视觉发育可塑性关键期后弱视大鼠视皮质c-fos的表达

目的 观察双眼形觉剥夺性弱视成年大鼠光照刺激诱导视皮质神经元C-los表达情况，探讨已过视觉发育可塑性关键期的弱视大鼠视皮质内视觉可塑性的存留程度。方法 14日龄SD大鼠共21只，随机分为无光照弱视组8只、光照弱视组8只和正常对照组5只，弱视组行双侧眼睑缝合术建立双眼形觉剥夺性弱视模型。饲养至100日龄后光照弱视组和对照组暴露于外界光线中0．5h，无光照弱视组不接触光线。取材后采用Nissl染色法及电镜观察3组视皮质神经元的形态改变，并用免疫组化技术检测C-fos蛋白表达情况。结果 ①弱视组视皮质神经元比正常组体积变小：②超微结构显示：弱视组视皮质出现早期类凋亡改变的神经元；③光照弱视组视皮质内Ⅱ～Ⅳ层各层中C-fos免疫刚性神经元密度明显高于另外两组（P〈0．05）。结论 双眼形觉剥夺性弱视成年大鼠视皮质经光照刺激诱导c-los表达增加，提示已过视觉发育敏感期成年大鼠的视皮质仍存留一定程度的视觉可塑性。     

视觉发育可塑性关键期后弱视大鼠视皮质c-fos的表达

目的 观察双眼形觉剥夺性弱视成年大鼠光照刺激诱导视皮质神经元c-fos表迭情况,探讨已过视觉发育可塑性关键期的弱视大鼠视皮质内视觉可塑性的存留程度.方法 14日龄SD大鼠共21只,随机分为无光照弱视组8只、光照弱视组8只和正常对照组5只,弱视组行双侧眼睑缝合术建立双眼形觉剥夺性弱视模型.饲养至100日龄后光照弱视组和对照组暴露于外界光线中0.5 h,无光照弱视组不接触光线.取材后采用Nissl染色法及电镜观察3组视皮质神经元的形态改变,并用免疫组化技术检测c-fos蛋白表达情况.结果 ①弱视组视皮质神经元比正常组体积变小:②超微结构显示:弱视组视皮质出现早期类凋亡改变的神经元;③光照弱视组视皮质内Ⅱ～Ⅳ层各层中c-fos免疫刚性神经元密度明显高于另外两组(P＜0.05).结论 双眼形觉剥夺性弱视成年大鼠视皮质经光照刺激诱导c-fos表达增加,提示已过视觉发育敏感期成年大鼠的视皮质仍存留一定程度的视觉可塑性.     

二十二碳六烯酸对视网膜光感受器细胞超微结构影响的实验研究

目的观察二十二碳六烯酸（DHA）对大鼠视网膜光感受器细胞超微结构的影响。方法 14只雌性SD大鼠随机分成正常组、造模组、DHA组,灌胃15d后造模,分别在造模后12h、24h和48h处死动物,取眼球行电镜观察。结果腹腔内注射一定量的MNU可以明显损伤视网膜光感受器细胞的超微结构。而DHA可抑制MNU对视网膜光感受器细胞超微结构的损伤。结论 DHA对视网膜光感受器细胞有较好的保护作用,有望成为一种延缓视网膜色素变性病程进展的有效药物。     

不同时限斜视性弱视大鼠视皮质c—los表达的研究

目的研究斜视性弱视大鼠在视觉发育可塑关键期早中末期以及成年后视觉发育情况及可塑性的存留程度。方法13日龄SD大鼠共40只,随机分为两组,正常组（N）20只,斜视性弱视组（MS）20只;MS组所有大鼠行单侧眼外直肌切除术,建立斜视性弱视大鼠模型。每组分别在视觉发育关键期早期（P25）,中期（P35）,末期（P45）以及成年后（P120）取材。取材前做F—VEP检测,黑箱饲养24h,曝光0．5h处理后经左心室主动脉灌注固定取材,切取各组大鼠脑组织视皮质17区,应用c—fos蛋白免疫组化染色分别比较单眼斜视弱视大鼠与正常大鼠视皮质光刺激诱导c—fos蛋白表达的阳性神经元的差异。结果各年龄组斜视组大鼠斜视眼N1P1、P1N2振幅与未剥夺眼相比大幅下降（P〈0．05）;视觉发育可塑性关键期早期和中期单眼斜视弱视大鼠与正常大鼠视皮质内光刺激诱导c—fos蛋白表达的阳性神经元差异无显著性（P〉0．05）;视觉发育可塑性关键期末和成年后单眼斜视弱视大鼠较正常大鼠视皮质光刺激诱导c—fos蛋白表达的阳性神经元多（P〈0．05）。结论c—los蛋白在成年弱视大鼠视皮质内神经元的表达增加,提示已过视觉发育敏感期成年弱视大鼠的视皮质神经元仍存留一定程度的视觉可塑性。     

