THE BI-DIRECTIONAL REGULATION OF FILAMIN ON THE ATPase ACTIVITY OF MOOTH MUSCLE MYOSIN

Objective. The aim of this study is to investigate the functional relationship between filamin, a known actin bind-ing protein, and myosin and the effects of filamin on the interaction between myosin and actin. Methods. Ultra-centrifugation method was used to investigate the binding of filamin to both phosphorylated and unphosphorylated myosins. Mg-ATPase activities of both phosphorylated and unphosphorylated myosins in the presence and absence of aefn were measured to observe the effects resulted from fdamin-actn and filamin-myosin interactions. Results. It was found that fiiamin is also a myosin binding protein. Filamin inhibited the actin activated Mg-ATPase activity of phosphorylated myosin and stimulated Mg-ATPase of phosphorylated myosin in the absence of actin;in addition, filamin stimulated Mg-ATPase activity of unphosphorylated myosin in both the presence or absence of actin.     

EFFECTS OF CALDESMON, CALPONIN, AND TROPOMYOSIN ON THE MG^2＋ -ATPase ACTIVITIES OF SMOOTH MUSCLE MYOSIN

Objective To test whether in the absence of actin, actin-binding proteins such as caldesmon, calponin, and tropomyosin interact with the myosin of unphosphorylation, Ca^2 -dependent phosphorylation (CDP), and Ca^2 -independent phosphorylation (CIP) and stimulate myosin Mg^2 -ATPase activities. Methods Mg^2 -ATPase activities were measured to evaluate the effects of caldesmon, calponin, and tropomyosin on the myosin in unphosphorylation, CDP by myosin light chain kinase (MLCK), and CIP by MLCK. (1) At different incubation-time, i.e., 5, 10, 20, 40, and 60 minutes, the highest Mg^2 -ATPase activity was observed when myosin was in the state of CDP, the medium was CIP of myosin, and the lowest was the unphosphorylated myosin. (2) In the absence of caldesmon, calponin, and tropomyosin, the Mg^2 -ATPase activities from high to low were in the following order: CDP, CIP, and unphosphorylated myosin. However, in the presence of caldesmon, calponin, and tropomyosin, the order of relative value of Mg^2 -ATPase activities from high to low was unphosphorylated, CIP, and CDP of myosin respectively compared to the corresponding controls. Conelusions The results propose that caldesmon, calponin, and tropomyosin are capable of stimulating Mg^2 -ATPase activity of smooth muscle myosin in Ca^2 -independent manner, since Ca^2 is not obligating for the stimulating effects of the three proteins. The common characteristic of the three proteins is that when myosin activities are low, their activations are relatively strong and this property might be involved in smooth muscle tension keeping.     

胶原刺激后血小板细胞骨架成分分布的变化

将正常血小板与用胶原刺激的血小板的胞浆部分与膜部分进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳(PAGE),并测定各部分的肌动蛋白激活的肌球蛋白Mg～(2+)-ATPase活力(AM-Mg～(2+)-ATPase)后发现:正常血小板膜部分所连接的肌球蛋白与肌动蛋白分别占血小板中此两种蛋白总量的26.40％)和31.55％。血小板受胶原刺激后则分别变为87.83％和42.17％。胞浆中的AM-Mg～(2+)-ATPase活力从正常的1.43±1.37nmolPi/min(每毫克肌球蛋白)升高到刺激后的4.66±1.51nmol Pi/min(每毫克肌球蛋白)。这些结果表明;血小板的胶原受体被结合后,有大量肌球蛋白和较少量肌动蛋白连接到胞膜上。另一方面,胞浆中的AM-Mg～(2+)-ATPase活力也明显增加。这些变化可能与血小板的形态变化和功能变化有密切关系。     

