浙江省主要地区抗病毒治疗病人HIV毒株耐药基因变异研究

目的:调查分析浙江省主要地区(杭州、宁波和温州)的抗病毒治疗病人的耐药基因变异情况,以进一步指导抗病毒药物的选用。方法:选取三地区接受抗病毒治疗的274例患者,对病毒抑制失败(即病毒载量大于1000 IU/ml)的样本进行HIV蛋白酶(PR)全长和部分逆转录酶(RT)基因区进行RT-PCR和巢式PCR扩增并测序。使用斯坦福大学HIVdb程序在线分析耐药相关突变位点,并分析对各药物的敏感性。结果:病毒未抑制率为10.9%(30/274),最终获得29份序列用于耐药基因分析。发现蛋白酶抑制剂(PI)、核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)和非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)最主要耐药突变类型分别为M46I、M184V和Y181C/V,三类药物的耐药率分别为0.4%(1/273),7.3%(20/273)和7.7%(21/273),总耐药率为7.7%(21/273)。21个个体发生耐药,其中4.8%(1/21)的个体对PI耐药,95.2%(20/21)对NRTI耐药,所有人均对NNRTI耐药,90.5%(19/21)的个体表现对NRTI和NNRTI的双重耐药。结论:整体而言,浙江省主要地区抗病毒治疗病人中HIV毒株耐药处于较低水平,但耐药突变呈多样化,耐药个体NRTI和NNRTI双重耐药突出,但对PI药物普遍敏感,应结合实际科学合理用药。     

阜阳市HIV抗病毒治疗患者耐药情况分析

目的了解阜阳市HIV抗病毒治疗患者的耐药情况及影响因素,指导HIV患者抗病毒治疗的临床用药。方法收集2016年阜阳地区抗病毒治疗大于12个月且病毒载量≥1 000 cps/ml的253例HIV/AIDS病例样本,应用巢式PCR进行扩增、测序及亚型鉴定,并登录国际耐药库进行比对,以确定耐药水平和耐药基因突变情况。结果253例样本中,获得有效基因序列216例。基因分型以B亚型为主(83.3%),其次是CRF01_AE亚型(10.2%),并在不同的感染途径中亚型分布显著不同。87例患者耐药,HIV-1病毒治疗失败人群耐药率为40.3%。耐药发生与传播途径、基线CD4和使用及更换二线治疗方案相关。21.1%患者针对NRTI突变,突变率最高是M184V;41.7%患者针对NNRTI突变,突变率最高是K103N。2例(0.9%)产生了PR区基因突变,1例为主要基因突变,突变位点为M46I、I54V、V82A。50.6%的耐药患者中同时对NNRTI类和NRTI类耐药,10.3%的患者对11种逆转录酶抑制剂全部耐药。结论阜阳市HIV-1病毒总体耐药程度较低,但在已产生耐药的患者中交叉耐药严重,少数患者对所有逆转录酶耐药,并出现了针对PI的耐药株,应加强耐药监测,及时调整治疗方案,提高治疗效果。     

2015年乐山市HIV-1抗体阳性病例抗病毒治疗效果及耐药分析

目的分析乐山市接受抗病毒治疗的HIV-1抗体阳性病例治疗效果及毒株耐药、突变情况。方法选取乐山市2015年接受抗病毒治疗时间>6个月的HIV-1抗体阳性病例共计620例,采集其抗凝全血进行病毒载量检测,对病毒载量>1 000copy/mL的样本采用自建基因型耐药检测进行耐药检测及分析。结果 620例患者中,419例病毒载量<200copy/mL,抗病毒治疗有效率为67.58%;175例病毒载量>1 000copy/mL,均值1.85×105copy/mL,病毒抑制失败率28.22%;其中93例样本核酸扩增阳性,主要为CRF07-BC亚型(占68.82%)和CRF01-AE亚型(占19.35%)。总耐药率6.13%(33/538),其中对核苷类反转录酶抑制剂(NRTIs)、非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTIs)和蛋白酶抑制剂(PIs)的耐药率分别为57.58%、84.85%和18.18%;耐药毒株对NRTI主要突变位点为M184V、K65R,对NNRTI主要突变位点为K103N、K101E、Y181C、G190A,对PI未发现主要位点突变,次要突变位点主要是Q58E、A71V。结论乐山地区部分HIV-1抗体阳性患者抗病毒治疗效果较差。与2014年相比,总耐药率及对NRTIs、NNRTIs耐药率均有所下降,但对PI耐药率上升。应加强对接受HAART的HIV-1抗体阳性病例的病毒载量及耐药检测,及时评估治疗效果及耐药情况。     

