PCR检测胃黏膜和唾液中的幽门螺杆菌

运用聚合酶链反应(PCR)分别检测48例患者的胃黏膜和唾液标本中的幽门螺杆菌(Hp)。结果对于胃黏膜Hp而言，组织学检查和PCR具有高度一致性。在胃黏膜Hp阳性的36例患者中，唾液标本的检出率为72.2％(26／36)。在胃黏膜Hp阴性的12例患者中，有2例患者的唾液Hp呈阳性(16．7％)。提示口腔感染可能是Hp的主要传播途径之一。PCR检测唾液Hp是一种有效的非侵入性Hp诊断方法，适用于Hp感染流行病学的调查。     

幽门螺杆菌cagA基因 PCR检测方法初探

目的 建立敏感性高的幽门螺杆菌菌株cagA基因PCR检测方法,为客观评价CagA在我国幽门螺杆菌感染致病中的作用提供基础。方法 通过分析比较GenBank中已知的cagA基因序列,设计了一对针对cagA基因保守序列,可扩增297bp片段的PCR引物,用PCR方法检测幽门螺杆菌的cagA基因,与SDS-PAGE检测CagA蛋白的结果进行比较。结果 PCR检测82株国内幽门螺菌杆菌的cagA基因,77株为cagA阳性,阳性率为93.9%,SDS-PAGE显示包括所有PCR扩增阴性菌株在内的74株幽门螺杆菌均表达CagA,阳性率为100%,PCR检测cagA基因的敏感性为93.2%。结论 建立了敏感性高的幽门螺杆菌cagA基因PCR检测方法。     

球形幽门螺杆菌cagA基因原核表达质粒的构建及表达

球形幽门螺杆菌是H-pylori为抗逆生存而形成的多形性改变,其致病性尚存在争议,多数学者认为H.pylori球形体可能与H.pylori感染迁延不愈、反复发作及流行传播密切相关.目前有关球形Hpylori致病力和毒力基因方面的研究尚未见有系统的研究报道我们曾成功地克隆了球形H.pyfori的cagA全长基因并进行了测序,证明球形Hpriori具有完整的cagA基因为进一步研究球形H.pylori cagA蛋白的生物学特性及为DNA疫苗奠定基础,我们构建了球形H.pylori cagA基因的原核表达质粒并在大肠杆菌中获得了高效表达。     

幽门螺杆菌耐药性与cagA、VacA基因相关分析

目的分析幽门螺杆菌的耐药性与cagA、VacA基因的关系。方法将上消化道疾病患者胃窦部组织接种后培养，并进行药敏试验，PCR聚合酶链反应技术测定幽门螺杆菌的cagA、VacA基因，同时测患者血清抗体。结果81株敏感菌株cagA基因检出率77．8％，VacA基因检出率95．1％，58株耐药菌株cagA基因检出率38．8％，％以基因检出率94．8％。结论％以基因与耐药性无关，耐药菌株中以不合cngA基因的HP菌株为主。     

幽门螺杆菌cagA基因全长克隆及序列分析

目的探索扩增cagA基因全长的PCR方法,克隆中国2株胃癌幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)分离株和1株十二指肠溃疡分离株及国际标准株SS1的cagA基因,初步探讨cagA序列和磷酸化位点变异及其临床意义.方法针对已知cagA基因两侧及cag致病岛右侧反转重复序列设计PCR引物,扩增cagA基因并克隆测序,分析已知cagA序列同源性及其酪氨酸磷酸化位点.结果3株中国Hp分离株cagA氨基酸序列的同源性约为94%(93.9%、94%、94.5%),并都有pY117/118/122和EPIYA-A、B、D 4个酪氨酸磷酸化位点.SS1株cagA与西方菌株同源性大于85%,而与中国菌株的同源性小于80%,具有pY117/118/122和EPIYA-A、B、C 4个酪氨酸磷酸化位点.结论建立的PCR方法可扩增cagA基因全长.CagA序列变异和磷酸化位点具有地区聚类特征,但与Hp感染临床结局无特殊关联.     

