甲状旁腺激素相关肽在高糖诱导NRK-52E细胞转分化中的作用

目的 探讨甲状旁腺素相关肽在高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E转分化作用.方法 应用RT-PCR及Western blot检测无糖组(无糖培养基培养),正常葡萄糖组(含5 mmol/ L葡萄糖DMEM培养基培养)组及高浓度葡萄糖组(含16.7 mmol/L葡萄糖DMEM培养基培养)中甲状旁腺素相关肽(parathyroid hormone-related peptide,PTHrP)及其受体1在大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E表达.10 pmol/L PTHrP及16.7 mmol/L葡萄糖分别干预72 h,应用Western blot检测转化因子β、金属蛋白酶2、Ⅰ型胶原及α平滑肌肌动蛋白表达情况.ROS含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测.结果 与空白组和正常葡萄糖组相比,高浓度葡萄糖能显著上调PTHrP(P<0.05, P<0.01)和甲状旁腺激素受体1(Type 1 receptor parathyroid hormone-related protein,PTH1R) (P<0.01, P<0.05)蛋白及 PTHrP mRNA(P<0.01)表达,PTH1R mRNA在高浓度及正常葡萄糖浓度组的表达高于空白组(P<0.01).对比空白组,PTHrP能显著上调NRK-52E细胞转化因子β1(P<0.01)、Ⅰ型胶原(P<0.01)及α平滑肌肌动蛋白(P<0.01)表达,而在高浓度葡萄糖状态下,其表达上调更显著(P<0.05, P<0.01).金属蛋白酶2在PTHrP及高浓度葡萄糖共同干预下表达上调(P<0.01).PTHrP及高血糖均可以升高NRK-53E细胞ROS含量(P<0.01, P<0.01).结论 高浓度葡萄糖可能通过调控PTHrP/PTH1R的水平从而影响肾小管导管上皮转分化.     

不同浓度葡萄糖对INS-1细胞PTHrP及PTH1R的表达影响研究

目的　探讨不同浓度葡萄糖对INS-1细胞PTHrP/PTH1R表达的影响以及对细胞增殖的作用。方法　根据不同干预条件分为无糖组,正常葡萄糖组（5mmol/L）组及高浓度葡萄糖（30mmol/L）组,培养96h应用MTT检测各组细胞活力,应用Westernblot及RT-PCR检测PTHrP/PTH1R蛋白及mRNA表达。结果　无糖组及高浓度葡萄糖组细胞活力比较正常葡萄糖组下降,高浓度葡萄糖组细胞活力低于无糖组,PTHrP和PTH1R蛋白或mRNA在高浓度葡萄糖组中表达显著下调。结论　表明不同浓度葡萄糖可以通过调控PTHrP/PTH1R的水平从而影响INS-1的增殖。     

全反式维A酸、阿维A和他扎罗汀对人黑色素瘤细胞A375凋亡和Bax/Bcl-2蛋白表达的影响及意义

目的 探讨全反式维A酸(ATRA)、阿维A及他扎罗汀对人黑色素瘤细胞A375凋亡及Bax/Bcl-2蛋白表达的影响及其意义。方法 采用体外培养和流式细胞仪检测细胞凋亡(AnnexinV-PI法),SABC免疫细胞化学方法检测细胞Bax/Bcl-2蛋白表达情况。结果 浓度均为10^-5mol/L的ATRA、阿维A及他扎罗汀能不同程度地诱导了人黑色素瘤细胞A375凋亡,其中阿维A作用最为显著,凋亡率13.42%,明显高于对照组、ATRA及他扎罗汀组(均P<0.05);其次为ATRA(5.03%,明显高于对照组及他扎罗汀组,P<0.05)和他扎罗汀组(凋亡率2.88%)。3种维A酸亦使A375细胞Bax蛋白阳性表达增强而Bcl-2蛋白阳性表达减弱(P<0.05),其中阿维A作用最强,其次为ATRA和他扎罗汀。结论 维A酸促进A375细胞凋亡可能部分通过以线粒体为核心的凋亡途径。阿维A可能是防治黑色素瘤的有效药物。     

