褪黑素通过抑制挛缩减轻大鼠离体心脏的缺血再灌注损伤

目的 探讨褪黑素（Mel）抑制挛缩改善大鼠离体心脏缺血再灌注（IR）损伤的作用及机制。方法 采用Langendorff离体心脏灌流方法模拟缺血再灌注模型,40只SD大鼠按随机数字表法分为4组（10只/组）。正常对照组（Control）：正常灌注175 min;IR组：全心缺血45 min,再灌注120 min;Mel+IR组：用Mel（5 μmol/L）灌注1 min,全心缺血45 min,用Mel（5 μmol/L）再灌注5 min,Krebs-Henseleit液再灌注115 min;挛缩抑制剂2,3-丁二酮单肟（BDM）干预缺血再灌注组（BDM+IR）：用BDM（20 mmol/L）灌注1 min,全心缺血45 min,用BDM（20 mmol/L）再灌注5 min,KH液再灌注115 min。以心肌死亡面积、caspase-3活性、细胞色素c（cytochrome c）和cleaved caspase-3蛋白表达检测各组心肌损伤程度;以HE染色、冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、肌钙蛋白（I cTnI）含量、左心室舒张末压（LVEDP）和电镜观察肌原纤维收缩带的形成评价各组心脏挛缩程度;检测心肌组织中ATP含量的变化。结果 与Control组相比,IR组心肌死亡面积、caspase-3活性、cytochrome c和cleaved caspase-3蛋白表达显著增加（P<0.01）;同时,冠脉流出液中LDH活性和cTnI含量明显增加,再灌注末LVEDP显著抬升,HE染色显示心肌纤维发生明显断裂,ELISA检测发现ATP含量显著降低（P<0.01）;另外,透射电镜结果表明IR组肌节过度收缩,形成明显的肌原纤维收缩带;而给予Mel和BDM处理后,可显著减小心肌死亡面积、aspase-3活性、cytochrome c和cleaved caspase-3蛋白表达,还可明显抑制LDH活性、cTnI含量和LVEDP,减少心肌纤维断裂,并增加胞内ATP含量;更为重要地是,Mel和BDM能减轻IR引起的肌节过度收缩,并抑制收缩带的形成。结论 Mel可通过抑制挛缩明显改善心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与增加心肌细胞内ATP含量,减轻心肌机械性损伤引起的肌膜撕裂,减少细胞内容物的漏出有关。     

褪黑素可以通过抑制肝和小肠的线粒体凋亡减轻肝缺血/再灌注损伤

目的 探讨肝缺血/再灌注损伤过程中肝和小肠细胞凋亡的发生及褪黑素的保护作用.方法 90只Wistar大鼠(190～210 g,6～7周龄)随机分为褪黑素处理组(Mel),酒精溶媒对照组(A1c)和生理盐水对照组(NS).通过阻断门静脉左支、左肝动脉和肝总管左支60 min建立肝左叶缺血/再灌注模型,之后分别于复流后的30、60和120 min收集血清、肝脏和小肠的标本进行检测.利用自动生化分析仪检测血清中的ALT和AST,利用酶联免疫吸附法检测血清中的TNF-α,利用比色法检测肝脏及小肠组织中的MDA含量,通过免疫组织化学方法对肝脏和小肠组织的Caspase-3进行染色,利用原位末端标记技术(TUNEL)对肝脏和小肠的凋亡细胞进行染色,利用透射电镜观察组织中的凋亡小体.结果 Mel组在复流后所有时点的ALT均显著低于两个对照组(P＜0.05);Mel组在复流120 min时的AST显著地低于两个对照组(P＜0.05).Mel组在复流后所有时点的TNF-α含量及线粒体中的MDA含量均显著低于两个对照组(P＜0.05).Mel组在复流后120 min的Caspase-3的积分光密度(IOD)显著地低于两个对照组(P＜0.05).另外Mel组在复流后所有时点的TUNEL染色的IOD值均显著地低于两个对照组(P＜0.05).结论 肝缺血/再灌注可以升高血清中TNF-α的水平和线粒体中的MDA含量,增加肝及小肠细胞的Caspase-3的表达和凋亡的发生.褪黑素减轻肝缺血/再灌注损伤的机制可能与抑制自由基损伤线粒体,进而抑制细胞凋亡有关.     

