人源化肿瘤血管移植瘤模型的建立及应用

背景与目的:目前在肿瘤内皮细胞基因功能和靶向血管治疗肿瘤的研究中仍缺乏适宜的动物模型。本研究拟建立一种新的小鼠人源化肿瘤血管移植瘤模型。方法:将人肝窦微血管内皮细胞系(humanliversinusoidendothelialcells,HLSEC)分别与人肝癌细胞系BEL7402、人结肠癌细胞系LS174T、人食管癌细胞系NEC按不同比例混合共接种NOD/SCID小鼠或BALB/c裸小鼠,以单独接种肿瘤细胞的小鼠作为对照组,观察小鼠人移植瘤生长的情况。采用绿色荧光蛋白基因(greenfluorescentprotein,GFP)转染HLSEC,结合荧光显微镜检方法观察HLSEC在共接种移植瘤中的存活及血管形成的情况。免疫组化法检测肿瘤内微血管密度(microvesseldensity,MVD)。用抗人肝癌内皮细胞单抗2B6处理人肝癌移植瘤共接种模型,观察2B6对肿瘤生长的影响。结果:HLSEC与BEL7402细胞共接种NOD/SCID小鼠时,共接种组肿瘤生长速度显著加快,平均瘤重可达肿瘤单独接种组的5.1倍。在GFP表达阳性的HLSEC与BEL7402共接种的移植瘤冰冻切片中可见HLSEC的存在,并已形成瘤内新生血管。免疫组化检测发现共接种组移植瘤中的总MVD较肿瘤细胞单独接种组增加85.7%,采用抗人vWF多抗检测结果显示共接种组人源微血管平均MVD可达10.28～29.28,约占总血管数量的41%～65%。进一步将HLSEC分别与NEC、BEL7402及LS174T细胞共接种于BALB/c裸小鼠时,共接种组的瘤重是单独接种组的3.3～6.0倍。2B6单抗能使共接种人肝癌移植瘤中人源肿瘤血管密度减少65.1%,抑制肿瘤瘤重达71.8%。结论:HLSEC与人肿瘤细胞共接种小鼠后,能在移植瘤中存活、增殖,形成大量人源化的肿瘤新生血管,并在促进肿瘤快速生长中起重要作用。该小鼠人源化肿瘤血管移植瘤模型可为肿瘤内皮细胞相关基因及靶向治疗剂的研究提供一个新的有价值的工具。     

利用α-氰基丙烯酸烷基酯医用胶建立人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的实验研究

 目的 使用α-氰基丙烯酸烷基酯建立人肝癌-裸鼠皮下肝原位移植瘤模型。方法 将BEL-7402人肝癌细胞接种于裸鼠皮下，建立皮下模型 。形成皮下移植瘤后再移植于裸鼠肝内，利用α-氰基丙烯酸烷基酯建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型）。结果 成功的利用α-氰基丙烯酸烷基酯建立了间接肝原位移植瘤模型。移植瘤存活率达95.8 %。结论 与传统的肝原位移植瘤模型比较，利用α-氰基丙烯酸烷基酯建立间接肝原位移植瘤模型方法简便，成功率高，便于推广使用。     

肝、胆

蝎毒对耐药肝癌细胞株Bei-7404／ADM逆转作用的研究，反义端粒酶RNA基因对肝癌细胞的抑制作用，表皮生长因子受体信号通路调控人肝细胞癌细胞增殖分子机制的研究，凋亡抑制聋白Livin在人原发性肝癌细胞系HEPG-2中的表达情况，靶向肿瘤血管内皮细胞抑制人肝癌移植瘤生长的功能性抗体的研制，肝癌树突状细胞瘤苗诱导抗肿瘤作用的研究，     

