游离中性粒细胞胞外诱捕网DNA的研究进展

中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是先天抗微生物免疫的重要部分。NETs由中性粒细胞DNA、组蛋白和细胞质蛋白质构成。它对微生物是一种有效的防御机制,当缺乏有效抗衡调节时,它又能损伤组织。越来越多的证据表明NETs的动态水平是随着炎性过程,而不是随着组织损伤而变化。一种快速定量游离中性粒细胞胞外诱捕网DNA（cf-DNA／NETs）的方法已经建立,cf-DNA／NETs可能是用于诊断与预测炎症性疾病的新标志物。     

中性粒细胞与淋巴细胞比值和中性粒细胞胞外诱捕网与脓毒症肝损伤的临床研究

Objective To explore the clinical value of peripheral blood neutrophil-to-lymphocyte ratio (NLR) combined with neutrophil extracellular traps (NETs) in predicting liver injury in patients with sepsis. Methods A prospective observational study was conducted. The patients who met the diagnostic criteria for sepsis 3.0 admitted to the Department of Intensive Care Unit in Wuxi People's Hospital Affiliated to Nanjing Medical University from March 2019 to June 2020 were selected as the research objects. The basic informations of the patients were recorded. NLR based on blood routine at admission was calculated. PicoGreen fluorescence quantitative detection kit was used to detect the quantitative level of free DNA (cf-DNA/NETs) in the peripheral plasma of patients at admission. According to whether liver injury occurred, the patients were divided into the sepsis without liver injury group and sepsis with liver injury group. Binary Logistics regression analysis was used to predict the risk factors of sepsis with liver injury. The receiver operating characteristic (ROC) curve was drawn. The value of NLR, NETs, NLR combined with NETs in predicting liver injury in patients with sepsis was analyzed. Results A total of 122 patients with sepsis were enrolled, of which 45 patients suffered from septic liver injury, with an incidence rate of 36.89%. The NLR of the sepsis wth liver injury group was (21.63 ± 4.71), the NLR of the sepsis without injury injury group was (15.03 ± 4.71), and the NETs level of the sepsis with liver injury group was (505.86 ± 250.05) ug/L, the level of NETs in the sepsis without liver injury group was (179.27 ± 67.20) ug/L, and the differences between the two groups were statistically significant (all P<0.05). Binary logistic regression analysis found that NLR (Oi?=1.470, 95% CI: 1.121-1.926, P<0.05) and NETs (OR=1.O18, 95% CI: 1.005-1.030, P<0.05) at admission were the independent risk factors for liver injury in patients with sepsis. The best cut-off value of NLR was 16.68, and the best cut-off value of NETs was 317 ug/L. The sensitivity of combined application of NLR and NETs to predict liver injury in patients with sepsis was 77.78%, specificity was 98.70%, the area under the curve was 0.930, and the Youden Index was 0.765. Conclusions The peripheral blood NLR and NETs levels are independent risk factors for liver injury in patients with sepsis. The combined application of NLR and NETs has a certain predictive value for liver injury in patients with sepsis. Taking NLR of 16.68 and NETs of 317 ug/L as the cut-off values, they can be used as early warning indicators to predict liver injury in patients with sepsis. © 2021 Chinese Medical Association. All rights reserved.     

中性粒细胞胞外诱捕网与肝癌关系的研究进展

中性粒细胞胞外诱捕网（NET）是由解聚的染色质和颗粒蛋白组成的网状结构。NET的形成过程被称为中性粒细胞炎性凋亡（NETosis）,它被认为是从垂死的中性粒细胞中排出以捕获和杀死病原微生物。NET与肝癌、胃癌、肠癌、肺癌等多种恶性肿瘤密切相关。近年来,大量研究表明,在癌症患者和动物模型中都存在NET。NET促进了肿瘤的生长、侵袭、转移以及癌症相关血栓的形成。阻断或破坏NET的形成可抑制肿瘤进展和癌症相关血栓的形成。因此,靶向NET可能是一种新的抗肿瘤治疗方法。该文重点阐述了NET的形成机制及其在肝癌中的作用。深入了解NET在肝癌中的发病机制,为肝癌治疗提供新思路和新方法。     

