注射用益气复脉(冻干)对大鼠肝微粒体CYP1A2,CYP3A4活性的影响研究

目的:研究注射用益气复脉(冻干)对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP1A2,CYP3A4)酶活性的影响效应.方法:实验设空白对照组(生理盐水)、诱导组(苯巴比妥)和益气复脉低、中、高剂量组,连续给药7 d.采用高效液相色谱法检测,以探针药非那西丁和咪达唑仑经大鼠肝微粒体孵育后转化的代谢产物对乙酰氨基酚和1'-羟基咪达唑仑的生成速率来判定CYP1A2,CYP3A4酶的活性.结果:空白对照组、诱导组和益气复脉低、中、高剂量组的对乙酰氨基酚的生成速率分别为(1.304 ±0.205),(8.555±1.193),(2.927±0.576),(3.675±0.444),(3.024±0.552)ng·mg-1·min-1,1-羟基咪达唑仑的生成速率分别为(9.100±2.235),(47.413±4.320),(38.649 ±5.043),(36.282±3.254),(33.764±5.128)ng·mg-1·min-1.结论:注射用益气复脉对大鼠CYP1A2,CYP3A4酶的活性具有诱导作用.     

升板方对SD大鼠CYP3A1酶活性的影响

目的:研究升板方对于SD大鼠肝微粒体CYP3A1酶活性的影响,为临床化疗联合用药方案提供参考。方法:将25只SD雄性大鼠随机分为升板方高(8.645 g/kg)、中(4.322 g/kg)、低(2.161 g/kg)地塞米松诱导组(灌胃100 mg/kg,1次/d,连续3 d),及空白对照组(灌胃给予生理盐水,10 mL/kg,2次/d,连续14 d)。升板方各剂量组均灌胃给药,2次/d,连续14 d。以睾酮为底物探针,建立稳定、可靠的检测大鼠CYP3A1酶代谢活性的HPLC方法,考察体外代谢体系最佳的孵育时间、最佳蛋白浓度、最佳底物浓度,在最佳孵育条件下根据大鼠肝微粒体转化生成6β-羟基睾酮的速率,评价各组大鼠肝药酶的活性。结果:在大鼠肝微粒体孵育体系,睾酮代谢为6β羟基睾酮反应的最佳孵育时间是10 min,最佳酶蛋白浓度是0.25 mg/mL,最佳底物浓度为200μmol/L。在最佳孵育条件下,升板方高、中、低剂量组及空白对照组、地塞米松诱导组6β-羟基睾酮生成速率分别是:(55.82±5.97)、(65.10±6.83)、(60.89±6.53)、(62.17±6.55)、(126.73±15.40)μmol/(L.mg pro.min)。经统计学检验,升板方高中低剂量组与地塞米松组反应速率的差异有统计学意义(P0.05),与生理盐水组无统计学差异。而升板方各剂量组间均无统计学差异。结论:升板方对大鼠肝药酶CYP3A1酶活性无诱导作用。     

莪术油对大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性的影响

目的:建立非那西丁及其代谢产物的液质联用检测法,研究莪术油对大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性的影响,为临床合理用药提供参考。方法:色谱柱为XDB-C18(150mm×2.1mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸,流速:0.4mL.min-1,柱温:30℃,以多反应监测方式采集数据。以非那西丁为探针药物,采用体外实验,实验组给予莪术油,对照组给予生理盐水,评价药物代谢酶CYP1A2酶活性的变化。结果:非那西丁和对乙酰氨基酚的检测浓度线性范围分别为4～1600ng.mL-1(r=0.9973)、3-2000ng.mL-1(r=0.9973)。实验组测得的扑热息痛/非那西丁的比值:11.30±0.71,对照组:9.60±1.04,t检验显示P<0.05,有统计学意义。结论:本法可用于检测大鼠肝微粒体孵育液中非那西丁及其代谢物浓度。莪术油对大鼠肝CYP1A2酶的活性,有体外诱导作用。     

