根管消毒药物控释系统的体外细胞霉性研究

采用细胞培养技术和ＭＴＴ法，进行根管消毒药物控释系统的细胞毒性观察。结果发现，贮库型控释系统的高分子包膜材料光吸收值与细胞对照组接近（Ｐ＞０．０５），并高于牙胶材料组（Ｐ＜０．０１）。整体型控释系统光吸收值同牙胶组（Ｐ＞０．０５）。提示根管消毒药物控释系统均可用于髓腔、根管消毒及根管充填，其中贮库型以其良好组织相容性可用于根尖周病的根管超充填治疗。     

低铜和高铜银汞合金的细胞毒性和细胞回复能力

采用人工唾液为浸提液,模拟口腔环境,在动态条件下将低铜和高铜银汞合金溶出,测定其细胞毒性和细胞回复能力。结果低铜银汞合金的细胞毒性为1级,作用后细胞的回复能力为89.39％;高铜银汞合金的细胞毒性为2级,作用后细胞的回复能力为60.89％。证实高铜银汞合金的细胞毒性比低铜银汞合金为大,而作用后细胞的回复能力较低铜银汞合金为小(P<0.05)。並对实验方法的应用价值进行了评价。     

CCK-8法评价口腔粘结材料的体外细胞毒性研究

目的：CCK-8法评价口腔粘结材料的体外细胞毒性研究。方法：应用CCK-8比色法比较体外4种粘结材料（普通型玻璃离子、加强型玻璃离子、SuperBond C＆B及SE BOND）对人牙周膜成纤维细胞（human periodontalligament cell,HPDLC）的细胞毒性,初步探讨4种粘结材料的生物学性能。结果：4种粘结材料对HPDLC的生物相容性影响结果相似,其中普通型玻璃离子及SuperBond C＆B无细胞毒性,加强型玻璃离子具极轻微细胞毒性,SE BOND具轻微细胞毒性。结论：4种粘结材料均满足口腔材料临床应用的生物相容性要求。     

盐酸黄连素根管消毒糊剂的制备及其体外抑菌效果和细胞毒性评价

目的    制备一种以盐酸黄连素（berberine hydrochloride，BBH）为主要成分的新型根管消毒糊剂，评价其体外抑菌作用和细胞毒性，并探索BBH治疗感染根管的潜在应用价值。方法    制备一种以BBH为主要成分的新型根管消毒糊剂，该糊剂以聚乙二醇作为溶剂，并添加壳聚糖、硫酸钡等辅助成分。效果评价以氢氧化钙糊剂作为对照，检测其X线阻射性、pH值和流动性，滤纸片扩散法分析各种糊剂对粪肠球菌的抑菌作用，CCK8法检测各种糊剂对牙周膜干细胞和牙髓干细胞的细胞毒性。结果    研究制备了BBH质量浓度为0.1 g/mL和0.2 g/mL的两种新型根管消毒糊剂，调整pH值为7 ~ 8，发现糊剂有良好的流动性和X线阻射性，且两种新型糊剂对粪肠球菌的抑菌效果均优于氢氧化钙糊剂（P < 0.05），其中0.2 g/mL的糊剂抑菌效果更好。另外，两种新型糊剂对体外培养的牙周膜干细胞和牙髓干细胞均无毒性。结论    以BBH为主要成分的新型根管消毒糊剂，具有良好的抑菌作用，且无细胞毒性。BBH具有应用于治疗感染根管的潜力，该新型根管消毒糊剂具有较高的临床应用价值。     

