关于吡咯烷二巯基氨甲酸减轻大鼠肾缺血再灌注损伤的机制研究

目的：探讨肾缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤中细胞凋亡的发生机制和吡咯烷二巯基氨甲酸（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）对其保护作用。方法：健康雄性Wistar大鼠随机分为3组：（1）I/R组：建立大鼠肾I/R模型;（2）PDTC组：I/R前20 min经大鼠尾静脉注射PDTC 100 mg/kg;（3）假手术组。分别于不同时间点（即0 h、2 h、8 h、24 h）处死。免疫组化检测肾组织中NF-κB、caspase-3蛋白的表达,ELISA检测肾组织匀浆中iNOS活性和NO的含量。结果：I/R组NF-κB表达于再灌注后2 h明显升高,8 h达到高峰,主要表达于胞核中,24 h开始下降;iNOS、NO、caspase-3于再灌注后2 h开始表达上调,此后一直呈上升趋势,与假手术组和PDTC组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）。PDTC组上述指标,再灌注后2 h时表达上调,8 h达到高峰,与假手术组比较均差异有统计学意义（P〈0.05）,再灌注后24 h,差异无统计学意义。结论：肾I/R损伤可引起肾组织结构损伤和细胞凋亡,这与NF-κB引起的NO高表达有关,应用NF-κB抑制剂PDTC可发挥明显的保护作用。     

黄芪甲苷预处理对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨黄芪甲苷( astragalosideⅣ)预处理对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 将60只雄性C57BL/6小鼠分为4组,15只/组,A组:假手术对照组,B组:假手术黄芪甲苷组,C组:实验对照组,D组:黄芪甲苷实验组.黄芪甲苷组每只腹腔注射黄芪甲苷24 mg·kg-1·d-1,对照组每天腹腔注射等体积无菌生理盐水,共1周.建立小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型,复流24h后采集标本,测定血清中转氨酶ALT和AST水平,光镜下观察H＆E染色肝组织病理学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IL-1β,IL-6,TNF-α的含量,采用Western blot 技术检测小鼠肝脏组织中核因子-κB (NF-κB)的表达.结果 黄芪甲苷实验组ALT及AST较实验对照组明显降低[AST:C组(4290±292) U/L vs.D组(2373±416) U/L,t=0.844;ALT:C组(4146 ±500) U/L vs.D组(2318 ±289) U/L,t =7.08,均P＜0.05],组织学损伤也明显减轻;ELISA 结果显示,黄芪甲苷预处理能明显降低外周IL-1β,IL-6,TNF-α的含量(IL-1 β:t 10.04;IL-6:t6.281;TNF-α:t =6.817;均P＜0.05).黄芪甲苷实验组肝脏组织中NF-κB表达量明显低于实验对照组.结论 黄芪甲苷预处理对小鼠肝脏缺血再灌注损伤有明显的保护作用.     

核因子κB抑制剂对缺血再灌注肌皮瓣的保护作用

目的观察核因子-κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对肌皮瓣缺血再灌注(I／R)损伤的影响。方法湖北白种猪12头,随机分为对照组(A组)、I／R组(B组)及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)处理组(C组)。采用放射免疫分析法检测I／R不同时点肌皮瓣静脉血浆肿瘤坏死因子(TNF)-α及白细胞介素(IL)-1β含量。观察组织髓过氧化酶(MPO)活性、水含量、肌细胞超微结构及肌肉存活比例变化。结果 C组再灌注1、2 h,TNF-α含量(0．69±0．15)、 (0．78±0．16)μg／L较B组(1．51±0．67)、(1．12±0．37)μg／L显著降低(P<0．01、P<0．05);再灌注1、2、4 h,IL-1β含量(0．17±0．09)、(0．18±0．06)、(0．17±0．07)μg／L较B组(0．43±0．17)、 (0．46±0．18)、(0．32±0．14)μg／L显著降低(P<0．01,P<0．01,P<0．05)。伴组织MPO活性、水含量显著降低(P<0．01),肌细胞线粒体损伤程度改善及肌肉存活比例的明显提高(P<0．01)。结论 PDTC能通过抑制TNF-α、IL-1β合成,减轻中性粒细胞浸润,有效防护肌皮瓣I／R损伤。     

