西红花酸对乙醛诱导的肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨西红花酸(Crocetin)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖和胶原合成的影响及其作用机制.方法:培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,建立乙醛诱导的HSC纤维化模型;用不同浓度的西红花酸(10-6、10-7、10-8 mol/L)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,MTT法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测HSC-T6胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞凋亡;Western blot检测细胞ERK1/2、Bax、Bcl-2蛋白的表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达.结果:在一定浓度范围里,西红花酸能抑制乙醛引起的HSC增殖和胶原合成;西红花酸诱导乙醛刺激的HSC细胞凋亡;西红花酸能增加Bax蛋白表达,降低乙醛刺激升高的ERK1/2、Bcl-2蛋白表达;西红花酸能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP-1的表达,提高MMP-2的表达.结论:西红花酸通过抑制乙醛诱导的HSC增殖和胶原合成以及促进活化的HSC凋亡起到抗肝纤维化作用,其机制可能与ERK信号传导通路和对基质金属蛋白酶的调节有关.     

鳖甲活性多肽的合成及对肝星状细胞增殖的抑制作用(英文)

探讨鳖甲活性多肽的固相合成及对肝星状细胞(HSC-T6)增殖的抑制作用。根据鳖甲活性多肽的序列结构,采用固相方法对多肽进行全合成,并用MALDI-TOFMS质谱对合成多肽进行分析鉴定;肝星状细胞(HSC-T6)培养至对数生长期后,加入不同浓度合成多肽作用肝星状细胞株HSC-T6,采用MTS法分析HSC-T6生长的抑制作用;使用AnnexinV-FITC/PI法检测HSC凋亡率。结果显示通过固相合成可以得到与原序列结构一致的鳖甲合成多肽;鳖甲合成多肽浓度依赖性地抑制肝星状细胞增殖,并能显著提高肝星状细胞早期凋亡率。因此,可以成功地合成鳖甲活性多肽,且对肝星状细胞增殖有明显的抑制作用。     

银杏叶提取物对肝星状细胞TGF-β_1,CTGF及细胞外基质表达的影响

目的:研究银杏叶提取物对肝星状细胞增殖及转化生长因子(TCF)-β1、结缔组织生长因子(CTCF) mRNA表达及细胞外基质分泌的影响。方法:用不同浓度(0,1,10,100,500 mg·L-1)的银杏叶提取物处理 HSC-T6 24 h及48 h后,用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)法检测各组细胞及空白对照组中TGF—β1,CTGF mRNA的表达;放射免疫法分析上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白的含量;MTT及流式细胞仪检测其对肝星状细胞增殖及细胞周期的影响。结果:银杏叶提取物10,100,500 mg·L-1能明显抑制 TGF-β1和CTGF mRNA的表达,降低上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白的含量 (P<0．01或P<0．05),在一定范围内呈随剂量增加及时间的延长,抑制效率增加;并可抑制肝星状细胞的增殖,影响HSC-T6的细胞周期,使细胞周期阻滞于G1期。结论:银杏叶提取物可明显抑制HSC-T6的增殖,降低其细胞因子基因表达及细胞外基质的分泌。     

草苁蓉乙醇提取物对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨草苁蓉提取物对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)生长抑制及诱导凋亡的影响。方法:选用大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)进行体外培养,用MTT比色法测定不同浓度、不同时间段草苁蓉乙醇提取物对该细胞的抗增殖作用;应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色荧光显微镜及扫描电镜技术观察药物作用后的细胞形态学改变;应用流式细胞仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测细胞周期及细胞凋亡率的变化。结果:(1)MTT实验表明:草苁蓉乙醇提取能抑制HSC-T6细胞增殖,并表现出浓度、时间依赖性关系。(2)HE染色、AO/EB荧光染色以及扫描电镜观察发现草苁蓉乙醇提取物作用于HSC-T6细胞后呈现出典型的细胞凋亡形态学改变:细胞表面微绒毛消失,细胞体积变小,细胞质浓缩,核染色质边集、细胞核固缩、核碎裂、出泡等现象。(3)流式细胞仪检测,草苁蓉乙醇提取物处理后大鼠肝星状细胞(HSC-T6)被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率上升,与对照组相比有统计学差异,并随药物浓度的升高呈增高趋势。结论:(1)草苁蓉乙醇提取物在体外可明显抑制HSC-T6细胞的增殖。(2)草苁蓉乙醇提取物在体外可诱导HSC-T6细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G0/G1期。     

化浊解毒方含药血清对HSC-T6增殖、凋亡及PPARγmRNA表达的影响

目的:研究化浊解毒方含药血清对体外培养的大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及细胞外基质和PPARγmRNA表达的影响,以探讨化浊解毒方治疗肝纤维化的机制。方法:选择健康SD大鼠,每天灌服不同剂量(每L分别含有生药30,60,120 g)的化浊解毒方以及α干扰素(1 000 U.mL-1),按1 mL.(100 g)-1大鼠体质量给药,以制备含药血清;常规培养活化的肝星状细胞(HSC-T6),用不同浓度的含药血清进行干预,用MTT法检测HSC增殖、流式细胞术测HSC凋亡,ELISA法及RT-PCR法分别测细胞上清液中I型及Ⅲ型胶原的含量以及细胞中PPARγmRNA基因的表达。结果:与正常血清组比较,化浊解毒方药含药血清各浓度组均呈现出抑制HSC增殖的作用(P<0.05),以作用48 h最为明显,且呈剂量和时间依赖性。与正常血清对照组比较,化浊解毒方药含药血清各个浓度组在作用48 h后,细胞上清液中的I型及Ⅲ型胶原的含量均降低(P<0.05),并上调PPARγmRNA的表达(P<0.05)。结论:化浊解毒方药能有效治疗肝纤维化可能通过上调PPARγ的表达起到抑制肝星状细胞增殖,促进肝星状细胞凋亡,降低肝星状细胞活性有关。     