GuttaFlow根管充填材料对人牙周膜成纤维细胞的毒性

目的:比较GuttaFlow常温流动牙胶根管充填材料与临床常用的两种根管封闭剂AH-Plus和Endomethasone的细胞毒性。方法:制备GuttaFlow、AH-Plus和Endomethasone浸提液,并将100%原液分别稀释至50%、25%和12.5%。组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,将上述不同材料、不同浓度的浸提液与细胞共同培养,于1、3、5、7 d镜下观察细胞形态,MTT法分别检测各组细胞增殖情况,并计算相对增殖率(RGR)以评价细胞毒性。结果:AH-Plus和GuttaFlow各浓度组在各时点的细胞OD值均与对照组无明显差异,RGR分别为77.1%～14.1%和79.8%～115.9%,毒性评级均为0～Ⅰ级,评价结果为无细胞毒性,优于Endometha-sone。结论:GuttaFlow对人牙周膜成纤维细胞无明显细胞毒性。     

根管治疗药物及其材料的细胞毒性研究进展

根管治疗中使用的消毒药物和根充材料对人体的安全性历来受到人们的关注。细胞毒性是评价其安全性的重要指标之一。下面就近年来有关常用根管冲洗剂、根管消毒药物、根管充填材料、根尖倒充填材料和髓腔穿孔修复材料的细胞毒性的研究进展作一综述。     

复方牡蛎根管充填糊剂的体外细胞毒性研究

目的:评价根管充填材料复方牡蛎糊剂的细胞毒性。方法:将根管充填材料的粉剂及粉液固化物分别制备成不同含量(50mg/ml、100mg/ml、200mg/ml)的浸提液作为试验组,RPMI1640培养液作为阴性对照组,应用V79细胞作为实验细胞;各组分别在细胞传代后培养的第2、4、7天时间段以倒置显微镜观察V79细胞的形态及增殖情况,并用MTT法测得各组在各个时间段的吸光度值,应用SPSS12.0软件包对数据进行统计学分析,评价材料的细胞毒性。结果:各实验组在细胞传代后培养的第2、4、7天,镜下观察细胞数量逐渐增多,呈多角形,汇集成群,与阴性对照组无显著差异;各实验组的吸光度值在各个时间段与阴性对照组均无显著性差异(P>0.05),且随培养时间的延长,吸光度值增大。结论:实验显示,复方牡蛎根管充填糊剂无细胞毒性。     

根管冲洗剂次氯酸钠和氯亚明的细胞毒性

目的:评价次氯酸钠(NaOCl)和氯亚明溶液在相同有效氯浓度下的细胞毒性.方法: 按有效氯浓度为0.500 0%、0.250 0%、0.200 0%、0.150 0%、0.125 0%、0.062 5%分别配制NaOCl溶液和氯亚明溶液,使其与L929细胞接触2 h、30 min、10 min,用MTT法检测各组的细胞存活率.结果: 在所设定的浓度范围内,除高低两端组(0.500 0%-2 h及0.062 5%-30 min)外,细胞在其余各组NaOCl溶液中的存活率均大于氯亚明,差异有统计学意义(P<0.05).结论: 在0.250 0%以下的有效氯浓度范围,NaOCl溶液的细胞毒性小于氯亚明溶液.     

六种保存液对牙周膜成纤维细胞活性的影响

目的评价6种不同保存液对牙周膜成纤维细胞活性的影响。方法培养因正畸拔除的前磨牙分离出的牙周膜成纤维细胞,采用CCK-8法检测细胞在自来水、Hank平衡盐溶液、豆浆、生理盐水、牛奶和DMEM高糖培养基6种保存液中1h、2h、4h、8h和24h五个时间点时的细胞生物学活性。结果在五个时间点,DMEM组细胞残存率大于生理盐水组,两组差异有统计学意义(P<0.01),豆浆、HBSS和DMEM三组之间细胞残存率无统计学差异(P>0.05),在1h、4h和24h 3个时间点,牛奶组细胞残存率大于DMEM组和豆浆组,其两组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论牛奶、豆浆、HBSS和DMEM高糖培养基4种溶液是有效的牙周膜成纤维细胞临时保存液,而生理盐水和自来水保存效果差,不适合作为保存液。     

