体位性心动过速综合征儿童及青少年在直立试验中血流动力学变化

目的 分析体位性心动过速综合征(postural tachycardia syndrome, POTS)儿童及青少年直立试验过程中血流动力学变化及不同心脏指数(cardiac index, CI)患者血流动力学指标的差异。方法 回顾性分析26例POTS患者与12例健康对照者间直立试验过程中总外周血管阻力指数(total peripheral vascular resistance index, TPVRI)、心率和血压的变化,并比较两组间各指标变化趋势。根据每位POTS患者直立试验过程中CI变化趋势将患者分为CI降低组(14例)与CI未降低组(12例), 分析两组患者在直立试验过程中CI、TPVRI、心率、血压变化,并比较两组间各指标变化趋势。结果 POTS患者在直立试验过程中CI显著下降(F=6.936, P=0.001), 心率明显增快(F=113.926, P <0.001),收缩压明显降低(F=6.049, P <0.001),而TPVRI (F=2.031, P=0.138)和舒张压(F=2.018, P=0.113)无明显变化。健康对照组CI在直立后显著升高(F=3.646, P=0.016),同时心率明显增快(F=43.970, P<0.001),收缩压(F=4.043, P=0.020)和舒张压(F=8.627, P<0.001)均明显升高,TPVRI (F=1.688, P=0.190)无明显变化。POTS患者与健康对照组比较,CI (F=6.221, P=0.001)、心率(F=6.203, P<0.001)和收缩压(F=7.946, P<0.001)随时间变化趋势显著不同,而TPVRI和舒张压在两组间的变化趋势差异无统计学意义(P>0.05)。CI降低组与CI未降低组POTS患者在直立试验中CI变化趋势差异有统计学意义(F=14.723, P<0.001), 前者直立后收缩压明显降低(F=8.010, P<0.001),而后者却无明显变化(F=0.612, P=0.639), TPVRI、心率和舒张压在CI降低组与CI未降低组间随时间变化趋势差异无统计学意义(P>0.05)。年龄是POTS患者直立后CI呈下降趋势的独立影响因素(P=0.013, OR=2.233; 95% CI:1.183~4.216)。结论 POTS患者在直立试验过程中存在明显的血流动力学变化,不同患者心输出量变化可能不同,年龄是心输出量下降的独立影响因素。     

Th1/Th2细胞因子在眼肌型重症肌无力转基因小鼠模型中的作用机制

目的 观察重组人乙酰胆碱受体(H-AChR) γ亚单位免疫HLA-DQ8转基因小鼠眼肌型实验性自身免疫性重症肌无力(oEAMG)模型体外培养上清液中Th1/Th2细胞因子水平变化,探讨其与oEAMG免疫学发病机制的联系。方法 HLA-DQ8转基因小鼠用乳化于完全弗氏佐剂(CFA)的重组H-AChR γ亚单位,或E. Coli提取物,或纯CFA分别免疫,分别于第0天、第30天和第60天共免疫3次。第3次免疫后28 d,处死小鼠后取淋巴结和脾淋巴细胞体外培养,收集培养上清液,采用ELISA法检测白细胞介素(IL)-2、γ-干扰素(IFN-γ)、IL-6和IL-10水平。结果 H-AChR γ组小鼠淋巴结及脾淋巴细胞体外培养上清液中IL-2(F=42.835,P<0.001;F=38.030,P<0.001)和INF-γ水平(F=76.332,P<0.001;F=34.865,P<0.001)均明显高于E. coli组和CFA免疫组;IL-6(F=1.325,P=0.284;F=1.935,P=0.166)和IL-10水平(F=0.908,P=0.417;F=1.189,P=0.322)与E. coli 组和CFA组差异无统计学意义。结论 Th1细胞因子在重组H-AChR γ亚单位诱导HLA-DQ8转基因小鼠所建立oEAMG模型的发病机制中可能发挥重要作用,而Th2细胞及其细胞因子作用尚不十分明确。     

