骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞中基因转录态势的研究

我们试图应用骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓单个核细胞（MNC）和正常对照骨髓细胞的RNA逆转成的cDNA与cDNA基因芯片杂交，检测出MDS细胞的特异性转录态势，从中选出MDS特异性表达的某些基因，加以证实，为MDS的诊断提供可能的分子标志。     

骨髓增生异常综合征遗传学研究进展

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组异质性，克隆性造血干/祖细胞疾病。细胞遗传学的异常是评价生存和进展到急性髓细胞白血病(AML)预后的独立的因子。本文综述MDS遗传学特征包括染色体缺失、丢失、单倍体、多倍体和易位等，以及研究MDS遗传学方法包括荧光原位杂交、cDNA芯片、异源双链分析等方面的进展。     

骨髓增生异常综合征克隆细胞胰岛素样生长因子Ⅰ型受体的表达

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓克隆细胞表面胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-Ⅰ R)的表达状况.方法 联合应用DNA荧光原位杂交(FISH)、免疫细胞化学(碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶系统,APAAP)技术检测40例MDS患者骨髓克隆细胞的IGF-Ⅰ R表达.结果 MDS患者骨髓克隆细胞表面IGF-Ⅰ R表达明显高于正常细胞[分别为(84.5±14.2)％和(11.4±12.1)％](P＜0.01).MDS患者骨髓克隆细胞阳性率与有核细胞IGF-Ⅰ R表达率明显相关(r=0.929,P＜0.01).高危组MDS患者骨髓克隆细胞IGF-Ⅰ R表达与低危组差异无统计学意义.不同异常核型的克隆细胞IGF-Ⅰ R表达率差异也无统计学意义.结论 IGF-Ⅰ R表达阳性提示细胞的恶性增殖倾向,可能作为MDS骨髓恶性克隆细胞的标志物.     

骨髓增生异常综合征遗传学研究进展

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组异质性,克隆性造血干/祖细胞疾病。细胞遗传学的异常是评价生存和进展到急性髓细胞白血病(AML)预后的独立的因子。本文综述MDS遗传学特征包括染色体缺失、丢失、单倍体、多倍体和易位等,以及研究MDS遗传学方法包括荧光原位杂交、cDNA芯片、异源双链分析等方面的进展。     

世界卫生组织关于骨髓增生异常综合征和骨髓增生异常或骨髓增殖性疾病的分类和诊断标准

骨髓增生异常综合征(MDS)是造血干细胞克隆性疾病，血细胞生成有量和质的异常，临床上表现有难治的、程度不等的不同系列或三系血细胞减少，骨髓有核细胞增生，有病态造血现象，约20％～40％的患者可转化为急性白血病。关于MDS分类，多采用法、美、英(FAB)分类。近年来，世界卫生组织(WHO)提出新分类，国内血液学界建议尽可能采用，以便与国际接轨，现将WHO对MDS、骨髓增生异常或骨髓增殖性疾病(MD／MPD)的分类介绍如下．供参考。     

骨髓增生异常综合征克隆细胞生物学特征的初步研究

目的 研究骨髓增生异常综合征（MDS）克隆细胞和急性髓系白血病（AML）克隆细胞的部分生物学差异。方法 对经核型分析证实有克隆标志的51例MDS和11例AML患者骨髓中克隆细胞（荧光原位杂交分析）和原始细胞百分比进行比较；检测MDS患者骨髓中晚期红系（血型糖蛋白A阳性的晚幼红细胞）、粒系（DAPI复染可分辨的分叶核细胞）和巨核系（CD61阳性磁珠分选，CD41阳性的形态学成熟的巨核细胞）中克隆细胞比例；同步检测MDS患者骨髓及外周血中克隆细胞比例；用流式细胞术检测含有克隆细胞的MDS患者外周血中性粒细胞的吞噬和氧化功能并与正常人和AML患者标本比较。结果 MDS患者骨髓克隆细胞百分比（平均48．2％）均高于原始细胞（平均6．7％）（P〈0．01）。进展型MDS与非进展型相比，克隆细胞与原始细胞数更接近。单纯染色体＋8异常与单纯5q-患者比较，克隆细胞与原始细胞数量更接近。而在11例AML患者，克隆细胞与原始细胞百分比的平均差距接近零。在MDS患者骨髓细胞中检出相当数量带有克隆标志的晚期造血细胞：分叶核细胞中平均为45．9％；晚幼红细胞中为46．0％；成熟巨核细胞中为38．0％。MDS患者外周血中检出与骨髓中核型一致的克隆细胞，数量与骨髓中克隆细胞数相关（骨髓中平均为48．6％，外周血中为37．3％）。功能性检测显示MDS患者外周血中的中性粒细胞具有与正常对照者几乎一致的对DHR的摄取和氧化功能（P〉0．05）。结论 MDS克隆细胞与AML克隆细胞具有明显的生物学差异。     

