以天麻和钩藤为主的中药制剂干预体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠碱性成纤维细胞生长因子及其受体的表达

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子及其受体在体外模拟脑缺血再灌注损伤中的表达变化及以天麻和钩藤为主的中药制剂——抗呆Ⅰ号对其的影响。 方法：实验于2002-03／2004-04在科学实验中心完成。先分别进行大鼠大脑皮质星形胶质细胞和神经元的分离纯化培养及体外模拟脑缺血再灌注损伤模型的建立，然后分别进行下列实验：①按随机数字表法将传代后培养5d的星形胶质细胞分为正常对照组、缺血再灌注模型组和缺血用药组（应用抗呆Ⅰ号），在体外模拟脑缺血4h和再灌注3h，18h，24h，36h，48h和72h后行碱性成纤维细胞生长因子的免疫细胞化学染色。②用再灌注18h后收集的星形胶质细胞条件培养液、经抗呆Ⅰ号作用的星形胶质细胞条件培养液及星形胶质细胞条件培养液与抗呆Ⅰ号联合应用以1：5的浓度来培养损伤后的神经元。再对其培养的神经元行碱性成纤维细胞生长因子受体的免疫组化染色。 结果：①体外培养大鼠的大脑皮质星形胶质细胞在模拟脑缺血再灌注损伤后各时相点分泌碱性成纤维细胞生长因子的能力均显高于正常对照组（P〈0．05—0．01）；除再灌注72h外，其余各时相点缺血用药组碱性成纤维细胞生长因子的表达水平均显高于缺血再灌注模型组（P〈0．05—0．01）。②星形胶质细胞条件培养液组、经抗呆Ⅰ号作用的星形胶质细胞条件培养液组和联合应用组脑缺血再灌注损伤后各时相点的碱性成纤维细胞生长因子受体表达水平大多显高于缺血再灌注模型组（P〈0．05-0．01），均在再灌注18h时达到高峰，其作用强度为经抗呆Ⅰ号作用的星形胶质细胞条件培养液〉联合应用〉星形胶质细胞条件培养液。 结论：体外模拟脑缺血再灌注损伤使星形胶质细胞表达碱性成纤维细胞生长因子的能力增强，星形胶质细胞条件培养液能促进受损神经元碱性成纤维细胞生长因子受体的表达。抗呆Ⅰ号可增强受损神经组织的分泌功能，促进其损伤后的修复。     