四川省凉山州布拖县HIV-1耐药基因检测情况分析

摘要:目的　了解凉山州布拖县艾滋病毒-I型（HIV-1）耐药基因突变情况,优化抗病毒治疗（ART）方案,提高治疗效果。方法　采用反转录式聚合酶链反应（RT -PCR）方法,检测2008、2010、2012年三年ART后病毒学失败患者的HIV-1耐药基因型。结果　截至2012年12月凉山州布拖县累计治疗艾滋病（AIDS）患者1755人,检测HIV-1病毒载量（VL）1 324次人,HIV-1 VL＜50拷贝/ml者为25.4%（336/1324）,VL 51～1 000拷贝/ml者为16.3%（216/1324）,VL＞1000拷贝/ml为58.3%（772/1324）,三年有 218例进行了耐药基因突变检测,获得可用序列148例,其中未检出耐药突变者为 42.6%（63/148）,发生耐药突变者为 57.4%（85/148）。非苷类反转录酶抑制剂（NNRTI）,蛋白酶抑制剂（PI）和核苷和核苷酸类反转录酶抑制剂（NRTI）相关的耐药基因突变率分别为33.8%（50/148）、33.1%（49/148）、10.8%（16/148）。NNRTI相关的耐药基因突变位点前3位依次是K103N/KN（47.1%）、Y181C/CY（10.3%）、Y188FY/C/L/CY（10.3%）、G190AG/A（8.8%）;PI相关的耐药基因突变位点前3位的是T71V/AT/AV（67.2%）、L10IL（20.0%）、L33IL（3.6%）;NRTI相关的耐药基因突变位点前3位依次是M184V（33.3%）、T69N/S/AT（19.0%）、D67N（9.5%）、G333E（9.5%）。结论　凉山州布拖县抗病毒治疗后病毒学失败患者中,以NNRTI耐药最多,其次为NRTI,PI较少,但PI是以次要位点（T71V/AT/AV）耐药突变较NRTI多。     

福建省新报告HIV/AIDS中HIV-1原发耐药状况研究

目的研究福建省HIV-1原发耐药者的流行病学特征,为制定艾滋病抗病毒治疗策略提供依据。方法收集福建省2015—2016年新报告且未接受过抗病毒治疗的HIV/AIDS个案信息903例,采用in-house基因型耐药检测法分析耐药突变位点。用logistic回归模型分析影响HIV原发耐药传播的危险因素。结果 903例研究对象以男性为主(85.7%);20～39岁组居多(56.9%);以性接触传播为主(97.1%);HIV-1感染者中40例被检出耐药突变,原发耐药率为4.4%。针对非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)耐药突变位点共11个,常见是V179D/E/F/T、E138G/A和G190A/E/D;针对核苷类类逆转录酶抑制剂(NRTI)耐药突变位点共8个,常见是T215D/A/P/S、A62V和M184V/R/L/W;针对蛋白酶抑制剂(PI)耐药突变位点共12个,常见是L33F、Q58E和M46I。结论福建省新报告HIV-1感染者中HIV-1原发耐药率尚处于低流行水平,但应继续保持对HIV耐药株传播的监测。     

徐州地区292例抗病毒治疗失败HIV/AIDS患者耐药情况分析

目的 了解近年来徐州地区人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染者对抗反转录病毒药物的耐药情况和基因突变位点。方法 收集2018—2020年292例抗病毒治疗(antiretroviral therapy, ART)失败HIV/AIDS患者血浆样本,检测病毒毒株亚型耐药突变特点。结果 292例治疗失败患者中,有129例(占44.18%)发生耐药突变,其中126例(占43.15%)非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTIs)耐药,主要突变位点为K103N(占22.26%);核苷逆转录酶抑制剂(NRTIs)耐药88例(占30.14%),主要的突变位点为M184V/I(占57.36%);蛋白酶抑制剂耐药位点突变率为1.37%。NNRTIs类药物中奈韦拉平(NVP)和依非韦伦(EFV)出现耐药程度最高,分别为42.12%和41.78%;其次是NRTIs类药物中的阿巴卡韦(ABC)和拉米夫定(3TC),分别为30.14%和29.79%。耐药毒株常见的基因亚型为CRF01＿AE亚型。结论 徐州地区ART治疗失败HIV/AIDS患者以NNRTIs耐药为主,应加强相关监测,合理选用抗病毒治疗药物,减少耐药的发生与传...     