幽门螺杆菌抗生素敏感性及cagA基因检测

幽门螺杆菌(Ｈｐ)常引起慢性胃炎、消化性溃疡,也与胃癌和胃淋巴瘤的发生密切相关。治疗Ｈｐ感染常用以抗生素为主的三联疗法,最常用的抗生素为甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林、西环素等,Ｈｐ根除率可达90%以上。近年来三联疗法的根除率有所下降,其主要原因是抗生素耐药菌株产生。因此定期对抗生素敏感性的监测可了解本地区Ｈｐ耐药状况,指导临床用药。本研究就Ｈｐ对常用的抗生素甲硝唑、阿莫西林、四环素耐药性进行了检测。为探讨阿莫西林耐药机制,及Ｈｐ中ｃａｇＡ基因与抗生素耐药性是否存在一定关系,同时检测Ｈｐβ内酰胺酶的产生和是否存…     

浙江地区小儿幽门螺杆菌cagA基因变异性研究

目的 研究浙江地区儿童感染的幽门螺杆菌 (Hp)cagA基因的变异性。方法 应用3对不同引物对66例Hp感染患儿胃粘膜Hp菌株通过聚合酶链反应 (PCR)技术 ,分别扩增cagA基因不同DNA片段 ,检测cagA基因阳性 (cagA +)检出率 ;用免疫印迹法检测患儿血清CagA抗体。结果 Hp 菌株cagA基因DNA404bp、349bp、298bp 片段分别经3对引物扩增后 ,cagA +检出率分别为56.1%、39.4%、72.7% ,三者之间差别有显著性意义(χ2=14.63,P<0.01) ,总阳性检出率为90.9%。66例患儿血清CagA抗体阳性率为97.0%。结论 浙江地区儿童感染的Hp菌株cagA基因存在变异性和多态性 ,增加引物对数量进行检测可以提高Hp菌株cagA +检出率。     

PCR快速检测细菌16S rRNA基因的初步研究

目的：建立检测细菌16SrRNA基因的PCR方法。方法:以细菌16S rRNA基因为靶序列。利用计算机软件primer5．0，Bioedit设计2条引物-pml.,pm2并建立相应的PCR方法。采用该PCR方法扩增实验室保留菌株的16srRNA基因,以人类外周血白细胞基因组DNA、HBV—DNA阳性血清以及白色念珠菌为对照。检测该实验方法的特异性;采用倍比稀释的方法进行该实验方法的敏感性实验。结果：用引物pml，pm2对17个不同菌株进行PCR扩增。均得到371bp左右长度的DNA片段。特异性实验表明,此通用引物与人类基因组DNA、真菌及病毒无交叉反应。敏感性实验表明。用pml，pm2引物进行的PCR扩增可检测出20CFU／ml,结论：16S rRNA基因PCR检测方法具有特异、敏感、快速的特点。     

新疆兵团农六师五家渠地区含cagA基因型幽门螺杆菌感染的流行病学调查

幽门螺杆菌 (Ｈｐ)的毒素在其致病性中的地位越来越受到人们重视。部分Ｈｐ菌株能表达细胞空泡毒素 (ＶａｃｕｏｌａｔｉｎｇＣｙｔｏｔｏｘｉｎ ,ＶａｃＡ)和细胞空泡毒素相关蛋白 (ＣｙｔｏｔｏｘｉｎＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＰｒｏｔｅｉｎ ,ｃａ ｇＡ) [1 ,2 ] ,ｃａｇＡ与ＶａｃＡ高度相关 ,被认为是Ｈｐ的毒力标志。许多研究资料表明Ｈｐ毒素与消化性溃疡及胃癌密切相关[3] 。本文用整群抽样的方法对新疆兵团农六师五家渠地区 1 1 1 2名自然人群的血清用ＥＬＩＳＡ法测定ｃａｇＡ -ＩｇＧ抗体 ,间接检测ｃａ ｇＡ基因。寻找其感染的重要…     

cagA gene distribution in Helicobacter pylon infected native people

ThebacteriumH.Pylonisamicroaerophilicspiralgram--negativemicroorganismwhichplaysasignificantroleinthepathogenesisofchronicgastritis,pepticulcer,andpossibly,gastriccancerandMALToma.Thecytotoxin--associatedantigen(cagA)geneisanH.PylongenethatcodesforanaboutMr128000proteinthatisassociatedwiththeproductionofvacuolatingtoxin.ToinvestigatethevirulenceofH.PyloninfectingChinesepeople,thepresentstudyselected74H.PylonclinicalisolatestodetectureasegeneandcagAgenebypolymerasechainreaction.Thecurrent…     

细菌直接PCR和双引物策略鉴定16S rRNA基因技术的建立

目的探索一种基于16S rRNA基因的快速鉴定细菌方法,为临床诊断治疗及耐药菌的分子遗传分析提供科学依据。方法对卫生部室间质评菌株和临床病人标本分离培养纯菌落,用双蒸水稀释菌落,然后直接以菌液为模板优化反应体系PCR扩增16S rRNA基因片段,再测序扩增片段。将测序结果在细菌Ribosomal数据库中进行同源性比对,根据序列同源性鉴定病原细菌。结果本实验鉴定的卫生部质评菌株结果与卫生部报告结果一致。本实验能够一次性鉴定出临床病人标本分离的菌株。结论本研究优化了一种免纯化细菌核酸直接PCR鉴定细菌16S rRNA基因的方法。本研究建立的基于病原细菌16S rRNA基因鉴定方法可用于细菌的快速诊断。     

