脊髓灰质炎灭活疫苗的免疫原性和保护性评价:预测疫苗效力的新方法[英]

用对脊髓灰质炎病毒敏感的转基因(Tg)小鼠评价脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)保护性的分析方法已经建立,并针对2型IPV进行了优化。美国食品和药物管理局Dragunsky等用这种方法来比较由减毒Sabin株生产的实验性IPV(sIPV)和由野生型(wt)脊髓灰质炎病毒MEF-1株生产的传统IPV(cIPV)的免疫     

三价Sabin脊髓灰质炎灭活疫苗:首次临床试验和血清免疫力观察

最近,Lederle药厂研制成功新型三价Sabin脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin IPV)。新疫苗与其他IPV制剂的不同点在于其D抗原含量和种子病毒株。应用减毒的Sabin株可消除制备过程和免疫接种时接触野病毒的危险性。病毒在恒河猴肾细胞中培养,过滤去除细胞碎片,超滤浓缩,并以凝胶过滤和离子交换层析纯化。病毒经福尔马林灭活11天以上。1、2和3型的D抗原含量分别为40∶25∶75U/ml。本文报道了对疫苗安全性和免疫原性的试验结果。作者对39名既往有口服脊髓灰质炎疫苗     

脊髓灰质炎灭活疫苗的免疫原性和保护性评价：预测疫苗效力的新方法

用对脊髓灰质炎病毒敏感的转基因（Tg）小鼠评价脊髓灰质炎灭活疫苗（IPV）保护性的分析方法已经建立，并针对2型IPV进行了优化。美国食品和药物管理局Dragunsky等用这种方法来比较由减毒Sabin株生产的实验性IPV（sIPV）和由野生型（wt）脊髓灰质炎病毒MEF-1株生产的传统IPV（cIPV）的免疫原性和保护性。     

用口服和灭活脊髓灰质炎疫苗对婴儿进行联合免疫:在冈比亚、阿曼和泰国的随机试验结果

受试者为1685名婴儿,随机分为3组:口服脊髓灰质炎疫苗(OPV)组:出生、6、10、14周龄时各服用一次OPV;OPV和脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)联合免疫组:出生时用OPV,6、10、14周龄时合用IPV和OPV;IPV组:出生时间安慰剂,6、10、14周龄时用IPV.每剂三价OPV含1、2和3型脊髓灰质炎病毒量分别为:10~6、10~5和10~(5.5)半数组织培养感染量(TCID_(50)),每剂IPV1、2和3型病毒含量分别为:40、8、32D抗原单位.收集14和24周龄的指血和静脉血1ml,以测定中和抗体滴度,收集脐带血样以测定母体抗体水平.血样一式三份,用改良的微量中和试验测定抗各型脊髓灰质炎病毒抗体滴度.24周龄时用10~6TCID_(50).剂量的Ⅰ型单价OPV进行攻击,接种后粪便样本用聚合酶链反应法作Sabin株特异性探针检查.     

简讯

2015年1月14日,国家食品药品监管总局批准了全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(单苗)的生产注册申请。该疫苗是由中国医学科学院医学生物学研究所研发,通过采用现行脊髓灰质炎减毒活疫苗的生产毒株(Sabin株),经在Vero细胞生物反应器培养收获病毒,结合灭活疫苗生产工艺制备而成。该疫苗主要通过注射途径用于儿童预防脊髓灰质炎病毒的     

脊髓灰质炎灭活疫苗保护转基因小鼠抵抗3型脊髓灰质炎病毒的攻击

作者用5种脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)接种7～8周龄的表达人脊髓灰质炎病毒受体(PVR)的转基因(Tg)小鼠(TgPVR21).IPV A、B和C分别为单价3型Saukett株、Sabin-Pfizer株和Saukett株疫苗.A与B的制备方法及大鼠试验免疫原性相同,C与A、B生产技术细节不同.IPV D和E为三价疫苗(1型Mahoney,2型MEF-1,3型Saukett     

全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗获批上市

本刊讯2015年1月14日,国家食品药品监管总局批准了全球首个Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(单苗)的生产注册申请。该疫苗是由中国医学科学院医学生物学研究所研发,通过采用现行脊髓灰质炎减毒活疫苗的生产毒株(Sabin株),经在Vero细胞生物反应器培养收获病毒,结合灭活疫苗生产工艺制备而成。该疫苗主要通过注射途径用于儿童预防脊髓灰质炎病毒的感染,它的上市将对我国彻底消灭脊髓灰质炎发挥至关重要的作用。脊髓灰质炎是一种由Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒引起的急性传     