清开灵注射剂等5种中药注射剂对大鼠肝微粒体 CYP3A的体外抑制作用

目的:考察清开灵注射剂、金纳多注射剂、疏血通注射剂、参麦注射剂、康艾注射剂这5种临床常用的中药注射剂对大鼠肝微粒体CYP3A的体外抑制作用,预测发生药物相互作用的可能性,以确保这些中药注射剂临床应用的安全性与有效性.方法:采用SD大鼠肝微粒体体外孵育法,在孵育体系中加入底物睾酮和不同体积的清开灵注射剂等5种中药注射剂,用高效液相色谱法测定睾酮的羟化代谢产物6β-羟基睾酮的生成量反映CYP3A的活性,酮康唑用作阳性对照药.结果:在体外孵育体系中,10%的清开灵注射剂大约能抑制93.0%的6β-羟基睾酮生成,抑制效果明显高于其他4种相同浓度的中药注射剂.根据其抑制动力学曲线,计算出清开灵注射剂的IC90和Ki值分别为1.O%和0.7%.结论:在体外系统中,金纳多注射剂和疏血通注射剂对大鼠肝微粒体CYP3A无抑制作用,参麦注射剂和康艾注射剂对CYP3A显示出弱的抑制作用,清开灵注射剂对CYP3A有明显的抑制作用.提示当清开灵注射剂与经CYP3A代谢的药物联合用药时可能会发生药物相互作用,临床联合用药须谨慎.     

3种中药成分对大鼠CYP3A4酶代谢的影响

目的:探讨3种中药成分(延胡索乙素、甲基莲心碱、三七总皂苷)对CYP3A4酶代谢活性的影响,以了解中药与CYP3A4酶底物联合用药时可能产生的相互作用.方法:采用超高速离心法制备大鼠肝脏微粒体,建立体外肝脏微粒体混合酶代谢体系.以睾丸酮作为底物探针,用HPLC建立检测CYP3A4酶代谢活性的方法,分别考察体外代谢体系的最适宜底物浓度、代谢时间、pH、孵育温度以及磷酸盐浓度.在确定的条件下,将3种中药成分稀释成不同浓度,分别与睾丸酮共同孵育于肝微粒体代谢体系中,测定在有或无中药成分存在下代谢产物6β-羟基睾丸酮的产生量,以评估中药成分对CYP3A4酶代谢的影响.结果:在肝微粒体孵育体系中,睾丸酮代谢为6β-羟基睾丸酮最适宜的体外代谢条件为底物浓度200μmol·L~(-1),代谢时间3.5 h,pH 7.0,孵育温度37℃,磷酸盐终浓度0.1 mol·L~(-1).延胡索乙素和三七总皂苷均对CYP3A4酶的抑制作用较弱,IC_(50)>100μmol·L~(-1),甲基莲心碱有一定的抑制作用,IC_(50)为(47.5±2.3)μmol·L~(-1).结论:延胡索乙素和三七总皂苷对CYP3A4酶代谢无明显影响,提示这2种中药成分与CYP3A4酶底物之间的相互作用较低,甲基莲心碱有可能会产生微弱的药物相互作用.     

HPLC-MS/MS测定葛根芩连汤对大鼠肝脏细胞色素P450酶的影响

研究葛根芩连汤及其主要药效成分对大鼠肝微粒体CYP450酶5种同工酶活性的影响。采用体外肝微粒体孵育技术将葛根芩连汤及其主要药效成分与各个探针底物共同孵育,利用LC-MS/MS建立CYP450 5种亚型探针底物的代谢产物的分析方法,考察微粒体蛋白浓度和孵育时间与代谢产物生成量之间的关系来确定蛋白浓度和孵育时间。运用HPLC-MS/MS检测CYP450酶5种同工酶特异性探针底物(非那西汀、甲苯磺丁脲、右美沙芬、氯唑沙宗、睾丸酮)相应代谢产物(对乙酰氨基酚、4-羟基氯唑沙宗、右菲烷、6-羟基氯唑沙宗、6β-羟基睾酮)的生成速率(V)来确定CYP450的各亚酶活性。结果表明,对乙酰氨基酚、4-羟基甲苯磺丁脲、右菲烷、6-羟基氯唑沙宗及6β-羟基睾酮线性关系良好,精密度、稳定性、平均回收率符合要求,所建方法可行;优化的肝微粒体体外孵育条件,符合药物相互作用指导原则的要求;葛根芩连汤对CYP450 5个亚型(CYP1A2,CYP2C11,CYP2D2,CYP2E1,CYP3A1/2)酶均有不同程度的抑制,其主要药效成分中小檗碱在高浓度下可对各亚型酶有一定的抑制(CYP1A2,CYP3A1/2除外)。     