抑制Ppif基因的表达对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察抑制Ppif基因的表达对缺血再灌注损伤肾脏的保护作用,并探讨其作用机制.方法 建立大鼠肾缺血再灌注模型,将实验动物随机分为3组:空白对照组、阴性对照组、治疗组(各20只).治疗组大鼠给Ppif基因靶向RNA干扰(RNAi)慢病毒载体(4μg)0.3 ml,阴性对照组再灌注时给予0.3 ml含体积分数0.01二甲基亚砜(DMSO)的生理盐水,空白对照组不夹闭肾蒂,余处理同阴性对照组.分别检测各组血肌酐(Cr)含量、尿素氮(BUN)含量、细胞凋亡指数(AI)、苏木素-伊红(HE)染色组织病理学分析.结果 治疗组与阴性对照组比较,血Cr和BUN均明显降低,AI明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05),HE染色组织病理学分析结果显示治疗组较另外2组缺血明显减轻.结论 Ppif基因靶向RNAi慢病毒载体能抑制大鼠Ppif基因的表达,从而抑制线粒体的凋亡,减轻肾脏缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To study the protective effect of Ppif gene inhibitor on renal ischemiareperfusion injury and the action mechansim. Methods A renal ischemia-reperfusion model was made in 60 rats, and the rats were evenly divided into three groups: control group (CON group), negative control group (NC group), and Ppif gene inhibitor group (treated group). The blood urea nitrogen (BUN) and creatinine (Cr), and renal cell apoptosis index (AI) were measured. Histopathological analysis was performed by using HE staining. Results A comparison between treated group and NC group showed that for treated group, the levels of both Cr and BUN were decreased, and AI decreased in the treated group as compared with the NC group (P ＜ 0. 05 ). Histolopathological analysis revealed that the ischemia in the treated group was significantly alleviated as compared with other two groups. Conclusion Ppif gene-targeted RNA interference ( RNAi ) lentiviral vector could inhibit the expression of Ppif gene in rats, thereby inhibiting the mitochondrial apoptosis and alleviating renal ischemia-reperfusion injury.     

茶多酚对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨茶多酚（teapolyphenols,TP）预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury,IRI）的保护作用及其机制。方法：雄性SD大鼠42只,随机分为假手术组、IRI组和TP预处理组。IRI组及TP组手术建立肾IRI模型,TP预处理组在此基础上加用TP治疗。IRI组及TP预处理组在缺血1h恢复灌注开始时刻、2h后、24h后分别检测血清肌酐（Scr）、血清超氧化物岐化酶（SOD）、血清丙二醛（MDA）、肾组织SOD和肾组织MDA水平,并观察肾组织的病理变化。结果：TP预处理组肾组织病理变化轻于IRI组;与假手术组相比较,IRI组的Scr水平升高（P〈0.05）,肾组织及血清中的SOD降低及MDA水平增加（P〈0.05）。而TP预处理组的Scr、MDA和肾组织的MDA均比IRI组低（P〈0.05）,而血清SOD水平及肾组织中的SOD水平升高（P〈0.05）。结论：TP对肾脏缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能是通过抗氧化作用实现的。     

黄芪对肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨黄芪注射液对肾脏缺血再灌注损伤的影响。方法 观察黄芪注射液对肾缺血再灌注损伤大鼠血浆超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,脂质过氧化产物丙二醇（ＭＤＡ）,内以素－１（ＥＴ－１）,一氧化氮（ＮＯ）变化及肾组织病理改变。结果 黄芪治疗组血浆ＥＴ０－１,ＭＤＡ水平较缺血再灌注组显著下降,ＳＯＤ显著升高,且病理改变较轻。结论 黄芪对肾脏缺血再灌注损伤具有保护作用。．     

