不同相对分子质量一年生膜荚黄芪多糖对RAW264.7细胞炎症相关因子表达的影响

目的：观察不同相对分子质量的一年生膜荚黄芪多糖（APSⅠ）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7炎症模型分泌促炎因子和抗炎因子的影响,探讨APSⅠ的抗炎作用。方法：体外培养RAW264.7细胞,APSⅠ作用于未经刺激的RAW264.7细胞及LPS（1 mg/L）刺激后RAW264.7细胞,将细胞分为空白对照组、LPS模型组、APSⅠ组及LPS+ APSⅠ不同相对分子质量组(APSⅠ-A,APSⅠ-B,APSⅠ-C),采用CCK-8法检测不同相对分子质量、不同浓度的APSⅠ组RAW264.7细胞增殖活力,硝酸还原酶法测定细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量,酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）的分泌量。结果：与空白对照组比较,APSⅠ单独处理组RAW264.7细胞增殖活性降低（P<0.05或P<0.01）,NO及IL-10表达水平明显增加（P<0.05）,TNF-α的分泌量降低（P<0.05）;与LPS模型组比较, LPS+APSⅠ组RAW264.7细胞增殖活力显著升高（P<0.05或P<0.01）,NO、TNF-α的表达明显降低（P<0.05或P<0.01）,IL-10的分泌增加（P<0.05或P<0.01）;3种不同相对分子质量APSⅠ之间比较,APSⅠ-C对NO、TNF-α的抑制更为明显,且APSⅠ-C促进IL-10分泌的作用强于APSⅠ-A及APSⅠ-B。结论：APSⅠ　可以拮抗LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应;不同相对分子质量APSⅠ的抗炎作用有差异,APSⅠ的生物活性与其相对分子质量存在一定的关联性。     

黄蜀葵茎叶多糖的乙酰化修饰及其免疫调节活性研究

目的?应用乙酰化修饰方法与技术进行黄蜀葵茎叶多糖的结构修饰,并评价其体外免疫调节活性,以期为黄蜀葵茎叶废弃物的资源化利用提供思路和科学依据。方法?采用水提醇沉法及DEAE-52离子交换法制备黄蜀葵茎叶粗多糖（SLAMP）和中性多糖（SLAMP-a）,应用乙酸酐法制备3种乙酰化修饰产物（SLAMP-a1、SLAMP-a2、SLAMP-a3）,且通过化学组成分析、柱前衍生HPLC法以及红外光谱法对多糖结构进行初步鉴定;此外,通过考察SLAMP-a及其3种乙酰化修饰产物对脾淋巴细胞体外增殖及RAW264.7释放NO的影响,评价四种多糖的免疫调节活性。结果?SLAMP-a总糖含量为99.76%,无体外免疫调节活性;3种修饰产物中,只有SLAMP-a1具有显著的刺激脾细胞增殖作用及激活RAW264.7产生NO。SLAMP-a1总糖含量为82.50%,取代度为0.62,主要由葡萄糖组成,且含有少量的甘露糖、半乳糖及阿拉伯糖。结论?黄蜀葵茎叶多糖SLAMP-a经乙酰化修饰后,可显著提高体外免疫调节活性,SLAMP-a1有望开发成免疫调节剂,且乙酰化修饰方法与技术可作为黄蜀葵茎叶多糖资源化利用的有效途径。      