大鼠视神经的发育学研究

目的观察不同发育阶段大鼠视神经的变化。方法采用常规HE染色、免疫组织化学染色及电镜技术,对28只不同发育阶段大鼠的视神经进行观察。结果新生大鼠视神经无髓,其髓鞘的形成大约在出生后第5天左右;在发育大鼠视神经中,出生后的前3天少突胶质细胞数迅速增加,而星形胶质细胞数在出生3天后迅速减少;随着视神经的不断发育成熟,视神经内成熟的少突胶质细胞数量也迅速增加。结论本研究从组织形态学上初步阐明了发育大鼠视神经的变化规律,即视神经发育成熟的过程是由少突胶质细胞逐渐形成髓鞘的过程。     

不同日龄视网膜变性大鼠眼底组织结构学观察

目的 探究转基因视网膜退行性变性S334ter-line-3大鼠在出生后不同日龄视网膜组织结构学变化.方法 选择出生后1,9,11,18,30,59 d的S334ter-line-3大鼠,断颈或腹腔注射过量麻药后处死大鼠,摘除双眼球,置入眼球混合固定液及福尔马林液中,左眼行常规石腊包埋,右眼行Histocryl plastic包埋,HE染色,光学显微镜下观察不同时点视网膜组织学结构.结果 出生后第1天,S334ter-line-3大鼠视网膜是一种未发育完善的胚胎型组织,仅有RPE细胞层、祖细胞层,短的内丛状层和神经节细胞层;第9天时其视网膜发育才较完善.第11天时视网膜感光细胞层即开始发生退行性变性,其外核层内可见深染皱缩的凋亡细胞核;第18天时感光细胞层内外节几乎完全消失,外核层变薄,胞核数仅为正常1/2;第30天时,S334ter-line-3大鼠视网膜外层退行性变性已基本完成,仅残留1排感光细胞核层,其外接RPE细胞层,内接视网膜内核层;第59天视网膜结构与第30天基本相同.结论 S334ter-line-3大鼠在出生后随年龄的增长,视网膜外层逐渐发生退行性变性,至出生后第30 d时这种退行性变性基本完成,故出生后30 d的大鼠适合作为视网膜移植中的移植受体.     

RCS大鼠感光细胞凋亡与Bcl-2蛋白的表达

目的 探讨遗传性视网膜色素变性中感光细胞凋亡及其可能的基因调控机制。方法 对RCS大鼠及对照SD大鼠的视网膜组织结构进行光镜观察、细胞凋亡及Bcl-2蛋白免疫组织化学检测。结果 RCS大鼠生后15d视网膜的感光细胞视杆层及外节增厚,视杆层的厚度在25d达到高峰。感光细胞的数目在25d时有所下降,到出生后60d,仅少许感光细胞存留。出生后25～40d,RCS大鼠视网膜可见外核层TUNEL染色阳性的感光细胞,阳性细胞数35d最多。30-40d内核层和节细胞层可见Bcl-2蛋白免疫组化阳性表达细胞,35d时内核层阳性表达细胞数最多。外核层一直未见明显Bcl-2蛋白阳性表达细胞。结论 RCS大鼠视网膜变性过程中。感光细胞发生了凋亡。Bcl-2原癌基因可能不参与感光细胞的保护机制。     

RCS大鼠感光细胞凋亡与Bcl-2蛋白表达的关系

①目的 探讨遗传性视网膜色素变性中感光细胞凋亡及其可能的基因调控机制。②方法 对：RCS大鼠及对照SD大鼠的视网膜组织结构进行光镜观察、细胞凋亡及Bcl-2蛋白免疫组织化学检测。③结果 RCS大鼠生后15d视网膜的感光细胞视杆层及外节增厚，视杆层的厚度在25d达到高峰。感光细胞的数目在25d时有所下降，到出生后60d，仅少许感光细胞存留。出生后25～40d，RCS大鼠视网膜可见外核层TUNEL，染色阳性的感光细胞，阳性细胞数35d最多。30～40d内核层和节细胞层可见Bcl-2蛋白免疫组化阳性表达，35d时内核层阳性表达细胞数最多，外核层一直未见明显Bcl-2蛋白阳性表达。④结论 RCS大鼠视网膜变性过程中，感光细胞发生了凋亡。Bcl-2原癌基因可能不参与感光细胞的保护机制。     

