吡非尼酮通过抑制TGF-β1通路和炎症反应预防大鼠尿道损伤后的纤维化及狭窄

目的 探讨吡非尼酮对大鼠尿道损伤后狭窄形成的预防作用及可能机制。方法 选取SD雄性大鼠30只,随机分为3组（10只/组）：阴性对照组、阳性对照组及吡非尼酮组。吡非尼酮组：切开后尿道海绵体建立大鼠尿道损伤模型,按100 mg·kg-1·d-1腹腔注射吡非尼酮;模型组：同对照组构建大鼠尿道损伤模型,腹腔注射等量溶剂;假手术组：不予尿道损伤处理,但腹腔注射等量溶剂。术后2周逆行尿道造影观察尿道狭窄,留取尿道损伤组织,行HE染色观察尿道组织形态学变化,Masson染色检测胶原变化,免疫组化及Western blot检测a-SMA和TGF-β1的蛋白表达,qRT-PCR检测大鼠尿道组织中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达。结果 吡非尼酮组大鼠较阴性对照和阳性对照组体质量下降,逆行尿道造影显示阳性对照组大鼠尿道显著变窄,吡非尼酮组大鼠尿道较阳性对照组大鼠明显好转（P<0.05）。HE染色显示阳性对照组尿道上皮细胞增生,管腔狭窄,炎性细胞增多;吡非尼酮组病理学表现与阴性对照组相似。Masson染色显示吡非尼酮组较阳性对照组胶原纤维含量少,排列规则有序。免疫组化和Western blot结果表明阳性对照组尿道a-SMA和TGF-β1表达显著高于阴性对照组（P<0.05,P<0.01）,而吡非尼酮能够抑制TGF-β1和α-SMA的表达。qRT-PCR结果显示吡非尼酮能够抑制损伤组织中TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子的基因表达（P<0.05,P<0.01）。结论 吡非尼酮可预防尿道损伤后纤维化及狭窄,并可能与抑制TGF-β1通路和炎症反应相关。     

羟尼酮可阻止大鼠肝星状细胞活化：基于抑制TGF-β1通路蛋白的磷酸化

目的 探讨羟尼酮对CCl₄诱导的大鼠肝纤维化的作用及相关机制。方法 66只雄性SD大鼠按随机数字法分为对照组10只、模型组20只、羟尼酮(100 mg/kg)组12只、羟尼酮(250 mg/kg)组12只、吡非尼酮(250 mg/kg)组12只,采用CCl₄皮下注射进行肝纤维化造模,羟尼酮、吡非尼酮予以灌胃给药,处死大鼠后,留取血清检测肝功能,利用肝脏组织检测羟脯氨酸的含量,肝组织进行HE染色和Sirius Red染色,对炎症和纤维化程度进行评分。将人肝星状细胞系LX-2分组：对照组、TGF-β1组、羟尼酮组、吡非尼酮组,经过TGF-β1刺激和羟尼酮、吡非尼酮处理后,Western blot分别检测α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和磷酸化Smad3、磷酸化p38、磷酸化Erk1/2、磷酸化Akt等磷酸化蛋白。结果 动物实验显示羟尼酮组大鼠肝功能值有改善,肝组织羟脯氨酸含量明显减少,肝组织纤维化程度显著降低,且均具有统计学意义(P<0.05)。细胞实验发现随羟尼酮浓度的增高,ɑ-SMA和Ⅰ型collagen蛋白表达水平降低;TGF-β1刺激细胞后...     