脑缺血再灌注后神经细胞凋亡与碱性成纤维细胞生长因子及其受体表达的关系

背景:脑受到损害可诱导脑内碱性成纤维细胞生长因子表达增加,而成纤维细胞生长因子受体在细胞的增殖、分化、血管生成、骨骼形成等进程中起着重要作用。目的:观察大鼠脑缺血再灌注后碱性成纤维细胞生长因子及成纤维细胞生长因子受体1表达对神经细胞凋亡的影响。设计:随机分组设计、动物实验。单位:青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所。材料:选用28只成年健康雄性Wistar大鼠,体质量220～260g,清洁级,由山东大学实验动物中心提供。兔抗大鼠碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体1单克隆抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供。方法:实验于2005-05/12在山东省脑病防治重点实验室完成。①摸球法将大鼠随机分为实验组(n=24)和假手术组(n=4)。应用线栓法经左侧颈外-内动脉插线建立大脑中动脉闭塞再灌注模型,假手术组除不插线外,其余步骤同实验组。实验组大鼠于脑缺血1h再灌注6h、12h、1d、3d、7d、14d各时间点取4只大鼠进行标本取材,假手术组于术后24h取材。大鼠麻醉后断头完整取脑,切取视交叉后方约5mm的脑组织,连续冠状切片备用。②脑组织经苏木精-伊红染色,显微镜下观察大鼠神经细胞形态。③TUNEL法:细胞核出现棕黄色颗粒者为阳性着色,即凋亡细胞。高倍镜下在皮质区和纹状体区随机各取4个视野计数阳性细胞。④标本切片经兔抗大鼠bFGF和FGFR-1单克隆抗体染色,高倍镜下在皮质区和纹状体区随机各取4个视野计数阳性细胞。主要观察指标:各组大鼠神经细胞凋亡情况及碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体1表达情况。结果:纳入28只大鼠全部进入结果分析。①实验组大鼠脑缺血损伤区神经细胞数量明显减少,部分细胞出现核固缩、不规则,染色加深呈紫蓝色,核仁消失,并有许多散在的细胞碎片。②假手术组脑组织可见少量凋亡神经细胞,脑缺血后凋亡细胞明显增多,主要位于额顶叶皮质区和纹状体区。实验组大鼠缺血再灌注6h皮质区开始凋亡细胞逐渐增多,12h～3d凋亡细胞数较多,其中再灌注1d达高峰,3d开始下降,至14d时仍高于假手术组。纹状体区凋亡细胞的数量和变化趋势与皮质区相近(P>0.05)。③假手术组大鼠脑组织神经细胞碱性成纤维细胞生长因子均有微弱表达,阳性细胞数量较少,着色较浅。实验组大鼠脑缺血后神经细胞碱性成纤维细胞生长因子表达增强,主要位于皮质区和纹状体区,实验组大鼠脑缺血再灌注后6h神经元即出现bFGF的表达,随着再灌注时间的延长逐渐增强,阳性细胞增多,着色加深,再灌注1～3d达高峰,之后逐渐减弱,至再灌注14d,皮质区和纹状体区bFGF表达分别为(5.01±1.71),(5.21±1.62)个/视野,仍高于假手术组[(2.03±1.73),(2.46±1.38)个/视野,P<0.05]。④假手术组脑组织可见到少量着色较浅的FGFR-1阳性细胞;脑缺血再灌注6h后皮质区和纹状体区成纤维细胞生长因子受体1阳性细胞数开始增加,至再灌注1～3d最多,3d后阳性细胞逐渐减少,至14d时皮质区和纹状体区成纤维细胞生长因子受体1阳性细胞数分别为(5.01±1.41),(5.20±1.33)个/视野,高于假手术组[(2.25±1.67),(2.32±1.61)个/视野,P<0.05]。结论:脑缺血再灌注后,在皮质区和纹状体区可能通过激活内源性碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-1的表达,来抑制神经细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞内游离钙的影响

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对大鼠脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞内游离钙浓度 [Ca2 + ]i 的影响。方法　用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,采用Fura 2 /AM双波长荧光光度法检测脑组织悬液内 [Ca2 + ]i。结果　缺血再灌注组细胞 [Ca2 + ]i 显著高于假手术组 ,bFGF组细胞 [Ca2 + ]i明显低于缺血再灌注组。结论　bFGF可通过减轻脑缺血损伤后脑细胞内钙超载程度来发挥抗脑缺血作用。     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对肠缺血再灌注大鼠肝脏内源性碱性成纤维细胞生长因子及其受体表达的影响

目的：通过观察外源性碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对缺血 再灌注大鼠肝脏内源性ｂＦＧＦ及碱性成纤维细胞生长因子受体（ＦＧＦＲ１）表达水平的影响,探讨ｂＦＧＦ调控内脏损伤修复的分子机制。方法：采用大鼠肠系膜上动脉夹闭模型,将动物随机分为假手术组、缺血即刻组、外源性ｂＦＧＦ治疗组及未治疗的再灌注６、２４ 和４８小时组。ｂＦＧＦ和ＦＧＦＲ１ 的表达水平采用免疫组织化学ＳＰ方法测定。结果：缺血 再灌注损伤后内源性ｂＦＧＦ和ＦＧＦＲ１ 表达水平均明显提高,分别在再灌注６小时和２４ 小时达峰值,４８小时后下降。应用外源性ｂＦＧＦ治疗后,在组织学损伤得到明显改善的同时,ｂＦＧＦ表达水平也较非治疗组明显提高,而ＦＧＦＲ１ 的表达水平无变化。结论：缺血 再灌注损伤诱导了内源性ｂＦＧＦ和ＦＧＦＲ１ 的表达,而外源性ｂＦＧＦ可能通过上调内源性ｂＦＧＦ的表达或其自身与ＦＧＦＲ１ 结合,调控肝损伤后的组织修复。     

