ERCC1基因表达与磁性Fe_3O_4纳米颗粒逆转卵巢癌细胞耐药性的关系

目的探讨磁性Fe3O4纳米颗粒(Fe3O4-MNPs)逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株(SKOV3/DDP)的耐药性的可能性及其机理。方法将SKOV3/DDP分为对照组、顺铂组、Fe3O4-MNPs组、顺铂+Fe3O4-MNPs组等4个组,流式细胞技术测定细胞凋亡、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)测细胞内顺铂的含量,及RT-PCR检测切除DNA修复基因ERCC1 mRNA在SKOV3/DDP中的表达。结果在顺铂+Fe3O4-MNPs组中,细胞凋亡率及细胞内铂含量均高于顺铂组(P<0.05);ERCC1 mRNA的表达明显低于顺铂组(P<0.05)。结论Fe3O4-MNPs可以逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性,其作用可能是通过提高细胞内铂浓度、下调ERCC1表达来逆转SKOV3/DDP对顺铂的耐药。     

磁性纳米四氧化三铁颗粒制备及其对ICR小鼠脏器的影响

目的 研究磁性纳米四氧化三铁颗粒(Fe O4-MNPs)的制备及比较不同浓度的Fe3O4-MNPs对ICR小鼠脏器的影响.方法 化学共沉淀法制备Fe3 O4-MNPs;透射电镜、扫描电镜观察Fe3O4-MNPs的形貌;不同剂量FeO4-MNPs(0、300、600、1200 mg/kg)给40只小鼠分4组(每组10只)一次性喂食,14d后处死小鼠收集标本,取小鼠皮肤、肝脏、脾脏、大肠,观察其组织病理学改变.结果 化学共沉淀法制备出黑色颗粒状晶体.透射电镜观察发现Fe3 O4-MNPs外形呈现大小不等的近似球形,扫描电镜观察发现Fe3O4-MNPs外形呈现大小不等的不规则状.不同剂量Fe O4-MNPs喂食的ICR小鼠皮肤、肝脏、大肠及脾脏组织病理学均无明显差异.结论 化学共沉淀法成功制备了Fe3 O4-MNPs.一定剂量范围的Fe3 O4-MNPs对正常小鼠脏器无明显的组织病理学损害.     

奥曲肽对人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP移植瘤增殖的影响

目的探讨奥曲肽对人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤生长的影响。方法将SKOV3/DDP细胞接种雌性BALB/c-nu/nu裸鼠右腋前皮下构建移植瘤动物模型,成瘤后随机分成4组。奥曲肽组(A):奥曲肽100μg.kg-1.d-1,用药28 d;顺铂组(B):顺铂4 mg.kg-1.d-1,成瘤后第1、8、15、22天用药;联合组(C):奥曲肽和顺铂联用;对照组(D):生理盐水对照。用药4周后处死裸鼠,取肿瘤标本计算瘤重和瘤体积,并采用免疫组织化学法检测瘤块中生长抑素受体2(SSTR2)和表皮生长因子受体(EGFR)的表达。结果各用药组肿瘤标本的瘤重、瘤体积均低于D组,C组的瘤重、瘤体积低于A、B组(P<0.01)。各组移植瘤细胞均有SSTR2表达;EGFR表达量D组显著高于其他各组(P<0.01),C组及A组EGFR表达量低于其他两组(P<0.01)。结论奥曲肽能抑制人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP的裸鼠移植瘤的生长,并与顺铂有协同作用。     

两种粒径磁性Fe_3O_4纳米粒的肿瘤靶向及光热治疗研究

目的利用四氧化三铁(Fe_3O_4)纳米粒作为模型,研究粒径对纳米粒子靶向性的影响,同时考察不同粒径Fe_3O_4的光热治疗效果。方法本研究采用水热法合成50 nm(Fe_3O_4-50)和210 nm(Fe_3O_4-210)两种粒径的Fe_3O_4纳米粒,考察其光热升温效果、细胞摄取情况和各水平磁响应性;评价外磁场介导下纳米粒在荷瘤小鼠中体内分布情况,并开展体内光热治疗。结果所制备的Fe_3O_4纳米粒形貌均一。两种纳米粒在体外具有近似的光热转化效率,近红外光照射5 min后,两组溶液均从25°C升至72°C;Fe_3O_4-50细胞摄取水平较高,对细胞的光热杀伤效果较好,1.5 W·cm~(-2)照射3 min后细胞存活率低于60%,而相同条件下,Fe_3O_4-210的细胞存活率高于75%。体内分布结果显示,Fe_3O_4-210具有更好的肿瘤靶向及治疗效果,照射3 min后,肿瘤部位温度达到47.3℃,而Fe_3O_4-50温度低于40℃。结论两种粒径Fe_3O_4均具有良好的光热效果。小粒径Fe_3O_4(50 nm)具有较高的细胞摄取效果;大粒径Fe_3O_4(210 nm)具有更好的肿瘤靶向能力,更适合于肿瘤热消融治疗。     