吡格列酮对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞增殖和TGF-β1表达的影响

目的 观察吡格列酮(PIO)对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)细胞增殖及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法 原代培养RPMC;并用MTT和ELISA法测定吡格列酮对高糖(2.5%葡萄糖)影响下RPMC增殖及其分泌TGF-β1的影响.结果 高糖能显著抑制RPMC的增殖(P<0.01).而5～20 μmol/L的吡格列酮能部分逆转高糖对RPMC增殖的抑制作用(P<0.01);高糖能显著增加RPMC表达TGF-β1(P<0.01),5～20 μmol/L的吡格列酮能明显减弱高糖上调TGF-β1的作用(P<0.01).结论 吡格列酮可能通过逆转高糖对RPMC的增殖抑制作用,抑制高糖上调RPMC表达纤维化因子TGF-β1的作用,进而修复高糖所致的RPMC的损伤,延缓腹膜纤维化,为改善间皮细胞损伤和防治腹膜纤维化提供实验依据.     

LncRNA-MEG3在心肌纤维化过程中的表达变化研究

目的研究LncRNA-MEG3在大鼠心肌纤维化及心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖过程中的表达变化。方法用异丙肾上腺素(ISO)腹部皮下注射SD大鼠构造心肌纤维化动物模型为实验组(ISO组),对照组注射等量的生理盐水;提取乳鼠CFs,采用转化生长因子β1(TGF-β1)作用CFs构建细胞水平纤维化模型为实验组(TGF-β1组),对照组为未经TGF-β1作用正常培养的CFs; HE、Masson染色观察心肌组织胶原变化;用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原分子(CollagenⅠ)蛋白的表达;qRT-PCR法检测CollagenⅠ、α-SMA mRNA和MEG3的表达;CCK-8法检测经TGF-β1作用CFs后的吸光度(OD)值。结果与对照组比较,ISO组的心肌细胞体积变大、紊乱,组织胶原面积明显增加;ISO组和TGF-β1组中CollagenⅠ、α-SMA蛋白和mRNA表达都显著增多,LncRNA-MEG3表达显著减少;CCK-8实验结果提示使用TGF-β1刺激CFs 24、48 h后较对照组的细胞OD值明显增加,即细胞增殖活性增强。结论 LncRN...     

TGF-β1对人胚肺成纤维细胞HSP47、collagenⅠ表达的影响

目的通过观察TGF-β1对人胚肺成纤维细胞（HELF）的热休克蛋白47（HSP47）及Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）表达的影响,探讨三者在肺纤维化形成中的作用和关系。方法用TGF-β1刺激HELF,观察HSP47、collagenⅠ的动态表达;实验分2组：a组相同浓度TGF-β15ng/mL作用于细胞后0h,12h,24h,48h,72h;b组不同浓度TGF-β10ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml作用于细胞48h;免疫印迹技术检测a组与b组的HSP47、collagenⅠ的表达情况。通过倒置相差显微镜观察细胞形态学变化及增殖情况。结果免疫印迹分析：a组HELF在5ng/mLTGF-β1作用下,HSP47与CollagenⅠ的表达随着时间的延长同步增强（P〈0.05）;b组TGF-β1剂量逐渐增加后,HSP47与collagenⅠ的表达亦同步增强（P〈0.05）。倒置相差显微镜下可见HELF细胞成梭形生长,加入TGF-β1后明显增殖。结论 TGF-β1可能主要通过促进HSP47分泌调控CollagenⅠ的合成分泌,HSP47作为胶原特异性分子伴侣在肺纤维化的发生发展过程中发挥至关重要的作用,有望成为治疗肺纤维化的新靶点。     

TGF-β1和CollagenⅢ在压力性尿失禁患者阴道壁组织中表达的研究

目的 探讨压力性尿失禁(SUI)患者盆底组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)与CollagenⅢ与SUI的关系.方法 收集SUI(伴或不伴POP)患者67例,并选取同期因子宫良性病变而非卵巢功能性肿瘤行手术治疗的非SUI和POP患者20例作为对照.术中取阴道前壁组织.免疫组化方法 检测Collagen Ⅲ及TGF-β1的表达阳性率.结果 ①Collagen Ⅲ在SUI组、SUI+POP组及对照组患者表达阳性率分别为25.0%、22.5%、90.0%;TGF-β1在SUI组、SUI+POP组及对照组患者表达阳性率分别为26.8%、22.6%、90.0%.SUI组及SUI+POP组与对照组比较,Collagen Ⅲ和TGF-β1的表达均低于对照组(P＜0.01),而在SUI组与SUI+POP组比较,差异无统计学显著意义(P＞0.05).②TGF-β1表达水平与Collagen Ⅲ表达水平呈正相关.结论 SUI患者盆底支持组织的弹性和强度减弱与组织中TGF-β1减少和胶原蛋白含量下降有关.     