黄精粗多糖对体外培养小鼠脾淋巴细胞及巨噬细胞免疫活性的影响

[目的]探讨黄精粗多糖对体外培养小鼠脾淋巴细胞及巨噬细胞(RAW 264.7)免疫活性的影响.[方法]设置空白对照组及给药质量浓度分别为1 000,500,250,125 mg/L的黄精粗多糖组,分别与小鼠的脾细胞、巨噬细胞(RAW 264.7)共同培养.采用ELISA法检测共同培养后的细胞上清液中免疫因子IL-2,IL-6,IFN-γ和TNF-α的含量变化,利用MTT比色法测定黄精粗多糖对巨噬细胞(RAW 264.7)增殖作用的影响,Griess法测定细胞上清液中一氧化氮的水平,RT-PCR检测iNOS mRNA的表达情况.[结果]与空白对照组比较,各质量浓度黄精粗多糖组免疫因子IL-2,IL-6,IFN-γ和TNF-α含量明显增加(P<0.05),促进巨噬细胞(RAW 264.7)的增殖(P<0.05),一氧化氮分泌量及iNOS mRNA水平均明显增高(P<0.01).[结论]黄精粗多糖可增强体外培养小鼠脾淋巴细胞及巨噬细胞的免疫活性.     

苦瓜多糖的纯化、结构解析及其免疫调节和抗肿瘤活性研究

目的?提取并纯化苦瓜多糖,对其结构特征进行解析并研究其免疫调节和抗肿瘤活性。方法?热水提取苦瓜多糖,透析后纤维素阴离子交换色谱和凝胶过滤层析纯化得到多糖产物。利用高效凝胶渗透色谱法测定多糖分子量,并采用FT-IR和NMR法对其局部结构特征进行解析。利用细胞分子生物学技术和药理学等手段测定苦瓜多糖的免疫调节作用和抗肿瘤活性。结果?分离纯化获得分子量为745 kDa的杂多糖MCP-2,测定其单糖组成为鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖和阿拉伯糖,对应的摩尔比为1.19∶15.97∶3.40∶0.73∶0.94。此外,还发现MCP-2能够促进正常小鼠淋巴细胞增殖,提高巨噬细胞RAW264.7中炎症因子NO、IL-1β和TNF-α的表达量。MCP-2还具有体内抑制S180肿瘤细胞的活性。结论?本研究表明MCP-2具有显著的免疫增强和肿瘤抑制的活性。      

苦瓜多糖的纯化、结构解析及其免疫调节和抗肿瘤活性研究（英文）

目的提取并纯化苦瓜多糖,对其结构特征进行解析并研究其免疫调节和抗肿瘤活性。方法热水提取苦瓜多糖,透析后纤维素阴离子交换色谱和凝胶过滤层析纯化得到多糖产物。利用高效凝胶渗透色谱法测定多糖分子量,并采用FT-IR和NMR法对其局部结构特征进行解析。利用细胞分子生物学技术和药理学等手段测定苦瓜多糖的免疫调节作用和抗肿瘤活性。结果分离纯化获得分子量为745kDa的杂多糖MCP-2,测定其单糖组成为鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖和阿拉伯糖,对应的摩尔比为1.19∶15.97∶3.40∶0.73∶0.94。此外,还发现MCP-2能够促进正常小鼠淋巴细胞增殖,提高巨噬细胞RAW264.7中炎症因子NO、IL-1β和TNF-α的表达量。MCP-2还具有体内抑制S180肿瘤细胞的活性。结论本研究表明MCP-2具有显著的免疫增强和肿瘤抑制的活性。     

