致泻大肠埃希菌实验室检测工作的探讨与分析

致泻大肠埃希菌引发的肠道感染疾病越来越多，在肠道病原菌中所占比重已超过志贺菌成为最常见的腹泻病原菌。近年来，嘉兴市陆续出现了多起由该菌引起的食物中毒和门诊病例，2002年本市所辖某县检出了一例由O157：H7（EHEC）引起的病例，2005年在本市食物中毒和门诊病例的腹泻病人标本中陆续检出3株与腹泻有关的O125：K70（EPEC）、O164：K？（EIEC）、O25：K19（ETEC），这引起了笔者的高度重视。为了更好地认识致泻大肠埃希菌的生物学特性，整理了检测工作中的记录，查阅了相关资料，并结合工作体会，从实验室角度对致泻大肠埃希菌的检测工作及其注意事项作了分析与探讨。     

一起致泻大肠埃希氏菌引起食物中毒的实验室检测

2008年8月,北辰某酒店发生食物中毒。主要症状为腹痛、腹泻、发热。根据流行病学调查、实验室检验结果分析,认定这是一起致泻大肠埃希氏菌引起的食物中毒。     

五类食品中致泻大肠埃希菌污染状况调查

目前已知致泻大肠埃希菌有肠致病性大肠埃希菌（ＥＰＥＣ）、肠产毒性大肠埃希菌（ＦＴＥＣ）、肠侵袭性大肠希菌（ＥＩＥＣ）、肠粘附性大肠埃希菌（ＥＡｇｇＥＣ）、产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希菌（ＥＳＩＥＣ）及肠出血性大肠埃希菌（ＥＨＥＣ）。致污大肠埃希菌是重要的食物中毒及腹泻病病原,已引起世界范围内的广泛关注。在我国,各类致泻大肠埃希菌引起的食物中毒也占有重要比例,为了解该菌在我国食品中的污染状况,为预防该菌引起食源性疾病的发生提供正确、可靠的科学依据,卫生部食品卫生监督检验所于１９９８年６月成立了…     

提高致泻性大肠埃希菌检出率的研究

目的提高食源性疾病监测中致泻性大肠埃希菌的检出率。方法采集2017年-2018年无锡市梁溪区食源性疾病监测标本272份,采用不同的方法进行可疑菌落的挑选,比较大肠埃希菌、致泻性大肠埃希菌检出率。结果 2017年、2018年分别检测食源性疾病监测标本170份、102份,筛选出大肠埃希菌100株、96株,大肠埃希菌检出率分别为58. 8%和94. 1%;采用多重实时荧光PCR分别检出致泻性大肠埃希菌15株、32株,致泻性大肠埃希菌检出率分别为8. 8%和31. 3%。2018年在ECC显色培养基上呈蓝色和无色菌落中分别检出致泻性大肠埃希菌28株和4株。结论 ECC显色培养基用于食源性疾病监测中致泻性大肠埃希菌筛选,用多重实时荧光PCR进行食源性疾病监测中致泻性大肠埃希菌确认试验,2018年大肠埃希菌、致泻性大肠埃希菌检出率较2017年有显著提高。     