碱性成纤维细胞生长因子对鼠缺血再灌注视网膜神经细胞凋亡及调控基因蛋白表达的干预

背景：碱性成纤维细胞生长因子是一种具有广泛神经活性的多肽生长因子，能保护神经元，促进神经生长。有证据证实碱性成纤维细胞生长因子可治疗视网膜缺血再灌注损伤。 目的：建立视网膜缺血再灌注损伤动物模型，分析碱性成纤维细胞生长因子对其视网膜细胞凋亡及调控基因蛋白表达的影响。 设计：随机分组，验证性实验。 单位：青岛大学医学院附属医院眼科。 材料：实验于2002-04／2003—12在青岛大学医学院眼科病理研究室完成。选择健康Wistar大鼠28只，随机取4只作为正常对照组，其余24只大鼠的左眼作为生理盐水对照组，右眼作为碱性成纤维细胞生长因子组。 方法：生理盐水对照组、碱性成纤维细胞生长因子组采用前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型。生理盐水对照组从玻璃体腔注人生理盐水12μL，碱性成纤维细胞生长因子组从玻璃体腔注入碱性成纤维细胞生长因子12μL，4只／次。正常对照组不给药。分别于缺血1h再灌注1，6，12，24，48，72h6个时间点采用原位缺口末端标记、免疫组织化学染色检测凋亡细胞的表达，计算凋亡指数。 主要观察指标：①各组大鼠再灌注后不同时间点视网膜组织原位凋亡细胞检测结果。②各组大鼠再灌注后不同时间点视网膜组织中Fas、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-2的表达。 结果：①缺血再灌注大鼠不同灌注时间下视网膜组织凋亡指数的比较：正常对照组大鼠视网膜中未见凋亡细胞。与生理盐水对照组比较，碱性成纤维细胞生长因子组于缺血1h再灌注1，6，12，24，48，72h6个时间点凋亡指数均明显降低，且再灌注12，24，48h时差异显著（t=5，362～5．595．P〈0．05）。②缺血再灌注大鼠不同灌注时间下Fas表达的变化：正常对照组大鼠视网膜中几乎无Fas表达。与生理盐水对照组比较，碱性成纤维细胞生长因子组于缺血1h再灌注1，6，12，24，48，72h6个时间点Fas表达均明显降低，且再灌注6，12，24h时差异显著（t=3．954～9．327．P〈0．05）。③缺血再灌注大鼠不同灌注时间下半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-2表达的变化：正常对照组大鼠视网膜中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-2蛋白不表达。与生理盐水对照组比较，碱性成纤维细胞生长因子组于缺血1h再灌注6，12，24，48，72h半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-2表达均明显降低（t=4．125-15．641，P〈0．05）。 结论：碱性成纤维细胞生长因子可显著抑制凋亡基因Fas及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-2在视网膜缺血再灌注损伤中的表达，从而减少神经节细胞凋亡，对视网膜缺血再灌注损伤起到治疗作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑细胞内游离钙变化的影响