树突状细胞诱导的细胞毒T淋巴细胞抑制移植瘤细胞增殖

目的　研究树突状细胞（ Ｄ Ｃ）体外诱导的细胞免疫能否抑制裸鼠移植瘤肿瘤细胞增殖。方法　联合应用粒／巨细胞集落刺激因子（ Ｇ Ｍ  Ｃ Ｓ Ｆ）及白介素４（ Ｉ Ｌ４）直接从肝癌患者外周血中培养出 Ｄ Ｃ;以源于人肝癌细胞系 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞的肿瘤抗原粗提物刺激 Ｄ Ｃ; Ｄ Ｃ 激活同源的 Ｔ 淋巴细胞产生细胞 毒性 Ｔ 淋 巴细胞 （ Ｃ Ｔ Ｌ）; 建立 人肝癌 细胞 系 Ｈｅｐ Ｇ２ 裸鼠移植瘤模型; Ｃ Ｔ Ｌ 治疗人肝癌细胞系 Ｈｅｐ Ｇ２ 裸鼠移植瘤;检测移植瘤标本肿瘤细胞 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 表达水平。结果　 Ｄ Ｃ诱导的 Ｃ Ｔ Ｌ抑制 Ｈｅｐ Ｇ２ 裸鼠移植瘤细胞增殖从而抑制移植瘤生长。结论　经肿瘤抗原激活的 Ｄ Ｃ 作为一新概念上的抗肿瘤疫苗有可能在肿瘤的治疗中发挥重要作用。     

树突状细胞体外诱导抗肿瘤免疫通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制裸鼠移植瘤生长

研究树突状细胞（ＤＣ）体外诱导的细胞免疫抑制裸鼠移植瘤生长作用及其机理。方法：联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子ＫＭ－ＣＳＦ）及白介素－４（ＩＬ－４）直接从肝癌患者外周血中培养出ＤＣ,以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的肿瘤抗原粗提物刺激ＤＣ,ＤＣ激活同源的Ｔ淋巴细胞,建立裸鼠人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２移植瘤模型,以被激活的Ｔ淋巴细胞治疗裸鼠ＨｅｐＧ２移植瘤并观察治疗效果,检测移植瘤标本肿瘤细胞凋亡情况。结果：ＤＣ诱导的Ｔ细胞免疫能够诱导裸鼠人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２移植瘤肿瘤细胞大量凋亡从而抑制裸鼠ＨｅｐＧ２移植瘤生长。结论：经肿瘤抗原激活的ＤＣ作为一新概念上的抗肿瘤疫苗有可能在肿瘤的治疗中发挥重要作用。     

槲皮素对裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤生长的抑制作用

目的研究槲皮素对裸鼠人肝癌细胞SMMC-7721移植瘤生长的影响。方法建立SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤模型,通过比较肿瘤体积（TV）、相对肿瘤体积（RTV）和相对肿瘤增殖率[T/C（%）]变化检测槲皮素对肿瘤生长的影响;采用免疫组织化学方法测试槲皮素对移植瘤微血管密度（microvessel density,MVD）的影响。结果槲皮素治疗组不同程度抑制裸鼠移植瘤的生长,腹腔注射给药4周后,TV、RTV和T/C%明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;槲皮素50 mg/kg处理组MVD值（19.35±2.88）与对照组的MVD值（42.56±4.98）比较明显降低,差异有统计学意义。结论槲皮素可抑制裸鼠人肝癌SMMC-7721移植瘤生长,降低移植瘤MVD,从而抑制肝癌的侵袭转移。     

AFP/ANGIO/TK靶向性融合基因治疗人原发性肝癌的效果观察

目的：研究pcDNA3／AFP／angio／tk靶向性融合基因系统对人原发性肝癌皮下移植瘤的治疗效果。方法：建立人原发性肝癌裸小鼠皮下移植瘤模型。将荷瘤裸小鼠随机分为5组（每组6只）：肿瘤对照组；空质粒组；GCV组；pcDNA3／angio／tk组及pcDNA3／AFP／angio／tk组。瘤内分别注射不同的质粒，同时于裸鼠腹腔内注射GCV，在第二次瘤内给药后第2天及第三次瘤内给药后第15天，分别处死裸鼠进行检测（每次3只）病理学检查；原位末端标记（TUNEL）法检查细胞原位凋亡；透射电镜观察细胞超微结构变化。结果：病理学检查结果显示，prDNA3／AFP／angio／tk融合基因瘤内注射可明显抑制肿瘤生长。TUNEL法检测显示．pcDNA3／AFP／angio／tk组凋亡指数明显高于肿瘤对照组。透射电镜观察细胞超微结构变化，发现pcDNA3／AFP／angio／tk组有明显的细胞凋亡发生。结论：pcDNA3／AFP／angio／tk靶向性融合基因系统可显著抑制肿瘤的生长，而且作用效果优于pcDNA3／angio／tk融合基因系统（P〈0.05）。     