2015―2019年安徽省致泻性大肠埃希菌分型及耐药性分析

目的  了解安徽省致泻性大肠埃希菌（DEC）的菌群流行特点及耐药趋势,为安徽省DEC腹泻病的诊断和治疗提供科学依据。 方法  采集安徽省2015―2019年腹泻患者粪便样本,采用多重实时荧光定量PCR对细菌进行鉴定与分型,采用微量肉汤稀释法对细菌进行药敏试验。 结果  从6 120份粪便中分离出DEC 557株,主要病原型为：非典型肠聚集性大肠埃希菌（aEAEC）191（34.29%）株,产肠毒素性大肠埃希菌（ETEC）153（27.47%）株,非典型肠致病性大肠埃希菌（aEPEC）108（19.39%）株,典型肠聚集性大肠埃希菌（tEAEC）77（13.82%）株,肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）11（1.97%）株,典型肠致病性大肠埃希菌（tEPEC）3（0.54%）株。药敏检测多重耐药255（45.78%）株;同种病理类型不同年份耐药性存在差异：aEAEC：氨苄西林/舒巴坦（AMS）,萘啶酸（NAL）,头孢西林（CFZ）;tEAEC：AMS,CFZ,阿奇霉素（AZM）;EPEC（aEPEC,tEPEC）：氨苄西林（AMP）,AMS,CFZ;ETEC：NAL,AZM,环丙沙星（CIP）。不同病理类型耐药性存在差异的抗生素有：AMP,AMS,四环素（TET）,NAL,红霉素（ERY）,氯霉素（CHL）,头孢噻肟（CTX）,CFZ,庆大霉素（GEN）,甲氧苄啶/磺胺甲恶唑（SXT）,AZM和CIP。2015―2019年,tEAEC对CFZ,EPEC对AMP,AMS和CFZ,ETEC对NAL和CIP,耐药性呈增强趋势。 结论  本地区DEC流行的主要型别是：aEAEC、ETEC、aEPEC和tEAEC。DEC的耐药情况较严重,常用抗生素AMP、AMS、NAL、CFZ和CIP在不同年份和不同病理类型间,耐药性差异明显,耐药性分析结果为临床合理使用抗生素,遏制抗菌药物耐药性增加提供参考。     

2021年浙江省湖州市致泻性大肠埃希菌病原学特征分析

目的 研究2021年浙江省湖州市致泻性大肠埃希菌分离株的检出情况、主要毒力基因、耐药性以及分子分型特征。方法 对2021年哨点医院腹泻患者粪便标本和市场采集的食品标本进行分离,运用多重荧光定量PCR方法检测其毒力基因,并对其中104株进行耐药性检测和脉冲场凝胶电泳分子分型。结果 病例源中肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)检出率最高为60.66%,食品源中也是EAEC检出率最高,为92.86%。DEC引起的发病人群以20岁～39岁年龄组最高,发病高峰在6月—8月。耐药率最高依次为氨苄西林(63.46%)、四环素(62.50%)、萘啶酸(57.69%)。经Xba I酶切后,对EAEC和ETEC进行分别聚类,EAEC相似度为41.7%～100.0%,ETEC相似度为40.7%～100.0%。结论 2021年湖州市检出的致泻性大肠埃希菌以EAEC为主,对氨苄西林的耐药率最高。建立本地PFGE分子分型数据库,为DEC防控提供数据支撑。     

腹泻症候群致泻性大肠埃希氏菌血清型及毒力基因检测

目的：通过对腹泻症候群中致泻大肠埃希菌的血清型和多重PCR检测,了解本地区致泻大肠埃希菌的血清群、型分布规律,所携带毒力基因及相互之间的相关性,为腹泻症候群中致泻大肠埃希菌的检测、鉴定提供科学依据,以提高阳性株的检出率。方法：对本地区2012-2013年腹泻症候群监测医院门诊未使用过抗生素腹泻患者的稀便、水样便、黏脓便或脓血便标本通过増菌、各种选择性培养基筛选出病原菌,后经生化试验、多重PCR试验和血清型分型试验进行鉴定。结果：本次检测共检出65株血清凝集致泻大肠埃希菌,分属EPEC、EIEC、ETEC,以EPEC为主,占83.08%,共8个血清型,其中血清型O55：H59、O128：H67占58.47%;共检出4种相关毒力基因,其中escV 49株（75.38%）。未分血清型菌株27株,检出相关毒力基因共5种,分属EPEC、EIEC、ETEC、EAEC,其中escV 15株（55.56%）。结论：本地区腹泻症候群中血清学阳性致泻大肠埃希菌以EPEC为主,常见血清型为O55：H59、O128：H67,毒力基因为escV、escV＋bfpB、invE、elt。未分血清型致泻大肠埃希菌毒力基因为escV、escV＋bfpB、invE、elt、astA,与已分型菌株携带基因基本一致。腹泻患者的大肠埃希菌检测中,在传统的细菌分离培养、生化试验、血清学鉴定的基础上,有必要进行大肠埃希菌的毒力基因检测,以提高阳性检出率,避免漏检,提高致泻性大肠埃希菌的诊断。     

