马钱子碱及生物转化氮氧化物对斑马鱼胚胎毒性的研究

目的 通过观察斑马鱼胚胎发育的情况,评价马钱子碱及生物转化产物马钱子碱氮氧化物对斑马鱼胚胎毒性的差别.方法 马钱子碱、马钱子碱氮氧化物培养斑马鱼6h受精卵,观察24、96 h死亡情况并计算LC50、孵化率、相对成活率、幼鱼形态变化;细胞凋亡分别采用吖啶橙法及流式细胞仪检测.结果 给药后24、96 h的马钱子碱氮氧化物的LC50分别是马钱子碱的15倍及10倍,同时孵化率及成活率明显高于马钱子碱组;200 μmol/L质量浓度时,马钱子碱组鱼胚胎出现脊柱侧弯,心包水肿等现象,相同质量浓度的马钱子碱氮氧化物组则未观察到该类现象;马钱子碱组斑马鱼细胞凋亡明显,而其氮氧化物组则无明显凋亡.结论 马钱子碱氮氧化物较马钱子碱对斑马鱼胚胎的毒性自明显降低.     

马钱子对斑马鱼胚胎发育的影响

目的:探讨马钱子水提液对斑马鱼胚胎发育的影响,建立马钱子对斑马鱼胚胎的浓度-效应曲线,确认其LC50。方法:参照OECD推荐的方法,将受精后6 h(6 hpf)胚胎暴露在含有不同浓度马钱子的养殖水中,分别在24 hpf、48 hpf和72 hpf(96 hpf)阶段测定自主抽动次数,心率、孵化率、死亡率、畸变率等指标。结果:各暴露组24 hpf自主抽动次数、48 hpf心率以及孵化率与正常对照组都具有显著性统计学差异;48 hpf后出现脊柱弯曲、心包水肿、卵黄囊水肿,游泳异常的毒性症状;各给药组的畸形率都可达到100%;在72 hpf之后,随着浓度的升高胚胎的死亡率升高。结论:马钱子对斑马鱼胚胎发育有毒性作用。     

基于斑马鱼幼鱼模型的甘遂毒性评价

[目的]以模式生物斑马鱼幼鱼为模型,评价甘遂不同溶剂连续提取物毒性差异及毒性特征。[方法]采用索氏提取法获得甘遂不同溶剂连续提取物。通过预实验,确定各提取物72 h最大不致死浓度和最小全致死浓度。在此区间设定6~8个药物浓度,建立致死曲线,计算半数致死浓度(LC50)。以毒性最大提取物的10%致死浓度(LC10)、最小致死浓度(LC1)、1/3 LC1和1/10 LC1为给药浓度,同时设立空白组和溶剂对照组,连续给药72 h,观察甘遂毒性特征。停药后将幼鱼置于养殖水中恢复48 h,观察毒性可逆性。[结果]甘遂不同提取部位毒性顺序为石油醚二氯甲烷乙酸乙酯乙醇提取物。甘遂的主要毒性为肝毒性和胃肠道刺激性。肝毒性既可造成肝肿大,又可导致肝变性,肝肿大不可逆,而肝变性具有可逆性。[结论]本实验首次利用单个模型以相同浓度单次给药,同时评价了甘遂对心脏、肝脏、肾脏、神经系统和胃肠道等脏器系统的毒性作用及可逆性。实验结果证实了甘遂的毒性集中于石油醚提取部位,并可对肝脏和胃肠道造成实质性损伤。本实验为斑马鱼模型在中药毒性评价中的应用提供了参考。     

乌头碱对斑马鱼心脏毒性的初步研究

目的:观察不同浓度的乌头碱对斑马鱼心脏的影响。方法:以发育正常的受精后48h(48hpf)的斑马鱼胚胎作为心脏毒性模型,以不同浓度的乌头碱处理上述胚胎,分别于处理后12h、24h观察胚胎心脏的形态和心率的变化。结果:5mg/L乌头碱作用24h未引起胚胎心脏中毒,而10、30、60mg/L乌头碱均导致胚胎心脏中毒,出现心膜出血,血细胞在心区堆积,心包囊水肿等现象。处理12h后心率随着浓度的升高而升高,且随后随着时间的延长心率下降。乌头碱引起斑马鱼胚胎心脏毒性的EC50(24h)约为14.49mg/L。结论:乌头碱对斑马鱼胚胎有心脏毒性作用,且与乌头碱的浓度正相关。     

