乳腺癌干细胞样细胞mRNA致敏的树突状细胞疫苗免疫治疗研究

目的观察乳腺癌干细胞样细胞核酸抗原致敏的树突状细胞疫苗体外诱导免疫反应作用。方法利用含有生长因子的无血清培养基悬浮培养法富集MCF-7乳腺癌干细胞样细胞,经单克隆形成、表面标记检测、NOD-SCID小鼠成瘤等实验鉴定后,采用T7mMessage mMACHINE试剂盒进行mRNA体外扩增并转染人外周血树突状细胞,MTT法体外检测转染后的树突状细胞诱导的细胞毒活性。结果无血清培养的方法能够富集乳腺癌干细胞样细胞,含CD44+/CD24-型的乳腺癌干细胞样细胞高达(90.17%);经鉴定在NOD/SCID小鼠体内具有强致瘤性;负载后DCs高表达树突状细胞特异性标志CD80/CD83/CD86及HLA-DR;与已分化贴壁乳腺癌细胞相比,悬浮培养的未分化状态的乳腺癌干细胞样细胞mRNA转染的树突状细胞靶向杀伤肿瘤干细胞样细胞的能力更强(P0.01)。结论乳腺癌干细胞样细胞mRNA致敏的树突状细胞疫苗在体外可诱导强的杀伤乳腺癌干细胞样细胞的CTL细胞能力,为乳腺癌临床免疫治疗提供了新的靶点。     

树突状细胞体外诱导分化扩增方法

目的探讨获得大量人树突状细胞的方法。方法采用淋巴细胞分离液密度梯度离心加细胞因子白细胞介素-4（IL-4）和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）诱生法。结果第4天开始有树突样突起。第7天后观察大部分细胞悬浮。结论用该方法可获得大量的人树突状细胞。     

小鼠骨髓浆细胞样树突状细胞亚群的体外诱导及其鉴定

目的 建立小鼠骨髓浆细胞样树突状细胞亚群的体外培养方法,并从形态、表型特征及功能方面与髓样树突状细胞亚群进行对比研究,探讨浆细胞样树突状细胞的生物学特性.方法 无菌条件下提取C57BL/6小鼠骨髓细胞,体外通过特异性细胞因子Flt3-Ligand诱导其向浆细胞样及髓样树突状细胞亚群分化,并利用倒置显微镜、流式细胞仪及混合淋巴细胞反应从形态学、表型特征及功能三方面对培养得到的浆细胞样树突状细胞进行鉴定.结果 小鼠骨髓细胞经Flt3-Ligand体外诱导培养8d,可获得表型为CD11c+ CD11b-B220+的浆细胞样树突状细胞亚群.形态上,浆细胞样树突状细胞亚群多为表面光滑的圆形,胞核常呈偏心分布的肾形.共刺激分子表达上,未成熟浆细胞样树突状细胞低水平表达CD80、CD86、CD40及MHC-Ⅱ类分子,不能被TLR4激动剂LPS诱导成熟,但在TLR9激动剂CpG ODN1826作用下,能够迅速转化为成熟树突状细胞.功能方面,浆细胞样树突状细胞具有一定的刺激同种异基因淋巴细胞增殖的能力,但弱于同等刺激条件下的髓样树突状细胞.结论 小鼠骨髓细胞在Flt3-Ligand的体外刺激诱导下,可向浆细胞样树突状细胞方向分化,所培养出的浆细胞样树突状细胞形态上多呈淋巴细胞样,低表达共刺激分子,并具有一定的刺激同种异基因淋巴细胞增殖的能力.     

离子蚀刻扫描电镜术在间皮细胞吞饮小泡研究中的应用

人体膈腹膜间皮细胞表面有大量密集的微绒毛,按常规扫描电镜制样方法,难以观察到间皮细胞表面的微细结构.本文利用离子蚀刻扫描电镜制样技术,在蚀刻掉其表面密集的微绒毛后,即可观察到间皮细胞吞饮小泡在细胞表面的开口.离子蚀刻技术的应用,为研究组织细胞游离面的超微结构,提供了有利条件.     