吡非尼酮抑制肿瘤相关成纤维细胞促进结肠癌细胞系HT29上皮间质转化的作用及机制

目的:探讨吡非尼酮在肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）诱导的HT29结肠癌细胞系侵袭、迁移、增殖、上皮-间质转化（EMT）中的作用及机制。方法:利用共培养小室将CAFs与HT29共培养后CCK-8测定HT29增殖效率;Real time-PCR和Western blot检测HT29结肠癌细胞系E-cadherin和Vimentin转录及蛋白表达水平;Transwell实验检测HT29结肠癌细胞的迁移和侵袭能力。ELISA技术检测CAFs细胞上清液中细胞因子的表达。结果:吡非尼酮抑制CAFs对HT29增殖促进作用（P＜0.05）;CAFs条件培养基培养HT29后,Vimentin表达水平显著升高（P＜0.05） ,E-cadherin显著降低（P＜0.05）;吡非尼酮处理CAFs的条件培养基对HT29细胞中两种蛋白无明显影响;Transwell实验表明CAFs与HT29共培养后,其侵袭和迁移能力明显增强（P＜0.05）;ELISA结果提示CAFs分泌TGF-β1功能受吡非尼酮抑制且存在剂量关系。结论:吡非尼酮通过抑制CAFs分泌TGF-β1抑制CAFs诱导HT29结肠癌细胞系侵袭、迁移、增殖、上皮-间质转化。     

沙利度胺联合吡非尼酮治疗肺间质纤维化患者的临床效果及对血清TNF-α、TGF-β1、IGF-Ⅰ水平的影响

目的 探讨沙利度胺联合吡非尼酮治疗肺间质纤维化患者的临床效果及对血清TNF-α、TGF-β1、IGF-Ⅰ水平的影响效果.方法 选取本院2017年1月至2021年10月收治的肺间质纤维化患者100例,按照随机数字法分为两组,每组50例.对照组采用吡非尼酮治疗,研究组采用沙利度胺联合吡非尼酮治疗.比较两组细胞因子指标(血清TNF-α水平、血清TGF-β1水平、血清IGF-Ⅰ水平)、治疗效果以及肺功能指标(FVC、FEV1、DLCO).结果 研究组细胞因子指标均低于对照组(P<0.05);研究组治疗总有效率高于对照组(P<0.05);研究组肺功能指标优于对照组(P<0.05).结论 应用沙利度胺联合吡非尼酮治疗肺间质纤维化患者,疗效显著,可有效改善肺间质纤维化患者的细胞因子水平,不良反应较少,安全性较高,可明显改善肺功能,值得临床上进一步应用推广.     

新生鼠视网膜中TGF-β1表达的影响研究

目的比较TGF-β1在不同氧环境饲养新生鼠视网膜中的表达变化,揭示TGF-β1与早产儿视网膜病变发病的关系.方法60只7日龄C57BL/6J鼠仔随机分为三组,对照组饲养于空气中;实验组1饲养于75%氧箱中5天后改为空气饲养;实验组2氧箱中的氧浓度逐日从30%升高至75%后再逐日下降至空气饲养.分别于第3、8、14天行视网膜铺片ADP染色观察视网膜血管变化;14天时采用免疫组化法检测视网膜TGF-β1表达,RT-PCR法检测TGF-β1 mRNA表达.结果实验组1和实验组2新生鼠视网膜血管缩窄.第14天时,实验组1周边视网膜血管密度增加,TGF-β1表达呈阳性改变,TGF-β1 mRNA表达高于对照组和实验组2(P>0.05);实验组2周边视网膜血管未见明显异常改变,TGF-β1表达呈阴性改变,TGF-β1 mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05).结论 TGF-β1参与早产儿视网膜病变的发病过程,吸入氧浓度波动较大时视网膜表达TGF-β1增加,并产生类似于早产儿视网膜病变的改变.     