丹皮酚对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶含量及活性的影响

目的:考察丹皮酚对大鼠肝微粒体的蛋白含量、CYP450酶总量和主要CYP450酶亚型(CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4和CYP2C19)活性的影响。方法:大鼠灌胃给予丹皮酚(100 mg/(kg·d)-1,连续7 d,测定其肝微粒体蛋白含量、CYP450蛋白含量以及CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4及CYP2C19活性。结果与空白对照组相比,丹皮酚给药组大鼠肝微粒体蛋白含量及肝微粒体CYP450含量无明显差异(P>0.05)。丹皮酚给药后,给药组大鼠的平均CYP2D6活性是对照组的2倍;而二两组之间CYP1A2、CYP3A4和CYP2C19的活性相当。结论丹皮酚对大鼠CYP2D6活性有一定诱导作用,对CYP1A2、CYP3A4和CYP2C19的活性没有影响。     

以咪哒唑仑为探针药测定大鼠肠CYP3A活性及其孵育条件优化

目的测定大鼠肠微粒体中细胞色素P4503A(CYP3A)的活性,并对其体外孵育条件进行优化。方法采用1′-羟基咪哒唑仑的生成量表示肠中CYP3A的活性,反相高效液相色谱法测定肠微粒体中1′-羟基咪哒唑仑的浓度,用单因素实验法对其体外孵育条件进行优化,用线性Lineweaver-Burk双倒数作图法研究肠CYP3A酶促动力学。结果1′-羟基咪哒唑仑在9.10～910.00ng.mL-1内线性关系良好;体外优化的孵育条件为10μmol.L-1咪哒唑仑、4μg肠微粒体、孵育20min;肠CYP3A酶促动力学参数Km为7.61μmol.L-1,Vmax为1.26nmol.min-1.mg-1。结论HPLC操作简便、灵敏、快速,适用于肠微粒体中1′-羟基咪哒唑仑的浓度测定,肠CYP3A孵育条件及其酶促动力学研究为研究经CYP3A代谢的药物相互作用及其他物质对CYP3A酶的影响提供理论依据。     

天王补心丸中生地黄、玄参、天冬和麦冬水提液对大鼠肝CYP450酶含量及其亚型CYP3A, CYP2E1和CYP1A2活性的影响

目的:研究天王补心丸中滋阴类药味生地黄、玄参、天冬和麦冬水提物对大鼠肝肝药酶(CYP450)含量及对亚型CYP3A,CYP2E1,CYP1A2活性的影响,探讨CYP450在天王补心丸代谢中的作用.方法:大鼠灌胃给予生地黄、玄参、天冬和麦冬水提物7d后取肝脏称重并制备肝微粒体,紫外分光光度法测定肝微粒体细胞色素b5(Cytb5),P450的含量及CYP3A的活性,高效液相法测定CYP2E1和CYP1A2的活性.结果:与空白对照组比较,各给药组大鼠肝指数无显著变化;生地黄组CYP450含量极显著减少(P＜0.01),CYP3A活性极显著增加(P＜0.01),CYP1A2活性显著增加(P＜0.05);玄参组CYP450含量减少(P＜0.05),CYP3A和CYP1A2活性均极显著增加(P＜0.01);天冬组Cytb5含量增加(P＜0.05),CYP2E1活性增加(P＜0.05),CYP1A2活性极显著增加(P＜0.01);麦冬组cytb5,CYP450含量无统计学差异,CYP3A活性增加(P＜0.05),CYP2E1活性增加(P＜0.05),CYP1A2活性极显著增加(P＜0.01).结论:天王补心丸中生地黄、玄参降低大鼠肝脏CYP450酶含量并均诱导CYP3A和CYP1A2活性,天冬诱导CYP2E1和CYP1A2活性,麦冬诱导CYP3A,CYP2E1和CYP1A2活性.由于抑制CYP450活性,减少对其他药代谢,滋阴药组在天王补心丸全方配伍中可增强其他各功能组比如补血养血、宁心安神类药味的作用,为探讨天王补心丸的配伍机制提供了理论基础.     