生物活性玻璃45S5体外对根尖牙乳头细胞成牙本质方向分化的影响

目的 明确生物活性玻璃(45S5)对人根尖牙乳头细胞体外成牙本质方向分化的作用。方法 浓度为0.1 mg/mL的45S5浸提培养液与人根尖牙乳头细胞共培养,离子体发射光谱检测45S5浸提培养液硅、钙、磷离子浓度,细胞活性噻唑蓝比色法检测细胞增殖,Realtime-PCR检测细胞成牙本质方向分化相关基因牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白(DMP-1)的表达,茜素红矿化结节染色及氯化十六烷基吡啶钙结节半定量分析矿化结节形成。结果 与对照组相比,45S5浸提培养液中硅离子浓度显著升高(P<0.05);45S5浸提培养液连续诱导培养根尖牙乳头细胞3、5、7 d后,与对照组相比显著促进细胞增殖(P<0.05);45S5浸提培养液连续诱导培养根尖牙乳头细胞7 d,细胞DSPP、DMP-1的表达量显著高于对照组(P<0.05);45S5生物活性玻璃体浸提培养液连续诱导培养根尖牙乳头细胞14和21 d,茜素红染色后观察45S5组和矿化诱导培养液(OM)组均见明显红染矿化结节,对照组未见明显红染矿化结节;氯化十六烷基吡啶钙结节半定量分析各组钙离子浓,45S5和OM组OD值高于对照组(P<0.05),45S5组OD值高于OM组(P<0.05)。结论 0.1 mg/mL生物活性玻璃45S5体外促进根尖牙乳头细胞增殖、成牙本质方向分化相关基因高表达和矿化结节形成,45S5体外促进根尖牙乳头细胞成牙本质方向分化。     

体外培养的人牙囊细胞矿化相关标志物的表达

目的 体外培养人牙囊细胞,探讨牙囊细胞是否具成骨、成牙骨质细胞表型特征,是否可作为牙骨质再生的种子细胞。方法 酶消化联合组织块法获得人牙囊细胞,免疫酶细胞化学染色技术检测其Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的表达,RT-PCR技术检测细胞的骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶的表达。矿化诱导并连续培养牙囊细胞,行Von kossa染色检测体外矿化形成情况。结果 免疫组化结果:牙囊细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨桥蛋白、骨粘连蛋白呈不同程度的阳性表达;RT-PCR结果显示骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶表达。经矿化诱导后的牙囊细胞在20d时可形成矿化结节,von Kossa染色阳性。结论 牙囊细胞具有成骨细胞、成牙骨质细胞的部分特性,体外培养的人牙囊细胞具有分泌合成矿化组织的能力,可试将其作为牙周组织再生的种子细胞。     

NLE1在结肠癌中的表达及其对HT29细胞增殖凋亡的影响

目的 验证Notchless同源物1(Notchless homolog 1,NLE1)在结肠腺瘤及腺癌组织中的表达水平,评价其可能作用及机制。方法 通过免疫组化及实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法评价NLE1在结肠正常黏膜、腺瘤组织及腺癌组织中的表达水平。通过慢病毒转染,评价NLE1沉默对HT29细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。结果 免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色显示,NLE1在结肠正常黏膜、腺瘤及腺癌组织中的高表达率分别为14.3% (15/105),44.0% (11/25)及68.6% (72/105),在腺癌中明显高于腺瘤(P<0.05),在腺瘤中明显高于正常黏膜(P<0.001)。实时荧光定量PCR显示,结肠正常黏膜、腺瘤及腺癌组织三组的NLE1 mRNA表达分别为1.38±0.82,5.04±2.09,7.57±1.25。腺癌组织中NLE1表达水平明显高于腺瘤(P<0.05),腺瘤组织中明显高于正常黏膜(P<0.01)。NLE1沉默显著抑制HT29细胞增殖(P<0.05)及克隆形成能力(P<0.05),促进其凋亡(P<0.05),并可促进Bax及Fas的表达。结论 结肠腺癌中高表达的NLE1可能通过影响肿瘤细胞增殖凋亡从而发挥促进肿瘤发生的作用。     