脂肪源性干细胞对内源性皮肤老化的治疗作用

目的 研究脂肪源性干细胞(ADSCs)对内源性皮肤老化的抗衰老作用及机制。 方法 分离培养小鼠皮肤成纤维细胞(MSFCs)及人ADSCs。将MSFCs 分为对照组、模型组、ADSCs条件培养基组。D-半乳糖(D-gal)制备MSFCs衰老模型,ADSCs条件培养基培养。镜下及流式检测ROS、β-半乳糖苷酶活性的变化,RT-PCR 检测caspase3、p53、sirt1基因的表达情况,Western blotting检测Sirt1蛋白表达。 结果 模型组较对照组ROS水平上升(P<0.001)、β-半乳糖苷酶着色增深,而ADSCs条件培养基组较模型组ROS水平降低(P<0.001)、β-半乳糖苷酶着色变浅。RT-PCR检测结果显示模型组较对照组caspase3(P<0.001)、p53(P=0.001)表达升高,sirt1表达下降(P<0.001);而ADSCs条件培养基组较模型组caspase3(P<0.001)、p53(P=0.001)表达下降,sirt1表达升高(P<0.001)。 Western blotting结果显示模型组较对照组Sirt1表达下降(P<0.001),而ADSCs条件培养基组较模型组Sirt1表达升高(P=0.006)。 结论 ADSCs可通过Sirt1通路改善D-gal引起的内源性皮肤老化。     

ACE2基因通过调控Nrf2/HO-1通路改善肾缺血再灌注损伤

目的 探讨血管紧张素转化酶2(ACE2)对缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞HK-2氧化应激、炎症、凋亡及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响。 方法 将ACE2慢病毒转染HK-2细胞,按照实验需要分为常氧组(Control组)、缺氧复氧模型组(H/R组)、缺氧复氧转染阴性对照慢病毒组(H/R-NC组)和缺氧复氧转染ACE2慢病毒组(H/R-ACE2组)。细胞经H/R处理后,通过CCK-8法检测细胞活力;RT-PCR及ELISA法检测炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平;比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)表达水平;Western blotting法检测胱天蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、Nrf2、HO-1的蛋白水平。采用Nrf2抑制剂ML385以及HO-1抑制剂SnPPIX抑制Nrf2/HO-1通路,Western blotting法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax、Nrf2、HO-1的蛋白表达水平变化,比色法检测SOD和MDA表达变化。 结果 与Control组相比,H/R组细胞活力降低(t=7.58,P<0.001),MDA含量和炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平以及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax蛋白水平均增加(t_MDA=11.08,P_MDA<0.001;t_PCR-IL-6=5.82,P_PCR-IL6<0.001;t_PCR-TNF-α=7.69,P_PCR-TNF-α<0.001;t_PCR-IL-1β=4.80,P_PCR-IL-1β=0.001;t_ELISA-IL-6=34.11,P_ELISA-IL-6<0.001;t_ELISA-TNF-α=14.12,P_ELISA-TNF-α<0.001;t_ELISA-IL-1β=9.63,P_ELISA-IL-1β<0.001;t_Caspase-3=2.73,P_Caspase-3=0.026;t_Bax=27.75,P_Bax<0.001),SOD活性、Bcl-2和ACE2蛋白水平下降(t_SOD=7.74,P_SOD<0.001;t_Bcl-2=75.49,P_Bcl-2<0.001;t_ACE2=11.41,P_ACE2<0.001)。与H/R组相比,H/R-ACE2组细胞活力增加(t=3.61,P=0.002),MDA含量和炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平以及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax蛋白水平均下降(t_MDA=6.15,P_MDA<0.001;t_PCR-IL-6=3.34,P_PCR-IL-6=0.006;t_PCR-TNF-α=3.65,P_PCR-TNF-α=0.007;t_PCR-IL-1β=4.06,P_PCR-IL-1β=0.004;t_ELISA-IL-6=14.62,P_ELISA-IL-6<0.001;t_ELISA-TNF-α=10.42,P_ELISA-TNF-α<0.001;t_ELISA-IL-1β=8.65,P_ELISA-IL-1β<0.001;t_Caspase-3=3.74,P_Caspase-3=0.006;t_Bax=30.52,P_Bax<0.001),SOD活性、Bcl-2和ACE2蛋白水平增加(t_SOD=3.58,P_SOD=0.007;t_Bcl-2=63.86,P_Bcl-2<0.001;t_ACE2=58.72,P_ACE2<0.001),Nrf2/HO-1信号通路被激活蛋白水平增加(t_Nrf2=44.55,P_Nrf2<0.001;t_HO-1=14.19,P_HO-1<0.001)。然而ML385和SnPPIX处理会抑制ACE2基因过表达在H/R中HK-2细胞的保护作用(F_Bax=11.02,P_Bax=0.003;F_Bcl-2=21.48,P_Bcl-2<0.001;F_Caspase-3=20.80,P_Caspase-3<0.001;F_SOD=133.49,P_SOD<0.001;F_MDA=14.06,P_MDA=0.001)。 结论 ACE2在HK-2细胞缺氧复氧损伤中具有抑制氧化应激、调节炎症、改善凋亡的作用,Nrf2/HO-1信号通路发挥重要作用。     