重组DNA技术与脊髓灰质炎病毒疫苗

脊髓灰质炎及其疫苗的现状和问题脊髓灰质炎是一种传播广泛、危害很大的急性病毒性传染病。1955年Salk创制福尔马林灭活疫苗(IPV)及以后Sabin创制口服减毒活疫苗(OPV)以来,世界上许多国家相继开展了大规模的疫苗免疫工作。脊髓灰质炎的发病率有了大幅度下降,有些国家已经     

以前免疫接种过的儿童口服脊髓灰质炎疫苗后的排毒情况和株特异性抗体应答

为了阻止脊髓灰质炎的爆发流行,1985年2～3月芬兰组织了一次全国性的三价口服脊髓灰质炎疫苗(OPV)的免疫接种运动。本次研究的健康儿童组,已于1984年11月接种过一剂脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)。作者报道了这部分儿童排毒和抗体应答情况及两者之间的关系。 138份粪便标本中有88份分离出1种或1种以上的脊髓灰质炎病毒株。Ⅲ型病毒除2株外,皆显示类Sabin株抗原特征。106份咽拭子标本中只有1份病毒分离试验阳性。该阳性儿童在4个月前脊髓灰质炎流行期间也     

Ⅰ型和Ⅱ型脊髓灰质炎减毒活疫苗的猴体神经毒力

[Marsden SA et al:J Biol Stand8(4):303,1980(英文)] 猴体神经毒力试验对脊髓灰质炎减毒活疫苗来说,仍然是一项重要的检定项目。Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎减毒活疫苗使用历史表明,它的猴体神经毒力随病毒株在细胞培养中传代水平而增高。为了确定Sabin株Ⅰ、     

脊髓灰质炎病毒中和抗体检测血清参考品的制备及稳定性

目的 制备抗脊髓灰质炎(脊灰)病毒血清作为检测参考品,并研究其稳定性.方法 用1、2、3型脊灰病毒分别接种非洲绿猴肾细胞,收获病毒液,超滤浓缩后纯化病毒抗原,并进行蛋白含量和纯度检测.用纯化的病毒抗原免疫新西兰白兔获得分别抗3个型别的血清,过滤、分装、冻干后,进行无菌检验、支原体检验、水分测定,用微量细胞病变抑制法进行特异性检测.3名实验员各标定5次候选参考品的中和抗体效价,计算变异系数.血清放置于-20℃进行稳定性分析.结果 纯化的1、2、3型脊灰病毒抗原蛋白含量分别为12.3、10.4、9.8μg/ml.电泳蛋白条带的相对分子质量与文献报道一致.高效液相色谱法检测的1、2、3型脊灰病毒抗原蛋白纯度分别为100％、99％和96％.抗各型脊灰病毒血清仅可中和对应型别,而不能中和另两个型别脊灰病毒或肠道病毒.无菌检验、支原体检验结果及水分含量(均低于3％)均符合药典要求.血清参考品的抗1、2、3型脊灰病毒中和抗体效价分别为73 587、3 264、34 857.候选参考品在-20℃放置5年后中和抗体效价未降低(t=-1.25,P=0.225).结论 制备的抗1、2、3型脊灰病毒冻干血清参考品稳定性好,适用于检测Sabin株脊灰灭活疫苗免疫原性及脊灰病毒特异性中和抗体.     