TGF-β1对支气管哮喘病人肺成纤维细胞的作用

目的通过观察转化生长因子β1(TGF-β1)对支气管哮喘病人肺成纤维细胞增殖和分泌的影响,探讨二者在支气管哮喘气道重塑中的作用。方法采用组织块贴壁培养方法,分离和原代培养哮喘病人肺成纤维细胞,免疫荧光法鉴定。以0、1、5、10μg/L TGF-β1分别作用肺成纤维细胞48h,MTT法测定成纤维细胞增殖情况,RT-PCR法测定肺成纤维细胞Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)mRNA表达水平。结果组织块贴壁法成功地培养出了肺成纤维细胞。免疫荧光法鉴定证明,原代培养出的细胞为肺成纤维细胞。不同浓度的TGF-β1均可促进哮喘病人肺成纤维细胞增殖,诱导哮喘病人肺成纤维细胞CollagenⅠmRNA的表达水平上调,呈浓度依赖性(F=44.723、24.704,P<0.05)。结论在哮喘发病机制中,TGF-β1可促进肺成纤维细胞的增殖,合成和分泌CollagenⅠ,从而引起气道黏膜下纤维化和胶原沉积,导致哮喘病人气道重塑。     

转化生长因子β1、I型胶原在Borrmann Ⅳ型胃癌形成中的作用研究

[目的] 分析转化生长因子β1(TGF-β1)表达与胃癌肉眼形态的关系及其在Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)合成中的作用,初步探讨TGF-β1与Ⅳ型胃癌形成的关联.[方法] 通过免疫组织化学染色SP方法,分析了109例胃癌患者原发灶中TGF-β1及CollagenⅠ的表达.[结果] TGF-β1表达分级在Borrmann分型各型间有显著性差异(P<0.005), Borrmann Ⅳ型胃癌TGF-β1呈++～+++级表达的占96%,而在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中分别为38.46%、76.31%、81.82%;TGF-β1表达与CollagenⅠ表达有相关关系(P<0.005);CollagenⅠ表达在Borrmann分型各型间有显著性差异(P<0.001),Borrmann分型为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的CollagenⅠ表达面积比分别为8.22±0.81、8.69±0.90、11.20±1.45、14.27±1.71.Ⅳ型与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型之间均有显著性差异(P<0.001).[结论] TGF-β1表达与CollagenⅠ表达有明显相关性,在以胃壁广泛纤维化为特点的Borrmann Ⅳ型胃癌形成过程中起促进作用.     