静压力对体外人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究静压力对体外人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)增殖活性的影响。方法用静压力加载装置对第4代HPDLFs分别施加0、15、30、45 kPa的持续性静压力,加力时间为1 h。加力后采用流式细胞术及噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察HPDLFs增殖活性。结果流式细胞术检测结果显示0、15、30 kPa静压力下HPDLFs增殖指数分别为(40.11±0.59)%、(49.89±0.75)%、(55.77±1.57)%,呈递增趋势(P<0.05);静压力达到45 kPa时,HPDLFs增殖指数有所降低,为(35.35±0.85)%。MTT法检测结果显示在0、15、30 kPa静压力下吸光度值分别为0.30±0.04、0.35±0.05、0.40±0.07,呈递增趋势(P<0.05);静压力达到45 kPa时,吸光度值有所降低,为0.25±0.04。结论适当大小的静压力能促进HPDLFs的增殖,过大的静压力会抑制HPDLFs的增殖。     

人牙周膜成纤维细胞对诺氟沙星的跨膜转运

目的 研究人牙周膜成纤雏细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)对诺氟沙星的跨膜转运,为根管全身给药假说提供实验依据.方法 诺氟沙星溶液孵育HPDLF和MC3T3-E1细胞.超声破碎细胞后,高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量.结果 10μg/mL诺氟沙星孵育1、5、lO分钟时HPDLF胞内药物含量分别是0.095±0.032ng/μg0.096±0.052ng/μg、0.104±O.078ng/μg;1Oμg/mL诺氟沙星孵育l、5、10分钟时MC3T3-El胞内药物含量分别是0.033±0.018ng/μg、0.034±0.013ng/μg、O.082±0.029ng/μg,10分钟组数据显著性高于前两组数据,20μg/mL诺氟沙星孵育5分钟时MC313-El细胞内药物含量是0.070±0.057ng/μg.结论 HPLC可用于胞内诺氟沙星的测定.HPDLF对诺氟沙星存在跨膜转运,这种转运与细胞外药物浓度及孵育时间有关,还存在着细胞差异.     

槟榔碱对人牙周膜成纤维细胞凋亡的影响

目的 研究槟榔碱(Arecoline)对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibro-blast,hPDLFs)中凋亡及相关蛋白p-JNK、p-p53、Bcl-2表达的影响.方法 采用组织块培养法培养原代hPDLFs,并传代纯化后用于实验.采用浓度为0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL的槟榔碱处理牙周膜成纤维细胞12 h,通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白免疫印记法检测槟榔碱对hPDLFs中p-JNK、p-p53、Bcl-2表达的情况.结果 槟榔碱作用于hPDLFs后,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率随着药物浓度增加而增加,p-JNK、p-p53蛋白表达逐渐增强,Bcl-2蛋白表达逐渐降低,呈现浓度依赖性.结论 提示槟榔碱可通过激活JNK和p53的磷酸化水平导致hPDLFs的凋亡,对牙周组织的再生有抑制作用.     

脂联素对人牙周膜成纤维细胞的作用

目的:原代培养人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cell,hPDLC),研究脂联素受体(adiponectinreceptor,Adipo R)在hPDLC中的表达情况,以及脂联素(adiponectin,ADP)对hPDLC增殖的作用。方法:收集因正畸需要而拔除的健康前磨牙10颗,玻片覆盖组织块法原代培养hPDLC,RT-PCR法检测分析AdipoR1和AdipoR2在hPDLC中的表达。使用不同浓度ADP(0,5,10,20ng/μL)刺激体外培养的hPDLC,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,分别测定第1、4、7天的细胞增殖活性。采用SSPS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组化显示,培养的细胞波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,证明体外原代培养细胞及传代细胞均为中胚层组织来源的hPDLC,且无上皮来源细胞混杂。琼脂糖凝胶电泳检测显示,Adipo R2在人牙周膜成纤维细胞中表达阳性。MTT法检测的生长曲线显示,随着ADP浓度的增加,细胞增殖活性增加。培养24h后,C、D组与对照组相比差异显著(P相似文献   