抗中性粒细胞胞外诱捕网的细菌毒力因子

中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellular traps,NETs)作为人体先天免疫系统的组成部分,具有捕杀病原体的作用.最近已经明确,几种细菌毒力因子有利于细菌逃避NETs的作用.本文讨论5种毒力因子,包括核酸酶、多糖荚膜、丙氨酰脂磷壁酸、唾液酸化聚糖分子模拟物、β-羟基丁酸.     

异丙酚对脓毒症小鼠中性粒细胞胞外诱捕网生成和炎症因子表达的影响

目的 明确异丙酚对脓毒症小鼠模型中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)生成和炎症因子表达的影响.方法 雄性8～10周龄C57BL/6小鼠40只,按照随机数字表法分为对照组、脂多糖(LPS)组、异丙酚组和脱氧核糖核酸酶(DNase)组,每组各10只.腹腔注射LPS建立脓毒症模型;异丙酚组小鼠腹腔注射异丙酚全身麻醉1 h;DNa...     

中性粒细胞胞外诱捕网蛋白质的免疫原性

中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）由DNA和抗菌蛋白质组成。在活细胞内,这些组分分布于亚细胞并发挥不同的功能。但是,在NETosis期,这些组分重新分布并从中性粒细胞内挤压出来。NETosis过分强盛和NETs清除受损,与自身免疫性疾病的器官损害有关,如系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎（RA）、Felty’s综合征（Fs）和小血管炎（SVV）等。NETs可能是体内新抗原的重要来源,蛋白质翻译后的修饰与水解,或药物诱导NETs构象异常能促进自身免疫性疾病患者产生自身抗体。总之,NETs可能提供了一个独特的具有破坏正常免疫耐受,引起自身免疫性的微环境。     

血清中性粒细胞胞外诱捕网水平与脓毒性休克患者病情以及预后的相关性分析

目的:探讨血清中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)水平与脓毒性休克患者病情以及预后的相关性.方法:选择2019年1月-2020年12月期间我院收治的157例脓毒性休克患者,根据APACHEⅡ评分将患者分为0～10分组(46例)、11～20分组(69例)和＞20分组(42例),根据SOFA评分分为0～5分组(53例)、6～1...     

大鼠肺组织胞外囊泡对脓毒症肺内炎症及中性粒细胞胞外诱捕网形成的影响北大核心CSCD

目的探讨脓毒症大鼠肺组织来源的胞外囊泡对脓毒症肺内炎症反应及中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成的影响。方法采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症大鼠模型,利用Collagenase D和DNase I充分酶解消化肺组织,多次离心去除杂质,最后通过差速超速离心法提取肺组织胞外囊泡(Ti-EVs)。将18只雄性SD大鼠随机分为3组:Ti-EVs组行CLP术并经气道滴入Ti-EVs混悬液(2.5 mg/kg);CLP组行CLP术并经气道滴入等体积PBS;Sham组行假手术。24 h后利用苏木精-伊红(HE)染色检测肺组织病理学变化,酶联免疫吸附实验检测肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fl uid,BALF)中IL-1β、TNF-α及IL-6的表达水平,免疫荧光法检测肺组织内NETs含量。结果分离提取的大鼠肺组织胞外囊泡经透射电镜观察为双层圆形的囊性小泡结构,粒子直径主要分布在150 nm,Western blot显示EVs标志物CD9、CD63、Tsg101呈阳性表达。肺组织HE染色可见脓毒症大鼠肺泡完整性破坏,炎症细胞浸润。与CLP组相比,Ti-EVs组肺组织损伤程度更重,且BALF中IL-1β、TNF-α、IL-6炎症因子表达水平均显著升高(P<0.01);激光共聚焦显微镜下见脓毒症组和Ti-EVs组肺内均有NETs形成,Ti-EVs组肺内NETs荧光强度较脓毒症组明显增加。结论通过酶解消化、差速超速离心等系列步骤能够成功分离提取得到纯度较高的大鼠肺组织胞外囊泡。在脓毒症肺损伤进程中,肺组织胞外囊泡可加重肺内炎症反应,促进NETs形成。     

