白内障术后后囊浑浊发生机制的研究--老年性白内障晶状体上皮细胞的体外培养

目的观察老年性白内障晶状体上皮细胞体外培养的生长特点。为研究老年性白内障及术后后囊浑浊的发生机制及防治奠定基础。方法应用改良组织块培养法对超声乳化术中老年性白内障晶状体前囊上皮细胞进行体外培养，在倒置显微镜下观察其生长和分化的规律。结果前囊接种3—5天，有新生上皮细胞自囊片的边缘长出并向四周延伸，第3-4周部分细胞内出现空泡和颗粒等结构改变，生长近于停止；传代培养细胞不能增生。结论老年性白内障晶状体前囊上皮细胞体外增生能力有限。改良组织块培养法培养晶状体上皮细胞简单有效。     

苦参碱体外对兔晶状体上皮细胞细胞周期的影响

目的:研究苦参碱(matrine,Mat)体外对兔晶状体上皮细胞细胞周期的影响。方法:将0.5,1.0和1.5g/L的苦参碱作用于体外培养的兔晶状体上皮细胞,通过流式细胞仪检测其细胞周期各时相的百分比。结果:不同浓度梯度的苦参碱作用体外培养的兔晶状体上皮细胞72h后,与对照组及各浓度的Mat组之间相互比较,随着苦参碱浓度增高,G0-G1期细胞数量明显增加(P<0.05),S期细胞明显减少(P<0.05),呈明显的剂量-效应关系。结论:苦参碱能明显抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞的增殖活性和细胞有丝分裂。     

成纤维细胞生长因子与后发性白内障的关系

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(base fibfroblast growth factor,bFGF）对白内障术晶状体上皮细胞增生过程中的影响。方法 在培养的牛晶状体上皮中添加bFGF，甲基噻唑基四唑（methyl thiazoly tetrazolium,MTT）法测定细胞增生情况以及流式细胞仪分析细胞周期。结果 bFGF浓度为10^-1－10^-2ng/ml对牛眼晶状体上皮细胞增生有促进作用，且以10ng/ml浓度作用最佳。结论 bFGF与其受体结合后可促进晶状体上皮细胞增生，与白内障术后后囊浑浊中起重要作用。     

阿霉素防治兔后囊混浊的实验与临床研究

目的研究阿霉素(adriamycine,ADR)对兔后发性白内障形成的影响及对兔眼的毒性作用.方法在12只兔眼晶状体囊外摘出术中分别注入0.2mLADR(0.4mg@L-1),然后观察术后不同时间角膜及晶状体后囊混浊变化,并结合观察术后病理学和电镜结构变化.结果12只兔眼注入ADR后1周炎性反应比对照组稍重,术后3～8周后囊膜明显比对照组清晰.组织病理学检查表明,对照组术后晶状体上皮细胞增生,而用药组明显抑制晶状体上皮细胞增生,且对角膜无明显毒性.ADR引起晶状体上皮细胞空泡变性、核固缩等,电镜观察发现用药组晶状体上皮细胞体积缩小、胞浆浓缩、染色质靠边聚集、包膜完整等典型的细胞凋亡形态.结论ADR能有效地抑制晶状体上皮细胞的增殖,预防兔后发性白内障的形成,且对兔眼毒性小,是-种有效的防治后发性白内障的药物.     

8-氯腺苷对抑制人晶状体上皮细胞增生的体外研究

目的探讨8-氯腺苷(8-chloroadenonosine)是否对体外培养的晶状体上皮细胞增生有抑制作用。方法取第2、3代传代培养的晶状体上皮细胞做药物抑制试验。加入不同浓度的8-氯腺苷(2,4,8,16μmol/L)作用24、48、72和96小时后,用MTT比色测定法和流氏细胞仪检测法确定药物对兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用。结果 8-氯腺苷在4-16μmol/L的浓度下能抑制晶状体上皮细胞的增生。并且其抑制程度呈时间、剂量依赖性。结论该结果可为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据。     

转化生长因子-β与白细胞介素-1对眼晶状体上皮细胞的影响

目的研究体外细胞培养中转化生长因子-β（TGF-β）、白细胞介素-1（IL-1）对人品状体上皮细胞（HLEC）的增生作用，对白内障术后晶状体后囊浑浊的预防提供依据。方法首先进行晶状体上皮细胞的原代培养，传代培养的晶状体上皮细胞分成各5个实验组，分别加入不同剂量的TGF-β、IL-1，设空白对照组，进行^3H-TDR掺入实验，观察TGF-β、IL-1对晶状体上皮细胞的作用。结果TGF-β对在体外的HLEC增生有促进作用，并随剂量增加而增强（P〈0．05）。IL-1对在体外HLEC的增生也有促进作用并随剂量增加而增强（P〈0．05）。结论TGF-β、IL-1在白内障术后的后发性白内障的形成发展过程中起促进作用。     