敌敌畏急性中毒小鼠脑ATP酶的活性检测

目的 观察小鼠敌敌畏急性中毒后脑组织各区域的Ca^2＋／Mg^2＋-ATP酶和Na^＋／K^＋-ATP酶的活性水平，探讨敌敌畏中毒对中枢神经系统的影响。方法雄性小鼠16只．随机分成中毒组和对照组，中毒组按25mg／kg腹腔注射敌敌畏，对照组注射生理盐水。25min后处死，分别测定大脑、小脑和脑干组织内的Ca^2＋／Mg^2＋-ATP酶、N^a＋／K^＋-ATP酶的活性水平。结果脑组织中的ATP酶的活性水平都有不同程度的降低。在小脑，敌敌畏中毒组的两种ATP酶活性分别是对照组的62．11％。47．56％。在脑干，中毒组的两种ATP酶活性分别是对照组的67．72％，64．83％。在大脑的Ca^2＋／Mg^2＋-ATP酶和Na^＋／K^＋-ATP酶活性水平有下降。但两组相比无统计学差异性。结论敌敌畏中毒引起脑组织Ca^2＋／Mg^2＋-ATP酶和Na^＋／K^＋-ATP酶活性水平降低．共同导致脑细胞内钙稳态失衡。影响了神经递质的释放。     

非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞膜ATP酶活力和细胞内离子水平变化

测定20例正常人及40例 NIDDM 患者红细胞膜 ATP 酶活力和红细胞内离子浓度。结果NIDDM 患者 Na~+-K~+-ATP 酶、Ca~(2+)-ATP 酶活力明显低于正常人(P 均<0.001),Mg~(2+)-ATT 酶活力无明显改变(P>0.05);NIDDM 患者红细胞内[Na~+]、[Ca~(2+)]明显高于正常人(P 分别<0.001和0.01),[Mg~(2+)]明显低于正常人(P<0.001),[K~+]无明显变化(P>0.05)。上述变化在无血管病者就已出现,有血管病者更加明显。     

膀胱出口梗阻后逼尿肌收缩功能异常机制的研究

目的 探讨人膀胱出口梗阻(bladder outlet obstruction,BOO)后逼尿肌在收缩力、形态学以及酶学上的变化及意义.方法 采集前列腺增生症患者和无BOO者各20例膀胱逼尿肌作为研究对象.测定收缩力、电镜观察超微结构以及用荧光分光度计分别对MDA含量和SOD、NOS、Ca2+ Mg2+ ATP酶的活力进行测定.结论 BOO组逼尿肌收缩力(0.347±0.107)g明显低于对照组(0.598±0.167)g.BOO组逼尿肌中检测到的SOD(13.908 ±1.430)U/mg protein、NOS(1.274 ±0.137)U/mg protein以及Ca2+Mg2+ATP酶(0.903±0.266)μmol Pi/mg protein 活力明显低于对照组逼尿肌的检测值(21.444±1.657)U/mg protein、(1.871±0.240)U/mg protein、(1.523±0.329)μmol Pi/mg protein,BOO组逼尿肌中检测到的MDA含量(2.488±0.383)nmol/mg protein要高于对照组中的检测值(1.872±0.170)nmol/mg protein.电镜观察到BOO组逼尿肌:平滑肌细胞(SMC)扭曲变形,肌丝走行紊乱,密体、密斑数量明显减少;肌细胞内出现大量溶酶体;SMC内线粒体空泡变性或絮状变性,粗面内质网脱颗粒;细胞核同缩,核膜表面呈锯齿状,核内高密度染色质凝聚堆积,已出现细胞调亡改变.结论缺血再灌注损伤参与人逼尿肌功能失代偿的演化过程,以致逼尿SLSL细胞超微结构出现衰亡的改变,收缩力受损,收缩能力减弱,这为保护BOO后逼尿肌收缩功能提供了新思路.     