16SrRNA基因序列分析法鉴定病原细菌

目的：运用16SrRNA基因序列分析法鉴定14种细菌,为该方法的临床应用奠定基础。方法：提取细菌DNA,采用通用引物PcR扩增16SrRNA基因片段并测序。将测序结果用Blastn在线软件在Nucleotide数据库中进行序列同源性比对,根据序列同源性鉴定病原细菌。结果：12种细菌可以鉴定到“种”,2种细菌可以鉴定到“属”。结论：16SrRNA基因序列分析是一种有效的病原细菌鉴定方法。     

16S rRNA基因检测对新生儿败血症诊断价值的Meta分析

目的 16S rRNA基因检测是诊断新生儿败血症的方法之一,但是尚无研究综合评价其诊断价值,本研究拟系统评价16S rRNA基因检测在新生儿败血症中的诊断价值。方法在Cochrane图书馆、Medline、Embase、Science Di-rect、中国期刊全文数据库、万方、维普等数据库中查找利用16S rRNA基因检测诊断新生儿败血症的文献。QUADAS工具评价纳入文献的质量,Meta-Disc 1.4软件检验异质性并根据其结果选择相应效应模型计算纳入研究的合并敏感性、特异性等指标,绘制汇总受试者工作特征（SROC）曲线,综合评价16S rRNA基因检测的诊断价值。结果共有8篇文献共计2 543例新生儿纳入本次研究,Meta分析显示16S rRNA基因检测对新生儿败血症的合并诊断价值分别为：敏感度为0.93,特异度为0.97,阳性似然比为25.12,阴性似然比为0.08,诊断比值比为323.40。SROC曲线下面积为0.99。结论 16S rRNA基因检测中对新生儿败血症具有较高的诊断价值,可作为诊断新生儿败血症重要工具。     

16S rRNA在检测肺炎克雷伯菌引起血流感染中的应用

目的初步建立一种对肺炎克雷伯菌引起血流感染的快速检测方法。方法应用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）,从血培养阳性瓶中提取细菌基因组DNA,以特异性引物扩增16S rRNA靶片段,同期进行细菌培养鉴定的对照。结果检测142份已知肺炎克雷伯阳性标本,65份非肺炎克雷伯阴性对照,52份双盲样本显示敏感性为100%（146/146）特异性为100%（113/113）,整个实验可在2h内完成。结论较传统的培养鉴定法而言,以16SrRNA作为实时荧光定量靶基因可快速检测肺炎克雷伯菌,具有很好的研究价值与应用前景。     

中国人感染幽门螺杆菌的基因分型及其临床意义

目的：研究细胞毒素相关基因Ａ（ｃａｇＡ）在幽门螺杆菌菌株中的分布，并初步探讨其应用价值。     

16S rRNA基因序列分析法鉴定病原细菌

目的: 运用16S rRNA 基因序列分析法鉴定14种细菌,为该方法的临床应用奠定基础。方法: 提取细菌DNA,采用通用引物PCR扩增16S rRNA 基因片段并测序。将测序结果用Blastn 在线软件在Nucleotide 数据库中进行序列同源性比对,根据序列同源性鉴定病原细菌。结果: 12种细菌可以鉴定到“种”,2种细菌可以鉴定到“属”。 结论: 16S rRNA 基因序列分析是一种有效的病原细菌鉴定方法。     

幽门螺杆菌cagA蛋白的克隆表达与鉴定

目的　构建表达幽门螺杆菌 (Hp)毒素相关基因A蛋白 (cagA)的重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白 ,为检出幽门螺杆菌致病株和运用于临床检测Hp感染奠定基础。 方法　PCR扩增出编码毒素相关基因蛋白DNA片段后构建出重组质粒 pET -cagA ,并经质粒酶切筛选、DNA测序、IPTG诱导DE3 表达融合蛋白和Western blot予以证实。表达的融合cagA蛋白经过纯化和凝血酶酶切验证cagA蛋白抗原性。 结果　克隆的cagA核苷酸序列与GeneBank(AB116 74 4 )公布的序列相比较 ,同源性达 99.34% ,推定氨基酸序列同源性为 99.0 1%。SDS -PAGE和Western blot检测到带有His tag的约 4 0kD融合蛋白中表达。融合蛋白酶切后能与抗cagA人抗血清发生阳性反应。 结论　重组cagA的原核表达质粒构建正确 ,蛋白表达成功 ,具有反应原性