水源水中致泻大肠埃希菌的检测与分析

目的　调查致泻大肠埃希菌在不同年限、不同季节、不同水源水中的分布规律以及菌型分布特点 ,为制定相应的防治对策提供参考依据。方法　在六安市区 3个主要饮用水源各设 5个采水点 ,每点分上、中、下游间隔10 0m各采集 1份水样 ,每月 1次 ,连续 5年检测致泻大肠埃希菌的分布 ,并对分离菌株进行生化学、血清学鉴定和药物敏感试验。结果　检测水源水 10 80份 ,分离到致泻大肠埃希菌 14 9株 ,阳性率为 13 80 % ,河水、塘水的检出率分别为 13 6 1%和 14 17% ,无显著性差异 (χ2 =0 0 6 2 ,P >0 0 5 )。 14 9株致泻大肠埃希菌分属 2 3个血清型 ;2 0 0 0年 5月份在河水中检出 1株H2 S肠道致病性大肠埃希菌O12 8∶K67。结论　检测结果揭示了水源水中致泻大肠埃希菌的分布规律及菌型分布特点 ;发现了产H2 SPEECO12 8∶K67。     

致泻大肠埃希菌感染在腹泻病中地位的研究

目的 :全面了解腹泻病中致泻大肠埃希菌的感染情况 ,以及研究该菌感染在腹泻病中的地位。方法 :本地医院送检的腹泻病人标本 ,经增菌、分离培养、纯培养、生化学、血清学等一系列微生物学鉴定 ,分别确定引起腹泻病的各种病原菌及其对抗菌药物的敏感性。结果 :114 2份腹泻病人的标本中 ,检出肠道病原菌 199株 ,阳性率为 17 43 % ,其中致泻大肠埃希菌感染 14 3例 ,占 71 86% ,居首位。男、女感染人数分别占 12 0 3 %和 13 5 5 % ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。 14 3株致泻大肠埃希菌分属EPEC、EIEC、ETEC共 2 3个血清型 ,其中O86∶K61K62 、O2 9∶K?和O8∶K40 K47血清型最为多见 ,分别占 5 0 0 %、2 2 5 8%和 47 62 % ;自腹泻病人标本中分离到 2株产H2 S致泻大肠埃希菌。结论 :本地腹泻病人标本中致泻大肠埃希菌感染居首位 ,有重要的流行病学意义 ;查清了致泻大肠埃希菌的血清群、型分布规律以及该菌对多种抗菌药物的敏感性 ,为制定腹泻病的防治对策提供了科学依据 ;产H2 S致泻大肠埃希菌的发现 ,为致泻大肠埃希菌家族增加了新的成员 ,是一种新的腹泻病原菌。     

2010-2012年河南省致泻大肠埃希菌监测

目的建立河南省致泻大肠埃希菌多重PCR分型的基线数据,分析致泻大肠埃希菌感染的流行病学特征。方法在河南省郑州、登封、周口、睢县4个地区的多家医疗机构设立监测哨点,收集可疑致泻大肠菌感染样本,采用多重PCR方法进行分型,并对致泻大肠菌分型结果和病例个人信息进行统计分析。结果 2010-2012年河南省共检测可疑致泻大肠埃希菌病例样本数1 934例,检出致泻大肠菌阳性样本为139例,检出率为7.19%。其中EPEC检出率最高为67例（3.46%）,之后依次为EAEC 56例（2.90%）、ETEC 9例（0.47%）、EHEC 7例（0.36%）、EIEC未检出。致泻大肠埃希菌感染高峰在4-5月,1-2岁组腹泻患者的检出率最高（10.81%）。结论 EAEH和EPEC是河南主要的致泻大肠菌型,应用多重PCR技术能快速鉴别粪便标本中的致泻大肠埃希菌。     

北京市通州区致泻性大肠埃希菌病原特征分析

目的 了解北京市通州区2016年—2019年腹泻患者致泻性大肠埃希菌病原学特征和耐药情况。方法 对通州区2016年—2019年门诊腹泻监测病例的粪便标本进行致泻性大肠埃希菌的分离培养,利用荧光PCR方法进行菌株毒力基因检测,应用MIC法进行耐药试验。结果 2016年—2019年通州区DEC菌株检出率为13.05%(217/1 663),检出率逐年增高。20岁～39岁年龄组DEC检出率最高,其次为0岁～5岁组和≥60岁组。EAEC为主要型别,其次为ETEC和EPEC,不同年龄组的DEC型别构成不同。ast A和pic是EAEC主要的毒力因子,ETEC以lt、sth、stp基因为主,部分菌株也含有ast A和pic基因。DEC菌株对头孢唑林、氨苄西林、磺胺异恶唑耐药率较高,对碳青霉烯类、多肽类及三代头孢较为敏感,多重耐药菌株占60.37%。结论 通州区DEC以EAEC为主,毒力基因组合具有多样性,ast A和pic可在不同型别菌株中转移。菌株多重耐药情况比较严重,耐药基因易传播,应重视临床抗生素的使用。     