骨髓增生异常综合征骨髓造血祖细胞凋亡与Fas抗原,bcl-2,c-myc的表达及HGFs的影响

骨髓增生异常综合征(MDS)是发生在多能干细胞阶段的异质性克隆性疾病。MDS患者骨髓造血祖细胞增殖、分化过程中存在过度凋亡现象,可能与细胞凋亡密切相关的fas,bcl-2,c-myc和p53等基因异常表达有关。为此,我们用间接荧光标记、流式细胞仪检测了15例MDS患者骨髓造血祖细胞(CD34~ 细胞)体外增殖、分化过程中bcl-2,c-myc蛋白和Fas抗原表达的变化,观察rhEpo,rhIL-3,rhGM-CSF对其影响,并分析这些基因产物表达与造血祖细胞凋亡的关系。新分离出的对照组骨髓CD34~ 细胞Fas抗原呈低水平表达(8.10±3.60％),MDS患者Fas抗原的表达较对照组明显增加(26.32±10.25％),差异显著(P<0.01),体外培养10天后,增加更为明显(40.33±13.83％),且与细胞凋亡呈正相关(r=0.98)。在新分离出的骨髓CD34~ 细胞中,MDS患者bcl-2蛋白的表达(89.90±1.72%)与对照组(84.60±2.40%)无统计学差异,体外培养10天后,MDS患者bcl-2的表达为23.44±9.83％,较对照组(45.11±5.42％)有明显下降,差异具有显著性(P<0.01)。大剂量的GM-CSF,IL-3(均为100 U/ml)可促进MDS患者骨髓细胞bcl-2蛋白的表达,使bcl-2/c-myc比值降低,从而抑制细胞凋亡。MDS患者Fas抗原与bcl-2蛋白的表达呈负相关(r=-0.88)。     

肝癌的基因表达谱研究

以基因表达谱芯片对人正常肝及肝癌组织基因表达的差异进行研究比较.将4096条人cDNA用点样仪点在特制的玻片上制备成表达谱芯片;利用肝和肝癌组织的mRNA通过逆转录方法,将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种组织的cDNA上,制备成cDNA探针,并与表达谱芯片进行杂交及扫描,重复4次实验,通过计算机数据处理判定基因是否在上述2种组织中有表达差异,筛选出差异表达的基因903条.基因芯片技术可同时定量研究数以千记的基因表达水平,从而鉴定参与肿瘤发生的基因.     

骨髓增生异常肿瘤的骨髓微环境促进疾病发生发展的机制北大核心CSCD

骨髓增生异常肿瘤(myelodysplastic neoplasms,MDS)是一种以造血干细胞克隆增殖、骨髓增生异常、无效造血、外周血细胞减少,高风险发展为急性髓系白血病(AML)为特征的恶性疾病[1]。基因和表观遗传学变化及异常的骨髓微环境以多步骤和克隆进化的方式促成MDS或AML的转化[2]。但是,携带MDS常见基因突变的造血干祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cells,HSPC)无独立的细胞自主增殖能力,并不能单独为恶性克隆提供增殖优势[3]。因此骨髓微环境的变化及其与HSPC的双向交流被认为在启动MDS的发生和支持肿瘤克隆的发展中起到关键作用。     

骨髓增生异常综合征患者凋亡造血细胞的克隆性初步研究

目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者凋亡造血细胞的克隆性来源。方法经过G带或R带染色体核型分析，确定骨髓细胞有异常克隆存在的MDS患者共19例，其中10例取骨髓分离有核细胞制备离心涂片。同步进行DNA末端原位杂交(ISEL)及相应异常染色体的间期荧光原位杂交(FISH)(简称ISEL／FISH法)。计数有核细胞中异常克隆细胞百分比和凋亡细胞中异常克隆细胞百分比。4名正常人8张离心涂片经Fas单抗孵育诱导凋亡后行FISH／ISEL检测作为方法学对照。另9例患者骨髓有核细胞经膜联蛋白V(Annexin V)及碘化丙锭(PI)标记染色细胞，流式细胞术分选PI^ 、Annexin V^ PI^-、Annexin V^-PI^-细胞，离心涂片后再行FISH检测(简称FCM／FISH法)。结果10例经ISEL／FISH分析的MDS患者骨髓有核细胞中异常克隆细胞百分比平均为37．1％，凋亡细胞中异常克隆细胞百分比仅为24．0％。正常人经Fas单抗诱导的凋亡细胞核型不变。9例经FCM／FISH分析者，8例显示凋亡细胞中核型正常百分比高于非凋亡细胞。结论MDS凋亡细胞主要来源于残余正常造血细胞。     