维生素D受体对低氧下结肠细胞屏障蛋白的作用

目的 探究低氧环境对结肠细胞DLD-1屏障蛋白影响及补偿机制。方法 将DLD-1分别给予低氧(l% O₂)、维生素D(100 nmol/L)及低氧联合维生素D处理48 h。Western blot法检测各组细胞中紧密连接蛋白封闭小带-1(ZO-1)、闭锁蛋白、Claudin-1和上皮细胞钙黏蛋白及维生素D受体(VDR)的表达情况。采用慢病毒包装的方法建立DLD-1的VDR稳转敲降细胞系及对照,给予低氧处理后,检测上述蛋白的表达情况。结果 与对照组相比,DLD-1低氧处理48 h后紧密连接结构蛋白闭锁蛋白、Claudin-1及VDR表达均增加(P均<0.001),低氧+维生素D联合处理组较单独维生素D处理组除闭锁蛋白、Claudin-1及VDR表达增加外,ZO-1及上皮细胞钙黏蛋白表达也明显增加(P均<0.001)。VDR敲降细胞系低氧处理后,ZO-1(P<0.001)、闭锁蛋白(P<0.05)、Claudin-1(P<0.01)及上皮细胞钙黏蛋白(P<0.001)表达均显著降低。结论 VDR对于低氧状态下结肠细胞系DLD-1肠上皮屏障蛋白表达有调节作用,提示VDR通路可能为低氧环境下保护肠黏膜屏障的另一重要机制。     

JAK1在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 检测酪氨酸激酶1(JAK1)在喉鳞状细胞癌组织中的表达,并分析其与临床病理特征的相关性,探讨JAK1的临床意义。方法 应用RT-qPCR检测mRNA表达和Western Blot检测蛋白表达, 同时采用免疫组织化学技术检测其在喉鳞癌组织及癌旁组织中的表达,根据免疫组化评分分析其与临床病理特征的关系。结果 与癌旁组织相比,喉鳞癌组织JAK1mRNA明显增高,P<0.01;与癌旁组织相比,喉鳞癌组织JAK1蛋白表达明显增高,P<0.01;JAK1表达与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移等因素密切相关,P<0.05。结论 JAK1在喉癌组织中表达升高,在喉癌发生、发展及转移过程中起重要作用。     

雌二醇与雷洛昔芬对体外培养成骨细胞生物学功能的影响及护骨素表达的调控

目的 比较雌二醇与雷洛昔芬对体外培养成骨细胞的生物学作用及对护骨素(OPG)表达的影响。方法 在新生SD大鼠头颅骨第二代成骨细胞培养液中加入不同浓度的雷洛昔芬,并设立雌二醇阳性对照及空白血清对照组;分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能;半定量RT-PCR测定成骨细胞中OPG基因的表达。结果 体外培养成骨细胞在加入不同剂量的雷洛昔芬后,细胞增殖率(A₅₇₀)、OPG蛋白表达与空白对照组相比均无明显差异(P>0.05);但碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节数明显升高,与空白对照组相比差异显著(P<0.05,P<0.01),且与雷洛昔芬浓度呈量效关系;雌二醇对成骨细胞的A₅₇₀值、ALP活性、矿化结节数量、OPG表达等的影响和对照组相比均有显著差异(P<0.01)。结论 雌二醇对体外成骨细胞生物学功能的影响非常显著,并可上调OPG蛋白表达及表达量;雷洛昔芬对体外成骨细胞分化矿化均有影响,但对增殖影响不显著;对OPG表达也无明显影响。此结果提示雷洛昔芬影响骨代谢可能不通过OPG代谢途径,它对体外成骨细胞的作用机制与雌二醇不完全相同。     