金铃子散不同配比方对大鼠肝药酶CYP1A2活性的影响

目的:通过比较金铃子散不同配比方对大鼠肝药酶CYP1A2活性的影响,探讨其配伍规律。方法:按L9(34)正交表,设计9个不同配比组方。体外实验采用大鼠肝药酶孵育体系,测定不同配比方对CYP1A2的半数抑制浓度(IC50);体内实验采用大鼠口服金铃子散不同配比方5 d后注射探针药物非那西丁,通过微透析探针采集肝脏部位样品,HPLC测定非那西丁及其代谢物对乙酰氨基酚浓度,winNonlin软件统计拟合药代参数。结果:川楝子、延胡索单味提取物和配比方1～9对肝药酶CYP1A2的IC50分别为(0.025 2±0.005 2),(0.012 1±0.007 9),(0.091 9±0.015 0),(0.071 9±0.005 3),(0.028 2±0.004 5),(0.075 4±0.015 5),(0.062 8±0.003 3),(0.091 9±0.015 0),(0.197 6±0.027 3),(0.159 1±0.008 1),(0.131 1±0.008 5)g.L-1,无显著抑制酶CYP1A2活性。体内实验,药代参数显示金铃子散不同配比方均能诱导CYP1A2活性,影响酶活性强弱顺序是:诱导剂组(方3)>方4(方5)>方9(方6,方1,方2,方8,川楝子,延胡索组)>方7>正常对照组。结论:金铃子散不同配比方对肝药酶CYP1A2活性有诱导作用,且诱导作用的强弱与配比有一定的相关性。     

紫杉烷类药物对SD大鼠CYP3A1作用效应的研究

 目的研究紫杉烷类抗癌药紫杉醇和多西紫杉醇对Sprague-Dawley(SD)大鼠肝细胞CYP3A1活性的作用。方法本实验将15只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(尾静脉注射给予生理盐水,每只1mL,每日1次,连续3d)、地塞米松诱导组(灌胃给予地塞米松,100mg·kg^-1·d^-1,连续3d)、酮康唑抑制组(腹腔注射给予酮康唑,50mg·kg^-1·d^-1,连续3d)、紫杉醇实验组(尾静脉注射给予紫杉醇,6.7mg·kg^-1·d^-1,连续3d)、多西紫杉醇实验组(尾静脉注射给予多西紫杉醇,30mg·kg^-1·d^-1,连续3d)。采用HPLC检测以睾酮为探针药物经大鼠肝微粒体温孵后转化的代谢产物6β-羟基睾酮的生成速率以评价各组间CYP3A1酶的活性。结果空白对照组、地塞米松诱导组、酮康唑抑制组、紫杉醇实验组、多西紫杉醇实验组6β-羟基睾酮的生成速率分别为(643.1±6.0),(2671.1±225.7),(78.3±4.8),(724.8±36.6)和(489.3±70.6)pmol·mg(pro)^-1·min^-1;数据经SPSS16.0统计软件分析,表明紫杉醇组和多西紫杉醇组6β-羟基睾酮的生成速率与地塞米松诱导组、酮康唑抑制组的差异均有极显著性(P<0.01),与生理盐水空白对照组的差异均无显著性(P>0.05)。结论紫杉醇和多西紫杉醇对大鼠肝细胞CYP3A1酶活性无诱导或抑制作用。     

