IL-6依赖的细胞系B9对IL-11的应答性

B9细胞是一种IL-6依赖性小鼠杂交瘤B13.29的变种,常用于测定培养上清及体波中IL-6的水平.在这一测定中,B9细胞的增殖是IL-6特异性的,但具有微弱活性的鼠源性IL-4则例外.实际发现下列因子如:重组人IL-1α,IL-1β,IL-2,IL-3,IL-4,GM-CSF,TNF-α,IFN-α和IFN-γ,天然纯的TGF-β和重组小鼠IL-2,IL-3及IL-5都不能维持B9细胞的生长.因此,将B9杂交瘤作为一种检测IL-6的指     

人精子蛋白17单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗精子蛋白17(Sp17)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:克隆人Sp17cDNA,表达带有6His标记的重组Sp17,用纯化的重组Sp17免疫BALB/c小鼠制备mAb。用ELISA筛选抗体阳性的细胞克隆。用免疫组化染色法及阻断试验鉴定mAb的特异性。结果:获得2株杂交瘤细胞系3C12和3D6,其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG1和IgM(κ),杂交瘤细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶64和1∶32;腹水mAb的效价分别为1∶1×105和1∶5×104。用人和大鼠睾丸组织以及人精液精子免疫组化染色及阻断试验证明,抗Sp17mAb具有良好的特异性。抗Sp17mAb也可识别卵巢癌组织中异常表达的Sp17。结论:成功地制备特异性的抗Sp17mAb,为研究该蛋白的功能、天然分布及异常表达奠定了基础。     

抗大鼠乳腺癌的单克隆抗体的肿瘤定位以及阿霉素-抗体结合物对肿瘤生长的抑制作用

单克隆抗体技术创立以来,解决了大量生产与细胞表面反应的特异性抗体的问题,并且也解决了用抗体作为肿瘤治疗剂的载体的问题。作为肿瘤治疗剂的载体的问题。作者对此在大鼠体内、外进行了研究。作者用大鼠Sp4乳腺癌细胞免疫同系大鼠后,取其脾细胞与P3NSI小鼠骨髓瘤细胞融合。生成的杂交瘤细胞可产生针对大鼠自发乳腺癌Sp4细胞表面抗原的单克隆抗体。取此杂交瘤细胞的上清液用偶联有羊抗大鼠免疫球蛋白的Sepharose4B洗脱、提纯抗Sp4瘤细胞     

抗人T细胞单克隆抗体的研制及初步鉴定

应用B细胞杂交瘤技术,将胎儿胸腺细胞免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,以扁桃体冰冻组织切片免疫酶染色技术作为筛选方法。从两次融合筛选建立了四株分泌抗人T细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系(分别命名为SM,SM_2,SM_3和SM_4)四次克隆化后,阳性孔率均达100％。经七个月传代培养仍能稳定分泌特异性抗体。液氮冷冻复苏     

抗人CT抑制物单克隆抗体的制备及应用

作者以CT抑制物免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与Sp2/0骨髓瘤细胞在50％PEG(Mr2000)的介导下融合,获得三株分泌抗人CT抑制物McAb的杂交瘤细胞系(A2、F7、G10)。用ELISA测定杂交瘤细胞培养上清及其所诱生的小鼠腹水,特异性抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)及10~(-4)～10~(-6)。抗原阻断试验及取代试验结果表明,这些McAb     

乙型肝炎病毒e抗源单克隆抗体研制及临床初步应用

基因工程菌生产的HBeAg,用十二烷基磺酸钠(SDS)和2-巯基乙醇(2-ME)处理后作为抗原免疫雌牲BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,共获约3000个杂交瘤细胞克隆。经二种不同的ELISA筛选,得到16个分泌抗HBe McAb的杂交瘤细胞系。其中以94.127二株杂交瘤细胞分泌的抗HBe McAb效价较高(ELISA效价均为10~(-6),与HBeAg作琼脂糖双向扩散时还可出现肉眼所见沉淀线)。染色体检查证实为杂交瘤     

杂交瘤冻存的简便快速方法

本文介绍两种在96孔微培养板内冻存和复苏杂交瘤细胞的简便快速方法,可提高对杂交瘤的管理水平,以避免细胞的丢失。具体方法是:用福尔马林杀死的嗜肺军团菌(OLDA株)或鹌鹑肌细胞,分别免疫Balb/c小鼠。杀鼠取脾细胞,与Sp 2/O—Ag14小鼠浆细胞瘤细胞杂交得LD 8 a 2—3 D 8-1 B 7和MF 2-5 A6杂交瘤。通过间接免疫荧光试验检测杂交瘤所分泌的抗     