高糖状态下甲状旁腺素受体1对乳腺癌的作用机制研究

目的 阐明高糖状态下甲状旁腺受体1(PTH1R)对乳腺癌细胞株SHZ-88的作用机制.方法 应用实时(real time) PCR分别检测0(对照组)、5、15、25 mmol/L葡萄糖浓度下PTH1R mRNA水平;构建出PTH1R基因沉默(siPTH1R)的细胞模型后,分别应用MTT法、TUNEL-FITC/Hoechst33258及Western blot法检测对照组、25 mmol/L葡萄糖处理组(高糖组)、25 mmol/L葡萄糖处理的阴性PTH1R基因序列组(高糖siPTH1R NC组)及高糖阳性PTH1R基因序列组(高糖siPTH1R组)细胞活力、细胞凋亡情况及Bax、Bcb2蛋白的表达.结果 随着葡萄糖浓度升高,PTH1R mRNA水平增高,其中25 mmol/L葡萄糖处理后PTH1R mRNA水平最高(均P＜0.01);高糖siPTH1R组细胞活力(P＜0.05,P＜0.01及P＜0.01)及Bcl-2表达(均P＜0.01)低于对照组、高糖组及高糖siPTH1R-NC组;高糖siPTH1R组中细胞凋亡水平及Bax表达高于对照组、高糖组及高糖siPTH1R-NC组(均P＜0.01);与对照组比较,高糖组细胞活力(P＜0.01)及Bcl-2表达(P＜0.01)增高,而Bax表达(P＜0.01)降低.结论 高糖状态下PTH1R表达水平与SHZ-88细胞增殖能力有关,抑制PTH1R表达可能为糖尿病合并乳腺癌治疗有效靶点之一.     

母血、羊水中胰岛素样生长因子测定及羊膜腔内给药早期诊治胎儿生长

目的 探讨胰岛素样生长因子(IGFs)与胎儿生长受限(FGR)的关系以及胎儿生长受限早期治疗的方法。方法 挑选FGR孕妇44例和正常孕妇36例,抽取中、晚期母血及羊膜腔穿刺术抽取羊水检测IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平。同时将44名FGR孕妇随机分为治疗组和对照组,FGR治疗组行羊膜腔内输注小儿氨基酸治疗,而FGR对照组采用孕妇静脉滴注复方氨基酸治疗,并运用多参数B超比较其疗效。结果 (1)FGR孕妇母血中IGF-Ⅰ水平、羊水中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平显著低于同期正常孕妇(P<0.01),而两组孕妇母血中IGF-Ⅱ水平无显著性差异(P>0.05)。(2)经治疗后,FGR治疗组羊水中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平显著升高(P<0.01),母血IGF-Ⅰ水平也明显升高(P<0.01);而FGR对照组IGF水平无明显改变(P>0.05)。(3)FGR治疗组羊水中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平,母血IGF-Ⅰ水平较FGR对照组显著升高(P<0.01);FGR治疗组孕妇宫高、腹围,胎儿双顶径、股骨长度净增长值及新生儿出生体重均显著高于对照组(P<0.01),且治疗组胎儿出生体重接近正常水平。结论 检测母血IGF-Ⅰ及羊水中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平可早期诊断FGR及监测胎儿宫内生长。羊膜腔内输注小儿氨基酸是治疗FGR的有效方法。     