NF-κB激活在大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤中的意义

目的　从核转录因子 κB(NF κB)途径研究心肌缺血再灌注损伤早期众多细胞因子表达的分子机制。方法　建立大鼠离体工作心脏模型 ,心肌缺血 3 0min后再灌注 60min ,期间取心室肌。同时 ,稳定阶段在实验组Krebs Henseleit碳酸盐缓冲液 (KHBB)里应用吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)。对照组测定心肌NF κB的DNA结合活性、胞质IκBα水平和肿瘤坏死因子 (TNF) αmR NA的表达。分别测定两组在短时间缺血后NF κB的DNA结合活性和TNF αmRNA的表达情况。结果　短时间的单纯缺血即引起细胞质IκBα水平的明显降解 ,同时有相对应的NF κB的DNA结合活性增加 ;再灌注后 ,虽然细胞质IκBα的水平有恢复 ,但是却有更强的NF κB的DNA结合活性 ;首次明确激活的心肌NF κB有 p65 p5 0和p5 0 p5 0两种形式。此外 ,在实验组 ,NF κB的DNA结合活性明显受抑 ;相应的 ,TNF αmRNA的表达也受到抑制。结论　分析了心肌在缺血再灌注过程中NF κB经历了两种不同激活途径 ,但没能确定p5 0 p5 0的确切作用。同时 ,确定NF κB的快速活化是心肌缺血再灌注早期众多细胞因子表达的始动因素。     

核因子-κB在白细胞介导大鼠移植胰腺缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨核因子(NF)-κB在大鼠移植胰腺再灌注损伤中的作用及其可能机制.方法 应用同系大鼠异位全胰十二指肠移植模型,大鼠移植术前和术后5 min静脉注射NF-κB抑制剂脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(ProDTC)(15 mg/kg),移植术后24 h经腹主动脉取血测定大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-2浓度酶联免疫吸附试验(ELISA)、血糖、淀粉酶、脂肪酶水平.测定胰腺组织NF-κB p65蛋白含量(Western blot)、TNF-α mRNA、MIP-2 mRNA、细胞间黏附分子(ICAM)-1 mRNA表达逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、髓过氧化物酶(MPO)活性.并进行组织学观察.结果 移植后24 h ProDTC组和对照组血清中TNF-α、MIP-2水平、胰腺组织中NF-κB p65蛋白含量、TNF-α mRNA、MIP-2 mRNA、ICAM-1 mRNA表达、MPO活性均升高,而ProDTC组水平明显低于对照组(P<0.05).移植后24 h血糖、脂肪酶水平在PmDTC组[(9.1±2.8)mmoL/L,(192±26)U/L]明显低于对照组[(13.0±3.1)mmol/L,(297±31)U/L,P<0.05].ProDTC组胰小叶间质水肿和胰小叶内中性粒细胞浸润较轻.结论 移植胰腺缺血再灌注后,NF-κB活化上调了TNF-α、MIP-2、ICAM-1表达从而增加中性粒细胞浸润,外源性应用NF-κB抑制剂ProDTC可以减轻移植胰腺缺血再灌注损伤.     

蛋白酶体抑制剂MG132减轻大鼠移植胰腺缺血再灌注损伤的作用

目的 研究蛋白酶体抑制剂MG132减轻大鼠移植胰腺缺血再灌注(IR)损伤的作用及其机制.方法 采用随机数字表法将SD大鼠分为假手术组、IR组和MG132组,IR组和MG132组建立同系大鼠胰腺十二指肠移植模型.分别于再灌注后1、3、6h,检测受鼠血清淀粉酶含量,光镜下观察胰腺组织病理变化,采用蛋白质印迹法测定胰腺组织中核因子-κB(NF-κB) P65蛋白的水平,采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应法分别检测胰腺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的表达情况.结果 与假手术组比较,IR组再灌注后相同时点的组织病理损伤明显较重,血清淀粉酶含量、胰腺组织中P65蛋白水平以及TNF-α和ICAM-1水平均明显上升;与IR组比较,MG132组相同时点的组织损伤减轻,血清淀粉酶含量、胰腺组织中P65蛋白水平及TNF-α和ICAM-1水平均明显降低.结论 MG132能够减轻大鼠移植胰腺的IR损伤,其机制可能是通过抑制NF-κB的活化,从而下调TNF-α和ICAM-1的表达.     

