不同浓度钛合金微粒对成骨细胞信号通路中转录表达因子RUNX2影响

目的关节假体松动后出现骨溶解,如何有效阻止骨溶解,一直是个难题。文中通过探讨不同浓度钛合金微粒对转录因子RUNX2影响,进一步了解磨损微粒抑制成骨细胞作用机制。方法实验分为空白对照组和钛合金微粒处理组5μg/ml(A组)、10μg/ml(B组)、15μg/ml(C组)。采用细胞计数试剂盒-8法检测各组培养120 h成骨细胞增殖活性。分别采用RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western)检测培养120 h后成骨细胞的RUNX2 mRNA和蛋白表达。结果培养120 h后,与空白对照组相比,各钛合金处理组细胞增殖活性显著下降(P<0.05),B组、C组细胞中RUNX2 mRNA水平亦明显下降(P<0.01),并且RUNX2蛋白表达水平变化趋势与其mRNA的表达变化趋势一致。结论钛合金微粒降低成骨细胞增殖活性,下调成骨细胞RUNX2-转录因子的表达。钛合金微粒对RUNX2表达水平的调控可能是其抑制成骨细胞增殖的机制之一。     

降钙素基因相关肽对大鼠成骨细胞表达转录因子RUNX2的影响

目的：探讨外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对大鼠颅盖骨来源成骨细胞RUNX2因子表达水平的影响,进一步了解CGRP促进成骨的作用机制。方法：用酶消化法培养原代大鼠成骨细胞并鉴定;MTT法筛选促进成骨细胞增殖的有效浓度,将含有不同浓度CGRP的条件培养基加入大鼠成骨细胞培养体系中,药物作用48 h后,用半定量RT-PCR和Western blotting方法检测大鼠成骨细胞转录因子RUNX2在mRNA和蛋白水平的表达。 结果：当CGRP浓度在10^-8～10^-6 mol/ L范围时,对成骨细胞增殖有明显促进作用,增殖率分别为71.9%,142.1%,321.0%,P<0.05;浓度为10^-7 和10^-6 mol/ L的CGRP作用于成骨细胞48 h后,转录因子RUNX2在mRNA水平的表达量明显上调,分别增强(46.2±11.2)%和(58.6±14.0)%, P<0.05;转录因子RUNX2的蛋白表达变化趋势与其mRNA的表达变化趋势基本一致。结论：一定浓度的CGRP对大鼠成骨细胞转录因子RUNX2的表达有直接促进作用,RUNX2可能参与了CGRP刺激成骨细胞增殖反应的机制。     

EPHA2在人骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用

目的:研究EPHA2在人骨髓间充质干细胞(hBMSC)成骨分化过程中表达的动态变化及其在成骨分化中的作用.方法:hBMSC成骨分化诱导0、4、10和14 d后分别收集细胞提取RNA和蛋白,采用Real-timePCR和Western blot方法检测EPHA2mRNA及蛋白表达;使用EPHA2的si-RNA下调EPHA2表达后进行成骨分化诱导,检测下调EPHA2表达对早期成骨分化指标ALP活性及晚期成骨分化指标钙沉积、成骨分化标志物OSX、OCN和成骨分化关键转录因子RUNX2表达的影响.结果:EPHA2在hBMSC成骨分化过程中表达逐渐上升,下调EPHA2表达能抑制ALP活性和钙沉积,抑制OSX、OCN及关键转录因子RUNX2的表达.结论:EPHA2在hBMSC成骨分化过程中表达逐渐上升,EPHA2可能通过增强RUNX2的表达从而促进hBMSC成骨分化.     