激活促生存激酶途径减轻缺血再灌注损伤

再灌注过程本身也会导致细胞死亡，研究表明再灌注时相细胞凋亡是导致细胞再灌注损伤的重要因素。因此再灌注过程中，针对抗凋亡机制的细胞保护可能提供减轻再灌注损伤的新方法。已有研究表明再灌注损伤过程中细胞的存活与某些应激下促生存激酶信号途径的激活有关系。这些激酶途径称为救援激酶途径．包括P13K—Akt、ERKMAPK、JNKMAPK、JAK—STAT等。寻求某些可以上调这些信号的药物，用于再灌注时相,可以成为抗再灌注损伤治疗的新方法。     

褪黑素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的 探讨褪黑素（MT）对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法 成年Wister大鼠60只分为假手术组、手术对照组、手术＋VitC组（125mg／kg）、手术＋MT1组（0．2mg／kg）、手术＋MT2组（1mg/kg）、手术＋MT3组（5mg／kg）。测定各组大鼠肝缺血40min再灌注90min后血清中ALT、AST水平和肝组织中的丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）含量，电镜观察肝细胞线粒体的结构变化。结果 与对照组相比，MT组血清ATT和AST值上升幅度明显降低（均P〈0．01）；MT组的肝组织中MDA含量显著降低，SOD、CAT的含量明显提高（P〈0．01）；MT组肝组织HE染色光镜观察肝小叶结构保存较完整，肝细胞肿胀减轻；电镜观察肝细胞线粒体结构保存较完整。结论 MT对大鼠肝缺血再灌注致肝损伤具有保护作用。其保护机制可能是通过维持肝组织内SOD、CAT含量，清除氧自由基，抗脂质过氧化，稳定细胞膜性结构来实现的。     

胸腺素β4通过激活AKT-Bad信号通路减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的:探讨胸腺素β4(thymosin β4,Tβ4 )预处理对小鼠肝脏缺血再灌注(ischemia-reperfusion,IR)损伤的作用及其可能的机制?方法:100只雄性ICR小鼠随机分为4组:空白对照(Sham)组;70%肝脏缺血再灌注组;生理盐水(Saline)组;Tβ4组?肝脏缺血再灌注后1?3?6?12?24 h收集血清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)?天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平?上述时间点收集的肝脏组织分为两部分:一部分甲醛固定后进行HE染色观察肝脏组织病理学变化;另一部分保存于液氮中进行Western blot与PCR实验?Tβ4?AKT?p-AKT?Bad?p-Bad的表达水平用Western blot进行检测;肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白介素-6(IL-6)的mRNA水平用PCR进行检测?结果:与正常肝组织相比,Tβ4表达水平在缺血再灌注后1?3 h降低,从6 h开始恢复至正常水平;再灌注后Tβ4组ALT?AST水平明显低于70%缺血再灌注组与生理盐水组(P < 0.05),同时Tβ4组的肝脏组织病理学变化明显改善,TNF-α与IL-6的表达水平也受到抑制;Tβ4组p-AKT与p-Bad的表达水平在缺血再灌注后1?3?6 h升高,从12 h开始各组间无差异?结论:胸腺素β4可以通过直接激活 AKT-Bad信号通路和抑制炎症因子的表达减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤?     

褪黑素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的探讨褪黑素（MT）保护大鼠肝缺血再灌注损伤的机制。方法采取大鼠第一肝门阻断的缺血再灌注模型,将健康雄性SD大鼠64只随机分为两组：对照组和MT组,观察每组动物的病理切片,分别检测血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）及肝组织匀浆中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）的含量,免疫组化测定诱导型NO合酶（iNOS）的表达。结果肝脏缺血再灌注后,有明显的病理损伤改变。MT组再灌注2 h、4 h血清ALT、LDH、肝组织匀浆中MDA和SOD含量与对照组相比均明显降低（均P〈0.01）,MT组iN-OS表达明显低于对照组（P〈0.01）。结论自由基产生过多是肝脏缺血再灌注损伤初期的主要原因,给予MT预处理可通过调节iNOS和SOD来降低MDA、NO水平,从而减轻肝脏损伤。     

褪黑素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的利用大鼠肝脏热缺血再灌注(I/R)损伤模型,研究褪黑素(MT)对再灌注损伤肝脏的保护作用。方法用无损伤血管夹阻断部分肝脏血流,建立大鼠肝热缺血再灌注损伤模型;用缺口末端标记法(TUNEL法)检测肝细胞凋亡指数(AI);心脏采血,测定血浆ALT和AST的变化。结果模型组肝细胞AI升高,血浆ALT和AST升高(P<0.05),用褪黑素干预组肝细胞AI和血浆ALT和AST较模型组下降(P<0.05)。结论褪黑素可以抑制缺血再灌注损伤后肝细胞的凋亡,减轻肝脏的损伤。     

