缺血性脑损伤中硝酸甘油对神经元的保护及Akt信号通路的影响

目的探讨硝酸甘油（NG）对大鼠缺血性脑缺血再灌注中Akt和Bad（ser136）磷酸化的影响。方法36只健康SD（Sprague-Dawley）大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组（对照组）、硝酸甘油组。以大鼠四肢动脉结扎脑缺血模型为基础,应用焦油紫染色法检测海马CA1区神经元凋亡,采用免疫印迹检测Akt和Bad（ser136）的磷酸化。结果硝酸甘油组脑海马CA1区神经元凋亡显著少于对照组（P〈0.05）;硝酸甘油组Akt、Bad（ser136）的磷酸化显著高于对照组（P〈0.05）。结论硝酸甘油能显著减轻脑缺血再灌注后脑海马CA1区神经元凋亡,明显提高Akt、Bad（ser136）的磷酸化水平,对脑缺血再灌注损伤起到保护作用。     

缺血性脑损伤中HSP72对神经元保护作用的实验研究

目的探讨缺血性脑损伤中HSP72对大鼠神经元的保护作用及其分子机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注对照组、热休克处理组、HSP72反义寡核苷酸组及溶剂组。采用焦油紫染色、免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织AKT、Bad（Ser136）的磷酸化情况。结果热休克处理组与缺血再灌注对照组、HSP72反义寡核苷酸组和溶剂组相比海马神经元损伤减轻,脑组织AKT和Bad（Ser136）磷酸化升高（P〈0.05）。结论HSP72可能通过升高脑组织中AKT和Bad（Ser136）的磷酸化程度起到海马神经元保护作用。     

芍药苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中脑细胞凋亡的影响

目的 观察芍药苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中脑细胞凋亡的影响,并探讨其脑保护的作用机制.方法 30只7日龄SD大鼠,随机均分成假手术组、缺氧缺血模型组、芍药苷低、中、高剂量治疗组.通过结扎左颈总动脉和吸入8%低氧混合气制备缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型.假手术组不进行缺氧缺血处理,各组新生鼠均于缺氧缺血后48 h处死,取大脑皮层及海马区组织进行HE染色及TUNEL法凋亡细胞检测.结果 假手术组大鼠的大脑皮层及海马区组织、细胞形态正常;缺氧缺血模型组的大脑皮层及海马区组织水肿,细胞周围间隙增宽,胞体肿胀变圆、变大、胞浆染色变浅;各芍药苷组的神经元细胞胞体肿胀及组织水肿情况较缺氧缺血模型组明显好转.假手术组的大脑皮层及海马CA1区未见凋亡细胞;缺氧缺血模型组的可见较多凋亡细胞;各芍药苷组的凋亡细胞较相应时点缺氧缺血模型组的减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 芍药苷能减轻新生大鼠HIBD时的脑病理损伤,抑制大鼠HIBD时的脑细胞凋亡,对新生大鼠HIBD脑损伤具保护作用.     

碱性成纤维细胞生长因子在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后海马神经发生中的作用

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经细胞内源性修复机制的相关性.方法 128只SD大鼠随机均分为假手术(A)组、单纯缺氧(B)组、单纯缺血(C)组和缺氧缺血(D)组.建立HIBD模型,免疫组化检测溴化脱氧核糖尿嘧啶(BrdU)阳性细胞表达,RT-PCR检测海马bFGF mRNA表达.结果 与其余各组比较,D组BrdU阳性细胞数及bFGF mRNA表达于HIBD后7、14 d明显增加(P＜0.05).结论 HIBD后海马齿状回存在神经细胞再生,bFGF可能参与HIBD后神经细胞内源性修复机制.     

Protective effect of paclitaxel on injury of hippocampal neurons induced by cerebral ischemia-reperfusion

目的 研究紫杉醇对脑缺血-再灌注(I-R)后海马神经元损伤的保护作用及分子机制.方法 SD大鼠随机分为假手术对照组(A组)、I-R对照组(B组)、1％ DMSO溶剂处理组(C组)、紫杉醇8 μg/kg组(D组,缺血前30 min脑室注射),每组各10只.采用大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,应用免疫印迹法检测紫杉醇对B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达的影响.结果 与A组相比,B、C组Bcl-2及Caspase-3磷酸化表达增加(P＜0.05),而D组Bcl-2及Caspase-3磷酸化表达较B组明显减少(P＜0.05).结论 紫杉醇可能对脑I-R诱导海马神经元的损伤有保护作用;这种保护作用可能与Bcl-2、Caspase-3蛋白活性密切相关.     

电针对大鼠脑缺血海马损伤区神经元δ-连环素表达的影响

目的 探讨电针对脑缺血海马损伤区神经元δ-连环素表达的影响及其意义.方法 应用免疫组织化学方法检测δ-连环素在海马CA1区的表达.结果 电针组大鼠缺血侧海马CA1区δ-连环素的阳性反应产物比缺血模型组增多(P＜0.05).结论 本试验的结果提示,电针可能通过上调δ-连环素的表达,从而对神经元起到保护作用.     

阳离子脂质体转染Akt基因对缺血性心脏病细胞凋亡的影响

目的 研究转染基因Akt对心肌细胞凋亡的影响.方法 培养新生SD大鼠心肌细胞;提取人Akt质粒,用脂质体将其转染心肌细胞.实验分5组:空白对照(A)组、缺血-再灌注损伤对照(B)组、Akt基因(C)组、阳离子脂质体空载体(D)组和Akt抑制剂(E)组;各组进行模拟缺血-再灌注后测定乳酸脱氢酶(LDH)含量、细胞活性、细胞凋亡率及Akt、Bcl-2、NF-kB p65蛋白表达.结果 C组LDH含量较B组、D组和E组明显减少(P＜0.05),细胞活性高(P＜0.05),细胞凋亡率低(P＜0.05),Akt、Bcl-2与NF-kB p65蛋白表达增加(P＜0.05).结论 细胞凋亡参与了心肌缺血-再灌注损伤过程,转染Akt基因可减少缺血-再灌注损伤心肌细胞凋亡率.     