背景：碱性成纤维细胞生长因子可促进体外培养的神经元存活及突起生长，拮抗兴奋性氨基酸毒性，对中枢神经系统功能恢复起重要作用，能否通过影响脑细胞内游离钙离子浓度对缺血脑组织起保护作用。目的：从细胞水平探讨碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时神经细胞内游离Ca^2＋浓度变化的影响。设计：完全随机对照实验。单位：郑州大学第二附属医院神经内科。材料：实验于2003—08／12在郑州大学第二附属医院神经内科实验室完成。24只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和碱性成纤维细胞生长因子治疗组，每组8只。方法：缺血再灌注组及碱性成纤维细胞生长因子治疗组采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型；假手术组除不插线外，余同其他两组。碱性成纤维细胞生长因子治疗组于缺血后即刻腹腔注射10μg／kg碱性成纤维细胞生长因子，其余两组腹腔注射等量生理盐水。各组大鼠于缺血再灌注24h检测脑细胞游离钙浓度。主要观察指标：各组大鼠缺血再灌注24h脑细胞游离钙浓度。结果：24只大鼠全部进入结果分析。缺血再灌注组明显高于假手术组[（673.46&;#177;18.44），（224.71&;#177;10．58）nmol／L，（F=1329.06，P〈0.01）1．碱性成纤维细胞生长因子治疗组明显低于缺血再灌注组[（378.37&;#177;21.08）．（673.46&;#177;18.44）nmol／L（F=1329．06，P〈0．01）]。结论：碱性成纤维细胞生长因子能明显抑制大鼠缺血再灌注后脑组织内游离钙水平，起到稳定细胞膜，防止细胞内钙超载的作用。     

血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子在缺血预处理大鼠局灶性脑缺血再灌注区域的表达

背景:脑缺血预处理可增加碱性成纤维细胞生长因子的表达,可能导致脑缺血耐受的产生.大鼠大脑中动脉缺血再灌注给予血管内皮生长因子能够起到神经保护作用.目的:观察缺血预处理对缺血再灌注大鼠血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为缺血预处理组、模型组和假手术组.缺血预处理及模型组线栓法阻塞大脑中动脉制备脑缺血模型.预处理组在脑缺血-再灌注前3 d用插入尼龙线阻塞大脑中动脉,缺血2 h后再灌注22 h.模型组第一次手术将线栓前推5 mm,不阻断血流,其他同预处理组.假手术组仪插入尼龙线不阻塞大脑中动脉.用苏木精-伊红染色法观察3组间神经细胞变化.用抗生物素-生物素-过氧化物酶复合物法检测各组血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子蛋白的表达.分别比较3组神经功能评分、光镜下脑缺血再灌注区神经细胞形态、血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的表达.结果与结论:与模型组比较,预处理组神经功能评分明显低于模型组(P＜0.01).光镜下观察结果显示,与模型组比较,预处理组缺血面积及缺血程度均减轻,血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子表达均明显升高(P＜0.05).结果提示缺血预处理可能通过增强血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子而对缺血再灌注大鼠神经细胞起保护作用.     

碱性成纤维细胞生长因子及WTp53在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法:随机将28只大鼠分为正常组和手术组,其中手术组大鼠左眼为缺血再灌注组,右眼为治疗组(玻璃体腔内注射bFGF),观察再灌注后不同时间段1,6,12,24,48,72h视网膜组织中细胞凋亡情况及WTp53的表达变化。前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型。应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法检测视网膜组织中凋亡细胞数,免疫组织化学SABC法检测视网膜组织中WTp53蛋白的表达。结果:视网膜神经细胞的凋亡出现于再灌注后6h,并逐渐递增,24h达到高峰,48h开始下降,72h组不明显。WTp53蛋白表达改变与凋亡的神经细胞改变基本一致。治疗组各观察指标表达变化规律与缺血再灌注组基本一致,但凋亡细胞数目在6～48h犤6,12,24,48h分别为(358.3±43.4),(859.5±12.0),(1006.5±49.4),(695.7±72.2)个/mm2犦明显低于缺血再灌注组犤(444.8±89.7),(1053.0±96.1),(1254.0±164.8),(891.0±87.2)个/mm2犦(t=2.9131～4.299,P均<0.05);WTp53表达在6～48h缺血再灌注组显著下降(t=3.342～4.781,P<0.05;t=52.586,P<0.01)。结论:WTp53参与视网膜缺血-灌注损伤,促进神经节细胞的凋亡;bFG     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的调控

