重组人角质细胞生长因子的体内外作用研究

 目的研究重组人角质细胞生长因子(K102)在体内和体外的生物活性。方法运用3T3BALB/c细胞和大鼠CCl₄肝纤维化模型对K102在体内体外的生物活性进行测定。结果体外生物活性检测:K102明显抑制成纤维细胞的生长,bFGF对K102有一定拮抗作用,且具有剂量依赖性;体内生物活性检测:治疗给药组血清ALT,AST和肝组织羟脯氨酸含量较CCl₄模型组明显改善。病理组织学检查见K102大、小剂量组肝细胞脂肪变性和水样变性比较轻,汇管区纤维组织仅有轻微增生。结论K102的抗肝纤维化作用可能是通过促进肝细胞增生、合成代谢,以及抑制成纤维细胞生长、减少纤维组织增生而产生的。     

祛银颗粒对角质形成细胞生长因子诱导的HaCaT细胞增殖及分泌TNF-α的影响

目的 探寻中药组方祛银颗粒治疗银屑病的作用机制.方法 体外培养HaCaT细胞,以10 ng/mL的KGF刺激HaCaT细胞增殖的方法建立银屑病的细胞模型.用祛银颗粒不同浓度含药血清干预细胞,倒置显微镜下观察药物作用后的细胞生长状态,ELISA法检测细胞分泌TNF-α的影响,流式细胞仪检测药物血清对细胞增殖、细胞周期的影响.结果 48 h祛银颗粒低、中、高剂量组药物与模型组比较,对细胞均有抑制作用（P＜0.05）;祛银颗粒中、高剂量组抑制作用与维A酸组差异无统计学意义（P＞0.05）.流式细胞仪检测显示：在细胞合成S期,祛银颗粒高剂量组同期细胞数量较模型组减少（P＜0.05）,与维A酸组相近（P＞0.05）.祛银颗粒高剂量组与模型组比较,分泌的TNF-a降低（P＜0.05）.结论 祛银颗粒含药血清具有抑制KGF诱导的HaCaT细胞增殖的作用,并可抑制细胞分泌INF-α,提示抑制表皮增殖和抑制细胞产生炎症因子可能是祛银颗粒发挥治疗银屑病的作用机制之一.     

常用治疗银屑病的中药对角质形成细胞、血管内皮细胞的影响的研究进展

银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病,以角质形成细胞过度增生、炎症细胞浸润和新生血管形成为主要组织病理改变,其病因不明,有多基因遗传背景,涉及到免疫、炎症、细胞增殖与凋亡、神经介质等多方面因素,在治疗上,到目前为止现代医学还不能对其根治,     

黄芪对急，陡肺损伤大鼠模型肺组织中角质细胞生长因子表达的影响

目的：研究黄芪对急性肺损伤大鼠肺组织中角质细胞生长（KeratinocyteGro、vthFactor,KGF）表达的影响,并探讨其可能的机制。方法：SPF级Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组（NormalSaline,NS组）、模型组（AcuteLungInjury,ALI组）、黄芪高剂量组（1argedoesofastragalusmembranaceous）、黄芪中剂量组（middledoesofastragalusmembranaceous）、黄芪低剂量组（smalldoesofastragalusmembranaceous）、地塞米松组（Dexamethasone,DEX组）。通过静脉内注射油酸（OleicAcid。OA）0．1ml·kg’建立大鼠模型,利用光镜观察肺部组织形态学变化,计算肺系数（LungIndex,LI）,酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中KGF含量,采用实时荧光定量PCR法检测肺组织KGFmRNA表达情况。结果：黄芪高、中剂量能提高血清KGF含量（P〈0．01）,降低肺系数（P〈0．01）,增强肺组织KGFmRNA表达（P〈0．05）,减轻肺组织病理损伤。黄芪低剂量的效果不如高、中剂量（P〈O．05）。结论：黄芪能够明显减轻油酸所致急性肺损伤的炎症反应,其药理作用机制与上调肺内KGF的表达,从而刺激肺泡Ⅱ上皮细胞（IIAlveolarEpithelialTypeCells,AECrI）增生有关。     