肠道感染致泻性大肠埃希菌的检测与流行分析

目的为检测肠道感染致泻性大肠埃希菌(DEC),并对疾病流行进行分析,为预防和诊治疾病提供依据。方法选取2009年5月-2014年5月医院消化门诊腹泻患者841例,所有患者均通过粪便标本以及PCR基因检测方法检测病原菌种类,统计致泻性大肠埃希菌,并结合患者的临床资料,分析其流行情况。结果 841例标本中检出DEC 151例,阳性率为17.95%,其中肠致病性大肠埃细菌(EPEC)22株、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)1株、肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)64株、肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)15株、弥散聚集性大肠埃希菌(DAEC)29株,分别占14.57%、0.66%、42.38%、9.39%和19.21%;仅eastA基因阳性未能分类20株占13.25%;发病年龄与DEC检出率:0~12岁为6.62%、13~59岁为75.50%、≥60岁为17.88%;DEC好发于夏秋季(6~11月),共检出DEC106例占70.20%。结论 DEC是导致肠道感染腹泻的主要病原菌之一,DEC在不同季节和不同年龄的人群检出率有所差异,好发于夏秋季,且年龄在13~60岁检出率较高。     

石家庄市致泻性大肠埃希菌分布调查

为了解致泻性大肠埃希菌在自然环境中的分布 ,掌握其对食品、水体及环境污染的途径 ,于 1999年 1月至 2 0 0 0年 7月对石家庄市 13种不同样本进行了致泻性大肠埃希菌的病原学分布调查。1.材料与方法 :(1)采样区域、种类与数量 :选择市区、正定、赞皇县 3个区域的农贸市场、农田土壤、屠宰场污水等 13种不同样本为调查对象。其中生肉类 12 0份 ,熟肉类 6 9份 ,蔬菜类 5 0份 ,兔粪 6 0份 ,羊粪 6 0份 ,猪粪 81份 ,牛粪 6 3份 ,鸡肠内容物96份 ,苍蝇体表 93份 ,水产品 6 0份 ,鲜牛奶 4 0份 ,农田土壤6 2份 ,屠宰场污水 32份。(2 )样本采集与运…     

感染性腹泻样本中致泻性大肠埃希菌的检测结果分析

致泻性大肠埃希氏菌可导致人、动物感染,引起食物中毒、尿道感染、肠道感染、脓毒症或脑膜炎症等。主要分为5类,即肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）、肠产肠毒素性大肠埃希菌（ETEC）、肠粘附性大肠埃希菌（EAEC）、肠出血性大肠埃希菌（EHEC）。为了解平罗县感染性腹泻样本中致泻性大肠埃希氏菌的感染情况,2011年4—12月对平罗县3家哨点医院收集到的感染性腹泻监测病例的粪便标本进行致泻性大肠埃希氏菌的检测和分析。     

致泻大肠埃希菌Real-time PCR检测案例分析

目的 通过应用不同检测原理试剂盒对同一可疑菌株进行多重实时荧光PCR检测,阐明合理选用分子生物学检测技术在目标菌检测工作中的应用价值.方法 对粪便中分离培养的同一株可疑菌落进行双体系及三体系的多重实时荧光PCR扩增反应,并通过上级疾病预防控制中心病原实验室的验证试验结果,对两种反应试剂的检测结果进行评价.结果 双体系多...     