水分离时应用三氧化二砷抑制兔眼后囊膜混浊及其眼内毒性的实验研究

目的探讨术中水分离时应用三氧化二砷（As2O3）对兔后发性白内障的抑制作用及对兔眼的毒性作用。方法在免眼晶状体囊外摘出术中，应用1mL不同浓度的As2O3（2μmol·L^-1、4μmol·L^-1、8μmol·L^-1）于晶状体囊袋内进行水分离，使其直接短暂作用于晶状体上皮细胞。术后随访12周，裂隙灯观察比较用药组和对照组免晶状体后囊膜混浊、眼压的变化等；并观察术后组织病理学的变化。结果术后2周只有对照组眼出现后囊膜混浊。术后4周用药组眼的后囊膜混浊明显比对照组眼轻，且随药物浓度增高而减轻。中、低浓度组兔眼的术后炎症反应与对照组比较无明显差异。高浓度组兔眼术后早期出现轻微的毒性反应。组织病理学检查表明，对照组的晶状体上皮细胞增生较用药组明显。As2O3可引起晶状体上皮细胞变性，其文化程度与药物浓度有关。高浓度组可引起角膜内皮细胞亚细胞水平可逆性损伤和虹膜睫状体急性炎症反应。结论As2O3能有效的抑制晶状体上皮细胞的增生，其作用强度与药物浓度有关。兔晶状体囊袋内应用2～8μmol·L^-1的As2O3是防治后发性白内障安全有效的荆量浓度。[眼科新进展2007；27（3）：179-183]     

受体蛋白质酪氨酸激酶抑制剂影响兔晶状体上皮细胞增生的研究

目的　研究受体蛋白质酪氨酸激酶 (receptorprotein tyrosinekinase,RPTK)抑制剂染料木黄酮对兔晶状体上皮细胞增生和胞膜RTPK活性的影响 ,探讨使用染料木黄酮防治后发性白内障发生的机制。方法　培养兔晶状体上皮细胞 ;测定 5、10和 15mg/L染料木黄酮作用晶状体上皮细胞 3d的氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷 (tritiatdethymidine,3 H TdR)掺入率 ,以无染料木黄酮作用的晶状体上皮细胞作为对照组 ;应用Casnetllie改良法检测不同浓度染料木黄酮作用 2 4h后 ,兔晶状体上皮细胞膜RTPK活性的变化。结果　 5、10和 15mg/L染料木黄酮作用晶状体上皮细胞 3d的3 H TdR掺入率分别为 6 30± 137、4 89± 16 6和 314± 98,与对照组比较差异均有显著意义 (P <0 0 5 ) ,且细胞增生抑制率随浓度增加而升高 ;不同浓度染料木黄酮作用 2 4h后兔晶状体上皮细胞中RTPK的活性均明显下降 ,其中 10和 15mg/L染料木黄酮作用的晶状体上皮细胞RTPK单位活性与无染料木黄酮作用者比较 ,差异均有显著意义 (P <0 0 5 )。结论　染料木黄酮在体外可通过抑制细胞膜RTPK的活性而抑制兔晶状体上皮细胞增生     

转化生长因子-β、白细胞介素-1和碱性成纤维细胞生长因子对人晶状体上皮细胞的影响

目的:研究体外细胞培养中转化生长因子-β(transforma-tion growth factor beta,TGF-β)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对人晶状体上皮细胞(human lens epi-thelial cell,HLEC)的增生作用,对白内障术后晶状体后囊浑浊的预防提供依据。方法:首先进行人晶状体上皮细胞的原代培养,传代培养的晶状体上皮细胞分成各5个实验组,分别加入不同剂量的TGF-β、IL-1,设空白对照组,进行3H-TDR掺入实验,观察TGF-β、IL-1、bFGF对晶状体上皮细胞的作用。结果:TGF-β、IL-1、bFGF对在体外的HLEC增生均有促进作用,并随剂量增加而增强(P<0.05)。结论:TGF-β、IL-1、bFGF在白内障术后的后发性白内障的形成发展过程中起促进作用。     