β-榄香烯抗DDP耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP 作用及机制研究

目的:研究β-榄香烯对DDP耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP增殖生长、逆转耐药的作用,以及对耐药细胞中耐药相关蛋白表达的影响。方法:CCK-8法研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞增殖的抑制作用;克隆形成实验研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞克隆形成的影响;流式细胞术研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞凋亡的影响;CCK-8法研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞产生顺铂(DDP)耐药的逆转指数;Western Blot法研究β-榄香烯对SKOV3/DDP细胞中耐药相关蛋白ABCB1、LRP和P-gp表达水平的影响。结果:β-榄香烯在20、40、80μmol·L^-1时能够抑制SKOV3/DDP细胞的增殖、克隆形成并促进细胞凋亡;β-榄香烯在不具有直接杀伤细胞作用的10μmol·L^-1时即可以逆转SKOV3/DDP细胞对DDP的耐药,其逆转耐药指数为2.58倍;β-榄香烯在20、40、80μmol·L^-1时能够减少耐药相关蛋白ABCB1、LRP和P-gp表达。结论:β-榄香烯能够直接抑制SKOV3/DDP细胞增殖、促进其凋亡并逆转细胞DDP耐药,其作用机制可能与减少耐药相关蛋白ABCB1、LRP和P-gp表达有关。     

黄腐酚对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的影响及其机制

目的 探讨黄腐酚降低人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的机制。方法 将KOV3/DDP细胞分为卵巢癌组（无干扰）、10 μmol·L^-1黄腐酚组（10 μmol·L^-1黄腐酚培养）、20 μmol·L^-1黄腐酚组（20 μmol·L^-1黄腐酚培养）、40 μmol·L^-1黄腐酚组（40 μmol·L^-1黄腐酚培养）、80 μmol·L^-1黄腐酚组（80 μmol·L^-1黄腐酚培养）、160 μmol·L^-1黄腐酚组（160 μmol·L^-1黄腐酚培养）。采用CCK-8检测SKOV3/DDP细胞存活率;克隆形成实验检测SKOV3/DDP细胞克隆数目;流式细胞仪检测SKOV3/DDP细胞凋亡率;CCK-8检测黄腐酚对SKOV3/DDP细胞DDP耐药性的影响;免疫印迹检测SKOV3/DDP细胞中耐药蛋白ABCB1、MDR-1和P-gp的表达。结果 与卵巢癌组相比,10 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞存活率无明显变化（P>0.05）;与10 μmol·L^-1黄腐酚组相比,20、40、80、160 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞存活率均显著降低（P<0.05）。卵巢癌组及10、20、40、80、160 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞克隆数目分别为（86±12）、（82±10）、（61±11）、（46±9）、（29±11）及（20±7）,组间比较,差异有统计学意义（F=43.270, P<0.001）。卵巢癌组及10、20、40、80、160 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞凋亡率分别为（2.56±0.20）%、（3.20±0.36）%、（15.21±1.22）%、（26.30±1.60）%、（33.20±2.25）%及（45.63±2.10）%,组间比较,差异有统计学意义（F=775.200, P<0.001）。与DDP相比,DDP联合黄腐酚对SKOV3/DDP细胞的活性抑制率较高,差异有统计学意义（P<0.05）;与卵巢癌组相比,10 μmol·L^-1黄腐酚组ABCB1、MDR-1和P-gp蛋白表达水平无显著差异（P>0.05）;与10 μmol·L^-1黄腐酚组相比,20、40、80、160 μmol·L^-1黄腐酚组SKOV3/DDP细胞中ABCB1、MDR-1和P-gp蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。结论 黄腐酚可降低卵巢癌SKOV3/DDP细胞的耐药性,抑制细胞活性,促进细胞凋亡,可能与下调ABCB1、MDR-1和P-gp蛋白表达相关。     

拉帕替尼联合顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3生长的影响

目的探讨新型靶向治疗药物拉帕替尼联合顺铂(DDP)对人卵巢腺癌细胞株SKOV3的增殖抑制作用以及对磷酸AKT蛋白表达的影响。方法体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,采用MTT方法检测不同浓度拉帕替尼、DDP单用或者合用对细胞增殖活力的改变;用流式细胞仪进行细胞周期分析;用流式细胞仪检测SKOV3应用拉帕替尼前后磷酸化AKT(P-AKT)蛋白的表达。结果拉帕替尼及顺铂单独使用即对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞有增殖抑制作用,不同浓度的拉帕替尼与顺铂联合应用对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞的增殖抑制作用较单药组增强(P<0.05),与对照组相比有统计学意义(P<0.05);应用拉帕替尼前后P-AKT蛋白的表达有显著不同(P<0.05)。结论拉帕替尼联合顺铂可显著抑制SKOV3细胞株的增殖,其作用可能与P-AKT的表达有关,为其在卵巢癌上的应用提供了新的靶点和一定的理论基础。     