人骨髓瘤细胞株基因表达谱经沙利度胺诱导的变化

本研究通过检测沙利度胺(thalidomide,TLD)作用于多发性骨髓瘤细胞株RPMI-8226后基因表达谱的改变,探索TLD抗骨髓瘤作用的分子机制。通过逆转录PCR,将TLD处理前后的人骨髓瘤细胞株RPMI-8226的mRNA分别制备成2种探针,应用Cy3和Cy5荧光染料分别标记,随后与包含1 152条待研究的人类基因表达谱基因芯片杂交,通过扫描和计算机软件分析,寻找经TLD作用后表达有差异的基因,并分析这些差异表达基因的功能。结果表明,100μmol/L TLD作用于RPMI8226细胞72小时后,筛选出22个差异表达基因,其中4个基因下调,分别为rpl32、scya3、mmp1和igbp1基因,18个基因表达上调,其中主要为wars、tubb4q、ube1l、txnrd1和fyb基因等5个基因表达明显上调。研究显示:①TLD能使编码色氨酸-tRNA合成酶的wars基因表达上调,同时使编码基质金属蛋白酶1的mmp1表达下调,这2个基因的变化可能与TLD抑制血管生成的作用有关;②TLD能使编码巨噬细胞炎症反应蛋白1a(MIP-1a)的scya3和编码免疫球蛋白结合蛋白1的igbp1表达下调,其表达下降可能参与了TLD抑制细胞增殖的过程;③TLD能诱导编码微管蛋白β4的tubb4q、编码泛素激活酶E1相关蛋白的ube1l和编码硫氧还蛋白还原酶1(TR1)的txnrd1表达上调,这些基因的表达变化与TLD的促凋亡作用有关;④TLD能使编码酪氨酸激酶Fyn结合蛋白(Fyb)的fyb表达上调,该基因的表达上调与TLD杀伤骨髓瘤细胞的作用有关。结论:22个差异表达基因通过不同的作用环节和途径发挥抗骨髓瘤功能,它们分别涉及到蛋白质的合成和降解、细胞信号转导、细胞骨架运动、免疫调节、细胞代谢、抑癌基因的调控、细胞凋亡等方面,直接或间接与TLD的分子作用机制有关。     

STAT5诱骗寡核苷酸下调K562细胞周期相关基因的研究

目的采用基因芯片技术筛选信号转导和转录活化因子5（STAT5）诱骗寡核苷酸作用下K562细胞差异表达的周期相关分子，探讨其对K562细胞周期的影响。方法合成STAT5诱骗寡核苷酸，在脂质体介导下转染K562细胞，采用人14K基因表达谱cDNA芯片检测差异表达基因，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证芯片筛选到的部分基因的表达情况。结果两张cDNA芯片检测重复性良好（r-0．9799）。在13824个标记的基因中检出多个下调基因，其中包括cyclin D1、cyc-linD2、S100钙结合蛋白P和E2F-5等在内的周期相关基因；RT-PCR实验证实STAT5诱骗寡核苷酸引起cyclinD2和E2F-5mRNA表达下调。进一步分析发现，这些基因的启动子区域均含有STAT5结合的一致性序列。结论STAT5诱骗寡核苷酸抑制K562细胞G-／s转换而影响细胞周期进程的作用机制，可能与cyclin D2和E2F-5等基因的表达下调相关。     