七氟烷激活PI_3-K/Akt/P~(70S6K)信号转导通路抑制缺血/再灌注损伤神经元的凋亡

目的研究七氟烷对神经元缺血/再灌注损伤后PI3-K/Akt/P70S6K信号转导通路的影响,探讨七氟烷脑保护机制。方法将96孔和6孔培养板上培养7d的海马神经元随机分为6组:正常培养组(C组)、缺血/再灌注组(I/R组)、缺血/再灌注+2%Sevoflurane组(Sevo组)、缺血/再灌注+2%Sevoflurane+10μmol.L-1LY294002(PI3-K拮抗剂)组(LY组)、缺血/再灌注+2%Sevoflurane+10μmol.L-1Tric irib in(Akt拮抗剂)组(Tri组)、缺血/再灌注+2%Sevoflurane+10 nmol.L-1Rapamyc in(P70S6K拮抗剂)组(Rap组)。C组神经元按正常培养方法培养。Sevo组在神经元缺糖缺氧的同时接受2%Sevoflurane麻醉。LY组、Tri组和Rap组在神经元进行缺糖同时分别加入LY294002、Tric irib in或Rapamyc in使其终浓度分别为10μmol.L-1、10μmol.L-1或10 nmol.L-1后同Sevo组处理。96孔培养板的神经元进行细胞存活力的检测。6孔培养板的神经元进行神经元纯度鉴定、神经元凋亡和PI3-K、Akt和P70S6K蛋白表达的检测。结果Sevo组PI3K、Akt、P70S6K蛋白表达增加,神经元存活率增加、神经元凋亡率降低(vsI/R组,P<0.01)。LY组PI3K、Akt和P70S6K表达降低,神经元存活率降低、神经元凋亡率增加(vsSevo组,P<0.05或P<0.01);Tri组Akt和P70S6K表达降低,神经元存活率降低、神经元凋亡率增加(vsSevo组,P<0.05或P<0.01);Rap组P70S6K表达降低,神经元存活率降低、神经元凋亡率增加(vsSevo组,P<0.01)。结论Sevoflurane激活了PI3-K/Akt/P70S6K信号通路,在海马神经元缺血/再灌注损伤过程中抑制了神经元凋亡,保护了神经元。     

吡格列酮对脑室注射脂多糖所致大鼠海马损伤的保护作用机制探讨

目的研究吡格列酮(Pio)对脂多糖(LPS)所致大鼠海马神经元损伤保护作用的信号传导机制。方法取SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只,即生理盐水对照组,LPS组,LPS+Pio 40和80 mg.kg-1组。大鼠灌胃给予Pio24 h后,脑室注射LPS 5μl(1.0 mmol.L-1),生理盐水对照组注射等量生理盐水。脑室注射后继续给药7 d后,快速取海马CA1区,Western blot观察磷酸化的c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)、c-Jun、Akt、p70S6K和Caspase-3表达,应用荧光免疫组织化学进行磷酸化JNK和OX-42双染,激光共聚焦显微镜观察磷酸化JNK的表达部位。结果 Western blot结果显示注射LPS后,与对照组相比海马CA1区磷酸化JNK1、c-Jun和Caspase-3表达水平明显增加(P<0.01),磷酸化Akt、p70S6K表达水平明显降低(P<0.01)。与LPS损伤组比较,Pio(40和80 mg.kg-1)能对抗LPS引起的海马CA1区磷酸化JNK1、c-Jun、Akt、p70S6K和Caspase-3表达的改变(P<0.01),激光共聚焦显微镜观察结果显示,脑室内注射LPS后小胶质细胞磷酸化的JNK表达明显增加。结论 Pio通过抑制JNK和Akt激酶信号传导通路的改变,对抗LPS引起的海马神经元损伤。     

天麻乙醇提取物对抑郁模型小鼠行为及海马神经元损伤的影响

目的:探究天麻乙醇提物(ethanolic extracts of Gastrodia elata,EEGE)对慢性应激抑郁模型小鼠行为、海马神经元损伤及海马突触体内游离Ca2 浓度的影响.方法:采用长期不可预见性中等强度应激造成小鼠抑郁模型.测定各组小鼠体重变化.Open-field法和糖水消耗实验测定各组小鼠的行为变化;Niss1染色法观察海马CA1,CA3区神经元形态及锥体细胞数目:以Fura-2负载及荧光分光光度计检测海马突触体内游离Ca2 浓度.结果:与正常组比较,模型组小鼠模型组小鼠体呈现明显的抑郁样症状.EEGE低、高剂量组小鼠在第21天体重显著增加(P＜0.001),其高剂量增加抑郁小鼠的爬格数(P＜0.05);低、高剂量能明显增加抑郁小鼠的糖水消耗量(P＜0.001),但无量效关系;低剂量组CA3区锥体细胞数目显著增多(P＜0.001).且排列整齐、密集;高剂量组CA3区锥体细胞数目显著增多(P＜0.05);低、高剂量能明显降低抑郁小鼠海马突触体内游离Ca2 浓度(P＜0.001).结论:EEGE能改善小鼠的抑郁样行为;保护抑郁模型小鼠海马神经元损伤,可能与EEGE抑制海马神经细胞外Ca2 内流,阻止Ca2 超载相关.