苯乙基异硫氰酸酯对良性前列腺上皮细胞增殖凋亡的影响及相关机制研究

目的 探讨苯乙基异硫氰酸酯(phenethyl isothiocyanate,PEITC)对人类良性前列腺上皮细胞(benign prostatic hyperplasia cell line,BPH-1)增殖与凋亡的影响及其相关机制。方法 体外培养人永生化前列腺上皮细胞,给予6、12、24 μmol/L PEITC或等量溶剂二甲基亚砜,分别作用6、12、24 h。采用CCK-8检测前列腺上皮细胞活性; Annexin V及PI标记,流式细胞技术检测PEITC处理24 h后 BPH-1细胞凋亡及坏死比例;Western blotting测定PEITC处理24 h后BPH-1细胞中X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis,XIAP)及自噬相关蛋白5-12 (Atg5-12)表达变化;RT-PCR检测PEITC处理24 h后BPH-1细胞中XIAP mRNA表达情况。结果 1) BPH-1细胞经过6、12、24 μmol/L PEITC处理6 h后,细胞相对活性分别为71.22%、48.90%、13.57%;处理12 h后分别为52.57%、42.37%、10.11%;处理24 h后分别为36.73%、25.88%、8.39%;处理36 h后分别为33.57%、25.83%、13.06%,呈现浓度依赖性和时间依赖性。2) BPH-1细胞在 6、12、24 μmol/L PEITC 处理24 h后,细胞凋亡率分别为19.5%、30.4%、40.1%;与对照组相比,12、24 μmol/L处理组差异均具有统计学意义(P<0.05)。 3) BPH-1 细胞在6、12、24 μmol/L PEITC处理24 h后,XIAP 蛋白表达量及 mRNA 表达量均下调,Atg5-12蛋白表达量下调,并呈现剂量依赖性。结论 PEITC可抑制前列腺上皮细胞增殖,通过下调BPH-1中XIAP mRNA而降低XIAP蛋白表达,促进前列腺上皮细胞的凋亡并呈现出剂量依赖性;同时PEITC下调了自噬相关蛋白Atg5-12;PEITC对凋亡与自噬的调节可能存在相关性。     

167例原发性甲状旁腺功能亢进症患者的临床分析

目的 分析原发性甲状旁腺功能亢进症（primary hyperparathyroidism,PHPT）患者的临床特点,减少患者的诊治歧路及合并症。方法 回顾性分析北京积水潭医院普外科自2010年1月至2018年3月诊治的原发性甲状旁腺功能亢进患者,统计其一般资料、临床表现及处理情况、术前影像定位检查等,对再次手术资料及术中标本、术后病理、甲状旁腺激素（parathyroid hormone,PTH）等进行分析。结果 原发性甲状旁腺功能亢进症病例数逐年增加,可来源于临床多科室,根据其临床表现分型,以骨型及骨肾型为多见,各占53.2%和24.6%,其中有骨折病史者30例,占18%,曾行骨科手术者24例,占14.4%,其中行2次及以上骨科手术者5例,占骨科手术患者的21%。有骨科事件（骨折或可疑骨肿瘤者）患者PTH值与其他患者比较,差异有统计学意义（P=0.003）。11例患者非初次手术,其中5例为既往异位甲状旁腺手术,占再手术的45.5%。甲状旁腺增生组与甲状旁腺癌组及腺瘤组术前PTH值差异有统计学意义（P<0.05）,3组间病灶湿质量差异无统计学意义（P>0.05）。结论 对于PHPT患者应注重其临床早诊断,加强对有骨折、骨畸形变、骨质疏松等患者的筛查,术前良恶性较难确定,PTH有提示意义,应结合术前影像及术中快速PTH检测技术,做到定位准确,提高手术成功率,避免因异位多次手术,或术中反复探查等。对于复发患者,应考虑到异位病灶或甲状旁腺癌转移等。     