白藜芦醇对中波紫外线照射后人角质形成细胞的保护作用

目的探讨白藜芦醇对中波紫外线(UVB)照射后人角质形成细胞(HaCaT细胞)损伤的保护作用及其可能机制。方法运用MTT实验观察0.001～0.5mmol/L范围内不同浓度的白藜芦醇对HaCaT细胞增殖的影响。采用U-VB(30mJ/cm2)照射HaCaT细胞后,立即加入不同浓度(0.01,0.1mmol/L)的白藜芦醇进行干预,同时设空白组与UVB对照组,分别用MTT法检测细胞增殖能力,用羟胺法、比色法、TBA法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,电镜观察细胞超微结构的改变。结果不同浓度的白藜芦醇作用正常HaCaT细胞后,细胞增殖能力无明显差异(P>0.05)。白藜芦醇能促进UVB照射后HaCaT细胞增殖、增加细胞SOD和GSH-Px活性、降低MDA含量,且高浓度组较低浓度组作用更加显著(P<0.05)。电镜显示白藜芦醇能减轻UVB对HaCaT细胞超微结构的损伤。结论不同浓度的白藜芦醇对正常HaCaT细胞增殖无明显影响。白藜芦醇在体外对UVB照射后的HaCaT细胞有保护作用,其机制可能与提高氧化酶活性、清除自由基有关。     

玉屏风散抗角质形成细胞光损伤作用的研究

目的探讨玉屏风散对皮肤光老化角质形成细胞生长增殖的影响。方法采用血清药理学方法制备玉屏风散含药血清,紫外线照射建立细胞光老化模型,以不同浓度含药血清处理光老化细胞,观察细胞形态的变化,以MTT法和集落细胞形成能力实验测定细胞活力及增殖能力。结果紫外线能够显著损伤细胞形态,抑制其生长和增殖;玉屏风散含药血清具有抵抗紫外线对细胞损伤的作用,以服用8g生药/kg大鼠的含药血清作用24h效果最佳。结论玉屏风散含药血清能够缓解紫外线对角质形成细胞损伤,具有抗皮肤光老化的作用。     

当归提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察当归水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞( A375)与角质形成细胞(HaCaT)共培养模型黑素合成的影响.方法:分别培养A375细胞与HaCaT细胞,A375细胞与HaCaT细胞以1∶2的比例接种于培养板后加入MEM培养基培养24 h.用MEM将当归提取物制备成0.1 ～2g·L-15个质量浓度,细胞给药作用48 h,采用MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给各组A375细胞与HaCaT细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性.结果:与阴性对照组相比,2,1,0.5 g·L-1当归提取物对共培养细胞的增殖有显著促进作用(P＜0.01);2,1,0.5,0.25 g·L-1当归提取物对黑素合成有显著的抑制作用(P ＜0.05或P＜0.01),呈现浓度依赖性的抑制作用趋势;当归提取物各浓度组对酪氨酸酶活性均有显著抑制作用,2,1 g·L-1组的抑制作用弱于熊果苷组(P＜0.01),0.5,0.25,0.125 g·L-1组与熊果苷组作用相当.结论:当归水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和HaCaT细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用当归治疗黄褐斑提供了实验依据.     