泉州市某区食品中致泻性大肠埃希菌的检测情况

目的 分析泉州市某区集贸摊点和超市食品中致泻性大肠埃希菌携带情况。方法 选择2021年1—12月从泉州市鲤城区超市以及集贸摊点采集的100份食品样本作为研究对象,严格按照GB 4789—2016《食品安全国家标准食品微生物检验致泻性大肠埃希菌检验》对所有标本开展致泻性大肠埃希菌微生物检验以及毒力基因检测,统计最终的检测结果。比较不同食品类型的致泻性大肠埃希菌检出率差异。结果 100份检测样本当中,总共20份检出致泻性大肠埃希菌,检出率为20.00%;其中包含产肠毒性大肠埃希菌（entero toxigenic Escherichia coli,ETEC）共6株,占比为30.00%;肠致病性大肠埃希菌（entero pathogenic Escherichia coli,EPEC）共5株,占比为25.00%;肠出血性大肠埃希菌（entero hemorrhagic Escherichia coli,EHEC）共5株,占比为25.00%;肠侵袭性大肠埃希菌（entero invasive Escherichia coli,EIEC）共4株,占比为20.00%。牲畜肉类、生禽肉类、凉拌类、海...     

河南省腹泻病人5种致泻大肠埃希菌感染调查

[目的]应用多重PCR技术筛查自腹泻病人中分离的致泻大肠埃希菌,了解5种致泻大肠埃希菌的感染情况。[方法]用常规方法分离培养粪便标本中的大肠埃希菌,提取DNA,采用多重PCR扩增12对目的基因,电泳检测扩增产物,确定病原检出情况,并进行统计学分析。[结果]2007年河南省1534份标本中致泻大肠埃希菌检出率10.37%,其中EAEC(3.59%)居首位,其余依次检出EPEC(2.67%)、STEC(2.15%)、ETEC(1.63%)、EIEC(0.33%)。合并感染检出率0.78%,以ETEC合并感染居多。感染高峰在5月(19.85%),城市与农村的检出率差异无统计学意义,45～60岁组腹泻病人的检出率最高(17.00%)。[结论]应用多重PCR技术能快速鉴别粪便标本中的致泻大肠埃希菌。致泻大肠埃希菌是河南省常见的腹泻病原。     

一起由2种致泻性大肠埃希菌所致食物中毒的病原学鉴定

目的 查明引起食物中毒病原菌,为明确食物中毒诊断提供依据.方法 收集食物中毒患者及厨师肛拭样本、厨房炊具及操作台样本、饮用水样本进行病原菌致泻性大肠埃希菌(DEC)、沙门菌和霍乱弧菌的分离检测;DEC毒力基因检测采用PCR鉴定;黏附性检测采用Hep-2细胞黏附方法.结果 食物中毒患者主要症状为腹痛、腹泻伴发热.从19份...     

佛山市十类食品致泻大肠埃希氏菌污染状况与分析

致泻大肠埃希氏菌(diarrheogenic Escherichiacoli,DEC)是重要的食物中毒及腹泻病原.目前国际上把DEC分为五大类:肠致病性大肠埃希氏菌(EPEC),产肠毒素大肠埃希氏菌(ETEC),肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC),出血性大肠埃希氏菌(EHEC),和肠集聚性大肠埃希氏菌(EAggEC).     

浙江省腹泻患者致泻性大肠埃希菌血清型分布及其鉴定效率的评价

目的 了解浙江省致泻性大肠埃希菌（DEC）血清型分布并探讨其血清学鉴定分类方法的鉴定效率。方法 对2009年7月至2013年6月浙江省腹泻症候群病原谱监测网络菌株库中的696株DEC菌株（通过毒力基因鉴定）开展血清学凝集试验,比较毒力基因和血清学鉴定分类的结果。结果 696株DEC中288株（41.4%）能明确O抗原型别,分属于35种O血清群。171株（24.6%）H血清凝集,分属于21种H型。肠集聚性大肠埃希菌（EAEC）、产肠毒素性大肠埃希菌（ETEC）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）和肠出血性大肠埃希菌（EHEC）凝集率分别为31.9%（130/408）、70.6%（127/180）、31.5%（29/92）和14.3%（2/14）,分属于30、18和15种O血清群,1株EHEC为O157∶H7。EAEC和EPEC血清群相对较多样化,而ETEC则相对集中,不同类型DEC可具有同一血清群/型。根据血清学结果可分类的75株DEC中,42株毒力基因和血清学分类结果一致,33株不一致。结论 浙江省DEC血清群/型种类多样,单纯采用血清学筛查可造成极大的漏检或误分,建议采用毒力基因鉴定分类。