脾多肽注射液联合术后化疗对三阴性乳腺癌患者临床疗效的研究

目的 探讨脾多肽对三阴性乳腺癌术后辅助化学药物治疗（以下简称化疗）患者的临床疗效。方法 将2014年1月至2017年12月间收治的80例三阴性乳腺癌患者采用数字表法随机分为对照组（n=40）和试验组（n=40）,对照组采用常规的根治手术加术后辅助化疗,试验组在对照组的基础上加用脾多肽注射液,比较试验组和对照组患者的临床疗效和免疫功能。结果 治疗后,试验组与对照组相比,Karnofsky功能状态评分明显增高（F=5.793,P=0.018）,CD4⁺（t=5.337,P<0.001）、CD8⁺（t=9.874,P<0.001）、自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）（t=－7.460,P<0.001）的比例及Treg细胞（t=7.113,P<0.001）都有不同程度地增高。试验组的无进展生存期（progress-free survival period,PFS）比对照组长,两组差异有统计学意义（P<0.05）。两组的上肢淋巴水肿率差异无统计学意义（P>0.05）。结论 脾多肽注射液可明显提高患者免疫功能,促进生活质量改善与提高,在临床治疗领域具备进一步推广价值。     

二烯丙基二硫化物诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨二烯丙基二硫化物(DADS)诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法 将不同浓度的DADS分别处理卵巢癌SK-OV-3和OVCAR-3细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,裸鼠移植模型观察体内抑瘤效果。进而应用流式细胞术检测细胞周期分布的变化,Western blot检测细胞中G2/M检验点相关信号通路、增殖和凋亡相关蛋白的表达。结果 MTT法检测显示,不同浓度的DADS作用SK-OV-3(F=247.86,P=0.000)和OVCAR-3细胞(F=302.54,P=0.000)后,随着DADS浓度增高,细胞增殖抑制率明显升高,呈浓度依赖性。DADS处理24 h时SK-OV-3(F=335.12,P=0.000)和OVCAR-3细胞(F=347.43,P=0.000)的增殖抑制率明显高于处理12 h和48 h时的细胞抑制率,呈明显的时间依赖性。流式细胞术检测结果显示,不同浓度的DADS作用SK-OV-3、OVCAR-3细胞后,随着DADS浓度的增高,细胞凋亡率明显升高,呈明显的浓度依赖性(P<0.05)。DADS处理24 h时SK-OV-3和OVCAR-3细胞的凋亡率明显高于处理12 和48 h时,呈明显的时间依赖性(P<0.05)。与空白处理组相比,腹腔注射DADS溶液可明显抑制卵巢癌细胞的裸鼠移植瘤体积(F=548.23,P=0.000;F=311.84,P=0.000)。将30 mg/L的DADS作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24 h后,与空白处理细胞相比,DADS处理后的SK-OV-3和OVCAR-3细胞中处于G2期的细胞百分率明显增加(F=375.11,P=0.000;F=256.48,P=0.000)。将30 mg/L DADS分别作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24 h后,p-Chk1(ser345)(F=108.89,P=0.013;F=97.58,P=0.018)、p-CDC25C(ser216)(F=87.25,P=0.025;F=114.25,P=0.009)、p-P53(ser15)(F=112.41,P=0.011;F=255.87,P=0.000)、P21WAF1(F=246.38,P=0.001;F=141.36,P=0.005)和p-CDK1(Thr14/Tyr15)蛋白(F=298.12,P=0.000;F=233.15,P=0.000)的表达明显增加,CDK1(F=308.24,P=0.000;F=257.55,P=0.000)和CyclinB1蛋白(F=223.15,P=0.001;F=241.28,P=0.000)的表达明显减少,增殖和凋亡相关蛋白PCNA(F=77.36,P=0.031;F=157.28,P=0.001)、Ki-67(F=205.64,P=0.007;F=315.22,P=0.000)和Survivin蛋白(F=122.13,P=0.013;F=188.24,P=0.000)表达明显减少,Cleaved-caspase3蛋白表达明显增加(F=86.46,P=0.023;F=99.11,P=0.009)。结论 DADS可抑制卵巢癌细胞增殖,诱导其凋亡;其分子机制可能与G2/M检验点Chk1-CDC25C和P53-P21WAF1通路激活、CDK1活性降低、CDK1和CyclinB1蛋白表达减少,最终导致卵巢癌细胞G2/M期阻滞有关。     