不同方法配制的DTaP-sIPV中sIPV的免疫原性研究

目的 对采用不同配制方式制备的,含不同剂量Sabin株脊髓灰质炎(脊灰)灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)的DTaP-sIPV联合疫苗中sIPV的免疫原性进行研究.方法 按照2种不同方式配制含高、低剂量sIPV的DTaP-sIPV联合疫苗.将70只大鼠按简单随机法分成7组,分别为F1H(DTaP-sIPV高剂量组,配制方式1)、F2H(DTaP-sIPV高剂量组,配制方式2)、sIPV-H(sIPV高剂量组)、F1L(DTaP-sIPV低剂量组,配制方式1)、F2L (DTaP-sIPV低剂量组,配制方式2)、sIPV-L(sIPV低剂量组)、赛诺菲巴斯德五联疫苗潘太欣对照组.每组10只大鼠,间隔3周双侧后腿肌内注射,0.5 ml/只,共免疫3针.于第0、3、6、9、13、17、21、25周眼眶采血、分离血清,采用微量细胞病变效应抑制法分别测定血清中抗I、Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒中和抗体滴度,并进行多样本均数方差分析.结果 每针免疫后,各组抗各型中和抗体滴度均持续上升,第9周均达到最高水平,第13周开始显著下降,至第25周仍维持在一定水平.3针免疫完成后3周,F2H组的抗Ⅰ型脊灰病毒中和抗体几何平均滴度显著高于潘太欣组(F=0.988,P=0.027);抗Ⅱ型中和抗体,F2H组显著高于F1H组,sIPV-H组显著高于F1H和潘太欣组(F=2.391,P值均＜0.05);抗Ⅲ型中和抗体,各组间差异均无统计学意义.3针基础免疫后各时间点F2H组抗各型中和抗体滴度均为最高,但除第9周其抗Ⅱ型中和抗体显著高于F1H组外,其他差异均无统计学意义.结论 DTaP-sIPV联合疫苗免疫大鼠后可以诱导产生抗各型脊灰病毒中和抗体,且其滴度和持续时间均优于或等同于潘太欣组.DTaP-sIPV诱导的中和抗体滴度不低于相应剂量的sIPV.虽然配制方式2可能更佳,但2种配制方式间sIPV的免疫原性差异无统计学意义.     

Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA方法的建立及应用

目的  建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV）D抗原定量检测的双抗体夹心ELISA方法,用于sIPV的体外效力评价。方法  以纯化D抗原分别免疫西门塔尔牛和BALB/c小鼠,获得牛免疫血清和小鼠单克隆抗体（单抗）杂交瘤细胞株,以杂交瘤细胞株免疫小鼠制备单抗腹水。牛血清和小鼠腹水分别经沉淀和亲和层析后得到纯化牛多克隆抗体（多抗）和小鼠单抗。以多抗为包被抗体、单抗为检测抗体进行配对筛选,建立D抗原定量检测的双抗体夹心ELISA。对方法的线性、范围、特异性、准确度、精密度以及在sIPV制备过程中样品检测的适用性进行验证。结果  纯化多抗和单抗均具有中和抗体活性,纯度分别达到80%和90%以上。经抗体配对筛选,确定3H10、901、1H10作为检测抗体,分别用于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA的建立。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型包被抗体的使用浓度分别为1:8 000、1:8 000、1:10 000, 3H10、901、1H10检测抗体的使用浓度分别为1:10 000、1:20 000、1:10 000。建立的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原检测方法的检测范围分别为0.4~13.0、0.4~12.0和0.4~20.0 DU/ml,线性回归决定系数≥0.99。该法能特异性检出D抗原,与C抗原、不同型别D抗原以及生产过程中的其他物质无交叉反应。用该法对高、中、低浓度样品进行测定,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型测定值/理论值（×100%）分别为97%～111%、91%～104%和95%～102%、相对标准偏差分别为≤7%、≤9%和≤10%;采用该法检测sIPV生产过程中的样品,显示出抗原纯化趋势。结论  建立了脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原定量检测ELISA方法,可有效用于sIPV的体外效力评价。     

培养温度对脊髓灰质炎病毒繁殖及D抗原的影响

目的 选择脊髓灰质炎病毒繁殖的最佳温度,同时观察温度对病毒繁殖及D抗原的影响。方法   分别在25℃、33℃和37℃培养脊髓灰质炎病毒(Sabin株Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型),从24 h开始间隔12 h取样,至细胞完全病变或96 h,用ELISA检测病毒D抗原含量,绘制变化曲线;用微量细胞病变法检测感染性滴度,绘制病毒生长曲线。结果   三个型的脊髓灰质炎病毒在25℃均不繁殖;33℃和37℃均适合病毒繁殖。对于Ⅰ和Ⅲ型病毒,33℃的繁殖滴度及D抗原水平比37℃高;Ⅱ型病毒在两种温度下繁殖特性基本一致。结论   温度对脊髓灰质炎病毒繁殖起决定性作用,综合Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型病毒的温度繁殖特点,33℃培养比37℃更适合脊髓灰质炎病毒繁殖。     

Immunogenicity and efficacy of Fermi-type nerve tissue rabies vaccine in mice and in humans undergoing post-exposure prophylaxis for rabies in Ethiopia