分泌抗心脏肌凝蛋白及其轻链单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

心脏肌凝蛋白(Cardiac myosin,CM)及其轻链(CM—LC)是心肌特有的收缩蛋白质,其化学结构和免疫学性质均与其它组织来源者不同。当急性心肌梗塞(AMI)造成心肌细胞缺血坏死时,血清CM—LC水平升高。故可用于临床诊断AMI。这一诊断指标的特异性、敏感性、与梗塞灶大小     

PKC-ε、h1 calponin在不同孕期小鼠子宫平滑肌中的表达及意义

目的 探讨蛋白激酶C epsilon( protein kinaseC epsilon,PKC-ε)及碱性调宁蛋白(h1 calponin,h1 CaP)在妊娠小鼠子宫平滑肌细胞中总蛋白和磷酸化蛋白的时空表达变化及与足月临产、早产的关系和机制.方法 建立小鼠酒精灌胃早产模型.按妊娠阶段的不同,将小鼠分为未孕组、早孕组(孕7 d)、中孕组(孕12 d)、晚孕组(孕18 d)、足月产组和早产组,每组各10例.应用Western blot检测子宫平滑肌中PKC-ε、磷酸化PKC-ε (pPKC-e)、h1 CaP、磷酸化h1 CaP( ph1 CaP)的蛋白表达.结果 足月产组和早产组PKC-ε蛋白表达均显著高于未孕、早孕、中孕组(P＜0.01),晚孕组、足月产组、早产组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)；足月产组和早产组h1 CaP蛋白表达均显著高于未孕、早孕、中孕组(P＜0.01),晚孕组、足月产组、早产组相比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；足月产组和早产组pPKC-ε/PKC-ε值均显著高于未孕、早孕、中孕组及晚孕组(P＜0.01),足月产组与早产组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)；足月产组和早产组ph1CaP/h1 CaP值均显著高于未孕、早孕、中孕组及晚孕组(P＜0.01),足月产组与早产组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)；pPKC-e/PKC-ε的变化与ph1 CaP/h1 CaP的变化呈正相关(r=0.73,P＜0.05).结论 PKC-ε及h1 CaP蛋白表达在临产前即达到最高峰,pPKC-ε及ph1 caP水平在临产时达最高峰.PKC-ε可通过激活h1 CaP参与足月产及早产的分娩发动.     

心肌肌凝蛋白诱导BALB/c小鼠发生自身免疫性心肌炎

目的:建立BALB/c小鼠实验性自身免疫性心肌炎模型.方法:采用差速离心、分级饱和硫酸铵沉淀和DEAE-Sephadex A-50离子交换层析纯化等方法自猪心中提取并纯化心肌肌凝蛋白,经SDS-PAGE和Western印迹方法鉴定.以此蛋白免疫遗传易感的BALB/c小鼠,建立自身免疫性心肌炎模型.结果:97％(35/36)小鼠在免疫后第14天出现不同程度的心肌炎病理改变,主要表现为心肌间质单个核细胞浸润、肌纤维排列紊乱和肌浆溶解.免疫鼠血清肌钙蛋白I水平升高,并出现较高滴度的抗肌凝蛋白自身抗体.结论:猪心肌肌凝蛋白可以诱导BALB/c小鼠出现典型的自身免疫性心肌炎.     

风湿性心脏病患者心肌肌球蛋白轻链的变化

目的:研究风湿性心脏病(RHD)心衰时心室肌中肌球蛋白轻链(VMLC)的变化与心脏重塑的关系。方法:采用Western blotting技术对13例RHD心衰患者及7例意外死亡者VMLC-1,VMLC-2含量进行定量分析。结果:RHD组VMLC-1,VMLC-2含量均显著低于正常对照组,以VMLC-2含量下降最明显,VMLC-1/VMLC-2比值在1∶0.95-1∶0.61。结论:RHD心衰发展过程中涉及了VMLC-1,VMLC-2蛋白水平的改变,这种改变可能对心功能的进行性恶化有直接影响。     