5-氮-2＇脱氧胞苷对Reh细胞增殖及RUNX3基因启动子区甲基化状态的影响

目的：探讨5-氮-2＇脱氧胞苷对Reh细胞增殖及其抑癌基因RUNX3启动子区甲基化状态的影响。方法：应用MTT法观察5-氮-2＇脱氧胞苷对Reh细胞增殖的抑制能力;采用甲基化特异性PCR（MSP）检测5-氮-2＇脱氧胞苷干预前后RUNX3基因启动子区的甲基化状况;应用RT-PCR检测干预前后RUNX3基因的mRNA表达水平的变化。结果：经5-氮-2＇脱氧胞苷处理后,RUNX3基因启动子高甲基化的区域发生部分去甲基化,5-氮-2＇脱氧胞苷处理前启动子高甲基化的RUNX3 mRNA未见表达,而在其处理后该基因可见重新表达,经5-氮-2＇脱氧胞苷处理后,Reh细胞生长缓慢。结论：5-氮-2＇脱氧胞苷能使Reh细胞RUNX3基因启动子区发生部分去甲基化,从而调控RUNX3基因表达并能抑制其细胞生长。启动子区异常甲基化是白血病Reh细胞RUNX3基因失活的主要原因之一。     

骨基质蛋白在小鼠胫骨牵引成骨过程中的表达

目的探讨小鼠胫骨牵引成骨动物模型,并检测骨基质蛋白在牵引成骨过程中的表达和作用.方法8周龄雄性CD-1小鼠36只,接受左胫骨中上段骨干横行截骨,安置特制延长外固定架,胫骨牵引过程包括5 d静止期,12 d牵引期和70 d固塑期,牵引速率为0.1 mm/Bid,共0.2 mm/d.术后于不同时间点分组采集左胫骨标本,分别作组织学检查和骨基质蛋白mRNA检测.结果组织学检查显示静止期其修复过程基本与骨折愈合相似.牵引期,被牵引骨痂显示三个典型的生物学功能区:纤维间区,初始骨基质前沿和微脊柱形成区.固塑期早期,牵引骨痂骨性愈合,第10周骨髓腔再通,新生骨再塑基本上完成.mRNA分析显示在牵引成骨早期,软骨内成骨及膜内成骨同时发生.牵引中期以后软骨内成骨逐渐减少,而转为以膜内成骨为主的成骨过程.结论通过对骨基质蛋白及相关蛋白的分析,结果表明牵引成骨与骨折愈合过程不同.早期软骨内成骨和膜内成骨同时存在,但在机械牵张力作用下转为以膜内成骨为主的成骨过程.该研究亦证实小鼠胫骨牵引成骨过程与人体及其他动物模型基本相同,可作为一种非常有意义的研究骨再生和修复的在体动物模型.     

RUNX3蛋白在宫颈癌中的表达及临床意义

目的 检测RUNX3蛋白在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌组织中的表达情况,并探讨其与宫颈癌发生发展的关系.方法 采用免疫组化方法检测48例宫颈癌、33例CIN(CIN Ⅰ 16例,CINⅡ～Ⅲ17例)、20例正常宫颈组织中RUNX3蛋白的表达,比较其阳性率的差异.结果 RUNX3蛋白在正常宫颈、CIN Ⅰ、CINⅡ～Ⅲ、宫颈癌中的表达呈下降趋势,4组间差异有统计学意义(P＜0.05).RUNX3蛋白的表达与宫颈病变的进展程度、临床分期、病理分级及是否有淋巴结转移明显相关(P＜0.05),与年龄、病理组织学类型及高危型人乳头瘤病毒感染无关(P＞0.05).结论 RUNX3蛋白表达与宫颈癌的发生、发展密切相关,其表达情况有可能作为临床预后判定指标之一.     

RUNX3蛋白在肝癌组织中的表达及其意义

目的探讨RUNX3蛋白在肝癌组织及其癌旁组织中的表达情况,并分析其与临床病理因素的相关性。方法采用免疫组织化学法检测RUNX3蛋白在肝癌组织及其癌旁组织中的表达水平,并分析其与临床病理因素的相关性。结果 RUNX3蛋白在肝癌组织、癌旁组织中的表达阳性率分别为49.02%(25/51)、82.35%(42/51),两者间有显著差异(χ2=12.5706,P<0.01)。RUNX3蛋白在分化程度、门静脉癌栓、肝内转移等病理因素的表达差异有统计学意义(P<0.05),而在性别、肿瘤直径、肿瘤部位、癌肿出血坏死、组织分型的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RUNX3蛋白在肝癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织。RUNX3蛋白表达下调可能对肝癌的发生、发展具有重要作用,RUNX3基因可能是肝癌的抑癌基因。     