重组人促红细胞生成素对骨骼肌缺血再灌注损伤的保护作用

[目的]观察重组人促红细胞生成素（rHuEPO）对肢体骨骼肌缺血再灌注（IZR）损伤的保护作用。[方法]建立大鼠后肢缺血再灌注模型。40只大鼠随机均分为：假手术组（I组），I/R组（Ⅱ组），I/R＋生理盐水组（Ⅲ组），I/R＋rHuEPO组（Ⅳ组）。取血浆测定丙二醛（MDA）、肌酸磷酸激酶（CPK）和乳酸脱氢酶（LDH）含量。取骨骼肌标本测定髓过氧化酶（MP0）活性、湿重／干重比（Wet／dry）。[结果]Ⅱ组与I组比较，血浆和骨骼肌的各项生化指标显著增高（P〈0．01）；IV组血浆及骨骼肌各项测定指标较Ⅱ组相比明显降低（P〈0．01）。Ⅲ组和Ⅱ组之间比较，差异无显著意义。[结论]rHuEPO对肢体骨骼肌缺血再灌注损伤有保护作用。     

乌司他丁对大鼠肾缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨乌司他丁对大鼠肾缺血/再灌注(I/R)损伤的作用及其机制.方法雄性SD大鼠75只,随机分为三组假手术对照组(C组)、肾I/R组(I组)、乌司他丁组(U组),每组25只.I组和U组大鼠夹闭双侧肾蒂45min后重新开放肾脏血供,制作肾脏I/R模型,C组不夹闭双侧肾蒂.U组缺血前30min及再灌注开始时静脉注射乌司他丁1.25万单位,I组分别静脉注射生理盐水1ml.各组在再灌注后0、2、6、12、24h时取标本,测定血尿素氮(BUN)和血肌酐(Cr)浓度,并制备肾脏病理切片,采用免疫组化方法测定热休克蛋白70(HSP70)和bcl-2蛋白的表达.结果与I组比较,C组在再灌注后各时点血清BUN和Cr浓度均降低(P＜0.05),U组在再灌注后12、24h时血清BUN和Cr浓度也降低(P＜0.05).C组肾脏未发现明显的形态学改变;I组近曲小管上皮细胞空泡变性和坏死,肾小管腔扩张,内可见管型和坏死脱落细胞,可见管周血管明显扩张淤血;U组近曲小管上皮细胞肿胀、颗粒变性,罕见管型,管周稍有淤血.与I组比较,C组在再灌注后0、6、12、24h时Paller评分降低(P＜0.05),U组在再灌注后0、6、24h时Paller评分也降低(P＜0.05),C组再灌注后12、24h时HSP70表达降低(P＜0.05),U组在再灌注后6、24h时bcl-2蛋白表达增强(P＜0.05).结论乌司他丁对肾脏I/R损伤有保护作用,其机理可能与上调肾脏bcl-2蛋白表达有关.     