siRNA介导RRM2基因沉默治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤

目的 探讨siRNA沉默核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)基因联合顺铂治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的可行性。 方法 常规体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,采用皮下注射法建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,将24只荷瘤鼠随机分为对照组、顺铂组、siRNA组、siRNA联合顺铂组,每组6只,分组给药。观察肿瘤生长情况,测瘤体积并计算肿瘤生长抑制率。采用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测肿瘤组织中RRM2 mRNA及蛋白表达。 结果 对照组、siRNA组、顺铂组和siRNA联合顺铂组平均肿瘤体积分别为(358.28±46.40)、(261.38±52.49)、(261.65±31.97)、(189.37±41.67)mm³,单药作用后肿瘤体积差异有统计学意义(F_siRNA-RRM2=22.399,P_siRNA-RRM2<0.001;F_顺铂=22.254,P_顺铂<0.001);两药间无交互作用(F=0.474,P=0.499)。对照组、siRNA组、顺铂组和siRNA联合顺铂组肿瘤生长抑制率分别为0、36.39%、41.10%、64.33%。siRNA-RRM2与顺铂单药各自均能降低RRM2 mRNA表达水平(F_siRNA-RRM2=9.37,P_siRNA-RRM2=0.006;F顺铂=11.90,P顺铂=0.003)和蛋白表达水平(F_siRNA-RRM2=8.71,P_siRNA-RRM2=0.008;F顺铂=13.01,P顺铂=0.002);两药间无交互作用(F_{RRM2 mRNA}=3.93,P_{RRM2 mRNA}=0.061;F_RRM2蛋白=1.72,P_RRM2蛋白=0.204)。 结论 单用siRNA或联用顺铂均可有效抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤瘤体的生长,可能与其沉默RRM2基因表达有关,特异性沉默RRM2或可成为卵巢癌治疗的一个新思路。     

PC12细胞中Vd介导的SPHK1/S1P通路及其在EAE中的潜在功能

目的 探讨维生素D(V_d)通过鞘氨醇激酶1(SPHK1)影响1-磷酸鞘氨醇(S1P)的合成从而对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病过程产生的影响。 方法 体外培养PC12细胞,分别用不同浓度的V_d对PC12细胞进行刺激,分为0、6.25、12.5、25、50、100 nmol/L V_d 组。Western blotting检测SPHK1表达量;RT-PCR检测SPHK1 mRNA的表达;ELISA检测S1P合成量。 结果 加入药物V_d刺激PC12细胞24 h后,不同浓度的V_d组SPHK1表达量较0 nmol/L V_d组减少(P<0.05);RT-PCR检测结果显示,不同浓度的V_d组SPHK1较0 nmol/L V_d 组mRNA亦有下调(P<0.05);不同浓度的V_d组S1P合成量较0 nmol/L V_d 组减少(P<0.05)。 结论 V_d可能通过调节SPHK1的表达来影响S1P的合成,以缓解EAE的发病进程。     

雌二醇对Th1细胞极化与肝纤维化形成的影响

目的 探讨雌二醇(E₂)对Th1细胞极化以及与肝纤维化发生的影响。 方法 根据E₂水平将47例肝纤维化患者分为A组(E₂增高组)19例和B组(E₂正常组)28例,阴性对照作为C组(正常人)30例。应用流式细胞术检测T细胞亚群,化学发光法检测透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢP)和Ⅳ型胶原(CⅣ);ELISA法检测干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)和白介素-10(IL-10),比较A、B组之间以及与C组的差异。 结果 A组E₂高于C组和B组(P<0.001)。A组HA、LN、PⅢP、CⅣ均高于C组(P<0.001, P=0.001, P=0.006, P<0.001),B组HA、LN、PⅢP、CⅣ也高于C组(均为P<0.001);A组PⅢP高于B组(P=0.045)。A组CD3⁺T细胞低于C组和B组(P<0.001, P=0.001),CD4⁺T细胞也低于C组和B组(P<0.001, P=0.024),B组CD3⁺、CD4⁺T细胞低于C组(P=0.002, P<0.001);A组、B组CD8⁺T细胞高于C组(P=0.001, P=0.012)。A组IFN-γ高于C组和B组(均为P<0.001),IL-2也高于C组和B组(P<0.001, P=0.003),B组高于C组(P=0.001, P=0.012);A组IL-4低于C组和B组(P=0.002, P=0.016),IL-10也低于C组和B组(P<0.001, P=0.012)。 结论 高E₂在延缓肝纤维化形成的同时也通过Th1细胞极化影响着机体的免疫功能,加速了肝纤维化的发展,E₂在肝纤维化的形成过程中扮演了双重角色。     