抗乙酰胆碱酯酶杂交瘤细胞系的建立

用Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞与用乙酰胆酯碱酶(AchE)免疫的BALB/c小鼠脾细胞,在PEG-1000作用下进行融合。获得了5株分泌抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体的杂交瘤。用酶联免疫吸附试验(ELISA)对其分泌的单克隆抗体进行了特异性交叉实验,免疫球蛋白的类型鉴定及染色体检查。以上细胞株经3～6个月稳定传代后冻存于氮液中。     

用免疫荧光法筛选抗人μ链单克隆抗体(McAb)的研究

用人血清IgM球蛋白重链-μ链免疫的BALB/c小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤Sp 2/0细胞在PEG作用下融合,用免疫荧光法筛选出6种分泌McAb的杂交瘤细胞,其中5株确定为抗人μ链McAb,一株未定。杂交瘤细胞经四次克隆,半年多传代,接种BALB/c鼠可稳定的产生腹水抗体。     

一株中和人IL-17免疫活性的单克隆抗体的制备

目的制备抗人IL-17单克隆抗体,并鉴定其中和活性。方法用hIL-17作为免疫和检测抗原,用间接ELISA法筛选分泌抗人IL-17抗体的杂交瘤细胞株,并对抗体进行中和活性鉴定。结果获得1株稳定分泌抗人IL-17单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型重链为IgG2b,轻链为κ;该株杂交瘤细胞腹水效价为1∶8.192×105;传30代及液氮中保存6个月,抗体效价稳定;Western Blot检测证明该单抗与人IL-17蛋白特异地结合;单抗亲和常数为8.192×10-9 mol/L;ELISA及Real-time-PCR检测证明该单抗能够有效地阻断人IL-17刺激Hela细胞产生IL-6的作用。结论所制备的抗人IL-17单克隆抗体具有高度的特异性、稳定性及中和活性,为针对IL-17为靶点的抗体药物的开发奠定了基础。     

抗小鼠胰腺癌单克隆抗体的研制和初步鉴定

应用杂交瘤技术,直接取胰腺癌荷瘤昆明种小鼠脾细胞与接种于活体内的Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。获得二株分泌Igg2a亚型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2B_6、B_(10)经过体外连续五个月的培养,仍能保持稳定的抗体分泌功能。所分泌抗体腹水效价分别为1.3×10~5,4.5×10~6。经间接免疫荧光法和免疫酶组织间接染色法分析,对小鼠胰腺癌组     

双分沁功能IgM、IgG2a单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

应用HB_sA_g采取两种不同的免疫方法免疫小鼠后。取免疫的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选出两株抗HB_s的单克隆抗体杂交瘤细胞株。常规免疫方法获得的细胞株为WHB_s1,分泌IgG1。脾内免疫方法获得的细胞株WHB_s2,分泌IgM和IgG_(2a)抗体。经过3个月的连续培养,能稳定分泌效价高,特异性强的单克隆抗体。     

家鼠型肾综合征出血热病毒单克隆抗体的制备与鉴定

以家鼠型HFRS病毒R22株免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0-Ag14融合,获得了23株能稳定分泌HFRS病毒特异性McAb的杂交瘤细胞系。以18株不同型别的HFRS病毒株进行分析,结果表明上述McAb中有些为HFRS病毒组特异性的,有些为家鼠型特异性的。有2株McAb对家鼠型HFRS病毒株具有较高的中和活性,对HFRS病毒R22株感染乳鼠也有明显的保护作用。     

缺失PRD的人FOXP3单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗脯氨酸富含区缺失的人FOXP3(△PRD-hFOXP3)的单克隆抗体(mAb),为进一步研究人FOXP3各片段功能奠定基础。方法:以纯化的△PRD-hFOXP3重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,经筛选及克隆化建立2株分泌抗△PRD-hFOXP3的mAb杂交瘤细胞株;利用核型分析、间接ELISA及Western blot分别鉴定了杂交瘤的细胞核型、抗体的效价与特异性。结果:筛选到2株可稳定分泌抗△PRD-hFOXP3的mAb的细胞株,分别命名为1A2和3A11;2株抗体均为IgG1,腹水经ELISA方法测定效价均可达1∶105;Western blot显示这2株杂交瘤分泌的mAb均可与△PRD-hFOXP3蛋白特异性地结合。结论:成功获得2株能稳定分泌特异性抗△PRD-hFOXP3的mAb的杂交瘤细胞株,可用于人FOXP3的进一步研究及相关试剂的研发等。     