氢化可的松法测定肿瘤患者CYP3A酶的活性

 目的　建立测定肿瘤患者CYP3A酶的活性的方法。方法　将52例肿瘤住院患者随机分为2组,一组直接收集24h尿液,另一组在给予100mg氢化可的松(HC)后收集24h尿液,测定尿液中HC与6β-羟基氢化可的松(6β-OHC)的含量,以6β-OHC/HC来评估CYP3A酶的活性。结果　未使用HC的患者尿液中6β-OHC与HC的比值为(6.23±4.67),使用100mg HC的患者其比值为(1.45±0.98)。结论　CYP3A酶的活性可以通过测定6β-OHC与HC的比值进行预测。     

仙茅体内代谢过程与药物代谢酶CYP3A的相关性研究

目的:探讨仙茅体内代谢过程与药物代谢酶细胞色素P4503A(CYP3A)的相关性,为进一步研究机体CYP3A活性变化对仙茅性-效表达的影响奠定基础。方法:SD雄性大鼠随机分为2组,即正常组和利福平组。利福平组每天灌胃给予200mg/kg药物混悬液,正常组给予等体积蒸馏水,连续7d,第8天每组各取6只大鼠一次性灌胃仙茅水煎液(20g/kg)后,分别于20、50、90、180min时眼眶取血测仙茅入血成分苔黑酚葡萄糖苷血药浓度,其他大鼠断头处死,取肝、小肠、肾测定CYP3A活性。结果:利福平组大鼠肝微粒体CYP3A活性明显升高(P0.05),小肠、肾微粒体CYP3A活性有升高趋势;利福平组大鼠各时间点血药浓度均低于正常组,且在20、50、90时差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:利福平诱导后大鼠肝微粒体CYP3A活性升高,而苔黑酚葡萄糖苷血药浓度明显降低,说明仙茅体内代谢过程与药物代谢酶CYP3A相关。     

Effects of Panax notoginseng saponins on the activities of CYP1A2, CYP2C9, CYP2D6 and CYP3A4 in rats in vivo

The aim of this study was to assess the influence of the Panax notoginseng saponins (PNS) on the activities of the drug‐metabolizing enzymes cytochrome P450 (CYP450) 1A2, 2 C9, 2D6 and 3A4 in rats. The activities of CYP1A2, 2 C9, 2D6 and 3A4 were measured using specific probe drugs. After pretreatment for 1 week with PNS or physiological saline (control group), probe drugs caffeine (10 mg/kg; CYP1A2 activity), tolbutamide (15 mg/kg; CYP2C9 activity), metoprolol (20 mg/kg; CYP2D6 activity) and dapsone (10 mg/kg; CYP3A4 activity) were administered to rats by intraperitoneal injection. The blood was then collected at different times for ultra performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry (UPLC‐MS/MS) analysis. The data showed that PNS exhibited an induction effect on CYP1A2 by decreasing caffeine C_max (36.3%, p < 0.01) and AUC_0‐∞ (22.77%, p < 0.05) and increasing CL/F (27.03%, p < 0.05) compared with those of the control group. Western blot analysis was used to detect the effect of PNS on the protein level of CYP1A2, and the results showed that PNS could upregulate the protein expression of CYP1A2. However, no significant changes in CYP2C9, 2D6 or 3A4 activities were observed. In conclusion, the results indicate that PNS could induce CYP1A2, which may affect the disposition of medicines primarily dependent on the CYP1A2 pathway. Our work may be the basis of related herb–drug interactions in the clinic. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