Ⅲ期小细胞肺癌年轻患者的肿瘤特异性生存优势

目的 考察年龄对小细胞肺癌(SCLC)患者预后评估的价值。 方法 登陆监测、流行病学及最终结果(SEER)登记系统,查询2010年1月至2013年12月的所有SCLC病例(n=17 237)。青年组定义为年龄≤49岁的患者(n=733),中年组定义为50~64岁的患者(n=6 332),老年组定义为年龄≥65岁的患者(n=10 172)。分析各组患者的临床病理特征,获取肿瘤特异性生存(CSS)等数据,应用Kaplan-Meier法及多变量Cox回归模型进行统计分析。 结果 单因素及多因素分析均显示,随着年龄的增加,CSS缩短(χ2=342.08, P<0.001),其中青年组患者的OS(χ2=203.90, P<0.001)和CSS(χ2=160.50, P<0.001)均提高。中年组风险比(HR)为1.177(95%CI:1.068~1.296, P=0.001),老年组HR为1.643(95%CI:1.495~1.807, P<0.001)。在Ⅰ期(P=0.015)、Ⅲ期(P<0.001)、Ⅳ期(P<0.001)或接受非手术治疗(P<0.001)的患者中,年龄越小,CSS越具优势。 结论 年龄≤49岁的SCLC患者较更年长患者具有生存优势;在Ⅲ期及接受非手术治疗的患者中,年龄具有较明确的预后价值。     

黄芪皂苷Ⅱ对肾透明细胞癌细胞生长抑制作用及机制

目的 探讨黄芪皂苷Ⅱ(AsⅡ)对肾透明细胞癌786-O细胞增殖的影响及潜在机制。方法 噻唑兰(MTT)法和克隆实验检测AsⅡ对786-O细胞的生长和集落形成的抑制作用。细胞流式术检测ASⅡ的凋亡诱导作用。随后,用免疫印迹法检测不同处理组细胞PI3K-AKT-mTOR通路蛋白及凋亡执行蛋白的变化,最后利用PI3K-AKT-mTOR通路激活剂IGF-1与AsⅡ对细胞共处理后,流式细胞术检测细胞凋亡水平的变化,进一步验证PI3K-AKT-mTOR通路在凋亡诱导中的作用。结果 AsⅡ对786-O细胞的增殖抑制效应具有浓度和时间依赖性,时间与浓度之间有交互作用(F_时间=513.00,P<0.001;F_浓度=1 678.00,P<0.001;F_{时间×浓度}=18.23,P<0.001),并可抑制细胞集落形成。AsⅡ可诱导细胞凋亡并诱导凋亡执行蛋白cleved caspase-3的表达(P_{0μmol/L AsⅡ组vs 10μmol/L AsⅡ组}=0.013 9,P_{0μmol/L AsⅡ组...}     

乌苯美司对卵巢癌A2780细胞的生物学影响

目的 研究乌苯美司对卵巢癌A2780细胞增殖、细胞周期、凋亡和自噬以及迁移和侵袭能力的影响,探讨可能的作用机制。 方法 CCK-8实验检测乌苯美司对A2780细胞增殖的影响;Transwell实验检测乌苯美司对A2780细胞迁移及侵袭能力的影响;流式细胞术检测乌苯美司对A2780细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting检测APN、AKT、p-AKT、LC3B、p62表达水平的变化。 结果 (1)乌苯美司能够抑制A2780细胞的增殖(F浓度=812.56,P<0.001;F时间=8.58,P=0.010;F交互=4.00,P=0.027)、迁移(t=56.9,P<0.001)和侵袭(t=11.8,P<0.001)、导致G₂/M期细胞比例增高(t=7.9,P=0.016),G₁期细胞比例减少(t=14.8,P=0.005),发生G₂/M细胞周期阻滞。(2)乌苯美司能够诱导A2780细胞凋亡(P=0.002),且联合应用AKT抑制剂后诱导细胞凋亡的作用增强(P=0.007)。(3)乌苯美司可以导致APN表达降低,p-AKT、LC3-B和p62表达增加。 结论 乌苯美司可能是卵巢癌的一种治疗方法或者辅助治疗方法,与AKT抑制剂联用能够增强其治疗效果。     

干扰MAD2L1基因表达对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨干扰有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1(MAD2L1)基因表达对乳腺癌(BC)细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用qRT-PCR检测正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和4种BC细胞系(MDA-MB-231、MCF-7、SK-BR-3和BT-20)中MAD2L1 mRNA表达水平。将MAD2L1 siRNA转染至MDA-MB-231细胞中,qRT-PCR和Western blotting检测细胞中MAD2L1 mRNA和蛋白表达水平;MTT检测细胞增殖能力;流式细胞术法检测细胞凋亡率;Western blotting检测细胞中Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3、p-p38MAPK(Thr180/Thr182)和p38MAPK等蛋白表达水平。采用p38MAPK抑制剂SB203580联合处理上述细胞,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率的变化;Western blotting检测Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3、p-p38MAPK和p38MAPK表达水平的变化。结果 BC细胞系中MAD2L1 mRNA表达水平高于MCF-10A细胞,其中M...     