醋甘遂不同提取物对斑马鱼幼鱼的毒性

目的:研究非致死剂量醋甘遂对斑马鱼幼鱼的毒性及毒性可逆性,并验证斑马鱼模型用于中药毒性快速评价的可行性。方法:用索氏提取器以不同极性溶剂依次提取样品,制备不同提取物。将健康斑马鱼成鱼配对产卵,以正常发育受精后3 d的斑马鱼幼鱼为模型,用醋甘遂不同极性提取物处理斑马鱼幼鱼,统计给药72 h死亡率,对毒性最强的提取部位观察评价其对斑马鱼心血管系统、肝脏、神经系统、胃肠道系统、肾脏及其他脏器系统的毒性特征及可逆性。结果:醋甘遂不同溶剂提取物毒性顺序依次为石油醚提取物二氯甲烷提取物乙酸乙酯提取物乙醇提取物,与空白组比较,石油醚提取部位处理后的幼鱼给药组肝区相对光强度随给药浓度的升高而降低,肝脏颜色变暗(P0.01);肝脏经苏木精-伊红染色后,在石油醚提取部位0.054 mg·L~(-1)给药组中有轻微的肝损伤,在恢复组中肝损伤明显好转。与空白组和石油醚提取部位0.004 mg·L~(-1)组比较,肠道尼罗红排泄实验显示残留率在石油醚提取部位0.012,0.036,0.054 mg·L~(-1)组中显著下降(P0.01),胃肠道被促进排空。其他系统毒性特征不明显,差异均无统计学意义。结论:醋甘遂的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和乙醇提取物中,石油醚提取物毒性最大,且主要毒性为肝毒性和胃肠道刺激性,肝毒性造成肝变性,具有可逆性。斑马鱼模型快速评价中药毒性具有较好的应用前景。     

基于斑马鱼幼鱼模型药物肝毒性快速评价方法的优化及评价标准初探

目的 以对乙酰氨基酚(APAP)为例，通过优化其对斑马鱼幼鱼肝毒性评价的影响因素和参数，确立基于斑马鱼幼鱼模型的肝毒性快速评价方法及药物肝损伤分级方法。方法 利用不同浓度APAP处理斑马鱼幼鱼，在实验终点(药物暴露后48 h/24 h)统计不同处理组斑马鱼的死亡率，并绘制“死亡率—浓度”效应曲线，计算最大耐受浓度(LC₀)和半数致死浓度(LC₅₀);考察并优化斑马鱼幼鱼在APAP毒性研究中的相关影响因素，包括斑马鱼鱼龄[3 dpf、4 dpf(受精后天数：dpf)]、给药暴露时间(48 h、24 h)和孔板(6孔板、12孔板；6 mL、4 mL),并从以上3个水平设计正交实验，建立斑马鱼肝毒性模型的最佳实验条件参数。另择3 dpf斑马鱼幼鱼[3 dpf-48 hpe-12孔板(暴露后小时：hpe))]与选定条件(4 dpf-24 hpe-12孔板)进行比较，以表型评价、组织病理学评价、体内凋亡评价、生化指标及肝脏区域面积作为系统生物学评价指标，确认斑马鱼整体肝毒性评价的方法和损伤参照标准。结果 以实验所得各组LC₅₀为指...     

斑马鱼模型筛选何首乌肝毒性的物质基础

目的:用斑马鱼模型探索何首乌肝毒性物质基础,为何首乌肝毒性作用机制研究提供一定的理论依据。方法:将对实验前期所筛选出来的大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷(质量浓度分别为0. 000 73,0. 002 22,0. 015 05,0. 002 36,0. 198 95,0. 072 73 g·L~(-1))这6种何首乌中的化学成分,继续使用肝脏荧光转基因斑马鱼为动物模型,对受精后72 h的幼鱼连续给药3 d。分别测定给药后1,2,3 d的斑马鱼体内丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),谷胱甘肽(GSH)的活力和总胆红素(TBIL)的含量,分别对其进行切片分析,观察斑马鱼肝脏组织病理学改变。结果:大黄素、大黄酸、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷对斑马鱼体内ALT,AST,GSH的活力和TBIL的含量无明显影响,其斑马鱼肝组织显示正常;芦荟大黄素能显著降低斑马鱼体内ALT,AST,GSH的活力(P 0. 01),显著升高TBIL含量(P 0. 01);芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷能显著降低斑马鱼体内ALT,GSH的活力(P 0. 01),明显升高TBIL含量(P 0. 05,P 0. 01),对斑马鱼体内AST的活力无明显影响,同时此二者的斑马鱼肝组织均出现大片片状坏死,肝组织细胞发生明显形态改变,肝细胞排列不规则等。结论:何首乌中的芦荟大黄素和芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷可对斑马鱼肝脏产生毒性作用,提示芦荟大黄素和芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷可能是何首乌的肝毒性物质基础。     