监测外周血中性粒细胞胞外诱捕网含量对食管癌远处转移的预测价值

目的 评价中性粒细胞胞外诱捕网（NET）生成对食管癌远处转移的预测价值。方法 前瞻性纳入食管癌患者（远处转移25例、非远处转移35例）和30名健康志愿者,检测其外周血NET含量并进行分析。结果 食管癌远处转移者外周血NET含量高于非远处转移者和健康志愿者。外周血NET含量升高是食管癌远处转移的独立危险因素（OR=1049.592, 95%CI:24.313～45310.558）。监测NET含量可预测食管癌的远处转移（AUC=0.37, 95%CI:0.737～0.937）,其预测价值高于中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）;NET联合NLR可以提高NET预测食管癌远处转移的灵敏度和特异度。结论 NET生成是食管癌远处转移的高危因素,监测外周血NET的含量可预测食管癌远处转移,NET联合NLR能够提高NET的预测价值。     

脓毒症患者血小板计数及体积变化趋势的临床意义

目的:观察脓毒症患者血小板计数(PC)、血小板体积(MPV)变化趋势,探讨两者相关性及其临床意义。方法:应用HEMACELLPlus全自动二十二项五类血细胞分析仪,通过阻抗法检测80例脓毒症患者发病后1、3、7、10d的PC、MPV,并回顾性将脓毒症患者分为死亡组和存活组,分析其PC、MPV变化趋势,并进行两者相关性分析。结果:(1)入院时存活组和死亡组患者PC均低于正常生理范围,死亡组PC在各时相点均低于存活组(1、3dP>0.05,7、10dP<0.01)。存活组PC在入ICU第3天明显下降(P<0.01),继之于第7、10天持续上升(均P<0.01)。死亡组PC则呈持续下降趋势(均P<0.01)。(2)入院时存活组和死亡组患者MPV均基本上处于正常生理范围,但是死亡组MPV值比存活组患者高(均P<0.05),病程中存活组患者MPV呈进行性下降趋势,而死亡组患者MPV呈进行性上升趋势(均P<0.01)。(3)PC与MPV呈显著负相关。结论:PC、MPV的变化可能成为脓毒症患者血小板生成和活性紊乱以及骨髓反应的间接标志,常规检测脓毒症患者的PC、MPV变化趋势,尤其早期检测MPV,可能成为评价脓毒症病情及骨髓反应情况的一种快速、可信的手段。     