Noggin蛋白对小鼠脑缺血再灌注损伤后学习和记忆能力与齿状回结构的影响

目的 探讨侧脑室注射Noggin蛋白对小鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)后学习、记忆能力及齿状回(DG)结构的影响,以期为临床缺血性脑血管疾病的预防与治疗提供新思路。 方法 240只小鼠随机分为:假手术组(n=80)、缺血再灌注损伤组(I/R组,n=80)、缺血再灌注损伤+Noggin治疗组(Noggin组,n=80),每组再分为1、3、7、14 d共 4个亚组;取材前1天采用Y型迷宫检测小鼠学习记忆能力(n=5);然后比色法检测缺血侧脑组织超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)含量(n=5);2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死面积(n=5); 尼氏染色与免疫荧光检测DG神经元与胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞变化(n=5);Western blotting法检测骨形态发生蛋白4(BMP4)蛋白表达(n=5)。 结果 随着损伤时间的增加,I/R组、Noggin组与假手术组相比,小鼠神经功能评分升高(F组别=21.19, P<0.001; F时间=25.13, P<0.001),学习、记忆能力均下降［(F组别=216.10, P<0.001; F时间=260.10, P<0.001)、(F组别=114.40, P<0.001; F时间=184.60, P<0.001)］,脑梗死面积增加(F组别=2374, P<0.001; F时间=3 292, P<0.001),SOD活性降低(F组别=1 426, P<0.001; F时间=1 723, P<0.001),MDA含量升高(F组别=2.22, P<0.001; F时间=6.33, P<0.001),神经元数量减少(F组别=148.90, P<0.001; F时间=485.50, P<0.001),GFAP阳性细胞和BMP4蛋白表达量增加［(F组别=40.18, P<0.001; F时间=141.90, P<0.001)、(F组别=426.70, P<0.001; F时间=1 329, P<0.001)］。在各个相同时间点,与I/R组相比,Noggin各组小鼠神经功能评分降低(P<0.001),学习、记忆能力提高(P<0.001),脑梗死面积减小(P<0.001),SOD活性升高及MDA含量降低(P<0.001),神经元数量增加及染色变浅(P<0.001),GFAP阳性细胞和BMP4 蛋白表达量降低(P<0.001)。 结论 Noggin蛋白对小鼠脑缺血再灌注损伤后学习、记忆能力提高与DG组织损伤修复有改善作用,其作用机制可能与阻断BMP4蛋白表达和抑制胶质细胞的反应性增生有关。     

丙泊酚对结肠癌细胞增殖、迁移及Wnt1和β-catenin表达的影响

目的 探讨丙泊酚对不同分化程度人结肠癌细胞体外增殖、迁移及肿瘤细胞中Wnt1、β-catenin mRNA表达的影响。 方法 选取2株分化程度不同的人结肠癌细胞株Caco-2(高分化)和LoVo(低分化),分别按丙泊酚浓度分为P₀(0 μg/mL)、P_6.25(6.25 μg/mL)、P₂₅(25 μg/mL)、P₁₀₀(100 μg/mL)组,CCK-8法检测丙泊酚对Caco-2和LoVo细胞生长增殖的影响,Transwell迁移实验检测丙泊酚对Caco-2和LoVo细胞迁移的影响,比较不同分化程度结肠癌细胞对丙泊酚的敏感性。Real-time PCR检测丙泊酚处理后Caco-2和LoVo细胞中Wnt1和β-catenin基因mRNA的表达。 结果 CCK-8检测结果显示,对于高分化Caco-2细胞,P₁₀₀组处理24 h与P₀组相比细胞存活率差异有统计学意义(P<0.001),P₂₅组处理48 h与P₀组相比,差异有统计学意义(P<0.05);对于低分化LoVo细胞,P₁₀₀组处理24 h与P₀组相比,细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),P₂₅组处理48 h与P₀组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell迁移实验结果表明,Caco-2细胞系P_6.25、P₂₅、P₁₀₀组与P₀组OD_{570 nm}值比较,差异有统计学意义(P<0.001);LoVo细胞系P₂₅、P₁₀₀组与P₀组OD_{570 nm}值比较,差异有统计学意义(P<0.001)。Real-time PCR结果表明,Caco-2细胞系P₂₅、P₁₀₀组与P₀组Wnt1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),LoVo细胞系P₂₅、P₁₀₀组与P₀组Wnt1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.001);Caco-2细胞系P₂₅、P₁₀₀组与P₀组β-catenin mRNA表达差异有统计学意义(P<0.001),LoVo细胞系P₁₀₀组与P₀组β-catenin mRNA表达差异有统计学意义(P<0.001)。 结论 丙泊酚呈剂量和时间依赖性抑制人结肠癌细胞Caco-2和LoVo的生长增殖及迁移。Caco-2较LoVo对丙泊酚的抑制作用更敏感。     