硼替佐米对卵巢癌SKOV-3/DDP细胞增殖和耐药逆转的影响

目的:探讨硼替佐米对卵巢癌SKOV-3/DDP细胞增殖和耐药逆转的影响和作用机制。方法:采用MTT法检测不同浓度硼替佐米和顺铂(DDP,cisplatin)对SKOV-3/DDP不同作用时间的细胞生长抑制率,以及硼替佐米和DDP合用和单独应用时的细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化。结果:硼替佐米能够有效抑制SKOV-3/DDP细胞增殖,硼替佐米与DDP合用组的SKOV-3/DDP细胞抑制率较硼替佐米和DDP单用组均明显增强。单独应用硼替佐米细胞周期阻滞于G2/M期,单独应用DDP细胞周期阻滞于S期,两药联合出现更明显的S期阻滞。结论:硼替佐米与DDP具有协同作用,能够逆转SKOV-3/DDP细胞对DDP的耐药性。     

磁性纳米Fe3O4颗粒对藤黄酸诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的研究磁性纳米Fe3O4颗粒(MNP-Fe3O4)对藤黄酸(GA)诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用。方法将HepG2细胞分为GA 0.5μmol/L单药组(A组)、GA 0.5μmol/L和MNP-Fe3O420μg/ml两药联合组(B组)及空白对照组(C组)。采用MTT法检测HepG2细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)及半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的表达。结果 GA对HepG2细胞生长的抑制作用呈剂量依赖性。与C组相比,A、B组HepG2细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少(P<0.05),且B组各指标变化更为显著(P<0.05)。结论 MNP-Fe3O4能增强GA对肝癌HepG2细胞的凋亡诱导作用;其机制可能与Bcl-2表达下调及Caspase-3表达上调有关。     

莪术油注射液致人卵巢癌SKOV3细胞胀亡形态变化研究

目的研究莪术油注射液对人卵巢癌SKOV3细胞形态学改变的影响。方法以不同的药物浓度作用人卵巢癌SKOV3细胞株后,采用光学显微镜和透射电镜观察卵巢癌SKOV3细胞形态学变化。结果光镜下可见莪术油低浓度组部分细胞体积开始变大,细胞胞浆空泡化,胞浆内出现致密颗粒,细胞核开始变形。细胞胞浆出现大面积的空泡,细胞核变形明显,细胞质出现颗粒脱落,出现细胞质空泡,核内染色质分散。高浓度组细胞肿胀,胞浆减少,核浆比例增加,细胞质大量颗粒脱落,细胞质空泡明显,有胞膜崩解、细胞核溶解;电镜下可见卵巢癌SKOV3细胞胀亡,且呈浓度依赖性。结论莪术油注射液诱导SKOV3细胞胀亡是其抑制肿瘤细胞生长的机制之一。     

miR-218在上皮性卵巢癌细胞株SKOV3中的生物学功能

目的 探讨微小RNA-218(miR-218)在上皮性卵巢癌细胞株SKOV3中发挥的生物学功能.方法 采用实时定量PCR方法检测上皮性卵巢癌细胞株中miR-218的表达.通过转染miR-218模拟体、miR-218抑制剂外源性地增高或者降低miR-218在SKOV3中的表达,利用MTT、流式细胞术、癌细胞侵袭迁移实验观察miR-218对SKOV3增殖、凋亡和侵袭转移的作用.结果 miR-218能增强SKOV3增殖能力(P＜0.05),而与细胞凋亡、侵袭转移无相关性(P＞0.05).结论 miR-218在上皮性卵巢癌细胞株SKOV3中发挥调节细胞增殖的作用.     

MDRI的siRNA干扰口腔Tca8ll3/DDP细胞表达的研究

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)对口腔鳞癌多药耐药基因mdr1(MDRI)及其表达产物P-糖蛋白(permeability-glyco-protein,P-gp)的干扰作用。方法体外构建针对MDR1的小干扰RNA,将其转染至人舌癌耐药细胞系Tca8113/DDP,采用RT-PCR法检测转染前后MDR1 m RNA的表达;采用免疫细胞化学技术比较转染前后P-gp的表达;采用MTT法检测转染前后肿瘤耐药细胞对顺铂的敏感性。结果 Tca8113/DDP细胞经MDR1-si RNA转染后48 h的转染率达最高,为71.3%;转染后mdr1 m RNA表达较对照组显著降低,降低率为68.32%,转染48 h后P-gp的表达较对照组明显降低;si RNA可显著提高Tca8113/DDP细胞对DDP的敏感性,逆转其耐药性,耐药倍数为2.05。结论 si RNA可以明显干扰口腔鳞癌MDR1及相应蛋白P-gp的表达。     