TGF-β1、TIMP-1及Collagen Ⅲ在盆腔器官脱垂患者阴道壁中的表达及意义

  目的  探讨TGF-β1、TIMP-1及Collagen Ⅲ在盆腔器官脱垂患者阴道壁中的表达及意义。  方法  选取2020年3月至2020年12月在昆明医科大学第一附属医院妇科住院部手术的盆腔器官脱垂（pelvic organ prolapse,POP）患者28例为实验组,其中按POP-Q分期法将其分为:II度7例,Ⅲ度16例,IV度5例。选择同期因妇科良性病变行全子宫和（或）双附件切除且无POP患者30例为对照组。通过免疫组化的方法检测阴道壁组织中TGF-β1、TIMP-1及Collagen Ⅲ的表达。  结果  POP组的TGF-β1、TIMP-1及Collagen Ⅲ的IRS得分明显低于对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）;POP组II度、Ⅲ度及Ⅳ度患者的TGF-β1、TIMP-1及Collagen Ⅲ的IRS得分随着分度的增加呈逐渐降低的趋势,差异均有统计学意义（P < 0.05）。POP组患者阴道壁组织中Collagen Ⅲ与TIMP-1、TGF-β1表达呈正相关（r = 0.381,0.519,P < 0.05）;TGF-β1表达与TIMP-1表达呈正相关（r = 0.270,P < 0.05）。  结论  POP患者阴道壁组织中Collagen Ⅲ、TIMP-1和TGF-β1呈低表达,且与病情程度有一定的关系,可能参与POP的发生、发展;POP患者阴道壁组织中Collagen Ⅲ、TIMP-1、TGF-β1间存在一定相关性,三者之间存在一定的协同作用,共同参与疾病的发生发展。     

转化生长因子β1、Ⅰ型胶原在Borrmann Ⅳ型胃癌形成中的作用研究

[目的]分析转化生长因子β1(TGF-β1)表达与胃癌肉眼形态的关系及其在Ⅰ型胶原(Colla-genⅠ)合成中的作用,初步探讨TGF-β1与Ⅳ型胃癌形成的关联。[方法]通过免疫组织化学染色SP方法,分析了109例胃癌患者原发灶中TGF-β1及CollagenⅠ的表达。[结果]TGF-β1表达分级在Borrmann分型各型间有显著性差异(P<0.005),BorrmannⅣ型胃癌TGF-β1呈++~+++级表达的占96%,而在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中分别为38.46%、76.31%、81.82%;TGF-β1表达与CollagenⅠ表达有相关关系(P<0.005);CollagenⅠ表达在Borrmann分型各型间有显著性差异(P<0.001),Borrmann分型为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的CollagenⅠ表达面积比分别为8.22±0.81、8.69±0.90、11.20±1.45、14.27±1.71。Ⅳ型与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型之间均有显著性差异(P<0.001)。[结论]TGF-β1表达与CollagenⅠ表达有明显相关性,在以胃壁广泛纤维化为特点的BorrmannⅣ型胃癌形成过程中起促进作用。     

吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TGF-β1、MMP-9、Col-Ⅳ表达影响

目的:探讨吡格列酮对链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏保护作用及机制。方法:实验用大鼠随机分为正常对照组(Normal control,NC)、糖尿病对照组(Diabetes mellitus control,DMC)、糖尿病吡格列酮治疗组(Diabetes treat-ed with pioglitazone,DP)。DP组给予吡格列酮20 mg/(kg.d)灌胃。8周后观察大鼠血糖、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、肾指数(Kidney index,KI)、尿微量白蛋白(Microalbuminuria,MAU)等生化指标,免疫组化法观察肾组织基质金属蛋白酶9(Matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)、转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)及Ⅳ型胶原(Collagen typeⅣ,Col-Ⅳ)的表达。结果:DMC组大鼠BUN、KI、MAU及肾组织TGF-β1、Col-Ⅳ的表达显著高于NC组(P<0.01),而DP组BUN、KI、MAU及肾组织TGF-β1、Col-Ⅳ的表达...     

TGF-β增强rhBMP-2诱导成骨中Ⅰ, Ⅱ型胶原及碱性磷酸酶的表达

目的 对β转化生长因子（TGF-β）增强人重组骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2)诱成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及碱性磷酸酶（ALP）的表达进行研究。方法 BALB/c小鼠110只随机分为2组，每组55只，设立rhBMP-2/TGF-β为实验组，rh-BMP-2为对照组，分别于3-21d共8个时间点取材，采用免疫组织化学方法对新生骨组织中的Ⅰ，Ⅱ型胶原进行检测；对ALP活性进行定量分析。观察2组在诱导成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达情况。结果 Ⅱ型胶原的出现是和成软骨，软骨细胞的出现相伴随的，但是，肥大，变性的软骨细胞并不表达Ⅱ型胶原，作为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原，ALP在软骨形成期即有表达，但是随着成骨细胞的出现，骨组织的形成Ⅰ型胶原仍表现为高表达，而ALP的表达则呈下降趋势。实验组CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达早于对照组。结论 TGF-β增强了rhBMP-2诱导成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达。     