脐带间充质干细胞通过NR4A1调节原发性功能不全卵巢中卵泡膜间质细胞凋亡的作用研究

目的 探讨脐带间充质干细胞(UCMSCs)对原发性卵巢功能不全(POI)大鼠的治疗作用及卵巢中卵泡膜间质细胞表达的NR4A1在此治疗过程中的机制。方法 选用5周龄雌性wistar大鼠,随机分为对照组、POI组、POI+UCMSCs组,POI组腹腔注射顺铂(CP),对照组腹腔注射等量的0.9%生理盐水,注射7 d。POI+UCMSCs组待注射顺铂后,观察1周,尾静脉注射UCMSCs悬液。注射1 周后,酶联免疫吸附法检测 3 组大鼠血清中 E₂、FSH 水平,HE 染色观察卵巢的形态学改变,TUNEL检测大鼠卵巢中颗粒细胞的凋亡情况。体外培养大鼠卵泡膜间质细胞(TICs),并进行鉴定及检测NR4A1的表达,随机分组给予顺铂及UCMSCs处理,western blot检测NR4A1的表达变化,Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测细胞的凋亡情况。结果 与对照组相比,POI组大鼠卵巢中各级卵泡的数目明显减少(P<0.05),而“类黄体样”结构明显增多(P<0.05),UCMSCs处理后卵巢中卵泡的数目明显增加(P<0.05)。与对照组相比,POI组血清中E₂水平明显下降(P<0.01)、FSH水平升高(P<0.05)。与POI组相比,POI+UCMSCs组血清中E₂水平升高、FSH水平降低(P<0.05)。与对照组相比,POI组大鼠卵巢中凋亡的颗粒细胞数目明显增多。POI+UCMSCs组颗粒细胞凋亡的数目明显减少(P<0.01)。体外培养的TICs呈梭形,并且表达Cyp17a1和NR4A1,不表达FSHR。CP处理后,TICs表达的NR4A1水平降低,而CP+UCMSCs组NR4A1表达水平有所升高(P<0.05)。CP处理后能够增加TICs的凋亡情况,而CP+UCMSCs组凋亡比例明显下降(P<0.01)。结论 UCMSCs通过调节TICs表达的NR4A1水平,增加TICs对颗粒细胞凋亡的调节作用,改善POI卵巢的功能,这为临床上应用UCMSCs治疗POI提供一定的理论和实验依据。     

Noggin蛋白对小鼠脑缺血再灌注损伤后学习和记忆能力与齿状回结构的影响

目的 探讨侧脑室注射Noggin蛋白对小鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)后学习、记忆能力及齿状回(DG)结构的影响,以期为临床缺血性脑血管疾病的预防与治疗提供新思路。 方法 240只小鼠随机分为:假手术组(n=80)、缺血再灌注损伤组(I/R组,n=80)、缺血再灌注损伤+Noggin治疗组(Noggin组,n=80),每组再分为1、3、7、14 d共 4个亚组;取材前1天采用Y型迷宫检测小鼠学习记忆能力(n=5);然后比色法检测缺血侧脑组织超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)含量(n=5);2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死面积(n=5); 尼氏染色与免疫荧光检测DG神经元与胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞变化(n=5);Western blotting法检测骨形态发生蛋白4(BMP4)蛋白表达(n=5)。 结果 随着损伤时间的增加,I/R组、Noggin组与假手术组相比,小鼠神经功能评分升高(F组别=21.19, P<0.001; F时间=25.13, P<0.001),学习、记忆能力均下降［(F组别=216.10, P<0.001; F时间=260.10, P<0.001)、(F组别=114.40, P<0.001; F时间=184.60, P<0.001)］,脑梗死面积增加(F组别=2374, P<0.001; F时间=3 292, P<0.001),SOD活性降低(F组别=1 426, P<0.001; F时间=1 723, P<0.001),MDA含量升高(F组别=2.22, P<0.001; F时间=6.33, P<0.001),神经元数量减少(F组别=148.90, P<0.001; F时间=485.50, P<0.001),GFAP阳性细胞和BMP4蛋白表达量增加［(F组别=40.18, P<0.001; F时间=141.90, P<0.001)、(F组别=426.70, P<0.001; F时间=1 329, P<0.001)］。在各个相同时间点,与I/R组相比,Noggin各组小鼠神经功能评分降低(P<0.001),学习、记忆能力提高(P<0.001),脑梗死面积减小(P<0.001),SOD活性升高及MDA含量降低(P<0.001),神经元数量增加及染色变浅(P<0.001),GFAP阳性细胞和BMP4 蛋白表达量降低(P<0.001)。 结论 Noggin蛋白对小鼠脑缺血再灌注损伤后学习、记忆能力提高与DG组织损伤修复有改善作用,其作用机制可能与阻断BMP4蛋白表达和抑制胶质细胞的反应性增生有关。     