Rabies is an acute viral encephalitis that is invariably fatal following the manifestations of clinical signs. To subvert the course of the disease, rabies post-exposure prophylaxis (PEP) is widely utilized. The immunogenicity and efficacy of Fermi-type rabies vaccine produced in Ethiopia was determined in mice subjected to intracranial challenge with rabies virus, and in humans undergoing rabies PEP in Ethiopia. Mice were randomly assigned into 5 groups. Group 1 received 0.25 ml each of phenolized saline intraperitoneally for 14 consecutive days. Mice in groups 2-5 received 0.25 ml of rabies vaccine for human PEP for the same period of time. Blood samples were drawn from the retro-orbital vein of all mice on designated days for the determination of rabies virus neutralizing antibody (VNA) using the mouse serum neutralization test. Mice were subsequently challenged intracranially with rabies virus at a concentration of 64 MICLD50 90 days post initial vaccination. Rabies neutralizing antibody titers in the sera of immunized mice ranged from 4.6 to 25 IU/ml. Booster vaccine doses did not seem to induce significant increases in the immune response of vaccinated mice, all of whom withstood intracranial challenge with rabies virus. Rabies VNA was further determined in 12 patients vaccinated in accordance with the prescribed dosage of Fermi-type vaccine for human rabies PEP. Most had > 0.5 IU/ml of rabies VNA by day 14, and none detectable at day 1. In contrast to mice, booster doses of vaccine may contribute to slightly higher rabies VNA titers in humans but our small sample size, on top of significant defaulter rates in the study participants, limits our interpretation of the effects of booster vaccine doses. The results of this study are the first documentation of the efficacy and immunogenicity of the Ethiopian Fermi type nerve tissue vaccine in both humans and mice.     

Sabin株脊髓灰质炎病毒纯化的离子交换层析条件研究

目的  研究Sabin株脊髓灰质炎病毒（Sabin strain polio virus,sPV）纯化的离子交换层析（ion exchange chromatography,IEC）条件。 方法  在不同层析条件下对sPV凝胶层析粗纯液进行IEC,设定的层析参数分别为介质Q Sepharose FF或Eshmuno Q、上样量30%或40%柱体积、流速（150±5）或（240±8） cm/h。分别检测各型sPV纯化液的D抗原含量、蛋白浓度、病毒滴度、宿主细胞蛋白残留量和Vero细胞DNA残留量,计算D抗原回收率和比活。结果  Eshmuno Q IEC纯化的各型sPV纯化液的D抗原回收率均明显高于Q Sepharose FF IEC。在上样量40% 柱体积、流速（150±5） cm/h条件下,Eshmuno Q IEC纯化的各型sPV纯化液的D抗原比活均高于Q Sepharose FF IEC,差异均有统计学意义（Ⅰ型：t=4.23,Ⅱ型：t=5.73,Ⅲ型：t=4.18,P值均<0.05）,而且前者的宿主细胞蛋白残留量（Ⅰ型：t=8.29,Ⅱ型：t=7.89,Ⅲ型：t=8.18,P值均<0.05）和Vero细胞DNA残留量（Ⅰ型：t=4.23,Ⅱ型：t=4.56,Ⅲ型：t=4.78,P值均<0.05）均低于后者,差异均有统计学意义。结论  用IEC纯化sPV进行纯化时,以Eshmuno Q代替Q Sepharose FF可增加上样量和流速,从而缩短IEC时间,提高纯化效率。     

甲醛溶液对Sabin株脊髓灰质炎病毒灭活效果研究

 目的  验证4%甲醛溶液使Sabin株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎（脊灰）病毒达到预期灭活效果所需要的时间。方法  用4%甲醛溶液对15批Sabin株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰病毒在(36.5±1) ℃ 环境进行灭活,同时以15批未加入4%甲醛溶液的病毒纯化液作为对照组,按照企业注册标准采用微量细胞病变法测定病毒滴度。为了消除4%甲醛溶液对Hep-2细胞的影响,取4%甲醛溶液接种Hep-2细胞作为实验组,同时设置Hep-2细胞为对照组,每天观察对比两组细胞形态。对同一个Hep-2细胞悬液的总细胞数和活细胞数采用传统手工计数和全自动细胞计数仪计数,并比较分析结果。结果  实验组随着灭活时间的延长病毒滴度呈下降趋势,在灭活到第4天起,3个型别样品均检测不到病毒滴度;对照组病毒滴度在每毫升9.1～10.6 lg半数细胞培养物感染量范围内,符合企业注册标准的要求。4%甲醛溶液对Hep-2细胞生长有抑制作用,在培养观察到第3天时细胞全部失去活力死亡;对照组细胞形态良好呈多边形长成致密单层,活细胞组t值为18.098,总细胞组t值为4.005,P值均＜0.05,差异有统计学意义。结论  脊灰病毒在第4天能被彻底灭活,在进行此实验时应先消除甲醛对细胞培养的影响,避免结果出现假病变现象,确保结果的准确性;应用全自动细胞计数能提高计数结果的精确度。     