RUNX3蛋白在脑胶质瘤中的表达特点及临床意义

目的探求脑胶质瘤RUNX3的表达及生物学意义。方法手术切除脑胶质瘤标本55例相对制成石蜡组织微阵列,运用免疫组织化学方法检测RUNX3在上述55例癌灶和其中19例癌旁相对正常脑组织中的表达情况和分布特点,并分析其表达与患者临床病理特征之间的关系。结果胶质瘤中RUNX3蛋白表达率为38.2%(21/55)较相对正常脑组织中表达率94.7%(18/19)明显下降,差异有显著性意义(P<0.05)。RUNX3蛋白表达无性别、年龄及病理分级间差异,但在病灶直径≥3 cm及生存期<3年的胶质瘤患者中,RUNX3蛋白表达显著低于病灶直径<3 cm及生存期>3年的患者(P<0.05)。RUNX3在不同类型脑胶质瘤中呈现差异表达。结论RUNX3蛋白表达下调可能与胶质瘤进展及患者的预后有关。     

RUNX3基因在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:探讨RUNX3在宫颈癌发生、发展中的意义.方法:采用免疫组织化学方法检测25例正常宫颈、34例宫颈上皮内瘤变(intraepithelia neoplasia,CIN)、48例宫颈癌组织中RUNX3蛋白的表达,应用SYBR Green Ⅰ嵌合荧光real-time PCR技术检测10例正常宫颈、24例CIN和30例宫颈癌组织中RUNX3mRNA的表达.结果:RUNX3蛋白、mRNA在正常宫颈、CIN Ⅰ、CINⅡ～Ⅲ 和宫颈癌中的表达呈递减趋势,4组间差异有统计学意义(P＜0.05).RUNX3蛋白、mRNA的表达与宫颈癌分化程度、临床分期以及是否淋巴结转移明显相关(P＜0.05),与年龄、组织学类型和高危型人乳头状瘤病毒感染无显著相关(P＞0.05).结论:RUNX3可能作为抑癌基因参与了宫颈癌的发生、发展.     

子宫内膜腺癌组织中人类RUNT相关转录因子3与果蝇zeste基因增强子同源物2的表达

目的:检测子宫内膜腺癌组织中人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)和果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)的表达.方法:采用免疫组化SP法检测60例子宫内膜腺癌、40例子宫内膜增殖症和20例正常增生期子宫内膜组织中RUNX3与EZH2蛋白的表达.结果:子宫内膜腺癌、子宫内膜增殖症与正常增生期子宫内膜组织RUNX3蛋白的阳性表达率分别为43.3%(26/60)、67.5%(27/40)与95.0%(19/20),3组间相比,差异有统计学意义(χ2=18.090,P＜0.001);上述3种组织中EZH2蛋白的阳性表达率分别为75.0%(45/60)、42.5%(17/40)与15.0%(3/20),3组间相比,差异有统计学意义(χ2=25.041,P＜0.001).RUNX3蛋白的表达与子宫内膜腺癌的组织分化程度、TNM分期及浸润深度有关(χ2=-3.561,-2.367,5.370,P均＜0.05),EZH2蛋白的表达与子宫内膜腺癌的组织分化程度及浸润深度有关(χ2=-3.084,5.568.P均＜0.05).子宫内膜腺癌组织中RUNX3和EZH2蛋白的表达相关(rp=0.330,P=0.007).结论:RUNX3蛋白表达缺失和EZH2蛋白过度表达在子宫内膜腺癌的发生与发展中起重要作用,高表达的EZH2可能在一定程度上参与调控RUNX3基因的表达下调.     

RUNX3和CerbB-2在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨乳腺癌组织中RUNX3和cerbB-2的表达及其与乳腺癌生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测55例乳腺癌组织及癌旁乳腺组织中RUNX3、cerbB-2的表达。结果乳腺癌组织中RUNX3蛋白表达(40.0%)显著低于癌旁乳腺组织的表达(98.2%)(P<0.01),且与年龄、组织分化及临床分期呈负相关(均P<0.05),而与肿块大小、淋巴结转移等无关(均P>0.05)。cerbB-2在乳腺癌中的表达(50.9%)显著高于癌旁乳腺组织的表达(29.1%)(P<0.01),且与肿块大小、组织分化、淋巴结转移及临床分期呈正相关(P<0.05),而与年龄无关(P>0.05)。RUNX3在乳腺癌中的表达与cerbB-2呈负相关(P<0.01)。结论乳腺癌中RUNX3蛋白表达降低,其表达与年龄、组织分化及临床分期密切相关,且与cerbB-2表达呈负相关。联合检测RUNX3、cerbB-2有助于提高乳腺癌侵袭转移能力的评估,对乳腺癌的预后判断具有重要的临床意义。     