丹参酮IIA对子宫内膜癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨丹参酮IIA对子宫内膜癌细胞增殖与凋亡的影响。方法 将丹参酮IIA作用后的子宫内膜癌细胞设置为对照组、低浓度组(1μg/mL)、中浓度组(2.5μg/mL)及高浓度组(5μg/mL);同时将酪蛋白激酶2(CK2)特异性磷酸化抑制剂(TBB)和丹参酮IIA共同处理后的细胞设置为对照组、TBB组(60μmol)、药物组(5μg/mL)及药物(5μg/mL)+TBB组(60μmol)。结晶紫染色法检测丹参酮IIA对子宫内膜癌细胞增殖的影响;Western blotting检测各组子宫内膜癌细胞中P53、活化胱天蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、CK2α、乳腺癌缺失因子1(DBC1)、沉默信息调节因子1(SIRT1)、磷酸化乳腺癌缺失因子1(p-DBC1)的表达;同时加入TBB,检测子宫内膜癌细胞中CK2α、DBC1、p-DBC1的表达。结果 结晶紫染色结果显示,对照组和高浓度组各时间点(24、48、72 h)细胞增殖率分别为(0.87±0.05)%、(0.61±0.04)%、(0.30±0.04)%、(0.09±0.04)%,差异...     

右美托咪定介导Wnt通路对七氟醚诱导的新生大鼠认知功能障碍的影响

目的 探索右美托咪定(Dex)通过Wnt信号通路对七氟醚诱导的新生大鼠认知功能障碍的影响。方法 出生7 d SD大鼠60只,分成5组:正常对照组(不做任何干预处理)、Dex处理组(腹腔注射 25 μg/kg的Dex)、七氟醚处理组(3%七氟醚处理4 h)、七氟醚+Dex处理组(25 μg/kg Dex注射后3%七氟醚吸入4 h)、七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(Wnt抑制剂XAV393 及25 μg/kg Dex注射后3%七氟醚吸入4 h)。3周后Morris水迷宫检测大鼠认知功能;TdT介导的dUTP缺口末端标记实验(TUNEL)染色检测海马神经元细胞凋亡;神经核(NeuN)染色检测海马神经元存活;蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达;荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹检测Wnt/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/β-链蛋白信号通路相关因子表达。结果 随着训练时间的延长,各组大鼠逃避潜伏期的时间逐渐缩短,与正常对照组相比,Dex处理组差异无统计学意义(t=0.304,P=0.768);七氟醚处理组(t=5.823,P=0.002)、七氟醚+Dex处理组(t=3.188,P=0.010)及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=5.784,P=0.002)逃避潜伏期时间延长,差异有统计学意义。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组(t=3.646,P=0.005)逃避潜伏期时间减少,差异有统计学意义。与七氟醚+Dex处理组比较,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=3.296,P=0.008)逃避潜伏期时间增长,差异有统计学意义。各组穿越平台次数结果显示,与正常对照组相比,七氟醚处理组(t=5.179,P=0.004)、七氟醚+Dex处理组(t=2.309,P=0.043)及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=3.871,P=0.003)穿越平台次数减少,差异有统计学意义;与七氟醚处理组比较,七氟醚+Dex处理组(t=3.296,P=0.008)穿越平台次数增加;与七氟醚+Dex处理组比较,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=2.361,P=0.041)穿越平台次数较少。与正常对照组相比,Dex处理组凋亡细胞数差异无统计学意义(t=1.920,P=0.127),七氟醚处理组、七氟醚+Dex处理组及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组凋亡细胞数均有不同程度增加,其中七氟醚处理组增加16%(t=13.436,P=0.002),七氟醚+Dex处理组增加5%(t=7.752,P=0.001),七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组增加11.5%(t=12.612,P=0.002)。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组细胞凋亡数降低11%(t=8.521,P=0.002),七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组降低5.5%(t=3.123,P=0.036)。与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组细胞凋亡增加6.5%(t=6.250,P=0.003)。在0.15 mm²区域内,与正常对照组相比,Dex处理组(t=0.898,P=0.136)及七氟醚+Dex处理组(t=0.203,P=1.519)阳性细胞数差异无统计学意义,七氟醚处理组及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组阳性细胞数均有不同程度减少,其中七氟醚处理组、七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组阳性细胞数分别减少31(t=4.702,P=0.009)及26个(t=3.948,P=0.014)。