褪黑素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨褪黑素（melatonin,Mel）对大鼠缺血再灌注（IR）损伤的保护作用及机制。方法通过手术建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型,将实验动物随机分为Sham组、IR组和Mel＋IR组,测IR后24 h各组大鼠血清中尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）、肾组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量变化,并观察肾脏组织结构的病理变化。结果IR后24 h大鼠血清BUN、Cr水平明显升高,组织匀浆SOD活力明显降低,MDA水平明显升高。Mel＋IR组较IR组肾脏SOD活性明显升高（P〈0.01）,MDA水平明显降低（P〈0.01）;肾功能、组织变化较IR组得到了明显改善。结论褪黑素可通过提高组织抗氧化酶活性、降低组织脂质过氧化反应发挥对肾功能及肾脏结构的保护作用。     

HSP60通过上调TREM2表达改善肺缺血再灌注损伤

目的:探讨热休克蛋白60(HSP60)调控2型髓系细胞触发受体(TREM2)对肺缺血再灌注损伤(LIRI)小鼠的保护作用.方法:将24只C57BL/6小鼠随机分成对照组、HSP60组、LIRI组、LIRI+HSP60组,每组6只.LIRI+HSP60组于术前1 h腹腔注射HSP60(5 μg/g).HSP60组腹腔注射...     

肾缺血再灌注损伤研究进展

肾脏为高灌注器官 ,对缺血以及缺血再灌注均敏感。缺血再灌注损伤 (ischemiareperfusioninjury ,IRI)是缺血性急性肾功能衰竭 (ischemicacuterenalfailure ,IARF)的重要损伤环节 ,也是肾移植中影响移植肾早期功能恢复的主要因素。造成缺血再灌注损伤的相关因素很多 ,其中 ,缺血再灌注引起的炎症级联反应 (In flammatoryCascade)和活性氧 (reactiveoxygenspecies ,ROS)氧化损伤是人们所关注的两个主要因素。1　活性氧对肾缺血再灌注损伤的影响活性氧 (ROS)是外源性氧化剂或细胞内有氧代谢过程中产生的具有很高生物活性的氧分子 ,如过氧…     

DJ-1通过Nrf2信号通路减轻大鼠脑缺血-再灌注引起的氧化应激损伤

目的 探讨DJ-1（Park7）在脑缺血再灌注损伤中的抗氧化作用及相关机制。方法 构建SD大鼠大脑缺血再灌注损伤模型,将SD大鼠随机分为假手术组、MCAO 组、Scramble组和 DJ-1 siRNA组、NC组和 Overexpression组。通过DJ-1 siRNA干扰片段干扰DJ-1的表达,以及DJ-1过表达腺相关病毒载体过表达DJ-1的表达。通过测定MCAO/R后各组神经功能学评分和脑含水量,同时应用HE和Nissl 染色法评估脑组织的形态学变化和皮层梗死区神经元的损伤情况,评价 DJ-1 对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。用超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）分析脑组织氧化应激状态。免疫印迹法检测脑组织中 DJ-1,Nrf2,HO-1以及NQO1的表达水平,以及免疫荧光染色法观察Nrf2的表达及核转位情况,探讨DJ-1减轻大鼠脑缺血再灌注氧化应激损伤的可能机制。结果 与 MCAO 组相比,DJ-1 siRNA 组的神经功能学评分（P?0.001）、脑含水量（P?0.001）均明显增加;HE 和Nissl 染色显示脑缺血区神经元损伤进一步加重;SOD 含量进一步降低,MDA 含量进一步增加（P?0.001）;干扰DJ-1后,其蛋白水平明显降低（P=0.003）,同时Nrf2及其下游的HO-1和NQO1也明显降低（P?0.001）。而过表达DJ-1以后,其DJ-1 （P=0.006）、Nrf2（P=0.006）及其下游的HO-1（P=0.004）和NQO1明显增加（P=0.014）。结论 DJ-1作为体内重要的神经保护因子,可以减少大鼠脑缺血再灌注氧化应激损伤,并可能是通过激活Nrf2信号通路来实现的。     