胶体金对MC3T3-E1增殖、分化及RUNX2基因表达的影响

目的研究30nm胶体金对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。方法体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,在仪-MEM培养液中加入不同体积的胶体金处理细胞,利用M1Tr法检测胶体金对成骨细胞增殖活性的影响,碱性磷酸酶活性测定及RT—PCR法分别检测其对成骨细胞分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。结果浓度为10^（-10）、10^（-11）、10^（-12）mg／L的胶体金均促进成骨细胞的增殖,且ALP相对活性及RUNX2基因表达也均高于阳性对照组。结论30nm胶体金能促进小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2的表达,进而促进成骨。     

RUNX2/LAPTM5在小鼠颅骨前成骨细胞矿化诱导中的表达

目的探讨RUNX2/LAPTM5在矿化诱导过程中的表达与成骨及溶酶体的相关性。方法矿化诱导MC3T3-E1，对照组不做处理，茜素红染色检测矿化情况，碱性磷酸酶染色检测成骨分化情况。RT-qPCR及Western blot检测分化0-5 d RUNX2及LAPTM5的基因及蛋白表达。过表达与干扰RUNX2/LAPTM5的表达后，Western blot检测RUNX2、LAPTM5的表达。过表达与干扰LAPTM5的表达后，Western blot检测成骨相关基因碱性磷酸酶、骨钙素的表达。结果倒置显微镜下观察，茜素红染色矿化结节计数随时间变化逐渐增多，矿化结节的大小也逐渐变大；碱性磷酸酶染色蓝紫色颗粒计数随时间逐渐增加。RT-qPCR及Western blot结果显示RUNX2及LAPTM5的表达，其在成骨矿化过程中呈上升趋势（P < 0.001）。过表达与干扰RUNX2影响LAPTM5表达（P < 0.05）；过表达与干扰LAPTM5对RUNX2的影响不显著。过表达与干扰LAPTM5影响了成骨的表达（P < 0.01）。结论RUNX2/LAPTM5可能参与了成骨细胞分化调节，RUNX2可能参与LAPTM5的表达调控。RUNX2/LAPTM5可能在溶酶体参与成骨矿化的过程中起到桥梁作用。     

SMURF1、RUNX3 在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨 SMURF1、RUNX3 蛋白在甲状腺乳头状癌（PTC）中的表达及其与患者临床病理特征的相关性。 方法 采 用免疫组化 SP 法检测 60 例 PTC 组织及 20 例正常甲状腺组织中 SMURF1、RUNX3 蛋白的表达,分析两者在 PTC 与正常甲状腺组 织中的表达差异及其与 PTC 患者临床病理特征的相关性。 结果 PTC 组织中 SMURF1 蛋白阳性表达率高于正常甲状腺组织,而 RUNX3 阳性表达率低于正常甲状腺组织（均 P＜0.01）;SMURF1、RUNX3 蛋白的表达与 PTC 患者的 TNM 分期、病理分级及淋巴结转 移均相关（均 P＜0.05）,而与患者性别、年龄及肿瘤大小等因素均无关（均 P ＞0.05）。PTC 组织中 SMURF1 的蛋白表达与 RUNX3 蛋 白表达呈负相关（r＝-0.564,P＜0.05）。 结论 SMURF1、RUNX3 蛋白在 PTC 组织中表达异常,并呈负相关,提示两者可能相互作 用,共同促进 PTC 发生、发展,两者可作为 PTC 分类和分期的辅助指标。     