流式细胞术检测骨髓增生异常综合征细胞中RAP1GAP表达及其临床相关性

以往应用基因芯片对骨髓增生异常综合征（MDS）患者细胞的基因表达谱的研究发现,RAS蛋白超家族成员RAP1GAP转录水平被上调,并在MDS患者大量病例中应用定量RT—PCR得到证实。本研究探讨MDS细胞中RAP1GAP的表达及其与临床的相关性。应用流式细胞术检测19例MDS患者骨髓细胞内RAP1GAP的表达,并与非恶性血液病以及急性白血病患者骨髓细胞中RAP1GAP的表达进行比较。对RAP1GAP表达水平与MDS患者的血红蛋白水平,白细胞计数,血小板计数,骨髓细胞中原始细胞的百分数以及IPSS危险积分等临床指标之间的相关性进行了分析。结果发现,RAP1GAP的表达在MDS患者骨髓细胞中显著高于非恶性血液病或急性白血病的细胞内的表达（8．420±8．365％比2．974±4．750％或2．256±4．239％）。在MDS患者中,MDS—RA的RAP1GAP表达显著高于MDS—RAEB内的表达（11．637±9．067％比4．368±4．646％）。然而,在检测的MDS患者中RAP1GAP的表达水平与上述临床指标无确切的相关性。结论：RAP1GAP在MDS中的表达明显增高,RAP1GAP表达水平与临床实验室血液学参数及1PSS积分之间无相关性。RAP1GAP表达在MDS进展至AML中的作用及其临床意义值得进一步探讨。     

骨髓增生异常综合征患者间充质干细胞SDF-1基因的表达

本研究探讨骨髓基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓间充质干细胞(MSC)中的表达水平。采集MDS的骨髓标本,分离、培养和扩增MSC,观察细胞形态并进行表型鉴定;以实时定量RT-PCR法检测间充质干细胞SDF-1基因和内参照磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的表达水平,并与健康供者的表达水平相比较。结果发现,MDS患者骨髓间充质干细胞SDF-1基因的表达水平经GAPDH校正后为1.53±0.92,与对照组(5.51±0.99)相比差异非常显著(P<0.01)。结论:SDF-1基因在MDS患者骨髓间充质干细胞中的表达显著升高,SDF-1基因的异常表达可能影响MDS患者骨髓微环境的造血调控作用,是否可对MDS的发病机制及治疗提供新的思路值得进一步探讨。     

硫化砷作用后NB4细胞基因表达谱变化的研究

目的 利用基因表达谱芯片对MB4细胞在硫化砷作用前后基因表达的差异性进行比较。方法 用Cy3和Cy5两种不同的荧光染料通过逆转录瓜在将硫化砷处理前后的NB4细胞mRNA分别标记成两种探针，并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交，通过扫描、计算机软件分析，寻找经硫化砷作用后表达有差异的基因。结果 筛选出包括与细胞凋亡、DNA合成修复、蛋白翻译、细胞周期等相关的硫化砷作用前后表达有差异的基因共34条，其中6条表达上调，28条表达下调。结论 ABC50、PNAS－2、周期素G2可能参与硫化砷诱导NB4细胞凋亡的发生机制。     

p57kip2在初发MDS患者的表达及与SDF-1/CXCR4信号的关系

本研究旨在探讨初发骨髓增生异常综合征(MDS)患者抑癌基因p57kip2的表达及其与SDF-1/CXCR4信号的关系在MDS发病中的作用。应用实时荧光定量PCR检测67例初发MDS患者骨髓单个核细胞中p57kip2及CXCR4的表达,流式细胞术检测MDS患者骨髓CD34+细胞百分比,并选择18例正常人骨髓作为对照。在体外实验中探讨SDF-1/CXCR4信号对p57kip2表达的影响,比较其作用在正常及MDS患者中的差异。结果表明,MDS患者p57kip2表达均显著低于正常对照组(P<0.001),且与骨髓CD34+细胞百分比呈负相关(r=-0.458,P<0.001),染色体核型异常MDS患者p57kip2表达低于正常核型者(P=0.045);CXCR4的表达在MDS患者及对照组间无统计学差异,但与p57kip2表达呈正相关(r=0.652,P<0.001)。正常人中,SDF-1剂量依赖性地促进骨髓单个核细胞中p57kip2的表达,该作用能被AMD3100阻断;而在MDS患者BMMNC中,SDF-1不能诱导p57kip2表达增加。结论:抑癌基因p57kip2在初发MDS患者中低表达,可能与MDS发病相关。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓及外周血中WT1及PRAME基因的表达研究