降钙素基因相关肽抑制铜绿假单胞菌外膜囊泡致炎作用

目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对铜绿假单胞菌外膜囊泡（OMVs）诱导炎症反应的影响。方法培养铜绿假单胞菌并提取OMVs,取1、5、10μg·mL-1 OMVs刺激鼠巨噬细胞RAW264.7,采用ELISA法检测细胞中促炎性细胞因子[包括白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]含量,采用CCK-8法及流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用10μg·mL-1 OMVs与1、5、10 nmol·L-1 CGRP同时处理RAW264.7细胞,并检测细胞中促炎细胞因子水平;采用20μg·mL-1 OMVs与10 nmol·L-1 CGRP同时处理RAW264.7细胞,检测细胞增殖与凋亡;培养人中性粒细胞,采用脱颗粒实验检测CGRP对其分泌中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白（NGAL）及弹性蛋白酶活性的影响。结果不同浓度OMVs均能显著刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和IL-1β（P<0.05）,而CGRP则能够抑制RAW264.7细胞分泌促炎细胞因子,且呈剂量依赖性（P<0.05）;20μg·mL-1 OMVs则能够显著降低细胞活性,并促进细胞凋亡（P<0.05）,10 nmol·L-1 CGRP与OMVs共同处理能显著增加RAW264.7细胞活性,抑制凋亡发生（P<0.05）;不同浓度OMVs均能提升NGAL表达水平以及弹性蛋白酶活性（P<0.05）,而10 nmol·L-1 CGRP则能够显著抑制OMVs引起的脱颗粒效应（P<0.05）。结论 CGRP可有效下调铜绿假单胞菌OMVs诱导的鼠巨噬细胞RAW264.7促炎因子分泌水平、减少凋亡率以及特异性中性粒细胞释放,进而抑制炎症反应。     

原花青素抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE_2生成的机制

目的：观察原花青素对脂多糖诱导RAW264.7细胞PGE2生成的影响及其作用机制。方法：放射免疫法（RIA）检测原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE2生成的影响;LPS诱导RAW264.7细胞9h,再加不同浓度原花青素作用30min,放射免疫（RIA）法检测原花青素对COx-2酶活性的影响;半定量逆转录-聚合酶联反应（RT-PCR）法检测原花青素对COx-2 mRNA表达的影响;提取核蛋白,蛋白免疫印迹（western blot）法检测原花青素对NF-κB/p65蛋白表达的影响;电泳迁移率变动分析（EMSA）法检测原花青素对NF-κB与DNA结合活性的影响。结果：0.8,4和20mg·L-1原花青素抑制LPS诱导RAW264.7细胞PGE2生成;0.8,4和20mg·L-1原花青素不影响LPS诱导RAW264.7细胞COx-2酶活性;0.8,4和20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞COx-2 mRNA表达;4,20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB/p65蛋白表达;0.8,4和20mg·L-1的原花青素可明显降低LPS诱导下RAW264.7细胞的NF—κB活化。结论：原花青素显著抑制LPS诱导RAW264．7细胞PGE2生成的作用与原花青素抑制COx-2 mRNA表达有关,此作用可能是通过抑制NF—κB／p65蛋白表达和抑制NF-κB的DNA结合活性来实现。     

党参多糖类成分抗肿瘤活性的研究进展

多糖具有广泛的药理作用,表现为免疫调节、抗肿瘤、抗病毒等,部分已应用于肿瘤、肝炎、心血管疾病的临床辅助治疗和康复[1]。研究证实,党参具有抗氧化、抗应激以及调节免疫功能等多种生物学活性,其主要活性成分之一为党参多糖（CPP）[2-3]。本文就近年来党参多糖类成分抗肿瘤活性研究进展作一综述。     

结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6对小鼠巨噬细胞凋亡的诱导作用

【目的】研究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）分泌蛋白ESAT-6（early secreted antigenic target of 6 kD）对小鼠巨噬细胞凋亡的影响及机理。【方法】应用流式细胞仪分析稳定表达ESAT-6和经重组ESAT-6蛋白作用的小鼠RAW264.7细胞的凋亡;应用Caspase-3检测试剂盒检测caspase-3活性变化;进一步应用Western blotting分析稳转细胞系ESAT-6表达情况。【结果】RAW-EGFP-ESAT-6细胞系培养48 h后的凋亡率与caspase-3活性显著高于RAW264.7和RAW-EGFP细胞系（P〈0.05）;RAW-flag-ESAT-6细胞系培养48 h后的凋亡率与caspase-3活性显著高于RAW264.7和相应对照细胞系（P〈0.01）。10μg/ml重组ESAT-6可显著诱导RAW264.7细胞凋亡,而5μg/ml重组ESAT-6无明显诱导细胞凋亡效果。稳转细胞系RAW-flag-ESAT-6细胞内flag-ESAT-6浓度大约只有500 ng/ml。【结论】胞内低水平表达结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6可依赖caspase-3信号通路诱导小鼠RAW264.7细胞凋亡。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对巨噬细胞中铁死亡相关因子表达水平的影响

