双歧杆菌、大肠杆菌菌体外多糖对iIEL激活作用的对比研究

目的：对比研究双歧杆菌、大肠杆菌菌体多糖对iIEL的激活作用。方法：采用Percoll非连续密度梯度离心法从小鼠小肠提取小肠上皮间淋巴细胞（iIEL）;应用有机溶剂提取扔双歧杆菌、大肠杆菌菌体多糖与iIEL细胞共同孵育作用后,检测iIEL细胞的自然杀伤活性、IFNγ和IL－2产生能力。结果：大肠杆菌、双歧杆菌菌体外多糖均能显著增强iIEL细胞的自然杀伤活性、IFNγ和IL－2的产生能力（P＜0．01）,双歧杆菌组的作用显著高于大肠杆菌组（P＜0．01）。结论：双歧杆菌和大肠杆菌菌体外多糖均对iIEL细胞具有免疫激活作用,但双歧杆菌菌体多糖的作用强。     

E.coli DNA抗肿瘤免疫的实验研究

目的探讨 E.coli DNA抗肿瘤免疫的效果及免疫作用机制。方法纯化提取大肠埃希菌染色体 DNA(E.coliDNA)进行抗肿瘤治疗及免疫学指标测定。结果 E.coli DNA体内多种途径给药均可抑制肿瘤生长 ,增强正常小鼠 NK细胞杀伤活性 ,在荷瘤小鼠亦测出 NK/ MΦ 细胞的杀伤活性增强 ,对荷瘤所致的 NK细胞功能下降有提高作用 ,还可诱生荷瘤小鼠体内 γ- IFN,调节其 TNF- α水平。结论 E.coli DNA具有抗肿瘤免疫特性 ,为微生物 DNA制剂开发应用于抗肿瘤治疗提供了科学依据。     

IL-12和IL-18基因免疫对HBcAg核酸疫苗诱导小鼠(H-2d)特异性免疫应答的影响

目的：观察IL-12和IL-18基因免疫对HBcAg核酸疫苗诱导小鼠（H-2d）特异性体液免疫和细胞免疫应答的影响.方法：用肌肉注射法将HBV核心区DNA疫苗、IL-12质粒和IL-18 质粒接种BALB/c小鼠;ELISA法检测小鼠血清抗-HBc（IgG）及IgG亚类（IgG1、IgG2a）;LDH释放法检测小鼠脾细胞HBcAg特异性CTL活性.结果：免疫6周后,HBcAg DNA疫苗联合IL-12质粒、IL-18质粒和IL-12＋IL-18质粒组小鼠的血清抗HBc终点滴度均明显高于单纯注射HBcAg DNA疫苗组小鼠（P＜0.05）,抗HBc IgG亚类以IgG2a占优.DNA疫苗免疫的各组小鼠,HBcAg特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤率均高于对照组（P组）,其中C＋IL-18组和C＋IL-12＋IL-18组中CTL值明显高于C组,尤以C＋IL-12＋IL-18组中的CTL杀伤率最高.结论：IL-12和IL-18基因与HBcAg DNA疫苗联合免疫,不仅能增强HBcAg特异性体液免疫应答,而且能增强HBcAg特异性CTL的杀伤活性.     

pcDNA3.1+/MAGE-3 DNA疫苗诱导特异性抗肿瘤免疫应答的实验研究

目的：构建pcDNA3.1+/MAGE-3 DNA疫苗，观察其在小鼠体内诱导特异性抗肿瘤免疫应答的能力。方法： 通过RT-PCR构建重组表达质粒pcDNA3.1+/MAGE-3；以pcDNA3.1+/MAGE-3 DNA疫苗免疫已接种肿瘤细胞的小鼠，每10 d重复免疫1次，共3次，以pcDNA3.1+、PBS为对照。末次免疫后5 d检测血清中MAGE-3抗体滴度、小鼠脾淋巴细胞的细胞毒T细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）杀伤活性、细胞因子IL-2和IFN-γ的浓度，同时计算抑瘤率。结果： 成功构建了pcDNA3.1+/MAGE-3 DNA疫苗，用此疫苗免疫已接种B16/MAGE-3细胞的小鼠后，能诱导小鼠脾淋巴细胞MAGE-3特异性的杀伤活性，脾细胞培养上清中细胞因子IL-2和IFN-γ的浓度明显增高，血清中抗MAGE-3抗体在1∶20滴度时阳性，肿瘤生长被显著抑制，与pcDNA3.1+组、PBS组相比，差异显著（P＜0.01）。结论： 成功构建了pcDNA3.1+/MAGE-3 DNA疫苗，该疫苗在小鼠体内既能激活CTL杀伤活性和CD4+ T细胞活性，又能激活体液免疫反应，从而诱导出特异性的抗肿瘤免疫应答。     