MK-801对视觉发育可塑性关键期内大鼠闪光视觉诱发电位的影响

目的在视觉发育可塑性关键期内,探讨MK-801对大鼠闪光视觉诱发电位（F-VEP）的影响。方法对出生后14d和28d正常和MK-801处理的大鼠进行F-VEP检查。结果正常组大鼠生后28d和14d相比较,F-VEP主波的潜伏期缩短、振幅增高（P〈0.05）;MK-801处理大鼠与同天龄正常组大鼠相比较,F-VEP主波的潜伏期较长（P〈0.05）。结论在视觉发育可塑性关键期内,MK-801影响了大鼠F-VEP的经验依赖性变化。     

枸杞子提取液对RCS大鼠遗传性视网膜变性的作用

目的 观察枸杞子提取液(LBA)对RCS大鼠遗传性视网膜变性的治疗作用.方法 出生后RCS大鼠24只,随机分为对照组和治疗组,每组12只.治疗组RCS大鼠出生后10 d开始喂食1 mg/kg的LBA, 对照组正常饲养.两组大鼠分别在出生后25、35、45 d取眼球,制备组织切片,应用苏木精-伊红(HE)染色和TUNEL染色观察视网膜感光细胞坏死和凋亡情况,并应用免疫组化方法检测Caspase-2的表达.结果 治疗组大鼠出生后25 d 和35 d时TUNEL染色阳性细胞与对照组相比明显减少(t=3.33～6.72,P<0.05);治疗组和对照组大鼠生后25～45 d时Caspase-2在节细胞层和内核层均有表达,但在25 d时治疗组与对照组相比明显减少(t=6.33,P<0.05).结论 在RCS大鼠遗传性视网膜变性的早期,LBA通过抑制细胞凋亡及Caspase-2表达对神经元起保护作用.     

大鼠视皮层神经元电学特性的发育变化

目的 揭示大鼠发育过程中视皮层神经元的电生理特性和发育不同步性。方法 对出生后14、28d龄大鼠视皮层进行脑片膜片钳全细胞记录和神经元标记，并根据输入阻抗对神经元分类及电生理特性分析。结果 当视皮层神经元的输入阻抗(Input tesistance,IR)减小时，突触后电流(Postsynaptic currents,PSCs)的峰值增大，上升时间和下降时间延长。在出生后14d(睁眼前)，以中间型为主(59．2％)，成熟型为14．9％；28d(睁眼后2周)以成熟型为主(56．3％)，幼稚型为12．5％。结论 在大鼠生后的发育过程中，视皮层神经元的电学特性逐渐成熟，但成熟程度与年龄并不完全相关。     

缺氧对大鼠肝细胞超微结构的影响

目的:观察大鼠在7km高度停留1.5h/d的不同时间组,肝细胞超微结构的改变.方法:Wistar大鼠随机分为缺氧10d组、缺氧20d组和对照组,将缺氧组大鼠放入人体低压舱内,上升至7km高度停留1.5h/d,分别在10d和20d后处死,用JEM-1200EX透射电镜观察各组大鼠肝细胞超微结构的改变,并与对照组进行比较.结果:两组缺氧大鼠肝细胞超微结构与对照组比较改变明显,主要表现为核膜不清,胞质中线粒体及内质网排列紊乱,数量减少,并有空白区和胞膜不清等表现.结论:缺氧环境大鼠肝细胞超微结构有明显改变.     