超深度焦磷酸测序技术用于HIV-1RT基因区原发性耐药突变的研究

目的：利用超深度焦磷酸测序技术（UDS）研究湖南省HIV感染者中原发性耐药流行趋势。方法90份未接受抗病毒治疗的HIV感染者同时采用UDS测序和Sanger测序进行HIV基因型耐药检测,测序结果采用斯坦福大学HIV耐药突变数据库进行分析比对,分析湖南省HIV-1反转录（RT）基因区原发性耐药突变情况。结果 UDS检测成功获取90份测序结果,84.4%为AE亚型（76/90）,发现38例（42.2%,38/90）针对RT基因区的耐药突变位点,其中14例样本仅发生核苷类反转录酶（NRTI）耐药突变（15.6%）,15例仅发生非核苷类反转录酶（NNRTI）耐药突变（16.7%）,9例样本同时发生了NRTI和NNRTI类耐药突变。在16个位置上共发现54次耐药突变。17例（18.9%,17/90）样本有针对RT基因区的中度及以上的耐药突变。传统Sanger法仅检出7例;其中针对NRTI类药物耐药的6例;针对NNRTI类药物耐药的5例。结论 Sanger法测序能够鉴定出显著的耐药性突变（≥20%）,但不能及时发现尚未达到显著突变量的突变位点或稀有型抗药型突变（＜20%）。而UDS则能更灵敏检测到低频突变毒株,这些耐药突变同样可在药物选择压力下快速的增长引起病毒学治疗失败,导致临床治疗失败。因此选择更高灵敏度和精确度的技术检测低水平耐药突变位点,对于HIV抗病毒临床治疗有着十分重大的意义。     

丽水市HIV-1感染者病毒基因型及耐药基因突变研究

目的了解丽水市人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染人群病毒基因型及耐药情况。方法收集未经抗病毒药物治疗的307例新报告病例血浆及经过药物治疗的79例既往感染者血浆,提取核酸检测病毒载量,同时巢式PCR扩增病毒pol区基因片段,对扩增成功样本进行测序、拼接并提交至耐药数据库进行基因型耐药分析。结果 269例基因扩增成功,CRF01_AE型为主要型别,占44.98%。57例存在主要耐药基因突变,28例显示耐药,新报告病例人群耐药率为5.04%(13/258),既往感染人群耐药率为11.39%(9/79)。耐药突变位点为I54IM、K65N、L100I、Y181C、M184V等引起的高度或中度耐药,Q58E、L23I、F77L、G190E等引起低度或潜在耐药。结论丽水市HIV-1耐药传播为中流行(5%~10%)水平,应加强耐药监测。耐药突变位点及耐受药物多样化,应警惕I54M、K70E、M184V、K103N等位点突变引起的FPV、3TC、EFV、NVP耐药。     

凉山彝族自治州HIV/AIDS抗病毒治疗前HIV-1耐药情况及其影响因素分析

目的 了解凉山彝族自治州（凉山州）HIV/AIDS抗病毒治疗前HIV-1耐药情况及其影响因素,为预防HIV-1耐药毒株的传播提供参考依据。方法 分别于2017年1月1日至6月30日、2018年1月1日至6月30日在凉山州开展HIV/AIDS抗病毒治疗前HIV-1耐药的横断面调查。提取获得HIV-1 pol基因区序列,根据2014年WHO耐药监测指南的推荐标准,应用HyPhy 2.2.4和Cytoscape 3.6.1软件进行HIV-1耐药毒株传播网络分析。结果 研究对象464例HIV/AIDS,HIV-1毒株为CRF07_BC亚型的占88.6%（411/464）,总的HIV-1耐药率为9.9%（46/464）,非核苷类反转录酶抑制剂（NNRTI）、核苷类反转录酶抑制剂（NRTI）和蛋白酶抑制剂（PI）耐药率分别为6.7%（31/464）、1.9%（9/464）和0.4%（2/464）;有1组HIV-1新型重组毒株URF_01BC亚型独立成簇并携带相关耐药突变位点;多因素logistic回归分析结果显示,与异性性传播人群相比,注射吸毒人群的HIV-1耐药风险较高（aOR=3.03,95% CI：1.40～6.54）。结论 凉山州HIV/AIDS抗病毒治疗前的HIV-1耐药率较高,且有新型重组毒株URF_01BC亚型携带相关耐药突变位点的成簇传播,建议加强HIV-1耐药毒株传播的预防工作。     

新疆1 816名艾滋病病毒抑制失败患者耐药分析

目的 了解新疆抗病毒治疗病毒抑制失败患者对免费抗病毒治疗药物的耐药状况,并寻找可能导致的耐药因素,给予建议。方法 选择HIV在治患者病毒载量大于1 000拷贝/ml的样本1 816份,用in-house套式聚合酶链反应扩增HIV pol区基因,通过序列测定,用ChromasPro软件进行序列拼接分析,进入Stanford HIV耐药数据库序列结果比对,获得耐药位点和耐药程度分析结果。结果 1 816例患者中有916例对至少一种药物产生耐药,占50.44%,南疆四地州的蛋白酶抑制剂类药物耐药率比较突出,达到4%~5%,但3类药物当中仍然是非核苷类药物耐药率最高,达到43.61%。并未出现特殊的耐药突变位点。结论 新疆艾滋病病毒抑制失败患者中耐药突变率较高,在艾滋病疫情发展较快的南疆四地州出现了蛋白酶抑制剂类药物的耐药,需要引起关注。     