目的：探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖（P. g-LPS）对巨噬细胞中铁死亡相关因子表达水平的影响,阐明铁死亡相关因子在牙周炎发病机制中的作用。方法：培养小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞,分为实验组和对照组,实验组加入10 mg·L-1P. g-LPS分别处理6、12和24 h,对照组不做任何处理。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组RAW264.7细胞中长链酯酰辅酶A合成酶4 (ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPX4)和转铁蛋白受体1 (TfR1) mRNA表达水平,2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针法检测2组RAW264.7细胞中活性氧（ROS）水平,硫代巴比妥酸（TBA）法检测2组RAW264.7细胞中丙二醛（MDA）水平,亚铁离子荧光探针（FeRhonox-1）法检测2组RAW264.7细胞中亚铁离子（Fe2+）水平,Western blotting法检测2组RAW264.7细胞中ACSL4、GPX4和TfR1蛋白表达水平。结果：与对照组比较,处理6、12和24 h后,实验组RAW264.7细胞中GPX4 mRNA表达水平降低（P&...     

黄芪多糖抗氧化作用研究

目的:评价黄芪多糖的体外抗氧化活性。方法:通过研究黄芪多糖的DPPH·清除能力、·OH清除能力、ABTS+清除能力、O_2~-清除能力和还原能力来评价黄芪多糖的抗氧化活性。结果:在浓度为1 g·L~(-1)时,黄芪多糖对DPPH·的清除率为72.9%;对·OH的清除率为60.2%;对ABTS+的清除率为52.2%;对O_2~-的清除率为33.1%;黄芪多糖的还原能力为1.32。结论:黄芪多糖对自由基(·OH、DPPH·、ABTS+、O_2~-)均有一定的清除作用,随着浓度的增加而增加,并且黄芪多糖具有一定的还原能力。     

Antioxidant and immunomodulatory activities of a polysaccharide from Flammulina velutipes

ObjectiveTo evaluate the antioxidant and immunomodulatory activities of a unique polysaccharide from the medicinal fungus Flammulina velutipes in vitro.MethodsUsing water extraction and alcohol precipitation, crude polysaccharides were obtained. After purification by DEAE-cellulose 52 ion exchange chromatography and Sephacryl S-300 HR gel filtration chromatography, High performance liquid chromatography equipped with evaporative light-scattering detector, Infrared radiation and Nuclear magnetic resonance were used to evaluate the structure of the polysaccharide. Its immunomodulatory activity was measured by examining the production of nitric oxide (NO) and cytokine secretion, and via lymphocyte proliferation experiments. Its effects on the scavenging activities of hydroxyl radical, superoxide anion and reducing power were also measured.ResultsA water-soluble polysaccharide, Flammulina velutipes polysaccharide I-A (FVP I-A), was obtained with a molecular mass of 8.14×10⁴ Da determined by high performance gel permeation chromatography. An in vitro antioxidant assay indicated that FVP I-A could scavenge hydroxyl radical, superoxide anion and possessed reducing power and could largely promote NO production and augment the interleukin-1β, interleukin-6, and tumor necrosis factor-α secretion by RAW264.7 macrophages (P<0.05). Moreover, FVP I-A could promote lymphocyte proliferation (P<0.05), and synergistically enhance the augmentation of the proliferation of mouse lymphocytes by concanavalin A and lipopolysaccharides (P<0.01, P<0.05).ConclusionThe FVP I-A obtained from Flammulina velutipes possessed antioxidant activity and could enhance non-specific and specific immune responses in vitro.     