本研究探讨WT1及PRAME基因在骨髓增生异常综合征患者骨髓和外周血中的表达情况以及与核型异常、病态造血、血红蛋白值之间的关系。收集2009年7月至2012年6月在我院初诊的240例贫血患者,其中MDS203例（RCUD15例,RCMD25例,RAEB161例,RAEB255例,MDS—U23例,MDS-AML24例）,AA18例,其他良性贫血15例,PNH4例和14例健康供者的骨髓标本,并收集其中78例患者及14例健康供者的外周血,分别检测骨髓和外周血中WT1及PRAME基因的表达水平。结果表明,WT1及PRAME在MDS骨髓及外周血中的表达均高于正常组、AA组及良性贫血组（BM：WT1：P=0．000,0．000,0．000,PRAME：P=0．048,0．000,0．064;PB：WT1：P=0．012,0．000,0．011,PRAME：P=0．020,0．004,0．003）,其中高危MDS患者WT1及PRAME的表达均高于低危组,AA及其他良性贫血组,且WT1及PRAME在骨髓和外周血中的表达水平呈现良好的相关性（WT1：r=0．6028,P=0．001;PRAME：r=0．7628,P=0．000）,WT1或PRAME在骨髓与外周血中阳性率一致（P=0．167）;另外,骨髓中WTl的表达水平与核型异常相关（P=0．049）。结论：MDS患者骨髓及外周血WT1和PRAME的表达较正常人、AA及其他良性贫血患者升高,且随着病情进展,其表达增加;WT1和PRAME基因的表达上调是MDS很好的分子标记,联合运用WT1和PRAME基因表达水平检测能为MDS的临床诊断及预后判断和微小残留监测提供有用信息,且在骨髓取材不便的时候可用外周血代替监测。     

三氧化二砷对急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡相关基因表达的影响

本研究采用微矩阵基因芯片技术探讨三氧化二砷（As2O3）对NB4细胞凋亡的相关基因表达谱的影响。As2O3作用NB4细胞48小时，用改进的TRlzOL试剂一步法抽提As2O3作用前后的NB4细胞总RNA；经逆转录．聚合酶链反应后用Cy3标记的脱氧三磷酸尿苷（Cy32dUTP）和Cy52dUTP两种不同的荧光染料，将As2O3作用前后的NB4细胞mRNA分别标记成两种DNA探针，并与载有一组凋亡相关基因的表达谱芯片进行杂交，扫描分析筛选As2O3作用前后NB4细胞表达差异的凋亡基因；采用逆转录实时定量聚舍酶链反应（RQ—PCR）检测p2l，survivin，cdc2及WeelHu等方法检测细胞凋亡。结果表明：从As2O3作用后NB4细胞中筛选出表达差异的凋亡相关基因共18条，包括p21，survivin，cdc2及WeelHu等，表达上调的有6条，表达下调有12条；p21、survivin、cdc2及WeelHu可能与As20，诱导NB-4细胞的分化和（或）凋亡有关。结论：As203介导的NB4细胞凋亡的发生机制中、p21、sur-vivin、cdc2及Weel可能发挥着重要作用。     

表达谱芯片技术在药物作用机制研究中的应用

目的 探讨表达谱芯片技术在研究药物作用机制中的价值。方法 建立荷NuTu-19卵巢癌的大鼠模型及相应对照,用罗勒多糖治疗50天,处死大鼠,以腹水量、腹腔脏器转移程度积分判断各组肿瘤生长及转移情况。提取癌组织总RNA,用RT—PCR逆转录合成cDNA,分别采用Cy3-dUTP、Cy5-dUTP标记对照组和药物组cDNA,与含有2000点的大鼠基因表达谱芯片杂交,杂交芯片扫描结果用ImaGene3．0软件分析,计算Cy3、Cy5两种荧光信号的强度比值。结果 对照组与药物组之间共有168条差异表达基因,表达差异在3倍以上的基因有65条,均为表达下调基因;表达差异在2倍以上的基因有103条,其中表达上调基因43条,下调基因60条。经归类分析,表达差异基因主要为：①肿瘤转移相关基因;②与免疫应答有关的基因;③与细胞能量代谢有关的酶类;④与药物代谢及敏感性有关酶类的基因;⑤与信号转导以及转录过程有关的基因等。结论 罗勒多糖可能通过抑制肿瘤代谢、调节肿瘤转移相关基因的表达等多种作用途径抑制肿瘤的转移,表达谱芯片技术可以快速确定药物作用的可能机制,并为进一步研究提供重要信息,加快药物的研发速度。     

Analysis of Gene Expression Pattern of Lumbar Intervertebral Disc Degeneration in Human

Intervertebraldiscdegenerationisthemainreasonofthe outbreakofvertebralcolumndegeneration.Theexpertsdomes ticandoverseahavestudiedthisdiseasefromtheanglesofanat omy,biochemistry,molecularbiologyandsoon.Butthedetails oftheintervertebraldiscdegenerationmechanismhavenotbeen explained.Inthisstudy,weadopt4096cDNAmicroarraysof humangenes,settingthedegeneratedintervertebraldiscfrom theclinicalsurgeryastheobjectstostudythecDNAmicroarray ofhumandegeneratedintervertebraldisc,andtosettlethefoun dationfo…