糖尿病大鼠视网膜血管超微结构改变与核因子-κB的关系

目的:观察不同病程糖尿病大鼠视网膜血管超微结构的改变与核因子-κB(NF-κB)在视网膜中的表达情况,并研究两者间的关系,以探讨NF-κB在糖尿病视网膜病变(DR)发病机制中的作用。方法:SD大鼠48只,随机分为糖尿病组24只,对照组24只。糖尿病模型的建立采用链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射。应用免疫组化SP三步法分别于1,3,5个月对大鼠视网膜的NF-κB表达情况进行观察,并用透射电镜进行超微结构的观察。结果:大鼠视网膜血管超微结构:对照组,微血管管壁完整,基底膜连续完整,内皮细胞、周细胞结构正常,异染色质分布均匀。糖尿病组,1个月时,微血管形态基本正常;3个月时内皮细胞明显肿胀、变形,周细胞异染色质边集、浓染,细胞器结构不清,基底膜增厚;5个月时,内皮细胞肿胀、变形更加明显,并有不同程度增生,血管腔明显变窄,周细胞内异染色质分布不均、边集、浓染,基底膜显著增厚。免疫组化结果:对照组,NF-κB仅表达于视网膜神经节细胞和内皮细胞胞质中,细胞核内未见其表达。糖尿病组,从1个月开始,可见视网膜各层细胞均有表达,并主要表达于细胞核内,随病程延长,表达进行性增高。结论:在糖尿病视网膜病变早期,视网膜微血管还未出现明显改变时,NF-κB已被激活,并且随着病程的延长,视网膜微血管超微结构明显改变,NF-κB的表达活性也不断增强。因此,NF-κB在DR的早期发生和后期增殖性发展中可能发挥着重要作用,对今后治疗DR也提供了新的依据。     

氦氖激光穴位照射对缺血缺氧新生大鼠海马组织超微结构的影响

目的：探讨氦氖激光穴位照射对缺血缺氧新生大鼠海马组织超微结构的影响。方法：9只新生Wistar大鼠,随机分为3组：假手术组、缺血缺氧组、激光穴位照射组,每组3只。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,不缺氧,后2组均制作缺血缺氧模型,缺血缺氧组动物不加任何治疗,激光穴位照射组于缺血缺氧后2d,采用氦氖激光穴位照射。常规饲养22d后,取海马区脑组织电镜下观察其超微结构的变化。结果：假手术组海马区神经细胞结构清晰,细胞核膜光滑,胞浆内细胞器丰富,结构完整;缺血缺氧组神经细胞胞体水肿,核膜模糊,细胞器明显减少;激光穴位照射组神经细胞水肿减轻,核膜较清晰,细胞器较丰富。结论：氦氖激光穴位照射具有减轻缺血缺氧对大鼠海马组织超微结构损伤的作用。     

实验性大鼠视网膜光损伤模型的建立与研究

目的：建立和研究视网膜光损伤动物模型，观察较强可见光对大鼠视网膜光损伤的病理变化。方法：自制光损伤箱。取健康成年SD大鼠35只，随机分成正常对照组（CON）、光损伤后1d(D1)、3d(D3)、5天（D5）、7d((D7)组，每组7只，各组大鼠在12h明12h暗环境中饲养7d，然后暗适应36h。D1、D3、D5、D7组大鼠采用4178Lux照度的可见光进行12h间歇光照射，连续3d，总计36h，然后在正常环境中分别饱饲养1d、3d、5d和7d。大鼠以10％水合氯醛麻醉，分别用4％多聚甲醛液3％戊二醛灌流固定，摘取眼球，制成石蜡切片及超薄切片，应用光谱、电镜观察。结果：正常大鼠视网膜组织结构层次清楚，内、外节视杆排列整齐、规则。内、外核层排列紧密，染色均匀。光照后各组均可见光感受器形态的变化，其变化随着时间的延长而加重。D7组变化与D5组基本相似。主要变化为外核层变薄而稀疏。光感受器视杆外节排列紊乱，膜盘叠状结构解离。内节线粒体肿胀，空泡变。外核层细胞核染色质固缩，分布不均匀，向中央聚集。结论：采用4178Lux照度的可见光较长时间（36h)间歇照射可诱导大鼠视网膜光损伤，成功地摸拟了大鼠视网膜光损伤模型；在光损伤的早期，即出现光感受器形态的变化，并随着时间的延长损伤逐渐加重。     

间歇性低氧及运动对大鼠右心室超微结构的影响

【目的】探讨低氧及运动对大鼠右心室超微结构的影响。【方法】大鼠分为常氧对照组、低氧对照组和低氧运动组。通过多道生物信号分析系统测定血压、心率。用透射电镜观察右心室超微结构。【结果】低氧运动组大鼠的体重比常氧对照组和低氧对照组大鼠轻。各组血压和心率的差别均无统计学意义。低氧对照组大鼠右心室肌原纤维呈凝集溶解性改变，肌节不清或消失，糖原减少。肌细胞膜皱缩，闰盘模糊。低氧运动组大鼠肌原纤维与线粒体排列有序，心肌细胞核形态较好，染色质尚均匀，肌节各带较清晰，可见三联管，横管较为明显。     

荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞的实验研究

目的建立荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞的方法。方法选取出生1 d的SD大鼠乳鼠,腹腔注射水合氯醛麻醉后,剪开头部皮肤,向双侧上丘各注射4%荧光金注射液1μl,缝合皮肤,4 d后处死,提取视网膜,胰酶消化后培养,显微镜下观察被标记的视网膜神经节细胞。结果混合培养的视网膜细胞中,可见被荧光金标记的视网膜神经节细胞,大约占细胞总数的0.34%,视网膜神经节细胞可存活3周。结论荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞是一种可行的方法,可用于视网膜神经节细胞的鉴定。     

Ultrastructure and electrophysiology of astrocytes differentiated from adult adipose-derived stromal cells

Background Adipose-derived stromal cell (ADSC) differentiation into neural cells in vitro is becoming widely studied. However, there are few reports on astrocytes following differentiation, and particularly on maturation and electrophysiology. In this study, we use various methods to determine ADSC-derived astrocyte maturity. Methods We used chemical induction with isobutylmethylxanthine (IBMX) to differentiate adult ADSCs into astrocytes followed by hematoxylin-eosin (HE) staining to observe morphology and transmission electron microscopy for cellular ultrastructure assessment. Immunofluorescence was used to detect expression of neural stem cell marker nestin as well as glial markers glial fibrillary acidic protein (GFAP) and S-100. In addition, we measured membrane potentials in bis-(1,3-dibarbituric acid) trimethine oxanol (DiBAC4(3)-labeled ADSCs and astrocytes by stimulation with a high potassium solution under an inverted fluorescence microscope. Finally, cell cycle distribution was detected by flow cytometry. Results Typical astrocyte morphology was shown by HE staining after 48 h differentiation. Glial fibril was observed with transmission electron microscopy. GFAP and S-100 were not expressed in the control group, but were expressed within 24 h differentiation and reached a maximum at day 14 with no change up to day 28. Nestin was weakly expressed in control cells and also reached a maximum at day 14 with the percentage of positive cells constant until day 21 followed by a decrease. Differentiated cell membrane potentials after stimulation with potassium were slightly increased, and then gradually declined over time. There was no significant membrane potential change in the control group. Flow cytometry showed that the percentage of cells in G0/G1 phase was 93% and only 5% in S phase. Conclusion We differentiated ADSCs into mature astrocytes with typical characteristics including morphology, ultrastructure, marker protein expression, mature potassium channels and mitotic capacity.     

实验性光损伤大鼠视网膜病理改变的电镜观察

目的：观察实验性光损伤大鼠视网膜组织病理学特点。方法：取健康成年SD大鼠40只，随机分成正常对照组（CON）、光损伤后１天（D1）、３天（D3）、５天（D５）组，每组１０只。D1、D3、D5组大鼠采用4178Lux照度的可见光进行１２小时间歇光照射，连续３天，总计36小时，然后在正常环境中分别饲养1天、３天、５天。灌流固定，摘取眼球，制成超薄切片，应用电镜技术方法进行研究。结果：正常大鼠视网膜组织结构层次清楚，染色均匀，细胞形态规整。光照后１天，光感受器外节膜盘叠状结构解离，外核层核染色质开始固缩。光照后３天，视网膜内节线粒体肿胀，空泡性变，外核层核染色质向中心聚集，呈岛状。光照后５天，视网膜光损伤达到高峰，视网膜内、外节空泡变明显增多，外核层出现细胞核碎裂，边集，光感受器细胞内线粒体空泡变，核膜皱缩，内陷。光照后各组大鼠视网膜色素上皮、内核层及节细胞未见明显改变。结论：实验性光损伤大鼠视网膜组织病理特点是光感受器的退行性变。     

电针治疗对缺氧缺血性脑病模型大鼠mTOR表达的影响

【目的】观察电针对缺氧缺血性脑病模型大鼠雷帕霉素靶蛋白(m TOR)表达的干预作用。【方法】选择7日龄SD大鼠,随机分为3组:假手术组、模型组、电针组。每组又以1、3、7、21 d分为4个亚组,采用苏木精—伊红(HE)染色观察缺氧缺血侧脑组织的形态学变化,Western blot法检测m TOR的蛋白表达。【结果】HE染色显示:电针组在21 d时,神经细胞界限清楚,排列有序,细胞肿胀变轻,细胞轮廓及核仁清晰,可见胶质细胞增生。模型组m TOR蛋白的表达均在第1天开始增加,第3、7、21天持续增加,与假手术组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。电针组在1、3、7、21 d 4个时间点与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。【结论】电针能够促进m TOR蛋白水平的表达,对缺氧缺血性脑损伤大鼠可起到脑保护作用。