活性维生素D_3 顺铂对卵巢癌HO-8910细胞株的凋亡研究

目的观察1,25(OH)2维生素D3单独及其与顺铂合用对人卵巢癌细胞株凋亡的影响及Bax蛋白的表达情况。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞抑制率,流式细胞术测定细胞周期及凋亡率,免疫组织化学法检测Bax蛋白表达情况。结果1,25(OH)2维生素3、顺铂均可抑制HO-8910细胞的生长(P<0.01)、均可阻滞细胞于G0/G1期并诱导HO-8910细胞凋亡(P<0.01),当两者合用时上述作用加强,凋亡率明显上升(P<0.01),两者均可上调Bax蛋白表达(P<0.01),两者合用时Bax蛋白表达增强(P<0.01)。结论1,25(OH)2维生素D3与顺铂合用能协同抑制HO-8910细胞的生长并进一步诱导其凋亡。     

1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌的合成及对卵巢癌细胞的生长抑制

目的:合成1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌,探讨该合成产物对人卵巢癌细胞(SKOV3)的生长抑制作用。方法:以大黄素为基础结构,化学全合成1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌;构建SKOV3与人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的交换培养液条件共培养体系,以卡铂为对照药,MTT法检测合成产物对单独培养SKOV3和HUVEC的半数抑制浓度(IC50)及条件共培养体系中两种细胞的IC50。结果:化合物结构经IR,1H-NMR和13C-NMR确证。合成产物和卡铂对单独培养SKOV3的IC50分别为111.72,177.63μmol·L-1,对单独培养HUVEC的IC50分别为198.11,131.53μmol·L-1;合成产物和卡铂对条件共培养体系中SKOV3的IC50分别为104.48,180.7μmol·L-1,对HUVEC的IC50分别为239.22,178.62μmol·L-1。结论:1,8-二羟基-3-乙酰基-6-甲基-9,10蒽醌显示出比卡铂更为优越的抑制卵巢癌细胞生长活性;合成产物对单独培养和条件培养基共培养细胞的IC50值不同,反映了单细胞体系与条件培养基共培养体系在药物筛选结果上的差异。     

Sulfinosine enhances doxorubicin efficacy through synergism and by reversing multidrug resistance in the human non-small cell lung carcinoma cell line (NCI-H460/R)

Summary  A resistant non-small cell lung carcinoma cell line—NSCLC (NCI-H460/R) was established in order to investigate the potential of sulfinosine (SF) to overcome multidrug resistance (MDR). The cytotoxicity of doxorubicin (DOX) in NCI-H460/R cells was enhanced by interaction with SF. SF improved the sensitivity of resistant cells to DOX when NCI-H460/R cells were pretreated with SF. Synergism was accompanied by the accumulation of cells in S and G₂/M phases. Pretreatment with SF was more potent in improving the sensitivity to DOX than verapamil (VER). The decrease of mdr1 and topo II α expression (assessed by RT-PCR), was consistent with the DOX accumulation assay and cell cycle analysis. Also, SF significantly decreased intracellular glutathione (GSH) concentration. These results point to SF as a potential agent of MDR reversal and a valuable drug for improving chemotherapy of NSCLC.     

Suspension of Fe(3)O(4) nanoparticles stabilized by chitosan and o-carboxymethylchitosan

In this study, a well-dispersed suspension of superparamagnetic Fe₃O₄ nanoparticles was stabilized by chitosan (CS) and o-carboxymethylchitosan (OCMCS), respectively. The resulting magnetic Fe₃O₄ nanoparticles were characterized by dynamic light scattering (DLS), Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), X-ray diffraction (XRD), transmission electron microscope (TEM), zeta-potential measurement and vibrating sample magnetometry (VSM). TEM results demonstrated a spherical or ellipsoidal morphology with an average diameter of 14–20 nm. The adsorbed layer of CS and OCMCS on the magnetite surface was confirmed by FTIR. XRD illustrated that the resulting magnetic nanoparticles have a spinel structure and lastly VSM results showed the modified magnetic Fe₃O₄ nanoparticles were superparamagnetic. The adsorption mechanism of CS and OCMCS onto the surface of Fe₃O₄ nanoparticles is believed to be the electrostatic and coordination interactions, respectively. The mechanisms of both CS and OCMCS stabilizing the suspension of Fe₃O₄ nanoparticles were supposed electrostatic repulsion. These well-dispersed superparamagnetic Fe₃O₄ nanoparticles stabilized by the biocompatible CS or OCMCS dispersant should have potential applications in biotechnology fields.