生长抑素受体介导90Y-DOTA-Octreotide靶向抗肿瘤效应初探

目的初步探讨生长抑素受体(SSTR)介导90Y-DOTA-Octreotide[90Y-DOTATATE]靶向放疗对裸鼠人肝癌移植模型的抗肿瘤效应。方法合成90Y-DOTATATE,用裸鼠人肝癌移植模型,观察该靶向药物对肿瘤体积、重量、肿瘤细胞细胞器等的影响。结果治疗后90Y-DOTATATE治疗组肿瘤体积为628.32 mm3±403.01 mm3,奥曲肽组肿瘤体积为2073.84±537.61(P<0.01),而生理盐水对照组为2624.91±1257.82 mm3(P<0.01);90Y-DOTATATE组瘤重抑制率为74.67%。细胞超微结构检查发现90Y-DOTATATE治疗组肿瘤细胞损伤主要表现为内质网空泡化、线粒体水肿、细胞核浓缩、染色质边缘化乃至裂解,并可见凋亡小体。结论生长抑素受体介导的90Y-DOTATATE靶向放射治疗确有良好的体内抗肿瘤效应,是一值得进一步深入研究的靶向药物。     

靶向肿瘤血管内皮细胞抑制人肝癌移植瘤生长的功能性抗体的研制

背景与目的:肿瘤的生长依赖于新生血管形成,阻断其血管形成可有效治疗肿瘤.本研究旨在研制抗人肝癌血管内皮细胞的功能性单克隆抗体,确定其抑制人肝癌移植瘤生长的作用.方法:用从新鲜人肝癌组织中分离、鉴定、培养的人肝癌血管内皮细胞免疫10只BALB/c小鼠.免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后采用甲基纤维素选择培养.使用活细胞免疫荧光、细胞增殖、内皮成管实验及"人源化血管"动物模型体内抑瘤实验筛选和鉴定有治疗潜力的功能性抗体.结果:细胞融合产生1 442个单个集落的杂交瘤株,获得119株阳性克隆,其中53株是具有抑制人肝癌血管内皮细胞增殖、成管的功能性抗体,2株被证实能抑制人肝癌移植瘤在BALB/c裸鼠体内的生长,抑瘤率为66.7%～76.5%.结论:建立了高通量制备、筛选、鉴定内皮细胞功能性单抗技术,获得了2株具有靶向血管内皮细胞抑制人肝癌移植瘤生长的功能性单抗.     

小鼠lewis肺癌原位移植瘤和异位皮下移植瘤模型的对比研究

目的同时建立肺癌原位移植瘤模型和异位皮下移植瘤模型,对比两种模型小鼠,以期发现它们在整体和肿瘤局部的生物学差异。方法将稳定表达虫萤光素酶的鼠Lewis肺腺癌细胞(ll2-luc-m38)与Matrigel胶的混悬液注射于C57 BL/6小鼠左肺建立肺癌原位移植瘤模型,与生理盐水混悬注射于C57 BL/6小鼠右侧腋后线皮下建立异位皮下移植瘤模型,定期利用小动物活体成像系统观察小鼠肿瘤形成及转移情况,记录小鼠生存时间,对小鼠肿瘤组织和肺部组织取材,石蜡包埋,切片,HE染色和免疫组化染色,做出病理学诊断。结果皮下移植瘤和肺原位移植瘤的成瘤率均为100%,肺原位移植瘤转移率为100%,小鼠出现了胸膜转移、心包转移、胸骨柄转移,其中1只小鼠出现了肾脏转移;皮下移植瘤转移率为70%,小鼠出现肺部转移。HE染色证实了两组均为肺腺癌,免疫组化染色结果示,肺原位移植瘤VEGF表达高于异位皮下移植瘤。结论肺癌原位移植瘤模型虽然操作复杂,小鼠生存期较短,但在转移率和肿瘤生物学特征更符合临床实际情况,研究者可根据不同实验需求选择合适的动物模型。     

裸小鼠原位移植建立人肝癌高转移模型

采用组织学完整的病人标本，以裸小鼠肝被膜下植入方法，从３０例人肝癌标本中筛选出一株人肝癌高转移瘤株，在裸小鼠体内成功地建立了人肝癌高转移模型ＬＣＩ－Ｄ２０。目前该瘤株在裸鼠体内生长１年，传代１６次，其移植生长率与自发转移率达１００％，表现为区域侵犯、肝内、淋巴结和肺转移、腹腔种植与血性腹水，并保持分泌甲胎蛋白的特性。组织病理学和电镜观察，流式细胞仪ＤＮＡ相对含量分析及染色体核型分析结果表明，移植瘤细胞与来源人肝癌细胞相似。本模型为原位移植模型，移植瘤的生长与转移，完全模拟了人肝癌的自然过程，为研究人肝癌转移机制和抗转移治疗提供了一个理想模型。     