偶联因子6抑制肌球蛋白轻链磷酸化增加跨内皮细胞电阻

目的探讨偶联因子6（CF6）对人肺微血管内皮细胞（LMVEC）跨内皮细胞电阻（TER）的影响。方法体外培养LMVEC,于不同时间给予不同剂量（高剂量：10^（-6） mol/L,低剂量10^（-6） mol/L）的CF6刺激,通过细胞电阻测定仪（ECIS）及Western blot观察其对TER及相关活化信号分子的影响。结果与对照组比较,CF6刺激组细胞形态无明显改变,但TER值显著增加,随着CF6孵育时间的增加,TER值明显增加,TER（ohm）峰值出现在15h后（1.39±0.02 vs 1.00±0.02,P〈0.01）,增加观察时间至24h发现TER维持在高水平（1.350±0.018 vs 1.000±0.023,P〈0.01）。用10^（-6）和10^（-7）mol/L的CF6孵育,TER虽剂量增加,但是组间差异无统计学意义（1.39±0.02 vs 1.37±0.01）。CF6刺激组明显抑制磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）水平,但是高、低剂量组间差异无统计学意义（P〉0.05）。并且和TER测定结果相似,CF6抗体能够中和CF6刺激引起的p-MLC水平降低。结论 CF6可能通过抑制细胞骨架运动调节蛋白p-MLC水平,增加TER,参与内皮细胞渗透性的调节。     

氯酯醒对小鼠缺血再灌注脑损伤的保护作用研究

目的：采用小鼠双侧颈总动脉缺血再灌注模型,观察氯酯醒对缺血再灌注脑损伤的改善作用。方法：重复缺血10min于再灌后2、24、48h分别取脑组织,密度梯度法检测脑组织含水量的变化,生化测量突触膜Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活性。HE染色观察组织形态学改变。结果：急性缺血再灌注能引起小鼠脑组织水肿,伴随着Na^＋-K^＋-ATP酶和Ca^2＋-ATP酶活性降低,以及皮层海马神经元损害。术前3d预服氯酯醒（100mg／kg,1次／d）,可显著减轻脑组织水肿,提升异常降低的ATP酶活力,改善神经元结构异常。结论：氯酯醒的神经元保护作用可能与抑制脑水肿的发生,改善脑缺血后能量代谢失衡和钙离子超载等作用有关。     

肌球蛋白轻链激酶在烧伤大鼠血清引起的内皮细胞骨架改变过程中的作用

目的观察烧伤大鼠血清刺激人脐静脉内皮细胞株ECV-304引起的纤维状肌动蛋白在细胞内分布变化的时间效应以及肌球蛋白轻链激酶在其中的作用。方法用烧伤大鼠血清分别孵育细胞30 min、1 h、2 h、4 h和6 h。或在烧伤血清作用30 min之前或之后使用5 μmol/L的ML-7作用30 min。使用罗丹明标记的鬼笔环肽探针特异性结合并显示细胞内的纤维状肌动蛋白,并在Nikon TE-300荧光显微镜下观察照相。结果正常情况下,纤维状肌动蛋白主要分布在内皮细胞内的外周膜部位。使用烧伤大鼠血清进行30 min~12 h的刺激后,内皮细胞内可观察到明显的应力纤维形成,并且随着刺激时间的延长而增强。可以通过使用肌球蛋白轻链激酶特异性抑制剂ML-7预处理细胞30 min来抑制这种效应。此外,ML-7还能够改善烧伤大鼠血清引起的内皮细胞内肌动蛋白重排。结论本研究表明,大鼠烧伤血清能够通过激活肌球蛋白轻链激酶引起明显的细胞内肌动蛋白排列的改变。在烧伤血清刺激细胞后,抑制肌球蛋白轻链激酶可以改善烧伤大鼠血清引起的内皮细胞骨架重排。     