基于太极阴阳鱼图探讨表皮角质形成细胞的阴阳变化

基于太极阴阳鱼图的特点,即圆运动的连续性、阴阳消长的动态平衡及阴阳互藏性,探讨表皮角质形成细胞演变过程中的阴阳变化,认为基底层、棘层表现出阳的属性,颗粒层、角质层表现出阴的属性,棘层与颗粒层是由阳转阴,重阳必阴关键。     

山茱萸水提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察山茱萸水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(Hacat)单层混合共培养模型黑素合成的影响。方法:将山茱萸水提取物制备成含生药0.75～12 g.L-15个质量浓度,细胞给药,通过MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给药前后A375细胞与Hacat细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果:与空白对照组相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系的细胞增殖率影响不大,对共培养体系黑素生成均有显著差异(P<0.01),对共培养体系酪氨酸酶活性有差异(P<0.05或P<0.01);与阳性对照药物熊果苷相比,6,3 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成有显著差异(P<0.01),作用强于熊果苷,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成无差异;与阳性对照药物熊果苷相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系酪氨酸酶活性无差异。结论:山茱萸水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和Hacat细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用山茱萸治疗黄褐斑提供了实验依据。     

中药单体及有效成分对人永生化角质形成细胞作用的实验研究进展

中医药治疗银屑病具有独特的疗效,中药单体及有效成分干预人永生化角质形成(HaCaT)细胞的增殖及凋亡,调控信号转导通路及调节细胞免疫功能等方面取得一定成效.该文通过阅读近10年国内外具有代表性的文献,分析中药作用于HaCaT细胞的单体有效成分.常用中药单体包括柴胡皂苷、重楼皂苷Ⅰ、白芍总苷、紫草素、苦参碱、丹皮酚、姜黄...     

润肤止痒乳对银屑病患者角质形成细胞增殖和VEGF分泌的影响

目的:观察润肤止痒乳对银屑病患者角质形成细胞增殖和VEGF分泌的影响。方法:对银屑病患者表皮角质形成细胞进行原代培养,通过四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT法)及酶联免疫吸附法(ELISA)体外观察润肤止痒乳对表皮角质形成细胞增殖及VEGF分泌的影响。结果:润肤止痒乳在0-485.5 mg/mL浓度范围内对角质形成细胞无毒副作用,在该浓度范围内有明显抑制角质形成细胞增殖的作用,其抑制作用与他扎罗汀比较,差异无统计学意义(P>0.05);且在该浓度范围内润肤止痒乳可减少角质形成细胞分泌VEGF的含量。结论:润肤止痒乳在一定浓度范围内可抑制角质形成细胞的增殖作用,且能减少VEGF的分泌。     

水飞蓟素对UVB致人角质形成细胞光老化保护作用的研究

目的：对水飞蓟素中的主要成分水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭的抗细胞光老化作用进行研究。方法：采用UVB辐射HaCaT进行造模并设置空白对照组,运用酶生化法检测水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭对UVB辐射HaCaT后的细胞增殖及抗氧化酶的影响,确定水飞蓟素中抗HacaT细胞光老化的主要有效成分。结果：与模型组相比,水飞蓟素中的水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭均可增强细胞的增殖活力、提高细胞中SOD的活性、降低MDA的产生和LDH的漏出量。结论：水飞蓟素中的水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭对UVB致人角质形成细胞光老化均具有保护作用,其中水飞蓟宁和水飞蓟亭的抗光老化作用更为显著。     

青蒿琥酯对体外培养角质形成细胞的影响

目的:了解青蒿琥酯(artesunate,ART)对角质形成细胞生长的抑制作用及机制。方法:用不同浓度ART处理人角质形成细胞株HaCat,MTT法检测ART对HaCat增殖情况的影响,流式细胞仪分析ART处理后的HaCat的趋化因子CXCR2表达的改变。对正常人表皮角质形成细胞进行原代培养,观察ART处理后,培养液中TGF-β1含量的变化。结果:0·01～0·5mg/mlART可抑制HaCat细胞的增殖,干预24小时后即可见到明显的抑制作用,但CXCR2的表达稍高于正常对照组。同时,正常原代的角质形成细胞的培养上清中TGF-β1分泌增加。结论:0·01～0·5mg/ml青蒿琥酯可促进角质形成细胞TGF-β1分泌,抑制角质形成细胞的增殖。     