缺氧对人牙周膜成纤维细胞增殖和超微结构影响的实验研究

目的:体外培养人牙周膜成纤维细胞(HPLFS),观察缺氧对其生长增殖能力的影响.方法: 分离培养 HPLFS,随机分为 21% O2对照组和10%、5%、2% O2缺氧组,采用四唑盐(MTT)比色法检测 HPLFS增殖情况,透射电镜下观察细胞超微结构改变.结果:MTT 法检测,与对照组比,12 h、24 h,缺氧对细胞增殖随缺氧程度呈依赖性增强,但重度缺氧(2% O2)24 h组具有统计学差异;48 h、72 h,重度缺氧组细胞增殖与对照组相比明显降低,差别具有统计学意义.透射电镜下,重度缺氧24 h细胞胞质内粗面内质网和线粒体明显增多,细胞突起增多;72 h细胞发生退变,溶酶体增多.结论:长期重度缺氧条件下,牙周膜的改建和修复功能降低,可能是高原牙周疾病多发、牙周组织破坏较重的重要原因.     

Scleraxis在牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞中的表达

目的研究碱性螺旋-环-螺旋转录因子 Scleraxis 能否在人牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞、骨髓基质细胞中表达,及其与牙周韧带细胞分化能力的关系。方法体外培养人牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞和骨髓基质细胞,RT-PCR 法检测牙龈成纤维细胞、骨髓基质细胞及不同代次牙周韧带细胞中 Scleraxis 的表达。结果 Scleraxis 在牙周韧带细胞、骨髓基质细胞及牙龈成纤维细胞中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。其 Scleraxis 与β-肌动蛋白吸光度比值分别为0.877±0.024,0.438±0.031,0.313±0.083。Scleraxis 在牙周韧带细胞中的表达最强,在牙龈成纤维细胞中表达最弱。牙周韧带细胞中 Scleraxis 的表达随培养代次的增加而减弱。结论 Scleraxis 可表达于体外培养的牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞和骨髓基质细胞,Scleraxis 可能在牙周韧带细胞的分化过程中起重要作用。     

IL-1β干预后人牙周膜成纤维细胞中TRAF6的基因表达研究

目的：研究IL-1β干预后人牙周膜成纤维细胞中TRAF6的基因表达水平的变化，为细胞因子网络调控牙周膜成纤维细胞功能的研究提供新资料。方法：采用原代培养的人牙周膜成纤维细胞，取5-8代细胞以IL-1β梯度浓度干预，采用RT-PCR法检测TRAF6在人牙周膜成纤维细胞中的表达。结果：在正常的人牙周膜成纤维细胞中未见TRAF6基因表达，IL-1β干预后，TRAF6呈阳性表达，并且随着IL-1β干预的浓度增高，其表达水平上调。结论：IL-1β干预后TRAF6在HPLFs中的表达水平的变化提示TRAF6可能是参与牙周膜成纤维细胞功能调控的重要信号分子。     

两种体外培养人牙周韧带成纤维细胞方法比较

目的探索一种在体外短时间内简便、可靠获取大量人牙周韧带成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPLF)、建立稳定的体外培养体系的方法。方法采用酶消化法和组织贴块法进行HPLF体外原代培养及传代培养的对比研究。通过细胞形态学、超微结构观察及波形蛋白和角蛋白免疫组化染色等对细胞进行定性研究;测定细胞生长曲线了解细胞生长基本规律及其增殖能力。结果采用酶消化法和组织贴块法均可成功的进行HPLF连续传代培养。最高传代数为30代。培养的细胞具有成纤维细胞的典型形态,波形蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,生长稳定期倍增时间为48~72h。组织块培养法需培养时间长,原代培养获取的细胞量较少,较难传代。酶消化法可短时间内获取大量细胞,细胞产量高,但操作手续复杂易污染,细胞易受损伤。结论成功建立了一个稳定的HPLF体外培养体系。除常用的组织块法外,胰蛋白酶及胶原酶联合消化法不失为一种简便、快速、可靠的组织原代分离培养方法。