阿利吉仑通过抑制炎症和凋亡反应改善小鼠心肌缺血再灌注损伤

目的通过建立小鼠心肌缺血再灌注损伤模型,探讨阿利吉仑对于改善心肌缺血再灌注损伤的药物效果及可能的作用机制。方法将C57小鼠分为假手术组、模型组、低剂量组、高剂量组。假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,低剂量组和高剂量组分别给予25、50 μg/g阿利吉仑灌胃。超声心动图检测各组小鼠心脏功能,ELISA检测各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测凋亡通路相关因子的表达水平。结果本实验成功建立小鼠心肌缺血再灌注损伤模型。与假手术组比较,其他3组小鼠的每搏输出量、心输出量、收缩期末左心室前壁厚度、收缩期末左心室后壁厚度、舒张期末左心室后壁厚度均显著降低(P＜0.05)。与模型组比较,低、高剂量组小鼠的左心室射血分数和左心室短轴缩短率明显升高(P＜0.05),且随着阿利吉仑剂量的增加而呈浓度依赖性升高(P＜0.05),但TNF-α和IL-6水平明显降低(P＜0.05)。与假手术组比较,模型组的B淋巴细胞2蛋白(Bcl-2)的mRNA和蛋白表达量均显著降低(P＜0.05),而Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达量明显增加(P＜0.05)。阿利吉仑能增加Bcl-2的表达量(P＜0.05),而使Bax的表达量明显下降(P＜0.05)。结论阿利吉仑可以通过抑制炎症反应、调控凋亡相关通路,改善小鼠心肌缺血再灌注损伤,促进其心功能的恢复。     

抗纤丸激活Nrf2信号通路抗小鼠慢性肝损伤的作用和机制研究

[目的]探讨抗纤丸对四氯化碳(CCL4)诱导的慢性肝损伤模型小鼠的保护作用及机制.[方法]BALB/c小鼠,分为正常组、模型组、甘草酸二铵组[60 mg/(kg·d)]、抗纤丸组[3 g/(kg·d)].腹腔注射CCL4橄榄油溶液建立慢性肝损伤小鼠模型,正常组腹腔注射等体积橄榄油.造模成功后,灌胃给药4周,检测血清丙氨...     

白藜芦醇减轻脑缺血再灌注损伤及其机制

目的研究白藜芦醇(Res)对脑缺血再灌注损伤的保护作用及可能的机制。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血2 h再灌注。将76只大鼠分成假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、Res低剂量组(15 mg/kg,I/R+R1组)和Res高剂量组(30 mg/kg,I/R+R2组),每组19只。再灌注24 h,采用TTC法测量脑梗死体积,化学比色法测定血清及脑组织中MDA含量,RT-PCR及Western blot检测Nrf2、HO-1基因和蛋白表达,HE染色观察脑组织的病理改变。结果与I/R组比较,Res能明显缩小脑梗死体积[I/R组(42.67±2.51)%vsI/R+R1组(30.53±1.45)%、I/R+R2组(20.27±2.11)%,P<0.01],降低血清中MDA的含量[I/R组(9.29±0.42)nmol/mlvsI/R+R1组(4.03±0.08)nmol/ml、I/R+R2组(2.68±0.27)nmol/ml,P<0.01],及脑组织中MAD含量[I/R组(1.40±0.02)nmol/mgvsIR+R...     

舒芬太尼后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时 Nrf2-ARE 信号通路的影响

目的 探讨舒芬太尼后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时Nrf2-ARE 信号通路的影响。方法 30 只健康雄性SD 大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组及舒芬太尼后处理组,复制大鼠心肌缺血再灌注损伤 模型,舒芬太尼后处理组于再灌注前5 min,按1μg/kg 的剂量将舒芬太尼经股静脉注入,假手术组和缺血再 灌注组则注入等量的生理盐水,检测3 组大鼠心肌梗死面积以及病理学改变,检测3 组大鼠心肌细胞凋亡情况, 利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot 分别检测3 组大鼠心肌组织中Nrf2、HO-1、NQO1、 SOD1 及GSTM2 基因和蛋白表达。结果 与假手术组比较,缺血再灌注组和舒芬太尼后处理组大鼠心肌细胞凋 亡指数和梗死面积均增加,与缺血再灌注组比较,舒芬太尼后处理组大鼠心肌细胞凋亡指数和梗死面积均降 低（P <0.05）;与假手术组比较,缺血再灌注组和舒芬太尼后处理组大鼠心肌组织中Nrf2、HO-1、NQO1、 SOD1 及GSTM2 基因和蛋白相对表达量均降低（P <0.05）;与缺血再灌注组比较,舒芬太尼后处理组大鼠心肌 组织中Nrf2、HO-1、NQO1、SOD1 及GSTM2 基因和蛋白相对表达量均升高（P <0.05）。结论 舒芬太尼 后处理可有效减轻缺血再灌注损伤大鼠心肌梗死面积以及细胞凋亡,其机制可能通过激活Nrf2/ARE 信号通路 促使其下游Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶的表达,从而有效对抗氧化应激损伤。     