基于斑马鱼模型筛选壮骨关节丸毒性药味高效筛选

目的：采用斑马鱼模型高效筛选壮骨关节丸中有毒性的药味。方法：将受精后1天（1 day post fertilization,1dpf）的斑马鱼胚胎暴露于壮骨关节丸及方中12种药味不同浓度水煎液和醇提液中,观察记录给药后2-6 dpf或2-8 dpf的死亡数量,于3 dpf显微检视斑马鱼幼鱼状态,SPSS软件计算6 dpf的斑马鱼半数致死浓度LC₅₀。结果：斑马鱼暴露于壮骨关节丸及补骨脂、续断、乳香没药、独活和木香的水、醇提取液,以及鸡血藤和狗脊的醇提液毒性较大,致鱼卵黄囊肿大、变形或变黑,提示与肝毒相关,6 dpf鱼的LC₅₀为33.2-392.7μg·mL^-1（已折算为生药量,下同）;淫羊藿水、醇提取液均在1500μg·mL^-1致鱼卵黄囊肿大、变黑,LC₅₀为1100-1350μg·mL^-1,有一定毒性;鸡血藤和狗脊的水煎液,以及骨碎补、桑寄生和熟地黄的水、醇提取液未致鱼脏器明显改变,LC₅₀大于1500μg·mL^-1,故安全性较好。结论：斑马鱼模型高效辨识了壮骨关节丸不同药味毒性差异,可实现复杂中药中潜在毒性物质的在体、实时、动态、规模化的高效筛选。     

炮制对马钱子生物碱含量及毒性的影响分析

马钱子来源于马钱科植物马钱的干燥成熟种子,具有通络止痛、散结消肿的功效,临床应用广泛。因马钱子所含生物碱成份士的宁和马钱子碱既是有效成份,也是毒性成份,炮制使用不当,极易引起中毒。为此,笔者对砂烫马钱子在不同温度下所含生物碱含量变化进行分析测定,确定最佳炮制温度,确保临床用药安全。     

马钱子点燃模型的制备探讨

目的了解马钱子对春青期Wistar大鼠有否点燃作用及点燃特征，探索马钱子制备癫痫动物模型的可能性。方法分别用化学提取法和传统中药煎煮法提取马钱子生物碱，经胃管注人大鼠，观察马钱子提取液对青春期Wistar大鼠的点燃效应。结果马钱子碱提取液对青春期Wistar大鼠有致痫效应，剂量越大，点燃作用越明显。但表现复杂，部分试验动物有自发性发作。结论大剂量马钱子提取液对青春期Wistar大鼠有点燃作用，利用马钱子的这种化学特征有可能制备一种新的癫痫模型。     

马钱子散的配伍减毒增效实验研究

目的:为了验证马钱子散的配伍减毒增效作用,进行了马钱子散的配伍减毒作用实验研究和马钱子散的配伍增效作用实验研究。方法:通过急性毒性实验和小鼠自主活动实验的研究,来阐明马钱子散的配伍减毒作用;通过镇痛实验与抗炎实验的研究,来阐明马钱子散的配伍增效作用。结果:实验研究结果证明马钱子散具有减毒增效的作用。结论:这种研究从实验研究角度为中药配伍合理性提供实验依据,为今后马钱子散在临床应用方面提供药理学实验依据。     

爆压法对马钱子总生物碱的影响及急性毒性试验研究

目的:观察爆压法对马钱子的总生物碱含量和急性毒性的影响.方法:采用溶剂提取法提取总生物碱并测定其含量,用薄层层析对总生物碱中士的宁和马钱子碱进行定性分析,并通过小白鼠灌胃给药测定爆压品和生品的LD50.结果:马钱子经爆压法和砂烫法炮制后,总生物碱的含量下降甚微,与生品比较仍达92%～95.6%,而爆压法与生品急性毒性比较下降了38.3%(P＜0.01).结论:爆压法既能显著降低马钱子毒性,又能保证其效价不会明显下降.     