人肝癌NOD-SCID小鼠原位移植模型的建立及其生物学特性的研究

目的：建立人肝癌NOD-SCID小鼠原位移植模型,并通过和裸小鼠原位移植模型生物学特性的比较,对两种不同类型免疫缺陷动物在人肝癌异种移植方面的应用价值进行初步探讨。方法：将组织学完整的SMMC-LTNM瘤块植入NOD- SCID小鼠和裸小鼠肝脏内,观察成瘤率、肿瘤体积和重量、脏器的转移情况以及血清甲胎蛋白(AFP)、γ-谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ(γ-GTⅡ)等。结果：NOD-SCID小鼠于移植后5周可扪及肿瘤的生长,成瘤率为100%,11周肿瘤体积为(4．48±0．93) cm~3,瘤重为(7．02±1．15)g,肺部转移率为53．85%；裸小鼠于移植后6～7周可扪及肿瘤的生长,成瘤率为100%,11周肿瘤体积为(1．02±0．70)cm~3,瘤重为(2．87±0．44)g,体内未见转移发生。NOD-SCID小鼠的瘤体积、瘤重、肺转移率均高于裸小鼠(P＜0．01)。两者均保持AFP高分泌和γ-GTⅡ同工酶阳性的特性。结论：建立了一个与临床相似的人肝癌动物模型,与裸小鼠相比,NOD-SCID小鼠在建立人肝癌异种移植模型方面有更大的应用价值。     

基质金属蛋白酶-9与骨肉瘤鸡胚移植瘤血管生成的关系

目的 建立人骨肉瘤鸡胚移植瘤模型，探讨基质金属蛋白酶-9（Matrix Metalloproteinase-9，MMP-9）在移植瘤模型中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法 人骨肉瘤细胞接种于鸡胚绒毛尿囊膜（chick embryo chorioallantoic membrane，CAM），建立人骨肉瘤鸡胚移植瘤模型，观察移植瘤生长特性和生物学性状；采用免疫组化法检测移植瘤组织中MMP-9的表达及微血管密度（microvessel density，MVD）。结果 建立了人骨肉瘤鸡胚移植瘤模型，移植瘤具有较强的诱导血管生成作用，骨肉瘤鸡胚移植瘤中，MMP-9的表达水平与MVD呈显著性正相关（P〈0．001，r=0．855）。结论 人骨肉瘤鸡胚移植瘤模型易于复制、操作简单、适用范围广，是研究骨肉瘤诱导血管生成的较好动物模型；人骨肉瘤鸡胚移植瘤中MMP-9表达水平与骨肉瘤诱导的血管生成密切相关。     

人ACHN肾癌裸鼠移植瘤模型的建立及其特性研究

目的　用ACHN肾癌细胞株,建立人肾癌裸小鼠异位移植模型。方法　将ACHN人肾癌细胞株2. 0×10 /0. 2ml接种于裸小鼠背部皮下,观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率、肺转移率及移植瘤病理形态,检测肿瘤细胞的增殖与凋亡。结果　异位移植成功率为 75%,肺转移率 58. 3%,肿瘤细胞增殖指数(PI)为 54. 84±11. 39,凋亡指数(AI)为 1. 75±0. 83,AI/PI与肿瘤体积呈负相关 (r=-0. 8332,P<0. 05)。皮下瘤病理形态与肾腺癌相似。结论　人ACHN肾癌裸鼠异位移植瘤模型可作为肾癌及其转移的研究工具。     

两株裸大鼠人肝癌模型的建立和生物学特性的观察

为了深入研究人肝癌,我室在大鼠肝癌模型研究的基础上,开展了裸鼠人体肝癌模型的研究。1982年建成我国第一株裸小鼠人肝癌移植模型。至今,5例人肝癌手术标本已成功移植于裸小鼠,并进行了肿瘤形态学、甲胎蛋白、铁蛋白、阳性扫描等多种研究。但裸小鼠人肝癌模型仍有一定的不足之处:1.所获瘤组织较少;2.所能提供的血量较少;3.裸小鼠难于施行某些外科小手术及肝内移植。为了弥补上述不足,我室于1983年引入     