黄芩素对中波紫外线诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响

目的:研究黄芩素对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响。方法:体外培养人皮肤角质形成细胞(HaCaT),取对数生长期的细胞,随机分为空白组、模型组和黄芩素组,并用30 mJ·cm~(-2)的UVB照射模型组和黄芩素组,建立光老化模型。噻唑蓝(MTT)比色法筛选黄芩素的有效安全浓度,并测定黄芩素对光老化HaCaT细胞增殖率的影响;活性氧自由基(ROS)试剂盒测定各组细胞中ROS含量;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒测定各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)及Caspase-9蛋白表达水平。结果:筛选出1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素为最佳有效安全浓度。与空白组比较,模型组ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,1×10~(-7),1×10~(-6),1×10~(-5)mol·L~(-1)黄芩素组ROS含量和细胞凋亡率显著降低(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著下降(P0.05,P0.01)。结论:黄芩素可以通过降低细胞ROS含量和凋亡率,调控Bcl-2家族中抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,降低凋亡相关细胞因子Caspase-3和Caspase-9的表达水平,抑制UVB诱导的细胞凋亡。     

养血解毒方对银屑病角质形成细胞紧密连接的调节作用

目的:观察银屑病样小鼠皮损紧密连接蛋白中水闸蛋白(claduin-1,claudin-7),闭锁蛋白(occludin)的表达,明确养血解毒方对银屑病表皮通透屏障的修复作用,为养血解毒方治疗银屑病提供科学依据。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、甲氨喋呤组、养血解毒方组,制备甲氨喋呤溶液、养血解毒方水煎剂对应灌胃干预,同时小鼠背部剃毛后给予咪喹莫特涂抹诱导银屑病样皮损模型。每日拍照记录皮损形态并对严重程度指数(PASI)评分;水油测试笔检测皮损表皮含水量;苏木素-伊红(HE)染色观察其病理改变、测量表皮厚度;免疫荧光法检测增殖相关的核抗原(Ki67);免疫组化法检测表皮兜甲蛋白(loricrin),真皮中CD3^+T淋巴细胞浸润和紧密连接蛋白claduin-1,claudin-7,occludin的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测皮损中claudin-7,occludin的表达。模拟银屑病皮损微环境,建立白细胞介素-17(IL-17,1 mg·L^-1)刺激的角质形成细胞(Hacat)模型,制作养血组分、解毒组分、养血解毒方喷干粉进行干预。采用细胞增殖毒性检测试剂盒-8(CCK-8)法检测药物对Hacat细胞的毒性;细胞免疫荧光法检测药物对角质形成细胞claudin-1,claudin-7,occludin表达的干预作用。结果:与模型组比较,养血解毒方可显著减轻小鼠银屑病样皮损表现,降低PASI评分及皮损表皮厚度(P<0.01),增加皮损区表皮水分含量(P<0.01),减少表皮ki67,loricrin的异常表达和真皮CD3+T细胞浸润(P<0.01),并增加紧密连接蛋白claudin-1,claudin-7,occludin的表达(P<0.05),增加紧密连接结构的完整性;体外研究发现,与模型组比较,养血解毒方组和养血组分组明显升高紧密连接蛋白claudin-1,claudin-7,occludin的表达(P<0.05);与模型组比较,解毒组分组蛋白表达水平无统计学差异。结论:养血解毒方通过调节角质形成细胞间紧密连接的表达抑制其异常的增殖分化过程,进一步恢复破坏的表皮通透屏障,可能是其治疗银屑病的作用机制之一。其中养血解毒方的养血组分对调节紧密连接的修复起主要作用。     