IGF-Ⅰ联合TGF-β1促成骨细胞的增殖和分化效应

目的 探讨重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ(rhlGF-Ⅰ)和重组人转化生长因子β 1(rhTGF-β1)联合应用对成骨细胞增殖和分化的影响.方法 ①体外培养成骨细胞株MG-63,分组以不同浓度的IGF-β(0.1、1.0、10.0和100.0 ng/mL)或TGF-β 1(0.01、0.1、1.0和10.0 ng/mL)培养,MTT法检测细胞增殖,得到IGF-Ⅰ与TGF-β单独作用的最适浓度.②选用最适浓度的IGF-Ⅰ,TGF-Ⅰ单独或联合培养,MTT法检测细胞增殖,ALP试剂盒检测细胞分化,分析两种细胞因子联合应用时,在成骨细胞增殖和分化过程中的作用.结果 ①IGF-Ⅰ与TGF-β对成骨细胞MG-63均有一定的促增殖和促分化作用.促增殖作用以10 ng/mL的IGF-Ⅰ在第3天,1 ng/mL的TGF-β1在第5天最为显著.②在上述浓度联合刺激条件下,促增殖和促分化效果均优于单一的IGF-Ⅰ或TGF-β1单独应用组.结论 IGF-Ⅰ与TGF-β1均有一定的促MG-63细胞增殖和分化效应,两者联合应用时具有良好的协同作用.     

阻断TGF-β/TGF-βRⅠ通路对ATDC5细胞增殖、分化及细胞外基质的影响

目的研究转化生长因子βⅠ型受体(transforming growth factor beta typeⅠreceptor,TGF-βRⅠ)阻断剂SB-505124对软骨细胞增殖、分化及细胞外基质的影响与机制。方法利用Western blot检测不同浓度的SB-505124处理后,前软骨细胞系ATDC5中p-Smad2/3的变化。MTT法检测SB-505124处理对ATDC5细胞生长、增殖的影响及时间、浓度依赖性效应。Western blot检测c-Myc蛋白水平的变化。Real-time PCR检测SB-505124处理后软骨分化、细胞外基质合成及降解相关分子CollagenⅡ、Aggrecan及Adamts5表达与变化,并利用阿尔新蓝染色法检测SB-505124处理对ATDC5细胞中蛋白聚糖合成的影响。结果 Western blot检测结果示:SB-505124处理ATDC5细胞明显抑制TGF-β1激活的p-Smad2/3,并呈浓度依赖性;MTT检测结果示:SB-505124浓度和时间依赖性的抑制ATDC5细胞增殖;Real-time PCR检测结果示:SB-505124处理明显抑制ATDC5细胞中CollagenⅡ、Aggrecan的表达,同时上调了Adamts5的表达;阿尔新蓝染色结果提示SB-505124处理明显抑制ATDC5细胞中蛋白聚糖的合成。结论利用SB-505124阻断内源性TGF-β信号,可抑制软骨细胞增殖、分化及细胞外基质的合成,同时促进细胞外基质的降解。     