树突状细胞亚群在非小细胞肺癌及癌旁组织中分布特点及临床意义

目的：研究树突状细胞亚群在人非小细胞肺癌癌组织、癌旁组织及正常肺组织中的分布差异,并探讨其临床意义。方法选择60名非小细胞肺癌患者,间接免疫荧光法检测非小细胞肺癌癌组织、癌旁组织及周围正常组织中的树突状细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察树突状细胞亚群的数量、成熟状况。结果非小细胞肺癌组织及癌旁组织中髓样树突状细胞和浆细胞样树突状细胞数量较正常组织均明显增加（P＜0．05）,非小细胞肺癌组织中髓样树突状细胞和浆细胞样树突状细胞数量较癌旁组织增加（P＜0．05）,非小细胞肺癌组织中成熟髓样树突状细胞较癌旁组织及正常组织均减少（P＜0．05）。结论肺癌组织中树突状细胞亚群数量分布异常及成熟髓样树突状细胞的减少可能与肺癌的免疫逃逸机制有关。     

树突状细胞的培养及成熟的鉴定

目的 探讨人体外周血树突状细胞在体外培养诱导其成熟的方法,通过得到成熟的细胞培养技术,对树突状细胞功能的研究奠定实验基础.方法 通过Ficoll-Hypaque梯度离心法得到单个核细胞,再诱导使其分化、扩增、纯化形成稳定的树突状细胞,通过树突状细胞自身形态、特异性表型,抗原摄取能力,鉴别培养的细胞,从而得到具有典型特征的树突状细胞.结果 树突状细胞培养第7天,加入LPS后,倒置显微镜及扫描电镜下观察,树突状细胞成熟中,细胞胞质增大,细胞膜表面能形成大量树突状突起,表面标志物CD80、CD86、CD11c、HLA-DR的表达增高(P＜0.05),共聚焦显微镜下,成熟的树突状细胞对抗原的吞噬能力减弱.结论 Ficoll-Hypaque梯度离心法能够得到稳定的树突状细胞体外培养体系.     

C57BL/6j小鼠骨髓CD34+造血干细胞来源的iDC的体外培养与鉴定

目的:探讨以恰当的体外定向诱导和培养小鼠骨髓CD34 造血干细胞以获得足够数量的未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,iDC)的方法.方法:采用自健康C57BL/6j小鼠骨髓中分离CD34 造血干细胞,进而于含rmGM-CSF和rmIL-4的RPMI-1640完全培养液中定向诱导和扩增,收集悬浮生长细胞后,予以流式细胞学检测其CD80、CD86和CD11c等表面分子的表达,扫描电镜观察悬浮细胞的形态.结果:去除红细胞的骨髓细胞培养4 h后,10%左右细胞贴壁生长.加rmGM-CSF和rmIL-4培养,逐渐呈集落样悬浮生长,有树枝状突起.第6天时,细胞集落呈密集的葡萄串状,细胞体积增大,毛刺状或根须状突起更明显.流式细胞学显示:体外培养第7天的iDC的表面分子CD11c的表达率为75%～81%[(78.4±8.36)%],表面分子CD80的表达率为32%～51%[(38.26±8.77)%],而表面分子CD86的表达率为18%～53%[(27.5±8.30)%].扫描电镜见细胞有典型的树枝状突起.结论:联合使用rmGM-CSF和rmIL-4定向诱导培养骨髓CD34 造血干细胞,可大量扩增出iDC.     

应用扫描电镜显示染色体超微结构的方法

本文介绍一新的制样技术使用扫描电镜,制备了细胞染色体的样品,得到了核型完整、结构清晰的染色体图像,并首次在扫描电镜下显示出染色体的双螺旋结构。     

芹菜素对肝细胞癌SMMC-7721细胞系干样细胞自我更新及CK2α表达的影响

目的:研究芹菜素是否能下调CK2α表达和抑制SMMC-7721细胞系肝癌干样细胞自我更新.方法:干细胞培养基超低粘附培养板悬浮培养法扩增肝癌干样细胞;肿瘤球形成法检测肝癌干样细胞的自我更新能力;Western-blot检测细胞CK2α蛋白表达水平.结果:人肝细胞癌SMMC-7721细胞系第2代球细胞具有最强自我更新潜能,可用作肝癌干样细胞模型.芹菜素以浓度依赖方式降低肝癌干样细胞的肿瘤球形成率以及CK2α蛋白表达水平.结论:芹菜素抑制肝癌干样细胞自我更新作用与其下调CK2α表达相关.     

细胞与生物材料共培养的样品扫描电镜制备法

目的通过不同的样品制备法,在扫描电镜下观察制样方法对细胞形态的影响,筛选细胞与生物材料共培养的样品制备法。方法对样品分组采用戊二醛单固定和戊二醛、锇酸双重固定,使用间接移液法和直接移液法对样品进行脱水、置换。结果镜下显示采用戊二醛、锇酸双重固定,使用直接移液法制备的样品细胞无塌陷皱折、表面结构丰富清晰,图像反差好。结论对细胞与生物材料共培养的样品采用双重固定、直接移液法进行样品制备效果理想。