高盐对AngⅡ肾损伤SD大鼠血压、肾脏组织形态及骨调素表达的影响

目的 研究高盐对AngⅡ肾脏损伤SD大鼠血压、肾脏组织形态、超微结构以及肾脏骨调素(OPN)表达的影响。方法 选取12周龄正常盐饮食雄性SD大鼠36只制作AngⅡ(每分钟给予100ng/kg·b.w.)肾脏损伤模型。之后随机分为高盐(4%NaCl)及正常盐(0.6%NaCl)饮食组(n=18)作为对照组。每2周测量大鼠鼠尾血压,分别于AngⅡ输注2周末及不同盐饮食第12周末每组处死6只。采用免疫组化方法测定大鼠肾脏OPN、TGF-β1表达;荧光定量PCR方法测定大鼠肾脏OPNmRNA表达。光镜下观察肾脏组织形态改变,电镜下观察肾脏超微结构改变。结果 输注AngⅡ2周后大鼠血压显著升高,大鼠肾脏TGF-β1、OPNmRNA及其蛋白表达升高,与对照组大鼠比较有显著差异(P<0.05)。停用AngⅡ后大鼠血压恢复正常。继续摄入高盐或正常盐饮食,两组大鼠血压无明显差异(P>0.05)。摄入高盐饮食12周后大鼠肾脏TGF-β1、OPNmRNA及其蛋白表达显著升高,与正常盐饮食及对照组大鼠比较,有显著差异(P<0.01)。形态学观察发现输注AngⅡ对大鼠肾脏造成轻度损伤,继续摄入高盐加重大鼠的肾脏损伤。结论 AngⅡ肾脏损伤基础之上,高盐摄入加重了大鼠肾脏损伤,高盐所致大鼠肾脏损伤不依赖于血压升高。OPNmRNA及其蛋白表达增强是肾脏损伤的结果。     

EPHX2 rs751141变异位点对肾脏微炎症的影响及其分子机制研究

目的 研究EPHX2 rs751141基因多态性(G860A,R287Q)对可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase, sEH)活性的影响及其参与肾脏微炎症的分子机制。方法 以人的肾小管上皮细胞(HK2)cDNA为模板,利用p-UCT DNA连接试剂盒、点突变技术及亚克隆技术,分别构建包含EPHX2基因rs751141位点等位基因G和A的重组质粒pcDNA3.1/V5-His-G(野生型:WT)和pcDNA3.1/V5-His-A(突变型:R287Q)。以Lipofectamine 2000转染试剂分别将上述重组质粒转染至HK2细胞,给予足量的11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-epoxyeicosatrienoic acid,11,12-EET);共培养后,利用ELISA试剂盒检测11,12-二羟基二十碳三烯酸(11,12-dihydroxyeicosatrienoic acid,11,12-DHET),采用t检验分析R287Q突变对sEH水解酶活性的影响;利用流式细胞术检测细胞上清中炎症因子浓度白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)和IL-1的浓度;RT-PCR检测IL-17A和IL-1β等mRNA表达水平;Western blotting方法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达。结果 与WT组相比,R287Q突变型重组质粒组水解活性明显降低(P<0.01),细胞上清中IL-17A浓度以及IL-1等炎症因子浓度显著下降(P<0.05)。与单纯WT组相比,WT+EET组的炎症因子浓度显著降低,但仍明显高于R287Q+EET组(P<0.05)。RT-PCR结果显示R287Q突变组中IL-17A和IL-1β等的mRNA表达明显低于WT组;与单纯WT组相比,WT+EET组IL-17A以及IL-1β等炎症因子mRNA表达降低,但仍明显高于R287Q+EET组(P<0.05)。Western blotting结果表明R287Q组可能通过调控PI3K/AKT信号通路减轻肾小管上皮细胞炎症水平。结论 R287Q突变型重组质粒对11,12-EET的水解能力降低,炎症水平显著下降;外源性11,12-EET可降低WT组炎症水平。EPHX2 rs751141位点等位基因A的肾脏保护作用可能通过调控PI3K/AKT信号通路参与减缓炎症的分子机制。     