白藜芦醇对病理性瘢痕成纤维细胞及TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 观察白藜芦醇对体外培养的病理性瘢痕成纤维细胞及TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 不同浓度白藜芦醇处理病理性瘢痕成纤维细胞后,应用扫描电镜观察其形态学变化;MTT法检测其增殖状况;分别用反转录聚合酶链反应和免疫荧光细胞化学染色法检测其TGF-β1/Smads信号通路中相关蛋白TGF-β1,Smads mRNA和蛋白的表达.结果 病理性瘢痕成纤维细胞经白藜芦醇干预后,在形态学上可见到典型的凋亡特征;MTT法检测结果显示,各不同药物浓度组与对照组相比,OD值均偏低,差异有统计学意义(P＜0.05);TGF-β1,Smad 2、3、4 mRNA和蛋白表达降低,而Smad 7 mRNA和蛋白表达增加,并且呈剂量依赖关系,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 白藜芦醇能通过下调TGF-β1,Smad 2、3、4表达并上调Smad 7表达,来达到其抑制瘢痕组织成纤维细胞增殖并诱导其凋亡的作用.     

炎性微环境下TGF-β1通过TGF-β1/Smad3 通路促进BMSCs成骨分化

目的 研究炎性微环境下转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响及作用机制。方法 应用肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)体外模拟炎性微环境,检测不同浓度TGF-β1对BMSC增殖活性的影响。实验分为对照组[BMSC+成骨诱导液(osteogenic medium,OM)]、实验组(BMSC+TGF-β1+OM)和抑制组[BMSC+SB431542 (TGF-β1拮抗剂)+OM]。应用ALP染色、茜素红染色、实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)及Western blot法对BMSCs成骨分化能力和TGF-β信号通路因子Smad2、Smad3进行检测并比较3组间的差异。结果 低浓度TGF-β1作用下BMSCs增殖活性较高,高浓度(50ng/ml)抑制BMSCs增殖活性;成骨诱导7天和10天时,实验组与其他两组比较,ALP染色较深、面积最大;茜素红染色结果显示,实验组体外矿化结节形成均高于其他两组;RT-qPCR检测结果显示,实验组成骨分化基因OPN、RUNX2与ALP表达均增高,TGF-β信号通路中Smad3在实验组表达最高,抑制组表达最低,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot法检测结果显示,实验组内OPN、RUNX2与ALP蛋白表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β信号通路中Smad3蛋白表达在3组中差异不明显,而p-Smad3在实验组中表达明显增高、抑制组中明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 炎性微环境中TGF-β1通过激活TGF-β/Smad3信号通路促进了BMSCs成骨分化。     

蛇床子素对骺板TGF-β1及其受体TGF-βRⅡ蛋白表达的影响

【目的】考察蛇床子素对小鼠长骨转化生长因子-β1（transforming growth factorβ,TGF-β1）及其受体TGF-βRⅡ蛋白表达的影响,初步探讨该化合物对骨的作用机制。【方法】取16 d胚胎小鼠前肢尺骨在BGJb培养基中培养48 h,培养基中分别含有1×10^-6mol/L雌酚酮、1×10^-7-1×10^-4mol/L四个不同梯度浓度的蛇床子素。采用免疫组织化学方法测定长骨骺板静止区、增殖区和肥大区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白。【结果】（1）经不同浓度的蛇床子素和雌酚酮处理后,胎鼠长骨骨总长显著增加。与对照组相比,蛇床子素1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5mol/L和雌酚酮1×10^-6mol/L组有显著性差异（P〈0.01）。蛇床子素1×10^-4mol/L组骨总长有增加的趋势,但无统计学意义（P〉0.05）。（2）与空白对照组,蛇床子素和雌酚酮组骺板各区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白水平明显上调。当蛇床子素浓度由1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5mol/L逐渐升高时,各区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白表达升高,而1×10^-4mol/L组各区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白表达降低。与雌酚酮组相比,蛇床子素组除1×10^-5mol/L组外,其他各组长骨骺板各区TGF-β1和TGF-βRⅡ表达与雌酚酮组相比有统计学意义（P〈0.05）。【结论】（1）蛇床子素能明显促进体外培养胚胎小鼠长骨生长。（2）培养基中加入蛇床子素可上调长骨TGF-β1及其受体TGF-βRⅡ表达,提示可能与其促进体外培养胚胎小鼠长骨生长有关。