Gpx1-Klk1转基因对肾缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 制备人谷胱甘肽过氧化物酶（Gpx1）、 组织激肽释放酶（Klk1）共转基因小鼠,在此基础上制作肾缺血再灌注损伤小鼠模型。观察转基因小鼠对缺血再灌注损伤的耐受能力。在体研究Gpx1-Klk1转基因对肾缺血再灌注的保护作用。 方法 应用基因工程技术制备pKsp-Gpx1-IRES-Klk1质粒,酶切后回收转基因片段并纯化,通过外源基因受精卵雄原核显微注射法制备Gpx1-Klk1共转基因小鼠。采用丝线悬吊控制法制备转基因小鼠肾缺血再灌注模型。设立C57BL野生型小鼠同法制备的肾缺血再灌注损伤为对照。在肾缺血再灌注实验前后,测定血尿素氮、血肌酐、肾组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、总一氧化氮合酶（tNOS）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）。留取肾脏组织制备病理切片,观察Gpx1-Klk1转基因小鼠抗肾缺血再灌注损伤的能力。 结果 获得全长为6.585 kb的pKsp-Gpx1-IRES-Klk1重组质粒,并证明了该克隆的正确性。在转基因小鼠制备过程中,共获得525枚注射卵,移植成功率为81.0%,小鼠出生总数109只。经基因组DNA的PCR检测,确认10只为转基因阳性小鼠,阳性率为9.2%。Western印迹法检测证实了阳性转基因小鼠肾脏组织有Gpx1和Klk1蛋白强表达。转基因小鼠（实验组）和野生型小鼠（对照组）肾缺血再灌注损伤模型建立后,实验组血样中尿素氮及肌酐水平显著低于对照组（P < 0.01）;肾脏组织中SOD显著高于对照组 （P < 0.01）,MDA显著低于对照组（P < 0.01）;两组肾组织中tNOS较缺血再灌注前均显著升高,且实验组显著高于对照组（P = 0.025）,实验组肾组织中iNOS显著低于对照组（P < 0.01）。缺血再灌注后,实验组肾组织间质轻度水肿,肾小管上皮坏死细胞较少,对标本损伤程度采用半定量评分后显示,实验组损伤程度显著轻于对照组（1.58±1.05比3.95±0.80,P < 0.05）。 结论成功制备Gpx1-Klk1转基因小鼠。Gpx1-Klk1过表达对肾缺血再灌注损伤的保护作用。     

STF-083010对肾脏缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 观察STF083010对急性肾缺血-再灌注损伤的作用,探讨其损伤保护作用的机制.方法 选择健康雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组(打开腹腔)、I-R组(建立大鼠肾I-R损伤模型)与STF083010组.分别在缺血-再灌注24h后处死大鼠,取血液和肾组织.全自动生化仪检测各组血清尿素氮(BUN)及肌酐(Scr)水平.PAS染色观察大鼠肾组织病理变化,免疫组化检测肾脏组织中XBP1、GRP78蛋白的表达.Quantitative real-time PCR(QPCR)测定大鼠肾组织标本中XBP1、GRP78 mRNA水平.结果 I-R组肌酐、尿素氮水平与假手术组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).STF-083010组与I-R组相比,差异亦有统计学意义(P＜0.05).PAS病理图片可见STF-083010组肾小管损伤较I-R组明显减轻(P＜0.05);免疫组化检测显示STF-083010组XBP1的表达较I-R组明显降低(P＜0.05),STF-083010组GRP78蛋白的表达较I/R组明显升高;QPCR结果显示STF-083010组XBP1 mRNA水平较I-R组明显降低(P＜0.05),STF-083010组GRP78 mRNA较I-R组明显升高(P＜0.05).结论 STF-083010可以对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤性保护作用.     

大蒜素在防治兔肢体缺血再灌注损伤中的疗效观察

目的探讨大蒜素对肢体缺血再灌注损伤的防护作用。方法将32只家兔随机分为再灌注组和治疗组,制备肢体缺血再灌注损伤动物模型。在即将恢复血流灌注前10分钟,再灌注组和治疗组分别自耳缘静脉注射等渗盐水和大蒜素注射液。在再灌注前、后不同时间点上分别测定血清有关生化指标并取胫前肌行光、电镜观察。结果再灌注组再灌注后血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、丙二醛（MDA）明显升高（P〈0．01）,超氧化物歧化酶（SOD）活力明显下降（P〈0．01）。治疗组再灌注后各指标变化不明显,而与对照组同期相比,差异有非常显著性（P〈0．01）。光、电镜观察可见再灌注组织超微结构改变明显,而治疗组较轻。结论大蒜素可抑制自由基产生并减轻对骨骼肌细胞的损害,对肢体缺血再灌注损伤具有明显的防护作用。