巨噬细胞对体外培养兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的探讨白内障术后后囊混浊的发病机制。方法观察巨噬细胞对兔晶状体上皮细胞（rabbitlensepithelialcells，RLEC）增生的影响。结果实验组加有巨噬细胞，BLEC增殖活跃。巨噬细胞上清液48及72小时能明显促进BLEC的生长。结论巨噬细胞促进晶体上皮细胞的增生，可能是引起白内障术后后囊混浊的原因之一。     

bFGF和顺铂、米托蒽醌及阿糖胞苷对兔晶状体上皮细胞的相互作用

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和顺铂（PDD）、米托蒽醌（Mit)及阿糖胞苷（Ara-C)对兔晶状体上皮细胞（RLECs)的相互作用。方法 分离兔晶状体囊膜行组织细胞培养,传代的2-3代RLECs在96孔板培养24h,然后分别用不同浓度的bFGF,PDD,Mit和Ara-c;以及bFGF合用PDD,Mit及Ara-C作用24h及72h,用（MTT）比色法测定对RLECs的影响。结果 bFGF可明显促进晶状体上皮细胞的增殖,而PDD和Mit明显抑制晶状体上皮细胞的增殖,在bFGF存在的情况下此两种药物仍能抑制晶状体上皮细胞的增殖,在本实验条件下Ara-C单用对兔晶状体上皮细胞无明显影响。而在bFGF存在时则表现出抑制作用。结论 bFGF是促进兔晶状体上皮细胞增殖的重要因子。并不能阻止抑制兔晶状体上皮细胞增殖药物对其的抑制作用。而对z细胞周期特异性药物的作用有增强效果。     

干扰素抑制晶体上皮细胞生长的实验研究

研究α－干扰素和γ－干扰素对体外培养的免晶体上皮细胞生长的抑制作用有效药物浓度。方法取第２、３代传培养的晶体上皮细胞做药物抑制试验。     

Effects of matrine on proliferation and apoptosis of cultured retinoblastoma cells

Background

Extracted from the traditional Chinese medicine of Kushen, matrine is an alkaloid with potential anti-neoplastic and anti-inflammatory effects. Here, we examined the effect of matrine on proliferation and apoptosis of cultured retinoblastoma cells.

Methods

The retinoblastoma cell lines Y79, WERI-RB1 and SO-RB50 were treated with matrine in increasing concentrations from 0.2-1.1?mg/ml for 24?hours, and the cell proliferation rate was measured. The cells were exposed to matrine at 50% inhibition concentration (IC50) for 12, 24 and 48?hours. Cell cycle was analyzed by flow cytometry, concentration of proteins regulating cell cycle and apoptosis was determined by Western blot, apoptosis rate was measured by TUNEL staining, and cell morphology was assessed by electron transmission microscopy.

Results

The retinoblastoma cell lines Y79, WERI-RB1 and SO-RB50 showed an increased inhibition of cell proliferation with increasing matrine concentrations. Applying the IC50 concentration of matrine, the alteration of the cell cycle, including a reduced percentage of the S phase, was significantly (P?<?0.01) associated with a longer treatment time by matrine. Correspondingly, the cell-cycle-associated proteins P21 and P27 were up-regulated and the protein cyclinD1 was down-regulated. The apoptosis-associated protein Bcl-2 was down-regulated, and Bax was up-regulated. In a similar manner, the apoptosis rate was significantly increased with longer treatment time.

Conclusions

Matrine added to cultures of immortalized retinoblastoma cells led to a reduced tumor cell proliferation, decreased rate of mitosis and an increased tumor cell apoptosis, paralleled by corresponding changes in the proteins regulating the cell cycle or apoptosis.     

苦参碱对体外培养的人角膜成纤维细胞增殖的影响

目的 研究苦参碱对体外培养的人角膜成纤维细胞增殖的影响.方法 将分离培养的人角膜成纤维细胞纯化后,用四唑盐比色试验（MTT比色法）分别测得培养0～8 d的人角膜成纤维细胞的光吸收值（A）,绘制出其生长曲线并计算出群体倍增时间.设立阴性对照组、溶媒对照组及阳性药物对照组（地塞米松160 mg/L）,不同浓度（10、20、40、80、160、320 mg/L）的苦参碱干预体外培养的人角膜成纤维细胞,在用药后的不同时间（24、48、72 h）,用MTT比色法测定各处理组的细胞光吸收值,计算出其抑制率,并分别对相应数据采用单因素方差分析或LSD-t检验进行统计分析.结果 体外培养的人角膜成纤维细胞的生长曲线近似＂S＂形,其群体倍增时间为52.17 h.不同浓度（10、20、40、80、160、320 mg/L）的苦参碱作用于人角膜成纤维细胞后24 h,其抑制率分别为5.08%、10.19%、18.66%、31.89%、48.93%、75.49%;作用48 h后,其抑制率分别为7.66%、15.58%、27.95%、43.45%、64.70%、89.70%;作用72 h后,其抑制率分别为11.57%、22.66%、35.50%、52.75%、70.66%、94.62%：随着作用时间的延长和浓度的增加,其抑制率均逐步增加,其抑制作用呈时间-剂量依赖性,与溶酶对照组两两比较差异均有统计学意义（P〈0.05）.地塞米松作用于人角膜成纤维细胞24、48、72 h后,抑制率分别为37.15%、50.81%、56.99%,显示出时间-效应依赖关系;且各时间段相同浓度（160 mg/L）的地塞米松与苦参碱对人角膜成纤维细胞的抑制率两两比较,苦参碱组均高于地塞米松组（P〈0.05）.结论 在10～320 mg/L浓度范围内,苦参碱对体外培养的人角膜成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,其抑制作用呈时间-剂量依赖性,且160 mg/L苦参碱对人角膜成纤维细胞增殖的抑制作用强于同浓度的地塞米松.     