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在局灶性脑缺血再灌注损伤中对缺血后神经细胞凋亡的调控机制及作用。方法 在缺血及再灌注不同时间点,采用免疫组化及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测缺血中心区及半影区内bFGF蛋白及mRNA表达的动态变化。结果 缺血半影区bFGF蛋白及mRNA达表明显增加,缺血中心区表达略有增加。结论 bFGF的表达趋势与缺血再灌注损伤时神经细胞凋亡趋势相符,说明bFGF对神经细胞有保护和修复作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑细胞内游离钙变化的影响

背景:碱性成纤维细胞生长因子可促进体外培养的神经元存活及突起生长,拮抗兴奋性氨基酸毒性,对中枢神经系统功能恢复起重要作用,能否通过影响脑细胞内游离钙离子浓度对缺血脑组织起保护作用.目的:从细胞水平探讨碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时神经细胞内游离Ca2+浓度变化的影响.设计:完全随机对照实验.单位:郑州大学第二附属医院神经内科.材料:实验于2003-08/12在郑州大学第二附属医院神经内科实验室完成.24只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和碱性成纤维细胞生长因子治疗组,每组8只.方法:缺血再灌注组及碱性成纤维细胞生长因子治疗组采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型;假手术组除不插线外,余同其他两组.碱性成纤维细胞生长因子治疗组于缺血后即刻腹腔注射10μg/kg碱性成纤维细胞生长因子,其余两组腹腔注射等量生理盐水.各组大鼠于缺血再灌注24 h检测脑细胞游离钙浓度.主要观察指标:各组大鼠缺血再灌注24 h脑细胞游离钙浓度.结果:24只大鼠全部进入结果分析.缺血再灌注组明显高于假手术组[(673.46±18.44),(224.71±10.58)nmol/L,(F=1 329.06,P＜0.01)],碱性成纤维细胞生长因子治疗组明显低于缺血再灌注组[(378.37±21.08),(673.46±18.44)nmol/L(F=1 329.06,P＜0.01)].结论:碱性成纤维细胞生长因子能明显抑制大鼠缺血再灌注后脑组织内游离钙水平,起到稳定细胞膜,防止细胞内钙超载的作用.     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠肾脏缺血/再灌注金属硫蛋白含量的影响

目的在大鼠离体肾脏缺血／再灌注（I／R）损伤模型上，观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对肾脏金属硫蛋白（MT）的影响，探讨bFGF肾脏保护作用的可能机制。方法复制离体肾脏I／R损伤模型。预先24h应用bFGF，以[Cd^109]-血红素饱和法测定肾脏MT含量，同时测定血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果肾缺血组、缺血／再灌注组及bFGF治疗组血浆SOD均非常显著低于对照组，而MT、MDA非常显著高于对照组（P〈0．01）；bFGF＋缺血组血浆SOD较缺血组略高，MT、MDA较缺血组略低，两者差异无显著性（P〉0．05）；bFGF＋缺血／再灌注组SOD较缺血／再灌注组非常显著升高，MT、MDA较缺血／再灌注组非常显著降低（P〈0．01）。结论MT参与了bFGF对大鼠离体肾脏缺血／再灌注损伤肾脏保护作用。     

脑缺血再灌注后bFGF和FGFR表达及藻蓝蛋白的干预作用

目的：观察脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及其受体（FGFR）的表达，探讨藻蓝蛋白对脑缺血损伤的干预作用。方法：成年健康雄性Wistar大鼠52只，应用线栓法建立大脑中动脉阻塞再灌注（MCAO／R）模型，藻蓝蛋白进行治疗，TUNEL方法观察脑缺血再灌注后神经细胞凋亡，免疫组化检测bFGF和bFGFR的表达。结果：脑缺血再灌注后6h，皮质区和纹状体区神经细胞凋亡逐渐增加，至第1d达高峰，第3d开始下降，第14d时仍高于假手术组；藻蓝蛋白治疗组凋亡细胞的变化与对照组相似，同一时间点相比较，均显著低于对照组。脑缺血再灌注后皮质区和纹状体区神经元bFGF和FGFR表达增强，再灌注6h神经细胞即出现bFGF表达，第1d达高峰，后逐渐减弱，至第14d仍高于假手术组；藻蓝蛋白组神经细胞bFGF和FGFR表达的变化趋势与对照组相似，同一时间点比较，均明显高于对照组。结论：藻蓝蛋白可能通过促进bFGF和FGFR的表达，激活内源性神经保护机制而发挥抗凋亡作用。     