鹅掌楸苷和光甘草定协同抗氧化作用研究

[目的] 研究鹅掌楸苷和光甘草定协同抗氧化作用。[方法] 采用1,1-二苯基-2-苦苯肼（DPPH）和2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）自由基清除实验,测定鹅掌楸苷和光甘草定单独及不同浓度配比的抗氧化活性,等辐射分析法（Isobologram）对协同作用结果进行分析。[结果] 鹅掌楸苷和光甘草定配比为3∶1时对DPPH自由基清除表现为协同作用,1:1表现为相加作用,1:3表现为拮抗作用。ABTS实验结果显示复配为1:1、1:3和3:1时均有协同作用,并且复配组合中协同作用强弱为：1:3> 1:1> 3:1。[结论] 鹅掌楸苷和光甘草定按一定比例复配后具有协同抗氧化作用。     

枇杷叶不同组分提取物在多种疾病中的作用及机制研究

目的 提取枇杷叶中的多糖、黄酮和三萜酸,并分别研究其在抗炎、抗氧化和抗肿瘤中的药理活性。方法 通过水提醇沉法提取多糖,醇沉上清液用于黄酮的富集,水提的残渣经90%乙醇回流提取三萜酸。通过Western blot检测枇杷叶多糖对TGF-β1干预的小鼠系膜细胞中PAI-1表达的影响,观察枇杷叶中的黄酮成分对ABTS自由基的清除作用评价其抗氧化活性;MTT法检测枇杷叶中三萜酸对骨髓瘤细胞ARP1增殖的影响,并通过ARP1细胞小鼠异种移植模型观察三萜酸对皮下肿瘤生长的影响。结果 枇杷叶中多糖、黄酮、三萜酸的含量分别为19.53、48.70、7.86 g/kg。枇杷叶多糖可以抑制PAI-1表达,黄酮浓度在75~150 μg/mL对ABTS自由基具有良好的清除作用,三萜酸可以抑制骨髓瘤细胞ARP1的增殖,IC₅₀为11.57 μg/mL。此外,三萜酸对异种移植小鼠皮下肿瘤的生长具有一定的抑制作用。结论 枇杷叶中多糖可能对肾炎具有一定的治疗作用,黄酮和三萜酸具有一定的抗氧化和抗肿瘤的作用。为枇杷叶的进一步开发利用提供有利的实验基础。      

茯砖茶不同溶剂提取物抗氧化活性研究

目的 研究茯砖茶不同溶剂提取物体外抗氧化活性,并测定其总多酚、黄酮含量.方法 以抗坏血酸为阳性对照,采用二苯代苦味酰基（DPPH）、[2,2＇-连氨-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐]（ABTS）及铁离子还原/抗氧化能力（FRAP）三种抗氧化模型,评价茯砖茶80％乙醇（总提物）、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水5种不同溶剂提取物体外清除DPPH、ABTS＋自由基能力和对铁离子的还原/抗氧化能力.结果 茯砖茶乙酸乙酯提取物总多酚含量最高,正丁醇提取物黄酮含量最高,分别为（291.38±5.24）、（222.86±6.12）mg/g.茯砖茶不同溶剂提取物均具有一定的抗氧化活性,清除ABTS＋自由基和铁离子还原/抗氧化能力为：总提物＞乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞水提物＞石油醚提取物;清除DPPH自由基的能力为：乙酸乙酯提取物＞总提物＞正丁醇提取物＞水提物＞石油醚提取物.茯砖茶总提物和乙酸乙酯提取物均具有良好的抗氧化活性,清除DPPH自由基能力的半清除率浓度（IC50）分别为0.048、0.043 g/L,清除ABTS＋自由基能力的IC50分别为0.025、0.027 g/L.茯砖茶抗氧化能力与总多酚含量呈正相关.结论 茯砖茶提取物具有良好的抗氧化能力,为开发功能性抗氧化剂提供科学依据.     