新型冠状病毒Omicron变异株利用多种动物ACE2作为受体侵入细胞的能力

目的 探讨新型冠状病毒Omicron变异株利用不同动物血管紧张素转换酶Ⅱ(angiotensin-converting enzyme Ⅱ, ACE2)受体侵入细胞的能力,评价Omicron变异株潜在的跨宿主传播风险。方法 将不同动物来源的ACE2表达质粒转染至293T细胞,建立新型冠状病毒D614G株系、Delta株系及Omicron株系的假病毒感染系统,并进行假病毒感染实验;利用假病毒感染系统及荧光酶素报告基因检测Omicron刺突蛋白对不同动物来源的ACE2受体利用能力。结果 与D614G株相比,Omicron株利用小鼠ACE2受体侵入细胞的能力明显增高(t=16.09、 P<0.05),但其利用中华菊头蝠、墨西哥无尾蝠、雪貂獾、猪獾、猫、兔、穿山甲的ACE2受体侵入细胞的能力降低(t=17.80、P<0.05,t=8.43、P<0.05,t=18.10、P<0.05,t=10.46、P<0.05,t=22.00、P<0.05,t=10.08、P<0.05,t=4.83、P<0.05);与Delta株相比,Omicron株利用中华菊头蝠、雪貂獾、猪獾、猫的ACE2受体侵入细胞的能力降低(t=8.15、 P<0.05,t=7.91、P<0.05,t=8.59、P<0.05,t=8.43、P<0.05)。结论 新型冠状病毒Omicron株的刺突蛋白可以利用多种动物的ACE2作为受体感染细胞,提示Omicron株可能存在多种跨宿主传播的风险。     

清毒汤对实验性重症肝损伤大鼠Bax蛋白及Bcl-2蛋白表达的影响

目的 观察清毒汤对实验性重症肝损伤大鼠Bax、Bcl-2蛋白的表达以及肝细胞凋亡的影响,探讨该方对慢性重型肝炎（chronic severe hepatitis,CSH）大鼠肝细胞凋亡作用机制。方法 建立硫代乙酰胺（thioacetamide,TAA）致实验性大鼠重症肝损伤模型,给予清毒汤干预后,用原位细胞凋亡技术法检测大鼠肝细胞凋亡指数（apoptotic index,AI）、蛋白免疫印迹法检测大鼠肝组织中Bax、Bcl-2蛋白表达的水平。结果 与正常组比较,模型组AI显著增高（P<0.05）,清毒汤各组较模型组AI明显降低,（P<0.01或P<0.05）。清毒汤对实验性肝损伤大鼠模型Bax蛋白表达具有抑制作用（P<0.01）,对Bcl-2蛋白表达具有促进作用（P<0.01）,能够提高Bcl-2/Bax的比值（P<0.01）。结论 清毒汤可以调控Bax、Bcl-2蛋白表达量、降低AI,减轻肝细胞的凋亡和坏死。