胰岛素样生长因子Ⅰ对椎间盘细胞及细胞外基质的影响

近年来 ,有关脊椎疾病的研究越来越受到重视[1 ] 。其中 ,椎间盘退变是导致颈腰椎病变的重要原因[2～ 4] 。在退变过程中 ,椎间盘组织的细胞和细胞外基质均发生变化。这其中包括蛋白多糖及胶原的改变、基质金属蛋白酶活性的增加 ,以及细胞凋亡的发生异常。而多种生长因子可以对椎间盘的退变产生调控作用 ,胰岛素样生长因子(insulinlikegrowthfactors,IGFs)是其中之一[5] 。IGFs是一类多肽 ,参与机体的多种生理活动 ,特别是能对多种细胞产生多样的生物活性[6] ,如促进细胞生长、增殖分化等。IGFs系统包括两种多肽性因子 (IGF -Ⅰ ,IGF …     

绞股蓝总皂苷干预光老化人皮肤角质形成细胞炎症分泌因子的研究

目的:研究绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤角质形成细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达的影响。方法:选取10只大鼠,随机分为2组,每组5只,分别设为空白血清组、绞股蓝总皂苷含药血清组,分别用以制备空白大鼠血清和绞股蓝含药血清。应用UVB人工照射方法制备光老化人皮肤角质形成细胞模型,用含绞股蓝总皂苷的大鼠血清进行干预,12h后采用ELISA方法检测各组细胞培养上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平。结果:与空白对照组比较,UV模型组细胞IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著上调(P<0.01);与UV模型组比较,绞股蓝总皂苷含药血清组细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著下调(P<0.01);与空白血清组比较,绞股蓝总皂苷含药血清组细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著下调(P<0.01)。结论:绞股蓝总皂苷可抑制UV辐射人皮肤角质细胞分泌炎症因子,抑制皮肤光老化。     

润肤止痒汤对小鼠慢性湿疹角质形成细胞凋亡及组织病理的影响

目的:探讨"润肤止痒汤"对小鼠慢性湿疹模型角质形成细胞凋亡及组织病理的影响。方法:将80只实验小鼠随机分为4组,每组20只,设为不造模组:正常对照组;造模组:空白对照组、中药治疗组、西药治疗组。造模组60只小鼠耳部应用2,4-二硝基氯苯丙酮溶液小剂量反复刺激制备接触性湿疹模型,中药治疗组:润肤止痒汤汤剂浓煎液,每次灌胃剂量为每只0.75 mg·d-1,日2次,疗程5 d。西药治疗组:盐酸西替利嗪片剂配成水溶液,灌胃剂量为每只0.025 mg·d-1,日1次,疗程5 d。空白对照组给予同等剂量生理盐水灌胃。用免疫组化方法观察各组Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果:小鼠耳部经2,4-二硝基氯苯丙酮溶液最后一次激发后24 h HE病理可见:表皮角化过度,颗粒层细胞轻度增生,棘层细胞增生,上皮角下延,基底层散在液化变性,真皮浅层轻度水肿,间质及血管周围见炎细胞浸润提示造模成功。Bcl-2及Bax蛋白空白对照组表达最明显,中药组与西药组表达低于空白对照组(P0.05),正常对照组表达低(P0.05)。结论:在慢性湿疹模型部位促凋亡蛋白大量表达,经中药灌胃治疗后,可降低凋亡通路中促凋亡蛋白表达,调节局部皮损免疫平衡,使局部皮损改善。     

马尾松树皮提取物对人角质细胞HaCaT的细胞毒性作用的研究

目的 探讨马尾松树皮提取物(PMBE)对人表皮角质细胞株HaCaT的细胞毒性,为PMBE用于皮肤炎症的治疗打下理论基础.方法 用倒置显微镜观察PMBE对细胞形态的影响;用CCK-8检测PMBE对细胞生长的抑制率;用流式细胞仪测定细胞周期.结果 PMBE对HaCaT细胞株的作用具有剂量和时间的依赖关系.PMBE在12 h前各浓度对细胞形态、活性、细胞周期基本没有影响,而在24 h后表现剂量依赖关系,并呈现随机的非线性关系.结论 一定浓度范围内的PMBE对细胞株HaCaT没有细胞毒副作用,可以用于表皮细胞抗炎症模型药物的筛选.