川芎嗪与阿米洛利联用对肝星状细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的探讨钠氢交换抑制剂阿米洛利（Amiloride）与抗氧化剂川芎嗪联用对大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSC）增殖及分泌细胞外基质的影响。方法用不同浓度的阿米洛利和川芎嗪处理大鼠肝星状细胞;以MTT比色法测定细胞的增殖;放射免疫法测定透明质酸和层黏连蛋白;酶联免疫吸附法（ELISA）测定Ⅰ型胶原水平。结果阿米洛利和川芎嗪均可剂量依赖性地抑制HSC增殖,不同程度抑制Ⅰ型胶原、透明质酸和层黏连蛋白分泌,联用组优于单用组。结论作用于HSC不同靶点的抗纤维化药物联用优于单用。     

黄芪总苷对肝星状细胞增殖和合成胶原的抑制作用

目的　探讨黄芪总苷 (AST)对肝星状细胞增殖和合成胶原的影响。方法　采用枯细胞条件培养基 (KCCM )及含新生牛血清 (NBS)和健康大鼠血清 (RS)的混合血清刺激大鼠肝星状细胞 (HSC)系HSC T6 ,用 3H TdR和3H 脯氨酸参入法检测HSC增殖活性和胶原合成状况。结果　AST(1 6、32、64、1 2 8和 2 56mg·L- 1 )对KCCM 1∶4刺激HSC T6细胞增殖和胶原合成均有明显的抑制作用 ;在含 1 0 %NBS- 3 %RS混合血清刺激的HSC T6细胞 ,AST(32、64、1 2 8和 2 56mg·L- 1 )作用 48h对HSC T6细胞增殖 ,及AST(1 6、32、64、1 2 8和 2 56mg·L- 1 )作用 72h对HSC T6细胞胶原合成均有明显的抑制作用 ,呈浓度依赖型趋势。结论　AST对体外激活肝星状细胞的增殖和产生胶原有明显抑制作用 ,该作用可能是AST抗肝纤维化的机制之一     

黄芪总苷对血吸虫卵抗原活化的肝星状细胞增殖与胶原合成的影响

目的观察黄芪总苷对血吸虫卵抗原活化的肝星状细胞增殖与胶原合成的影响。方法小鼠腹腔注射日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Solub le egg antigen,SEA),制备SEA活化的腹腔巨噬细胞条件培养基(Solub le egg antigen inducedm acrophage cond itioned m ed ium,SEA-MCM)。采用肝星状细胞株HSC-T6细胞,以细胞增殖抑制率为指标,用噻唑蓝(MTT)测定黄芪总苷对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞增殖的影响;通过3H-脯氨酸参入法测定黄芪总苷对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞胶原合成的影响。结果SEA-MCM能明显促进HSC-T6细胞的增殖和胶原合成。黄芪总苷(32.5、65和130 mg.L-1)对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞增殖及胶原合成有明显的抑制作用,且呈药物浓度依赖性关系。结论黄芪总苷对SEA-MCM诱导的肝星状细胞增殖及胶原合成有明显的抑制作用。     

美洲大蠊浸膏对大鼠HSC和SEC增殖及细胞外基质分泌的影响

目的探究美洲大蠊浸膏(APE)对体外培养大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)和肝窦内皮细胞(SEC)增殖及分泌细胞外基质的影响。方法用稀释不同倍数的美洲大蠊浸膏干预大鼠肝星状细胞株(HSCT6)和肝窦内皮细胞(SEC)。M TT法测定HSC-T6和SEC的增殖情况;ELISA测定药物干预后细胞培养上清液中α-SMA、Ⅳ型胶原和层粘连蛋白(LN)的含量。结果美洲大蠊浸膏叮抑制HSC-T6和SEC的增殖,并在一定范围内呈剂量效应关系。美洲大蠊浸膏组细胞上清中α-SMA、Ⅳ型胶原和层粘连蛋白(LN)的含量低于对照组。结论美洲大蠊浸膏可抑制HSC-T6和SEC增殖,并不同程度抑制α-SMA、Ⅳ-C和LN的分泌,有可能成为防治肝纤维化的临床用药。     

甲基阿魏酸对肝星状细胞增殖和细胞外基质的影响

目的研究甲基阿魏酸对大鼠肝星状细胞增殖和细胞外基质的影响。方法采用四甲基噻唑蓝法检测MFA对HSC的毒性;采用酶联免疫法法检测HSC上清液羟脯氨酸、金属蛋白酶组织抑制因子和透明质酸。结果 MFA可以抑制HSC的增殖,呈现剂量和时间依赖性;MFA各剂量组均可显著降低HSC细胞上清液HYP、HA、TIMP-1含量,呈现剂量依赖关系。结论 MFA通过抑制HSC的增殖,从而使ECM合成减少,肝纤维化减轻。