深圳口岸国际旅行人员中HIV-1感染者耐药基因型检测分析

目的对深圳口岸1996—2008年已确诊的68例人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染者进行耐药性突变分析,以了解深圳口岸国际旅行者HIV-1耐药性毒株的流行情况。方法应用巢式RT-PCR扩增HIV-1聚合酶基因,对所获得的PCR产物直接测序,再将所获得的序列与国际耐药数据库比对,辨别耐药性突变位点。结果在68例HIV-1感染者中,经巢式RT-PCR扩增并获得聚合酶基因序列68份。耐药分析结果表明,本研究人群未检测到蛋白酶抑制剂(PI)原发耐药突变;11例感染者发生反转录酶抑制剂(RTI)耐药基因突变,基因突变率为16.17%;其中核苷类和非核苷类反转录酶抑制剂的耐药突变率分别为7.35%(5/68)和8.82%(6/68)。结论本研究分析了深圳口岸国际旅行者HIV-1感染者耐药突变的流行情况,这对于我国的艾滋病预防和控制工作具有重要指导意义。     

云南省德宏傣族景颇族自治州2015年HIV-1耐药传播警戒线调查

目的 了解2015年云南省德宏傣族景颇族自治州（德宏州）未接受抗病毒治疗的HIV感染者的耐药株传播水平。方法 2015年1-7月在德宏州收集72份新报告的16~25岁HIV-1感染者的血浆样品,进行HIV-1基因型耐药检测和耐药株传播水平分析。结果 48份完成了基因型及耐药鉴定,其中中国籍占31.2%（15/48）,缅甸籍占68.8%（33/48）。通过进化分析对pol区进行分型,主要的基因型包括URF（52.08%,25/48）、CRF01_AE（16.67%,8/48）、CRF07_BC（10.42%,5/48）、B亚型（6.25%,3/48）、C亚型（6.25%,3/48）、CRF57_BC（6.25%,3/48）和CRF08_BC（2.08%,1/48）。在4个序列中分别检测到1个针对非核苷类反转录酶抑制剂的耐药突变位点（K103N）和2个针对核苷类反转录酶抑制剂的耐药突变位点（T69D和T215I）,按照耐药警戒线的统计方法估算耐药株流行率为5%~15%。结论 2015年德宏州16~25岁新报告的HIV-1感染人群中外籍比例较高,HIV-1基因型复杂,HIV-1传播性耐药达中度水平。     

辽宁省艾滋病治疗患者耐药基因特征及分子流行病学分析

目的 了解辽宁省自2004年以来抗病毒治疗的艾滋病患者中基因耐药突变和HIV-1耐药株的流行率.方法 选取2004-2008年全省接受一线抗病毒治疗艾滋病患者104个样本,病毒载量检测,高于最低检测限有12个样本,经HIV蛋白酶(PR)全长和部分反转录酶(RT)基因区RT-PCR扩增、测序,运用Contig Express 1对序列拼接、编辑和校正,上传Stanford HIV Drug Resistance Database(http://hivdb.stanford.edu),在线耐药序列分析,寻找耐药位点,评价目前使用的一线药物的治疗效果和耐药株流行趋势.结果 104份治疗患者的样本中,92份病毒载量检测已经小于最低检测限,治疗有效率88.4%(92/104).余下的12份样本经RT-PCR、巢式PCR和5个序列的正反方向测序,8份样本得到PCR有效扩增和测序(均获得5条有效测序序列).RT区序列检测,8份样本中有5份存在核苷类反转录酶抑制剂(NRTIs)相关突变,耐药突变率为4.81%(5/104),M184V出现较早(治疗8个月);6bq存在非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTIs)相关突变,耐药突变率为5.77%(6/104),以K103N、Y181C出现频次较高,使NNTRIs存在高度的多重交叉耐药.未发现蛋白酶抑制剂主要耐药相关突变,总耐药突变率为6.73%(7/104).结论 辽宁省艾滋病治疗患者中耐药突变仍处于低流行状态,与国内其他地区原发耐药流行率接近.目前使用的一线反转录酶抑制剂药物仍有效.但同时怎样解决NNRTIs突变导致的多重耐药、调整药物配伍、提高用药依从性、跟踪分析病例个案发展是今后工作努力的方向.