胰岛素样生长因子及其受体对脑缺血再灌注后大鼠神经行为功能的影响

背景:研究表明胰岛素样生长因子作为一种神经营养因子,对脑缺血再灌注损伤有重要的保护作用,胰岛素样生长因子水平与缺血性脑卒中发作有关,脑缺血再灌注后胰岛素样生长因子1及其受体表达对神经行为功能的影响有待研究。目的:观察胰岛素样生长因子1及其受体表达对大鼠脑缺血再灌注后神经功能的影响。设计:随机对照观察。单位:青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所。材料:实验于2005-05/12在山东省脑病防治重点实验室完成。成年健康雄性Wistar大鼠28只,体质量220～260g,清洁级。方法:摸球法随机将大鼠分为实验组(n=24)和假手术组(n=4)。应用线栓法经左侧颈外-内动脉插线建立大脑中动脉闭塞再灌注模型,假手术组除不插线外,其余步骤同实验组。①神经功能测试:实验组大鼠分别于脑缺血1h再灌注6h、12h、24h、3d、7d、14d按Bederson评分法评分(0分:无神经功能缺失,1分:前爪曲屈,2分:不能够对抗来自对侧的推力,3分:行走时转圈,4分:摇动,5分:神志恍惚)。②标本的采集和处理:实验组分别于脑缺血1h再灌注后6h、12h、24h、3d、7d、14d取材,假手术组于术后24取材。将大鼠麻醉,断头取脑,切取视交叉后方约5mm的脑组织,切片(厚度5μm),每隔10片抽取1片,帖于多聚赖氨酸处理的玻片,晾干备用。③甲苯胺蓝组织化学染色后观察各组大鼠脑组织神经细胞形态观察。④胰岛素样生长因子1及其受体表达检测:标本采用免疫组织化学技术检测大鼠皮质区和纹状体区胰岛素样生长因子1及其受体表达,即高倍镜下随机各取4个视野进行阳性细胞记数。主要观察指标:①神经行为功能测试结果。②各组大鼠脑组织神经细胞形态观察。③大鼠皮质区和纹状体区胰岛素样生长因子1及其受体表达情况比较。结果:大鼠28只均进入结果分析。①神经行为功能测试结果:实验组大鼠缺血再灌注7,14d神经行为功能评分分别为(1.50±058),(1.50±0.78)分,低于再灌注6h[(3.00±0.00),P<0.05]。②各组大鼠脑组织神经细胞形态观察结果:脑损伤区神经细胞周围出现明显的周隙,形态不规则、出现核固缩,细胞染色呈紫蓝色,核仁消失,并有许多散在的细胞碎片。③大鼠皮质区和纹状体区胰岛素样生长因子1及其受体表达情况比较:实验组大鼠缺血再灌注6h、12h、24h、3d、7d皮质区胰岛素样生长因子1阳性细胞数分别为(8.75±2.06),(11.13±1.14),(19.75±3.18),(17.38±3.11),(11.23±2.28)个,高于假手术组[(3.88±1.46),P<0.05],纹状体区分别为(8.25±2.21),(11.34±2.21),(18.23±2.64),(18.56±2.34),(11.31±2.14)个,高于假手术组[(4.12±2.24)个,P<0.05];实验组大鼠缺血再灌注6h、12h、24h、3d、7d皮质区胰岛素样生长因子-1受体阳性细胞数分别为(7.63±1.50),(10.50±2.34),(15.55±3.12),(15.37±3.01),(8.86±2.75)个,高于假手术组[(4.13±1.81),P<0.05]。纹状体区分别为(8.33±2.31),(10.24±2.09),(14.72±2.17),(14.24±2.77),(8.38±2.05)个,高于假手术组[(3.76±2.35)个,P<0.05]。结论:脑缺血再灌注后神经功能明显受损,脑组织胰岛素样生长因子1受体及其受体主要在皮质和纹状体区表达,再灌注12h～7d持续高表达,1～3d达高峰,但在再灌注14d后表达明显减少,提示胰岛素样生长因子及其受体早期表达的神经功能恢复作用。     