艾氏腹水瘤全细胞瘤苗诱导的特异性杀伤活性

目的研究艾氏腹水瘤全细胞瘤苗诱导的特异性杀伤活性。方法用40g/L的多聚甲醛处理的艾氏腹水瘤细胞作为全细胞瘤苗免疫Balb/c小鼠,建立瘤苗小鼠模型。用HE染色法对亲本肿瘤细胞皮下再次攻击形成的肿瘤结节进行病理学观察;用51Cr释放法测定瘤苗免疫组、荷瘤组、正常组小鼠脾细胞,对亲本艾氏腹水瘤细胞和Sp2/0细胞的杀伤活性。结果HE染色显示,经瘤苗免疫后亲本肿瘤细胞皮下再次攻击形成的肿瘤结节中,瘤细胞几乎完全坏死,同时在坏死部位有大量炎细胞浸润、纤维母细胞和小血管增生;而对照组则无以上现象。效靶比为200∶1时,免疫小鼠脾细胞体外杀伤亲本艾氏腹水瘤细胞的杀伤率(％)为(42.3±3.2)％,显著高于荷瘤组的(12.1±2.3)％、正常组的(6.1±1.1)％和对Sp2/0细胞的杀伤率(8.8±0.4)％(P均∨0.05)。结论艾氏腹水瘤全细胞瘤苗可诱导机体产生特异性杀伤活性。     

抗人心肌球蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性初步研究

作者以人心肌球蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,获得2株(2F1和1F6)分泌抗人心肌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。经ELISA检测细胞培养液上清和小鼠诱导的腹水,其抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)和10~(-5)～10~(-6)。抗原区带测定结果,细胞培养液上清及小鼠腹水中的特异性抗体均能与分子量为65 000的蛋白质结合,经酶联二抗及底物处理,呈一条明显的显色带,阴性对照无显色带。抗原阻断     

一组分泌抗人粒细胞单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用正常人的外周血粒细胞免疫Balb/c小鼠,取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,用间接免疫荧光法及扁桃腺冰冻切片免疫过氧化物酶染色技术,从2次细胞融合中筛选并经克隆化得到一批稳定分泌抗粒细胞单抗的杂交瘤细胞系。对其中4株(FPMNI-FPMN4)杂交瘤细胞系所分泌的单抗作了系统的鉴定,证实它们是粒细胞特异性的单抗。     

分泌抗人C_(1q)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

以人C_(19)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,用固相C_(19)-ELISA筛选和有限稀释法克隆化以后,获得三株(A_4、B_6及D_5)分泌抗人C_(19)单克隆抗体的杂交瘤细胞系。培养上清和小鼠腹水的特异性抗体效价分别为10~(-3)、10~(-5)及10~(-7)。单克隆抗体与人IgG无交叉反应,与灭活C_(19)呈阴性反应,经人C_(19)吸收后,OD值明显下降,能阻断补体经典途径的活化,从而抑制溶血活性。根据上述结果表明,三株细胞所分泌的单克隆抗体是针对人C_(19)特异性的。经鉴定单克隆抗体A_4属小鼠IgG_(2b)、B_6及D_5属IgG_1亚类。杂交瘤细胞系核型分析表明,染色体数为87～91条。 三株杂交瘤细胞系贮存液氦6个月,体外培养传20代,仍保存分泌特异性单克隆抗体的能力。     

分泌抗HBeAg单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用

应用血清纯化的HBeAg免疫BALB/c小鼠,取该鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,获得两株分泌抗HBe的杂交瘤细胞系(HE_(20)1B_8,HE_(21)2C_(11))。接种同系小鼠腹腔诱生的腹水中用ELISA测定抗HBe效价达3.2×6.4×10~6。因相捕捉HBeAg,HBsAg和HBcAg特异性试验以及中和试验均证明是针对HBeAg的特异性抗体。临床应用作为ELISA检测HBeAg和抗HBe试剂包被抗体,配合人抗HBe-HRP,结果与Abbott试剂非常一致。     

炎症介导的PI3K/Akt/Sp1信号通路激活及内源性H_2S生成加剧重症急性胰腺炎肠道损伤

目的:探讨内源性硫化氢(hydrogen sulphide,H_2S)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)肠道动力的调控及相关机制。方法:构建SAP大鼠模型,观察大鼠粪便颗粒的排出情况及肠道炎症水平;采用SAP大鼠血浆、TNF-α和IL-6处理大鼠肠道平滑肌细胞,RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色等方法检测H_2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)、胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)、转录因子Sp1和PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达;采用PI3K特异性抑制剂LY294002处理细胞或转染Sp1的干扰序列至细胞中,以验证PI3K/Akt/Sp1信号通路在肠道H_2S产生过程中的调控作用。结果:SAP大鼠排便减少(P0.05),内源性H_2S生成增加(P0.05),血清TNF-α和IL-6含量增加(P0.05)。SAP大鼠血浆、TNF-α和IL-6可诱导肠道平滑肌细胞CSE和CBS的表达上调(P0.05)。阻断PI3K/Akt/Sp1信号通路可以显著抑制肠道平滑肌细胞CSE和CBS的表达(P0.05)。结论:炎症反应介导的PI3K/Akt/Sp1信号通路激活和内源性H_2S产生增多是SAP肠道动力减退的潜在机制。