电离辐射对破骨细胞分化过程中RANK表达的影响及其致骨损伤的分子机制

目的：研究电离辐射对破骨细胞分化过程中核因子κB受体活化因子(RANK) mRNA和蛋白表达的影响,探讨辐射导致骨损伤的分子机制。方法：采用50 μg•L-1 核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞。RQW264.7细胞分为对照组(未处理)、RANKL处理组(50 μg•L-1RANKL处理)、照射处理组(2 Gy γ射线照射)、照射联合RANKL处理组(50　μg•L-1RANK处理+2 Gy γ射线照射)。采用抗酒石酸磷酸酶(TRAP）染色法检测各组破骨细胞的分化状态;采用PCR法检测各组细胞中RANK mRNA的表达水平;采用Western blotting法检测各组细胞中RANK蛋白的表达水平。 结果：RAW264.7细胞经过RANKL诱导7 d后,TRAP染色呈现阳性,表明已经成功分化成为破骨细胞。与对照组比较,RANKL处理组和照射处理组破骨细胞前体细胞中RANK mRNA和蛋白的表达水平上调（P<0.05）;与RANKL处理组比较,照射联合RANKL组破骨细胞前体细胞中RANK mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：电离辐射可以促进破骨细胞前体细胞的增殖和成熟,增加其活性,但是对破骨细胞的增殖、成熟与活性却有一定的抑制作用。
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不同品牌蓝莓果汁抗氧化功能研究

目的：研究市售不同品牌蓝莓果汁及自制蓝莓果汁的抗氧化活性。方法对不同品牌蓝莓果汁中花色苷多糖及Vc含量进行测定,并采用体外抗氧化方法研究不同品牌蓝莓果汁的总还原能力羟基自由基清除能力超氧自由基清除能力 DPPH和ABTS自由基清除能力。结果不同品牌蓝莓果汁的营养成分和抗氧化能力存在一定的差异,且呈明显量效关系。结论自制果汁和蓝莓e族抗氧化能力最佳,有助于清除机体多余自由基,是良好的保健食品。     

当归补血汤对RAW264.7细胞的TNF-α、ICAM-1表达的作用

目的探讨当归补血汤抗动脉粥样硬化(As)损伤作用的机制。方法制备当归补血汤含药血清,台盼蓝染色法检测细胞活性,免疫印迹法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的蛋白活性变化。结果RAW264.7细胞培养3 d后,台盼蓝染色细胞活力95%。免疫印迹法检测结果显示,氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激RAW264.7细胞后TNF-α蛋白活性明显增强,当归补血汤含药血清组与ox-LDL组比较有差异(P0.05);ox-LDL刺激RAW264.7细胞后ICAM-1蛋白活性明显增强,当归补血汤含药血清组与ox-LDL组比较有差异(P0.05)。结论当归补血汤含药血清一定程度上能减少TNF-α、ICAM-1的蛋白表达,减少TNF-α、ICAM-1的表达可能是当归补血汤抗As损伤作用的机制之一。     

夏枯草多糖的分离及抗氧化活性研究

目的对夏枯草粗多糖进行分离,并对其抗氧化活性进行研究。方法采用DEAE-52离子交换柱色谱对夏枯草粗多糖进行分离;高效凝胶色谱法对其纯度和相对分子质量进行分析;通过清除DPPH.、ABTS＋和.OH活性试验,研究粗多糖及各级多糖的抗氧化能力。结果从夏枯草粗多糖中分离得到5级分多糖,依次为PPV2、PPV3、PPV4、PPV5和PPV6,各级分多糖液相图均为单一峰,相对分子质量依次为27 133、58 035、243 108、2 725 210和3 023 430;粗多糖和各级分多糖对DPPH.、ABTS＋和.OH均有一定的清除作用。结论 DEAE-52离子交换柱色谱法对夏枯草多糖分离效果好,夏枯草多糖具有良好的抗氧化活性。