人子宫内膜癌瘤组织块活体移植瘤动物模型的建立

目的:研究建立人子宫内膜癌的组织块活体移植动物模型方法。方法:将生长状态良好的Ishikawa细胞浓度调整至1.5×107/ml,接种于BALB/c nude裸鼠腋下皮下(Ⅰ组),Ⅱ组生理盐水对照,观察其生长情况,待成瘤5-10mm时建立成瘤模型,收集Ⅰ组瘤组织块行活体移植于Ⅲ组小鼠,留取组织标本行病理检查。结果:成功建立了人子宫内膜癌Ishikawa细胞的BABL/c裸鼠皮下移植瘤模型和活体移植瘤模型,形成的肿瘤具备人肿瘤生物学特点。结论:建立的瘤组织块活体二次传代移植人子宫内膜癌的BABL/c nude小鼠皮下移植瘤模型具有人子宫内膜癌特征且成瘤率更高,为大批建立子宫内膜癌单位模型研究子宫内膜癌的发病机制和药物治疗提供了实验动物模型。     

新型染料IR-808靶向肿瘤近红外荧光成像的体内研究

目的 探讨近红外荧光染料IR-808在移植瘤动物模型中特异性的肿瘤靶向示踪作用。方法建立人肺癌细胞系NCI-H460、结肠癌细胞系HCT-116及鼠源肝癌细胞系Hepa 1-6皮下移植瘤裸小鼠模型,未接种癌细胞的裸小鼠作对照。尾静脉注射同等剂量染料IR-808,分别在不同时间点对裸小鼠正常组织及肿瘤组织进行近红外荧光成像,追踪染料在裸小鼠体内的分布,评价其肿瘤靶向作用。结果 在未接种的裸小鼠体内,IR-808染料首先在肝脏、心脏聚集,随后信号减弱,48h后基本代谢排出体外;在荷瘤裸小鼠模型体内,IR 808染料注入24h后开始靶向肿瘤,72h后荧光信号仍很稳定;取荷瘤裸小鼠组织进行近红外荧光成像,发现仅肿瘤组织有信号,其他组织无信号。全部实验小鼠状态良好,未见明显毒性反应。结论 近红外荧光染料IR 808能特异性靶向肿瘤成像,且信号稳定,无明显毒性,具有重要的应用前景     

长期观察的人肠粘液腺癌裸鼠移植瘤

人体肿瘤的裸鼠移植瘤在深入研究人类肿瘤生物学特性方面发挥了重要作用。人体肿瘤裸鼠移植瘤性状的稳定性是人们所关心的重要问题。我们曾报道了人肠粘液腺癌裸鼠移植瘤瘤株的建立及其生物学特性移植。该瘤株目前已传57代,历时5年多移植成活率为99.34％,是迄今国内连续传代最长的裸鼠移植瘤。我们以这一模型研究了人肠粘液腺癌移植瘤某些生物学特性的稳定性。     

聚酰胺树形分子递送survivin反义脱氧寡核苷酸抑制裸鼠肝癌移植瘤

目的: 探讨聚酰胺胺型（polyamidoamine ，PAMAM）树枝状高聚合物介导survivin反义寡核苷酸（survivin antisense oligodeoxynucleotide, survivinasODN）对肝癌裸鼠移植瘤及其微血管形成的抑制作用。方法：以人肝癌细胞SMMC7721裸鼠皮下注射建立肝癌裸鼠皮下移植瘤模型     

miR-421通过抑制PDCD4发挥促进肝癌的作用

摘 要：［目的］ 分析miR-421通过靶向调控PDCD4的表达水平在肝癌的发生及发展中的作用。［方法］ 通过构建肝癌裸鼠移植瘤模型检测miR-421对移植瘤生长的影响;检测miR-421在肝癌细胞株及肿瘤组织中的表达量及其过表达在高/低侵袭转移能力肝癌细胞模型中对侵袭能力的影响;TargetScan预测miR-421的潜在靶基因,并采用双荧光素酶报告基因法验证,qRT-PCR和Western blot检测miR-421对靶基因的调控作用;检测PDCD4在肝癌细胞株肿和肿瘤组织中的表达;CCK8、流式细胞法、Tranwell和细胞划痕检测miR-421与靶基因对肝癌细胞增殖、周期、侵袭和迁移的调控。［结果］ 肝癌裸鼠移植瘤模型中过表达miR-421可促进肝癌细胞的增殖及肿瘤的生长。miR-421在肝癌细胞及肿瘤组织中均呈高表达并且上调其表达可提高肝癌细胞的侵袭能力。PDCD4受miR-421的靶向调控,并在肝癌细胞及肝癌肿瘤组织中呈低表达。miR-421过表达可促进肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移及S期阻滞,但PDCD4可逆转这种促进效果。［结论］ miR-421通过负性调控靶基因PDCD4在肝癌中扮演促癌基因的角色。