清开灵注射液对大鼠CYP1A2和2D6的影响

目的：通过清开灵注射液的大鼠体内、外实验,观察清开灵注射液对大鼠CYP1A2亚型,CYP2D6亚型的影响。方法：通过HPLC法测定全血中咖啡因的代谢率,观测清开灵注射液对大鼠CYP1A2活性的影响；通过HPLC法测定大鼠肝微粒体重组系统非那西丁的代谢比率,确定清开灵注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2亚型的作用；测定大鼠肝微粒体重组系统右美沙芬的代谢比率,确定清开灵注射液对大鼠肝微粒体CYP2D6亚型的作用。结果：实验组中给予大鼠不同浓度的清开灵注射液(0.15,0.3,0.6 mL·kg^-1),其咖啡因代谢率为(15.9±3.8)%,(14.5±1.8)%,(12.3±1.2)%,对照组为(16.8±5.9)%,各剂量组及对照组间均无显著性差异；肝微粒体体外重组系统中,实验组各浓度清开灵注射液对CYP2D6没有影响；高剂量组清开灵注射液对CYP1A2有抑制作用。结论：清开灵注射液对CYP1A2和 CYP2D6的活性没有影响。     

齐墩果酸对健康人体CYP1A2,CYP2E1及CYP3A4抑制作用的研究

 目的在人体内研究齐墩果酸对CYP1A2,CYP2E1及CYP3A4酶活性的影响,以预测齐墩果酸与常用临床药物的相互作用。方法分别以咖啡因、氯唑沙宗和咪哒唑仑作为CYP1A2,CYP2E1及CYP3A4的探药,采用随机、开放、双周期交叉设计,12名健康男性受试者在服用7d齐墩果酸前后均服用100mg咖啡因、400mg氯唑沙宗和7.5mg咪哒唑仑,服探药后采血测定探药及相应代谢产物的浓度,并计算相关参数。探药和代谢物的浓度分别用RP-HPLC和HPLC-MS测定。结果服用齐墩果酸7d后,咖啡因的代谢受到显著的抑制,其达峰时间、消除半衰期及药-时曲线下面积显著增加;氯唑沙宗的代谢受到轻微抑制,达峰浓度、达峰时间、消除半衰期及药-时曲线下面积均有升高趋势,但无显著性差异;咪哒唑仑的代谢未受影响。结论服用7d齐墩果酸对CYP1A2体内活性有显著抑制作用,对CYP2E1体内活性有轻微抑制作用,而对CYP3A4酶活性无影响。     

大戟配伍甘草对大鼠肝功能及肝脏微粒体中CYP3A2的影响

目的研究中药“十八反”中大戟与甘草配伍对大鼠肝功能和肝脏微粒体中CYP3A2在mRNA水平、蛋白表达及酶活性方面的影响。方法采用RT-PCR技术检测大鼠肝脏CYP3A2mRNA表达水平;利用Western-blot技术检测大鼠肝脏CYP3A2蛋白的表达;采用红霉素N-去甲基反应评价CYP3A2酶活性。结果大戟和甘草合用对大鼠肝功能损害最为严重;在mRNA水平、蛋白表达、酶活性方面,大戟组均高于空白组及其他各单用组。结论大戟、甘草可能存在基于药物代谢酶机理的相反作用,但需进一步结合代谢研究加以综合分析,阐明相反作用的机理。     

RP-HPLC同时测定William′s E培养基中地塞米松、睾酮和6β羟基睾酮的含量

 目的建立同时测定William′sE培养基中地塞米松、睾酮和6β羟基睾酮含量的RP-HPLC检测方法,并用该方法研究地塞米松对大鼠原代肝细胞CYP3A的诱导作用。方法采用Agilent1100HPLC系统,Phenomenex色谱柱,以乙腈和磷酸溶液组成的流动相梯度洗脱分离,以酮康唑为内标,流速1.00mL·min^-1,检测波长245nm,柱温20℃。结果地塞米松、睾酮和6β羟基睾酮分别在53～19291,161～29318和58～21091μg·L^-1内呈线性关系;它们的日间和日内精密度均低于15%;地塞米松、睾酮和6β羟基睾酮的最小定量限分别为53.00,161.00和58.00μg·L^-1。结论该方法简便、准确、可靠,可用于地塞米松作用于大鼠原代肝细胞体系后,地塞米松、CYP3A底物睾酮及其代谢产物6β羟基睾酮在William′sE培养基中的浓度测定。