d时能明显促进成骨细胞MC3T3-E1骨钙素合成和分泌。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养19d时成骨细胞株MC3T3-E1细胞的矿化结节(mineralized bone nodular structure,MBNS)数目增多。结论梓醇可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖和分化能力,梓醇可能是地黄治疗骨质疏松作用的活性成分之一。     

Effect of daidzin, genistin, and glycitin on osteogenic and adipogenic differentiation of bone marrow stromal cells and adipocytic transdifferentiation of osteoblasts

AIM: To examine the effect of daidzin, genistin, and glycitin on the osteogenic and adipogenic differentiation of bone marrow stromal cells (MSC) and the adipogenic transdifferentiation of osteoblasts. METHODS: MTT test, alkaline phosphatase (ALP) activity measurement, Oil Red O stain and measurement were employed. RESULTS: Daidzin, genistin, and glycitin 1*10(-8), 5*10(-7), 1*10(-6), 5*10(-6), and 1*10(-5) mol/L all promoted the proliferation of primary mouse bone MSC and osteoblasts. Daidzin 5*10(-7) mol/L and genistin 1*10(-6) mol/L promoted the osteogenesis of MSC. Genistin 1*10(-8), 5*10(-7), 1*10(-6), 5*10(-6), and 1*10(-5) mol/L and glycitin 1*10(-8), 1*10(-6), and 1*10(-5) mol/L inhibited the adipogenesis of MSC. Daidzin, genistin, and glycitin 1*10(-8), 5*10(-7), 1*10(-6), 5*10(-6), and 1*10(-5) mol/L all inhibited the adipocytic transdifferentiation of osteoblasts. CONCLUSIONS: Daidzin, genistin, and glycitin may modulate differentiation of MSC to cause a lineage shift toward the osteoblast and away from the adipocytes, and could inhibit adipocytic transdifferen-tiation of osteoblasts. They could also be helpful in preventing the development of osteonecrosis.     

人骨形成蛋白2和地塞米松对不同来源成骨细胞的作用

目的：观察不同浓度的人骨形成蛋白2(BMP-2)和地塞米松(DEX)对3种来源成骨细胞的作用，并比较其特性。方法：体外培养胰酶消化法所得的正常成人的成骨细胞，成骨样细胞系和由骨髓单个核细胞(MNC)经DEX诱导7d后所得的成骨细胞，经不同浓度的BMP-2和DEX处理，观察细胞形态，并进行MTT试验和测定细胞裂解液的碱性磷酸酶(ALP)。结果：对正常成人的成骨细胞，BMP-2处理48h，72h对第4代和第8代的细胞无明显促增殖和分化作用；DEX作用48h和72h促第4代细胞增殖且表达ALP明显增加，DEX浓度为10^-8mol／L时其促增殖和分化的效果最佳，DEX对第8代细胞无明显作用。对成骨样细胞系BMP-2促增殖作用不明显，DEX处理48，72h后明显促其增殖；BMP-2及DEX作用72h后ALP表达明显增加，当作用于源自骨髓MNC的成骨细胞48，72h均促其增殖和分化。结论：BMP-2和DEX对不同成骨细胞的效应因细胞来源和作用时间不同而有差别。     

毛蕊花糖苷对新生大鼠体外培养成骨细胞增殖与分化作用研究

目的研究毛蕊花糖苷对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖、分化作用的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶消化法分离制备新生大鼠颅骨ROB细胞,MTT法测定ROB细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒法测定ROB细胞内ALP活性,以细胞的增殖率和ALP活性作为考察指标,观察不同浓度的毛蕊花糖苷对ROB细胞增殖和分化作用的影响。结果 1×10-7～1×10-9mol·L-1的毛蕊花糖苷对ROB细胞的增殖具有显著的促进作用(P<0.05),且终浓度为1×10-7mol·L-1的毛蕊花糖苷在作用72h后能显著提高ROB细胞内碱性磷酸酶的活性(P<0.05)。结论一定浓度的毛蕊花糖苷能显著的促进ROB细胞的增殖和分化。     

淫羊藿苷对体外在无地塞米松培养基中诱导培养大鼠骨髓基质细胞成骨性分化的影响

目的：探讨在无地塞米松（dexamethasone）时淫羊藿苷（icariin,ICA）对体外培养大鼠骨髓基质细胞成骨性分化的影响,并试图寻找一种新的或更强的促体外培养骨髓基质细胞成骨性分化的诱导剂。方法用1×10－5 mol·L －1淫羊藿苷或1×10－8 mol·L －1的地塞米松对大鼠骨髓基质细胞分别进行药物干预,细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测细胞增殖,碱性磷酸酶检测试剂盒检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性,茜素红染色检测钙化结节数量,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、核因子-κB 受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand, RANKL）、骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）的信使 RNA（mRNA）表达情况。结果1×10－5 mol·L －1淫羊藿苷在无地塞米松的培养基中能显著提高大鼠骨髓基质细胞 ALP 活性;明显增加大鼠骨髓基质细胞钙化结节数目;显著上调BMP、OPG mRNA 水平以及 OPG／RANKL mRNA 比值。结论淫羊藿苷可能是一种潜在的促体外培养大鼠骨髓基质细胞成骨性分化的新诱导剂。