斑马鱼体表类穴位与类经络结构的初步观察

目的:探讨斑马鱼是否存在类经络与类穴位结构。方法:将成年斑马鱼活体经10μmol/LDiA水溶液染色,麻醉后在荧光显微镜下观察。结果:DiA荧光标记物呈亮圆点状,若干标记物聚集在一起形成簇状,有规律地分布于身体各个部位。在躯体部,标记物从背部到腹部沿躯干纵轴形成4条线,背侧线、背外侧线、外侧线和腹侧线。在高倍镜下观察,又可依据其神经联系的不同将外侧线分为外侧上线和外侧下线,将腹侧线分为腹外侧线和腹侧线。结论:斑马鱼体表感觉器官分布有一定的规律性,若干感觉器官聚集在一起形成簇,若干簇又有规律地沿躯体长轴排成线,类似于传统经络与穴位。     

斑马鱼药物代谢模型的适用性研究进展

根据相关研究及国外有关文献资料,对斑马鱼药物代谢的实验方法、代谢类型及适用性进行归纳和总结.斑马鱼较成功地模拟了哺乳动物I相代谢、II相代谢、肠道菌群代谢及多途径整体代谢,适用于微量单体化合物及其组合物的在体代谢研究,有利于代谢产物的简单、高效富集,具简单、高效、低成本、化合物用量少(毫克级)等优势,是一种早期、快速预测微量成分在体代谢的极具前景的模式生物模型.     

诃子对川楝子所致肝毒性的减毒作用机制初探

目的:初步探讨诃子缓解川楝子所致肝毒性的作用机制.方法:以含有诃子和川楝子的复方三子汤中的药物为示例,将全部64只SD大鼠随机分为正常组、三子汤组、川楝子组、栀子组、诃子组、川楝子加诃子组、川楝子加栀子组和诃子加栀子组,每组8只.除正常组外,其余各给药组灌胃相应的药物溶液,连续给药21 d.观察各组药物对该组大鼠肝功能...     

基于模式生物斑马鱼的款冬叶肝肾毒性比较研究

目的采用斑马鱼模型比较款冬叶、花的肝脏、肾脏毒性,为款冬叶的资源利用提供实验依据。方法取3 dpf(day post fertilization)健康AB系及转基因系斑马鱼,将款冬叶、款冬花以及款冬叶、花分别与紫菀配伍后的4个样品溶于斑马鱼培养用水,分别以0.5、1.0、1.5 mg/mL给药,以培养用水为对照,处理72 h后观察各组样品对斑马鱼肝、肾形态及各指标的影响,以斑马鱼肝脏的荧光面积和肝脏丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平评价药物对肝脏的毒性,以斑马鱼表型变化结合培养液蛋白量评价药物的肾脏毒性。结果与对照组比较,各给药组对斑马鱼肝脏生化指标无显著影响,但在1.5 mg/mL剂量下,款冬花及款冬花+紫菀组斑马鱼的肝脏荧光面积减小。各药物处理组斑马鱼表型及培养液蛋白量无显著差异。结论款冬花及款冬花配伍紫菀在高剂量时对肝脏产生一定的毒性,而款冬叶及款冬叶配伍紫菀未表现出明显的肝肾毒性,即款冬叶入药的安全性风险不高于款冬花。研究结果为款冬叶的资源利用奠定了基础。     

基于谱-效相关分析的雷公藤致肝毒性物质基础的初步研究

基于谱-效相关分析方法,筛选雷公藤致肝毒性的主要成分,为提升雷公藤类药材质量控制方法提供参考。该研究以中药雷公藤为研究对象,采用LC-Q-TOF-MS技术表征不同产地雷公藤样品的化学成分,并结合文献初步指认其主要成分;以正常人肝细胞(LO2细胞系)为模型,对乙酰氨基酚为阳性药,细胞毒价为评价指标,采用简单相关分析及多元线性相关分析方法,筛选雷公藤致肝毒性的主要成分。该研究共指认出雷公藤药材中的10种主要成分,基于谱-效相关分析发现雷公藤甲素可能是毒性成分,与传统文献报道一致,多元线性相关分析还发现雷公藤红素,demethylzeylasteral可能对肝毒性贡献较大;此外研究中还发现不同品种、不同产地雷公藤样品质量差异较大,产于西南地区的雷公藤药材肝毒性相对较低,产于湖南、安徽的2批雷公藤肝毒性相对较高。该研究可为今后雷公藤药材的合理利用及雷公藤致肝细胞毒性研究提供数据支持。     

基于能量代谢对3味山姜属中药黄酮类成分药性归属的初步研究

目的:通过检测胃溃疡寒证模型大鼠体内能量代谢、物质代谢、脂代谢相关酶的含量,考察高良姜、大高良姜、红豆蔻的黄酮类成分对其表达的影响,以阐述其寒热属性及对胃溃疡寒证模型大鼠能量代谢的影响及作用机制.方法:采用知母水煎液和15％冰乙酸灌胃造胃溃疡寒证模型.以干姜姜辣素为阳性对照,分为空白对照组、阳性对照组、模型组、高良姜高...