机械牵张力对小鼠成骨细胞形态及BMP-2、碱性磷酸酶和胶原表达的影响

目的: 在正畸治疗过程中,牙齿在正畸力和机械牵引力下的移动必然伴随着积极的牙槽骨改建。骨形成蛋白-2（BMP-2）,ALP（碱性磷酸酶）和COL-I（I型胶原蛋白）是骨改建过程中非常重要的细胞因子,但目前对机械牵张力与BMP-2 ,ALP和COL-I之间的关系仍不甚了解。本实验的目的是研究不同大小机械牵张力对成骨细胞形态及其BMP-2,ALP和COL-I表达的影响。 方法: 对小鼠成骨样细胞分别施加0％、6％、12％和18％形变率的机械牵张力后,用RT-PCR方法检测BMP-2,ALP和COL-I的mRNA表达。其结果经SPSS13.0统计软件进行方差分析。 结果: 加力后细胞基本呈长梭形,排列更加有序,与加载牵张力的方向相一致;各实验组比对照组的BMP-2,ALP和COL-I mRNA表达量有明显增加,差别有统计学意义（p<0.05）,其中 12％拉伸形变组的增加量最大。 结论: 一定大小的机械牵张力可以促进成骨细胞BMP-2,ALP和COL-I的表达,并引起细胞的形态和排列方式发生改变,调控骨的形成,从而影响正畸治疗中的骨改建。     

RUNX3、p21CIP1/WAF1、cyclinD1在肝细胞性肝癌中的表达及其临床意义

目的 探讨RUNX3、p21CIP1/WAF1、cyclinD1蛋白在肝细胞性肝癌(HCC)和癌旁组织中的表达,以及三者在HCC组织中表达的相关性,三者的表达与临床病理因素之间的关系.方法 采用回顾性分析方法,收集43例HCC新鲜标本及其癌旁组织,用免疫印迹(Western Blot)技术检测癌及癌旁组织中RUNX3、p21CIP1/WAF1、cyclinD1蛋白的表达.结果 RUNX3、p21CIP1/WAF1蛋白在HCC组织中的相对表达值低于癌旁组织,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);cyclinD1蛋白在肝癌组织中的相对表达值高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001);RUNX3、p21CIP1/WAF1、cyclinD1蛋白相对表达值均与TNM分期及组织分化程度有关(P<0.05);HCC组织中RUNX3蛋白与p21CIP1/WAF1蛋白表达呈正相关(r=0.696,P<0.05),RUNX3蛋白与cyclinD1蛋白表达呈负相关性(r=-0.435,P<0.05).结论 RUNX3蛋白可能通过影响p21CIP1/WAF1和cyclinD1蛋白的表达影响肝细胞性肝癌的发生发展;联合检测RUNX3、p21CIP1/WAF1和cyclinD1蛋白的表达可能对HCC的诊断及预后判断有一定参考价值.     

伤科接骨片对MC3T3-E1在小鼠体内成骨能力的作用研究

目的：观察伤科接骨片对小鼠体内MC3T3-E1细胞成骨能力的作用。 方法：30只小鼠随机分为3组（每组10只）：(1)药物+细胞组：伤科接骨片及饲料喂养+MC3T3-E1+明胶海绵;(2)细胞组：单纯饲料+MC3T3-E1+明胶海绵;(3)阴性对照组：单纯饲料+生理盐水+明胶海绵。手术在小鼠右侧股部臀大肌下方制成肌袋,用无菌明胶海绵吸附MC3T3-E1细胞悬液（药物+细胞组和细胞组）,或者生理盐水（阴性对照组）后植入肌袋内。术后常规饲料喂养,3天后开始按组分别灌胃给药,方法如下：药物+细胞组将伤科接骨片(0.35g/片)用蒸馏水配制成浓度为20mg/ml的混悬液,按每日2.0mg/g的剂量灌胃给药,细胞组和对照组均灌胃给予每日2.0mg/g的蒸馏水。分别于建模后第4、8周每组麻醉后处死5只小鼠,取材后分别从大体,切片HE染色光镜,以及扫描电镜下观察。 结果：术后4周,药物+细胞组和细胞组肌袋内均可见有新骨出现,术后8周两组均形成松质骨样结构的板层骨,但是药物+细胞组较细胞组形成的板层骨结构更为成熟,成骨细胞数量更多,胶原纤维分泌量也更多,并有更多的钙化结节形成。阴性对照组内未见有明显骨化现象。 结论：伤科接骨片可以促进MC3T3-E1细胞在动物体内的成骨作用。