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组阳性细胞数增加17个(t=3.415,P=0.018),七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组增加5个(P=0.001)。与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组阳性细胞减少12个(t=3.010,P=0.039)。蛋白质免疫印迹检测海马组织中凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶3、Bax、Bcl-2的灰度值,结果显示与正常对照组相比,Dex处理组差异无统计学意义(t=0.612,P=0.573;t=1.225, P=0.288;t=0.961,P=0.391),七氟醚处理组、七氟醚+Dex处理组及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组Bax(t=13.440,P=0.002;t=8.520,P=0.001;t=13.320,P=0.002)及半胱氨酸蛋白酶3(t=9.860,P=0.001;t=6.120,P=0.004;t=11.620,P=0.003)均表达上调,Bcl-2(t=7.671,P=0.002;t=2.880,P=0.045;t=6.280,P=0.003)表达下调。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组Bax(t=8.130,P=0.001)及半胱氨酸蛋白酶3(t=7.120,P=0.002)均表达下调,Bcl-2(t=6.201,P=0.003)表达上调。与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组Bax(t=7.310,P=0.002)及半胱氨酸蛋白酶3(t=7.750,P=0.002)均表达上调,Bcl-2(t=4.206, P=0.013)表达下调。荧光定量PCR检测海马组织Wnt/β-链蛋白信号通路相关分子Wnt3a、GSK-3β、β-链蛋白mRNA的表达情况显示,与正常对照组相比,Dex处理组Wnt3a、GSK-3β及β-链蛋白(t=1.230,P=0.290;t=0.901,P=0.418;t=1.837,P=0.140)及七氟醚+Dex处理组Wnt3a、β-链蛋白(t=1.102,P=0.332;t=1.030,P=0.361)表达差异均无统计学意义,七氟醚处理组(t=5.790,P=0.004;t=7.130,P=0.002)、七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=7.130,P=0.002;t=5.500,P=0.005)中Wnt3a、β-链蛋白表达均下调,七氟醚处理组(t=4.800,P=0.009)、七氟醚+Dex处理组(t=2.940,P=0.045)及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=3.100,P=0.042)GSK-3β表达上调。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组Wnt3a(t=4.460,P=0.011)及β-链蛋白(t=6.390,P=0.003)均表达上调,GSK-3β(t=4.160,P=0.004)表达下调。与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组Wnt3a(t=5.730,P=0.005)及β-链蛋白(t=4.640,P=0.010)均表达下调,GSK-3β有表达上调趋势,但差异无统计学意义(t=3.240,P=0.117)。与正常对照组相比,Dex处理组(t=0.735,P=0.503;t=0.245,P=0.819)及七氟醚+Dex处理组(t=1.623,P=0.180;t=1.159,P=0.311)Wnt3a、β-链蛋白表达差异均无统计学意义,七氟醚处理组(t=7.280,P=0.002;t=5.640,P=0.005)与七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=7.240,P=0.002;t=4.970,P=0.008)表达下调。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组Wnt3a(t=6.410,P=0.003)、β-链蛋白表达上调(t=4.640,P=0.015)。与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组Wnt3a(t=6.360,P=0.003)、β-链蛋白(t=4.640,P=0.016)表达下调。蛋白质免疫印迹检测P(ser9)-GSK-3β/GSK-3β蛋白灰度值,结果显示与正常对照组相比,七氟醚处理组(t=11.280,P=0.002)、七氟醚+Dex处理组(t=7.080, P=0.002)及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=9.970,P=0.001)P(ser9)-GSK-3β/GSK-3β表达均下调。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组P(ser9)-GSK-3β/GSK-3β表达均上调(t=8.310,P<0.001)。与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组P(ser9)-GSK-3β/GSK-3β表达下调(t=5.510,P=0.005)。结论 Dex可介导Wnt/GSK-3β/β-链蛋白信号通路,抑制七氟醚诱导的新生大鼠认知功能障碍。