再生障碍性贫血红细胞膜(Na~+·K~+)-ATP酶活性变化

用酶学比色法测定10例再生障碍性贫血慢性期患者红细胞膜(Na~+·K~+)-ATP酶活性,结果为每小时2.577±0.86微克分子磷/毫克蛋白(均值±标准差),明显高于正常组。红细胞膜(Na~+·K~+)-ATP酶活性与糖酵解相偶联。再障慢性期(Na~+·K~+)-ATP酶活性升高,可作为病情变化的辅助指标。     

四种心肌保护方法对心肌细胞质膜蛋白的影响

目的：研究４种心肌保护方法对心细胞质膜蛋白结构和功能的影响。评价其心肌保护效果。方法复动物模型,检测心肌细胞质膜ＡＴＰ酶活笥、质膜蛋白形态,,二级结构及电泳谱型变化。结果：（１）因期间,各级一ａ＾＋,Ｋ＾＋泵活性均显著下降,体外循环１８０ｍｉｎ,Ⅵ组恢复较好,Ｃａ＾２＿,Ｍｇ＾２＋泵与Ｎａ＾Ｋ,Ｋ＾＋泵活必绫心。（２）复灌后１．８万以上质膜蛋白条下降;体外循环１８０ｍｉｎ,Ⅵ组恢复较好。Ｃａ＾２＋     

兔骨骼肌肌球蛋白轻链的分离纯化

目的 从兔骨骼肌中提取肌球蛋白轻链,为下一步研究肌肉收缩原理提供可磷酸化的底物。方法 用离心、透析、柱层析、ＳＤＳ聚丙烯配角安凝胶电流（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和电泳轩移等方法纯化兔骨骼肌肌球蛋白轻链。结果 提取纯化得到较纯的肌球蛋白,进一眇是到轻 混合液和各种轻链纯品,经紫外吸收检测及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实其分子量分别为２５０００（ＭＬＣ１）、１９０００（ＭＬＣ２）和１６５００（ＭＬＣ３）,均与文献报道     

荧光定量PCR检测细胞代谢综合征相关基因表达的优化

目的优化MRSG mRNA表达的Taqman荧光定量PCR检测反应体系并进行系统评价。方法设计荧光PCR适用的引物和探针,从模板、引物、探针、镁离子浓度等方面优化荧光定量PCR检测反应体系,评价优化系统的特异性和稳定性。结果确定系统的模板取样量为2μl,引物浓度为0.4μmol/L,探针浓度为0.2μmol/L,Mg~（2＋）浓度为4mM,建立了稳定的MRSG mRNA表达的Taqman荧光PCR检测方法。结论优化后的MRSG mRNA荧光PCR检测方法特异性和稳定性较好。     

心肌挫抑发生机理的实验探讨及高镁的保护作用

以大鼠Langendorff离体心脏灌流模型,探讨了低流缺血(0.2ml/min) 15分钟及再灌10分钟后心肌形态学、含水量、钙的变化及高镁(2.4mmol/L)对心肌挫抑的影响。发现:①缺血组心肌间质有水肿,血管内皮细胞肿胀,糖原颗粒减少。而高镁组和对照组心肌结构正常;②缺血组心率—左室发展压乘积在再灌注后仅恢复至缺血前的77％,且心肌含水量与钙含量均显著高于对照组(P<0.01)。高镁可明显改善缺血后心功能,减轻挫抑心肌的钙超载及心肌水肿。本结果表明:心肌钙超载及心肌水肿参与了心肌挫抑的发生,高镁可明显改善挫抑心肌的功能。     

脑梗死患者血清镁含量的变化

目的 为了解脑梗死患者血清镁含量的变化。方法 检测65例脑梗死患者．50例对照组的血清镁含量并对比分析。结果 脑梗死患者血清镁含量明显低于对照组，而且血清镁含量越低，其病情越重，预后越差。结论 血清镁含量的降低是脑梗死的危险因素．并与脑梗死的预后有相关性。