乙型脑炎减毒活疫苗安全性和免疫原性观察

目的 观察乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗的接种反应和免疫原性.方法 分别选择52名（8月龄～50岁）和607名（8月龄～12岁）健康志愿者进行Ⅰ和Ⅲ期临床试验.试验组每人接种1次由上海生物制品研究所有限责任公司研制的乙脑减毒活疫苗（0.5 ml）,对照组接种同样剂量的已上市乙脑减毒活疫苗.两组接种后的不良反应率和中和抗体阳转率用x2检验进行比较,中和抗体几何平均滴度用t检验进行比较.结果 试验组接种后有5.91％的人体温升高,对照组为7.96％,两组的体温反应发生率差异无统计学意义（x^2 =0.917,P=0.338）.试验组Ⅰ期试验局部反应率为1.92％,Ⅲ期试验为0.25％,对照组Ⅲ期试验局部反应率为0.50％,两组的局部反应率差异无统计学意义（确切概率法,P=0.553）.Ⅲ期免疫原性试验中,试验组的血清中和抗体阳转率为89.00％,抗体几何平均滴度为29.69;而对照组分别为74.59％和19.25,差异均有统计学意义（x^2=11.708,P=0.001;t=4.281,P=0.001）.结论 本研究的试验性乙脑减毒活疫苗接种反应轻微,并具有良好的免疫原性.     

脊髓灰质炎病毒VP1区的基因变化及疫苗衍生脊髓灰质炎病毒的流行情况

脊髓灰质炎(脊灰)病毒有3个血清型.VP1是脊灰病毒衣壳蛋白之一,它有4个抗原决定簇,可以诱导中和抗体,具有血清型特异性.脊灰病毒由于其RNA依赖性RNA聚合酶缺乏严密的自我校正功能,在自身复制过程中精确性下降,因此,会产生很多点突变,出现一些VP1区核苷酸突变热点.口服脊灰减毒活疫苗(OPV)的应用,有效地控制了脊灰,但因OPV病毒在人体肠道内复制过程中发生碱基突变,导致其神经毒力回升,引起疫苗相关麻痹型脊灰和出现疫苗衍生脊灰病毒(VDPV),使全球多次发生循环VDPV事件,对消灭脊灰带来新的挑战.为此,有关学者建议停止使用OPV,改用脊灰灭活疫苗或两种疫苗相结合的序贯免疫程序.     

麻疹、腮腺炎、风疹和水痘联合减毒活疫苗的研制

目的 建立麻疹、腮腺炎、风疹和水痘(measles,mumps,rubella and varicella,MMRV)联合减毒活疫苗的生产工艺和检定方法.方法 采用麻疹病毒沪-191株、腮腺炎病毒S79株、风疹病毒BRDⅡ株、水痘-带状疱疹病毒北京84-7株,在原代鸡胚细胞或人胚肺二倍体细胞2BS株中制备高滴度疫苗病毒原液.观察4种原液按不同比例稀释配制后病毒的滴度变化和相互干扰现象,确定MMRV疫苗中4种原液的配制比例,并筛选适宜保护剂,建立最佳冻干工艺.同时,建立MMRV联合减毒活疫苗的检定方法.采用t检验对结果进行比较.结果 选择最佳配制比例、保护剂和冻干工艺制备出连续多批MMRV疫苗,按国家药典要求检定全部合格.其中连续3批疫苗经国家检定机构检定合格:麻疹病毒基础滴度和37℃放置7d后的滴度分别≥3.9和≥3.5 lg半数细胞培养感染量(50％ cell culture infective dose,CCID50)/ml,腮腺炎病毒≥5.0和≥4.7 lgCCID50/ml,风疹病毒≥5.0和≥4.8 lgCCID50/ml,水痘病毒≥4.5和≥4.4 lg噬斑形成单位/ml.用建立的方法检测MMRV疫苗,结果4种病毒滴度实测值与理论值之间的差异无统计学意义(t值为0.149～1.838,P值均＞0.05).结论 建立了稳定、可行的MMRV疫苗生产工艺和检定方法.