碱性成纤维细胞生长因子对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor ,bFGF)对兔晶状体上皮细胞（rabbit lens epithelia cell,RlECs)的作用。方法：采用bFGF作用于第2－3代培养细胞,用MTT法测定细胞对增殖的影响;电观察细胞形态的变化,流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果：bFGF可促进晶状体上皮细胞的增殖,尤其是浓度为10μg.L^-1作用最明显,透射电镜显示细胞增殖活跃,流式细胞仪观察进入S期的细胞明显增加。结论：bFGF是促进培养兔晶状体上皮细胞增殖的重要因素。     

全反式维甲酸对兔晶状体上皮细胞移行性和黏附性的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对兔晶状体上皮细胞(RLECs)移行性和黏附性的影响及其作用机制,筛选防治后发性白内障的药物。方法 于第二代体外培养RLECs中添加浓度为10-8—10-5mmol/L的ATRA,观察ATRA对RLECs移行和黏附的影响,用SABC法观察ATRA对RLECs细胞网络骨架改变和内源性层粘连蛋白受体(LN－R)的表达。结果 ATRA对RLECs的移行和黏附有抑制作用且其作用呈时间依赖性和剂量依赖性;ATRA可使RLECs骨架重组并使其内源性LN-R表达降低。结论 ATRA能抑制RLECs的黏附和移行;ATRA能调节RLECs的网络骨架分布且明显降低其内源性LN-R的表达;RLECs的黏附和移行与RLECs的LN－R含量分布密切相关。     

低强度2450 MHz微波阻断兔晶状体上皮细胞周期及对相关基因表达的影响

目的　探讨不同剂量微波辐射对兔晶状体上皮细胞 (RLEC)细胞周期的阻断作用 ,以及微波辐射对细胞周期调控基因P2 1WAF1、P2 7Kip1及c myc表达的影响。 方法　应用频率为 2 4 5 0MHz、功率密度分别为 0 10 (A组 )、0 2 5 (B组 )、0 5 0 (C组 )、1 0 0 (D组 )及 2 0 0mW /cm2 (E组 )的微波连续辐射体外培养的RLEC 8h ,光镜下观察辐射前、后细胞形态学的改变 ,采用流式细胞技术测定细胞周期 ,Western印迹法检测功率密度 2 0 0mW /cm2 的微波辐射 4、6及 8h对P2 1WAF1、P2 7Kip1及c myc基因表达的影响。以无微波辐射对照者为F组 ,进行对照研究。结果　微波辐射 8h后 ,C、D及E组RLEC肿胀和聚集 ,甚至出现细胞固缩和脱壁现象 ,G0 /G1期细胞所占比例明显升高 (P <0 0 5 )。功率密度 2 0 0mW /cm2 的微波辐射 4h ,P2 7Kip1表达水平即开始明显升高 ,而c myc表达水平开始逐渐下降 ,P2 1WAF1表达无变化。结论　功率密度≥ 0 5 0mW/cm2 的微波可阻断RLEC细胞周期 ,并使细胞停滞于G0 /G1期 ;这种阻断作用可能是通过调节调控细胞周期转换的基因P2 7Kip1和c myc而实现。     

苦参碱对人视网膜母细胞瘤细胞生长与端粒酶活性影响的实验研究

目的探讨苦参碱（Ma）对体外培养的人视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞的生长抑制作用及其机制。方法培养的人HXO—Rb44细胞经不同浓度的Ma作用后,采用噻唑蓝比色法（MTT法）测定细胞的生长状况;采用苏木素-伊红染色、流式细胞技术及核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口标记法检测细胞凋亡率和形态学变化;采用端粒重复扩增法检测端粒酶活性的变化。结果一定浓度范围内Ma可抑制HXO—Rb44细胞的生长（P〈0．01）,24h内呈浓度依赖性。0．4mmol／LMa作用12h,可观察到HXO—Rb44细胞凋亡的形态改变,细胞凋亡率开始增加（P〈0．01）,端粒酶活性下降（P〈0．01）,两者在48h内均呈时间依赖性,并具有一定相关性（r=-0．961,P〈0．01）。结论Ma可抑制HXO—Rb44细胞生长,诱导其凋亡,端粒酶活性下降可能是Ma诱发HXO—Rb44细胞凋亡机制之一,提示Ma对视网膜母细胞瘤的综合治疗具有一定的应用前景。