提睾肌再灌注损伤模型碱性成纤维细胞生长因子变化与丹参的干预效应

目的:观察丹参对缺血再灌注损伤提睾肌模型碱性成纤维细胞生长因子变化的影响,以及丹参干预后血清中超氧化物歧化酶活性、丙二醛浓度的变化。方法:实验于2006-02/09在福建中医学院骨伤系创伤修复与重建实验室及福建师大生命科学院实验室完成。实验分组:选用清洁级雄性SD大鼠84只,手术造成左提睾肌缺血再灌注损伤模型,按随机数字表法分为丹参组(n=42)与生理盐水组(n=42),缺血再灌注前30min腹腔分别注射相同剂量的丹参注射液(正大青春宝制药厂,主要成分:丹参,含生药1.5g/mL,批号:0408113,给药量按人剂量与大鼠剂量之间的换算方法,1.809g/kg)、生理盐水。分别于缺血再灌注后10,20,30,40,50,60,90min时抽取腹主动脉血,每个时相点6只。实验评估:①采用考马斯亮兰蛋白法和酶链免疫吸附法测定提睾肌碱性成纤维细胞生长因子含量。②采用黄嘌呤氧化酶法测定血清中超氧化物歧化酶活性。③采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛浓度。结果:纳入大鼠84只,均进入结果分析。①提睾肌碱性成纤维细胞生长因子含量:再灌注10,20min丹参组与生理盐水组无明显差别,再灌注30,40,50,60,90min丹参组单位蛋白中碱性成纤维细胞生长因子含量高于生理盐水组,差异有显著性意义(t=2.415,2.292,4.605,3.595,5.196,P<0.05,0.01)。②血清超氧化物歧化酶活性:再灌注开始10min时,丹参组与生理盐水组超氧化物歧化酶活性无明显差异;再灌注20,30,40,50,60,90min丹参组超氧化物歧化酶活性高于生理盐水组,差异均有显著性意义(t=2.949,2.327,4.050,2.958,9.142,6.188,P<0.05,0.01)。③血清丙二醛浓度:再灌注10,20min时,丹参组与生理盐水组丙二醛浓度无明显差异,再灌注30,40,50,60,90min丹参组丙二醛浓度低于生理盐水组,差异有显著性意义(t=3.164,2.697,4.461,2.587,3.002,P<0.05,0.01)。结论:丹参能促进再灌注损伤中骨骼肌碱性成纤维细胞生长因子的表达,减少骨骼肌缺血再灌注损伤过程中产生的丙二醛并促进血清中超氧化物歧化酶的分泌,这可能亦是丹参防治缺血再灌注损伤的机制之一。     

大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤血管内皮细胞生长因子表达的研究

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)在局灶性脑缺血-再灌注损伤中的表达及作用。方法采用免疫组化染色、原位杂交技术检测缺血3h以及缺血3h、再灌注3、6、24、48和72h大脑中动脉栓塞模型大鼠脑组织VEGF蛋白及mRNA表达。结果正常对照组脑组织有极低水平的VEGF表达，脑缺血后表达主要位于半影区，随缺血及缺血-再灌注时间延长，中心区由表达增强降低至正常水平，半影区表达逐渐增强。结论内源性VEGF表达增强，对局灶性脑缺血-再灌注损伤具有保护作用。