重组水蛭素通过降低白细胞浸润减轻心肌缺血再灌注损伤

目的:探讨重组水蛭素(r-hirudin)对兔心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及其对缺血心肌中白细胞浸润的影响.方法:24只日本大耳白兔随机分为2组,每组12只.缺血再灌注(I/R)组:心脏左冠状动脉前降支缺血45 min、再灌注120 min;重组水蛭素(r-H)组:缺血45 min、再灌注120 min,再灌注前15 min静注重组水蛭素(1 mg/kg),再灌注时继以持续静滴重组水蛭素[1 mg/(kg*h)]120 min.测定血浆肌酸磷酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,并观察缺血心肌内白细胞聚集、心肌缺血及梗死范围的变化.结果:I/R组缺血心肌内白细胞聚集,血浆CK、LDH活性明显增高,心肌梗死面积明显增大;给予重组水蛭素,可显著降低缺血心肌内白细胞聚集,降低梗死面积,减轻心肌再灌注损伤(P<0.05).结论:重组水蛭素能够抑制再灌注期缺血心肌内白细胞浸润,拮抗心肌缺血/再灌注损伤.     

下调SIK2可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤：基于mTOR-ULK1信号通路的下调与细胞自噬的减少

目的 探究盐诱导激酶2（SIK2）对大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响及机制。方法 建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、缺血再灌注组、SIK2抑制剂组,5只/组（造模前24 h左股静脉注射博舒替尼10 mg/kg）。超声检测大鼠心功能,HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌细胞自噬情况,蛋白免疫印迹法检测各组大鼠心肌组织中SIK2和LC3B、Beclin-1、p62等自噬相关蛋白以及p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1相关通路蛋白含量。结果 与假手术组比较,缺血再灌注组心肌组织病理损伤严重,自噬小体数量增加（P<0.05）,同时SIK2蛋白表达增多（P<0.01）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组SIK2蛋白表达减少（P<0.01）,心肌组织病理损伤较轻,自噬小体数量减少（P<0.05）。与假手术组相比,缺血再灌注组LVEF、FS值降低（79.33±3.40 vs 38.67±2.49,59.33±5.25 vs 19.33±1.25,P<0.001）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组LVEF、FS值升高（38.67±2.49 vs 59.33±3.40,19.33±1.25 vs 30.67±3.40,P<0.05）,3组IVSDd、LVPWDd无明显差别（P>0.05）。与假手术组相比,缺血再灌注组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达增多,p62蛋白表达减少（P<0.01）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达减少,p62蛋白表达增多（P<0.05）。与假手术组相比,缺血再灌注组p-ULK1（Ser757）蛋白表达增多（P<0.01）,p-mTOR蛋白表达减少（P<0.0001）;与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组p-ULK1（Ser757）蛋白表达减少（P< 0.01）,p-mTOR蛋白表达增多（P<0.05）;各组mTOR、ULK1无明显差异（P>0.05）。结论 SIK2可能通过mTOR/ULK1信号通路促进细胞自噬,对SIK2进行抑制,可以减少异常自噬,缓解心肌缺血再灌注损伤。     

缺血预适应通过抑制TLR4/NF-KB信号通路保护大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:研究缺血预适应对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用是否由toll样受体4(TLR4)/NF-kB途径所介导,以及是否与促进降钙素基因相关肽(CGRP)释放有关.方法:结扎Sprague-Dawley大鼠左冠状动脉前降支60 min,复灌3h造成心肌缺血再灌注损伤.缺血预适应为结扎大鼠左冠状动脉前降支5 min,复灌5min,共4个周期.RT-PCR分析心肌TLR4 mRNA表达.免疫组织化学法分析心肌TLR4和NF-κB蛋白表达.同时,测定心肌梗死面积、血浆CGRP浓度和血清肌酸激酶活性.结果:缺血预适应显著减少心肌梗死面积,降低肌酸激酶活性,增高血浆CGRP水平.心肌缺血再灌注可显著上调TLR4和NF-κB表达,缺血预适应可抑制其作用.结论:缺血预适应通过抑制TLR4/NF-κB信号通路保护大鼠心肌缺血再灌注损伤,其作用与促进CGRP释放有关.