血小板活化相关因子和血栓前体蛋白在严重脓毒症中的表达

目的 探讨血小板活化相关因子(PAC-1、CD62P)和血栓前体蛋白(TpP)在严蘑脓毒症患者中的表达及其临床意义. 方法 前瞻性地选取2007年4月至2008年3月江苏省苏北人民医院急诊监护病房(EICU)收治的符合严重脓毒症诊断标准的患者入选严重脓毒症组(Ⅲ组).按照严重脓毒症治疗指南进行治疗,并根据28 d内是否存活分为生存亚组和死亡亚组,存在感染但未发生脓毒症同期患者设为一般感染组(Ⅱ组),同期门诊体检者或健康自愿者设为正常对照组(Ⅰ组).病例的选取均遵循随机的原则,三组的年龄、性别具有可比性;急性脑梗死、急性冠脉综合征、严重糖尿病和高脂血症者、恶性肿瘤、白血病、原发肝、肾、造血系统疾病者.长期卧床者、孕妇、近期使用过激素和免疫抑制剂者均除外.Ⅰ组和Ⅱ组均在入院第1天清晨空腹,Ⅲ组在入院第1、3,5天清晨空腹取外周静脉血,用酶联免疫吸附测定法(ELISA法)测定血栓前体蛋白(TpP),流式细胞术测定血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲ a复合物纤维蛋白原受体(PAC-1)、血小板颗粒膜糖蛋白140(CD62P),并对Ⅲ组进行Mar-shall评分.应用SPSS 12.0软件包处理数据,多组均数间比较采用方差分析,方差齐性检验采用Levene's法,方差齐性时采用LSD法,相关分析采用Bivariate法,以P<0.05为差异具有统计学意义. 结果 共有20例纳入Ⅰ组,20例纳入Ⅱ组,30例纳入Ⅲ组,其中生存亚组19例,死亡亚组11例.入院第1天,PAC-1、CD62P、TpP在Ⅰ组与Ⅱ组之间的表达差异无统计学意义(P>0.05),但Ⅰ组与Ⅲ组、Ⅱ组与Ⅲ组之间均差异具有统计学意义(P<0.05);PAC-1、CD62D、TpP在生存亚组的表达均随着病程显著下降而趋于正常,而在死亡亚组仍持续保持高值甚至显著升高,第1天时CD62P、TpP在亚组的表达差异无统计学意义(P>0.05),但在第3天时差异具有统计学意义,分别为(2.89±1.48)%vs.(5.04±2.57)%,P<0.01和(5.24±2.22)mg/L vs.(9.20±1.93)mg/L(P<0.01);而PAC-1在入院第1天亚组中的表达差异具有统计学意义(P<0.01),为(3.15±0.42)%vs.(5.30±0.48)%.两组的Marshall评分也呈类似变化,相关性分析显示:PAC-1、CD62P、TpP与Marshall评分呈明显正相关. 结论 严重脓毒症的早期就存在血小板活化和微血栓形成,两者共同参与了早期的高凝状态,在病情的发生发展过程中扮演了重要角色.动态监测CD62P和TpP有助于判断病情和预后,PAC-1具有危险分层效应,早期高表达者预后差,可尝试作为严重脓毒症的独立预警指标.     

血小板活化与炎症反应在高血压患者中的改变及其相关性研究

目的 探讨高血压患者血小板活化与炎症反应的改变及其相关性.方法 选择61例原发性高血压患者(高血压组)和64例阵发性室上性心动过速患者(对照组),测定其血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)及平均血小板体积.结果 高血压组患者血清hs-CRP浓度[(3.51±1.95)mg/L]明显高于对照组[(1.15±0.77)mg/L],差异有统计学意义(P＜0.05),平均血小板体积大于对照组[分别为(11.19±2.18)fl与(9.20±2.31)fl],差异有统计学意义(P＜0.05),两者之间呈线性相关(r=0.452,P=0.003).结论 高血压患者存在炎症反应及血小板活化,作为炎症反应及血小板活化的两个观察指标,两者相互作用具有相关性,与高血压的发生发展有密切关系.

Abstract：

Objective To investigate the changes and correlation between platelet activation and inflammatory response in patients with essential hypertension(EH). Methods Sixty-one patients with essential hypertension and sixty-four patients with paroxysmal supraventricular tachycardia as control group were enrolled in the study. The levels of high sensitivity C reactive protein ( hs-CRP ) and mean platelet volume ( MPV ) were measured and compared between the control group and the essential hypertension group. Results Compared with the control group,the levels of hs-CRP and MPV in the EH group were significantly higher( [3.51 ± 1.95]mg/L vs [ 1.15 ± 0. 77 ] mg/L, P ＜ 0. 05 ). The MPV in the EH group was significantly higher than that in the control group ( [ 11.29 ± 2. 18 ] flvs [ 9. 20 ± 2. 31 ] fl, P ＜ 0. 05 ). The level of hs-CRP positively correlated to the level of M PV (r = 0. 452, P = 0. 003 ). Conlusions There were inflammatory response and platelet activation in patients with EH and the serum levels of hs-CRP and MPV is correlated with the development of essential hypertension.     