双歧杆菌DNA对小鼠巨噬细胞中PKC和NF-κB的影响

目的：探讨青春型双歧杆菌的DNA对巨噬细胞中6种PKC和NF-κB的影响。方法：通过激光共聚焦显微镜观察小鼠腹腔巨噬细胞中PKCα、PKCβI、PKCβII、PKCγ、PKCε和PKCζ的荧光强度,以免疫细胞化学染色法检测巨噬细胞中NF-κB^＋细胞的密度。结果：双歧杆菌DNA注射组小鼠腹腔巨噬细胞中,PKCα和PKCβII的平均荧光强度明显高于对照组（P〈0.01）;而PKCβI、PKCγ、PKCε和PKCζ的平均荧光强度在两组间则无统计学意义（P〉0.05）。双歧杆菌DNA注射组巨噬细胞中,NF-κB^＋细胞的密度显著高于对照组（P〈0.01）。结论：青春型双歧杆菌的DNA可通过活化PKCα、PKCβII和NF-κB来激活巨噬细胞。     

灰树花提取成分对小鼠免疫功能影响的实验研究

目的:以NK细胞杀伤活性,巨噬细胞吞噬功能及TNFα,IL-1的产生水平为指标,对灰树花乙醇沉淀物（ET-Pre）和RNA提取物影响小鼠非特异性免疫功能及其抗肿瘤机制作初步探讨。方法:以常规生物学测定的乳酸脱氢酶法,吞噬中性红法,结晶紫染色法,MTT生物活性测定法进行检测。结果:灰树花ET-Pre和RNA提取物处理组小鼠脾NK细胞杀伤活性,巨噬细胞吞噬功能及TNF-α,IL-1的产生水平均较对照组呈现有显著意义的增高或增强。并且灰树花RNA提取物提高NK细胞杀伤活性和巨噬细胞吞噬功能的程度大于灰树花ET-Pre的作用。结论:灰树花两种提取物可增强机体非特异性免疫功能,间接发挥抗肿瘤作用。     

双歧杆菌的脂磷壁酸对小鼠腹腔MΦ的激活作用

目的 探讨青春型双歧杆菌的脂磷壁酸（LTA）对MΦ功能的影响。方法 将LTA注射于小鼠腹腔，分别采用中性红吞噬试验，MTT法，小鼠胸腺细胞增殖法和ELISA法，检测MΦ的吞噬能力，能量代谢水平，IL－1的活性及IL－6含量。结果 LTA注射组小鼠腹腔MΦ的吞噬能力，能量代谢水平，IL－1活性及IL－6含量均显著高于对照组（P＜0．01）。结论 双歧杆菌的LTA能激活MΦ，提高其吞噬能力和能量代谢水平，同时可分泌多种的具有杀瘤作用的活性因子。     

双歧杆菌DNA对J774A.1巨噬细胞的活化作用

双歧杆菌的细胞壁成分能有效的激活免疫细胞,促使这些效应细胞释放免疫活性物质,并对多种肿瘤的发生与发展具有一定的抑制作用。本研究利用我室提取的双歧杆菌DNA观察了其对小鼠J774A.1巨噬细胞的活化作用。收集厌氧培养的双歧杆菌(菌种由山东省防疫站提供),加入溶菌酶(1mgm1)与10%SDS(终浓度为1%)裂解菌体,饱和酚抽提去除菌体蛋白,透析,用紫外分光光度计测定所提取的双歧杆菌DNAA260/A280为1.823,经薄板层析证实所制备的双歧杆菌DNA中无脂多糖存在,经HpaⅡ酶酶切证实所制备的双歧杆菌DNA具有一定的非甲基化CpG基序,冷冻干燥后备用…     

双歧杆菌对裸鼠腹腔巨噬细胞产生IL-6、IL-12及NO的影响

双歧杆菌是人体肠道内最主要的生理性细菌.目前证实它能激活机体免疫系统中的巨噬细胞、NK细胞及其它免疫效应细胞,使之分泌IL-1、TNF-α及IFN-γ等细胞毒性效应分子[1].本文以ELISA及Griess试剂分别检测了青春型双歧杆菌刺激裸鼠腹腔巨噬细胞分泌的IL-6、IL-12和NO的含量,旨在探讨它们在双歧杆菌调节免疫反应中的作用.     

干扰素对受照射机体NK细胞活性的调节作用

采用4h51Cr释放法,分别以小鼠脾脏淋巴细胞对YAC-1细胞和肿瘤患者外周血淋巴细胞对K562细胞的体外自然杀伤（NK）活性为指标,研究受电离辐射后小鼠脾脏NK细胞活性的变化以及干扰素（IFN－α）对NK细胞活性的影响;并观察肿瘤患者及其放疗后NK细胞活性的变化以及IFN－α的调节作用。结果表明NK细胞具有较强的辐射耐受性,经16Gy照射后24hNK细胞活性显著降低;肿瘤患者的NK细胞活性明显低于正常对照组（P＜0．01）,放疗后NK细胞活性进一步降低（P＜0．05）。IFN－α处理NK细胞可以显著增强NK细胞活性,这提示IFN-α有可能作为一种生物应答调节剂用于肿瘤患者、肿瘤放、化疗或手术患者。