HBV DNA含量与前S1蛋白抗原和HBV血清学标志物的相关性分析

目的 探讨HBV DNA检测、前S1蛋白抗原与乙型肝炎血清标志物的相关性.方法 采用PCR法检测HBVDNA;ELISA法检测前S1蛋白抗原及乙型肝炎血清学标志物:HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb.结果 644例HBV DNA≥1.0×103Copies/m乙肝患者血清中A组:HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性占50.47%(325/644);B组:HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性占38.82%(250/644);C组:HBsAg、HbcAb阳性占10.71%(69/644).Pre-S1阳性532例.占82.6%.结论 Pre-S1抗原与HBVDNA、HBeAg有较好的一致性和互补性.可作为乙肝病毒存在和复制的观察指标,对病情的预后及疗效判断具有指导意义.     

冠心病患者血小板活性与高敏C反应蛋白的关系

目的探讨冠心病患者血小板活化膜糖蛋白GpⅡb／Ⅲa、P-selectin（P-选择素）的变化及其与高敏C反应蛋白（hs—CRP）的关系。方法用三色全血流式细胞术测定40例冠心病患者外周血中血小板GPUb／Ⅲa、P-selectin的表达水平,并检测患者hs—CRP水平,与30例健康对照者比较。结果冠心病组GpⅡb／Ⅲa、P—selectin、hs—CRP均高于健康对照组（均P〈0．001）。冠心病组GPⅡb／Ⅲa与hs．CRP呈正相关（r=0．45,P〈0．005）,P-selectin与hs—CRP呈正相关（r=0．59,P〈0．001）。结论冠心病患者血清hs-CRP增加、血小板明显活化,其血小板活化程度与hs-CRP关系密切。     

血小板活化、高敏C反应蛋白与慢性肺心病患者肺动脉压的关系

目的探讨慢性肺心病患者血小板活化指标PAC-1、CD62p和高敏C反应蛋白（hs—CRP）与肺动脉收缩压之间的关系。方法用三色全血流式细胞术测定50例慢性肺心病急性加重期患者及50例缓解期患者外周血中血小板PAC-1、CD62p的表达水平,采用免疫比浊法测定hs-CRP,并与40例健康对照者比较。用超声心动图检测慢性肺心病患者肺动脉收缩压。结果慢性肺心病急性加重期组PAC-1、CD62p的表达分别为（81．84±8．68）％、（47．12±6．30）％,明显高于缓解期组[（52．70±7．87）％、（33．66±5．83）％]及正常对照组[（48．73±5．55）％、（30．63±4．09）％]（均P〈0．01）,并与hs-CRP、肺动脉收缩压呈正相关。慢性肺心病急性加重期组hs—CRP为（10．28±6．23）mg／L,明显高于缓解期组[（5．48±3．34）mg／L]（P〈0．01）,并与肺动脉收缩压呈正相关。慢性肺心病急性加重期组肺动脉收缩压为（44．22±6．70）mmHg,明显高于缓解期组[（39．88±6．18）mmHg]（P〈0．01）。结论慢性肺心病急性加重期患者血小板明显活化,hs-CRP参与了慢性肺心病急性加重期炎症反应,血小板活化、炎症反应与肺动脉高压之间关系密切。     

慢性肺心病患者血流变学与血小板膜蛋白结构的改变

目的探讨慢性肺心病的关系血流变学变化与血小板膜蛋白GPⅡb／Ⅲa、P-selectin（P-选择素）的变化。方法测定46例慢性肺心病患者血流变学,用三色全血流式细胞术测定外周血中血小板GPⅡb／Ⅲa、P-selectin的表达水平,并与36例健康对照组比较。结果慢性肺心组全血高切粘度、全血低切粘度、血浆粘度、纤维蛋白原均高于健康对照组（分别为P〈0．05;P〈0．05;P〈0．001;P〈0．001）。肺心病组GPⅡb／Ⅲa、P-selectin均明显高于健康对照组（均P〈0．001）。肺心组GPⅡb／Ⅲa．P-selectin与血浆粘度和纤维蛋白原均呈正相关。结论慢性肺心病患者血粘度增加、血小板明显活化,其血小板活化程度与血流变学变化关系密切。