几种细胞微囊化后致瘤性的研究

目的　探讨微囊化技术对细胞异种移植致瘤性的影响。方法　应用免疫隔离技术原 理,制成了能将人体嗜铬细胞(HCC)、大鼠黑色素瘤细胞(B16 F1)及大鼠成纤维细胞(NIH3T3)与宿 主的免疫系统隔离的新型微囊。选雌性SD大鼠112只,随机分为14组,分别将APA空微囊、HCC、 微囊化HCC(ME HCC)、B16 F1细胞、ME B16 F1细胞、NIH3T3细胞、ME NIH3T3细胞移植到大 鼠眼前房和足胝部。每日观察大鼠的眼前房及足胝部,持续4周。定时取材行组织学观察。结果　 肉眼观察:B16 F1组和ME B16 F1组大鼠移植部位有新生物生长;B16 F1组的新生物重量和成瘤 率明显大于ME B16 F1组(P<0.01);其余各组未见新生物。光镜观察:B16 F1组移植后1周,移 植部位有薄层黑色素瘤细胞,第4周见较多黑色素瘤细胞;ME B16 F1组有3只大鼠移植部位有薄 层黑色素瘤细胞;余组未见瘤细胞。非微囊化细胞组大鼠移植部位见大量淋巴细胞浸润。空囊组和 微囊化细胞组大鼠移植部位仅见少量淋巴细胞。结论　移植细胞经微囊化技术处理后无致瘤性,说 明微囊化HCC异种移植是比较安全的,在生物镇痛领域内有广阔的应用前景。     

微囊化异种甲状旁腺组织移植的研究

目的探讨微囊化异种甲状旁腺(PTG)组织移植对Wistar大鼠甲状旁腺功能低下的治疗作用及微囊的通透性。方法 40只去甲状旁腺Wistar大鼠随机分为微囊组、非微囊组、空囊组、空白对照组。用海藻酸-钡交联微囊包裹兔甲状旁腺组织,移植至Wistar大鼠肾包囊。移植后每隔2周取血测血钙,移植后第16周取移植物进行透射电镜检查及T淋巴细胞、大鼠IgG抗体的免疫组织化学染色。结果微囊组移植后第4周血清钙由(1．62±0．04)mmol／L恢复至正常水平 (2．2～2．6)mmol／L,9例维持至观察期结束(P<0．01),非微囊组、空囊组及空白对照组血清钙差异无统计学意义(P>0．05)。第16周取出移植物检测显示移植物活性良好,微囊周围可见较多T 淋巴细胞浸润,囊壁及囊内IgG抗体染色阳性。结论海藻酸-钡交联微囊可对甲状旁腺组织起到有效的保护作用,使甲状旁腺组织较长时间存活并发挥正常功能。但海藻酸-钡交联微囊并未减轻受体免疫排斥反应的激活且未有效的免疫隔离IgG抗体。     

微囊化人嗜铬细胞体外培养的研究

目的观察体外培养人嗜铬细胞(HCC)和微囊化人嗜铬细胞(ME-HCC)的儿茶酚胺(CA)及甲-脑啡肽(M-ENK)的释放功能,了解微囊技术对ME-HCC形态和活性的影响.方法取6例ABO同型健康成人脑死亡的双侧肾上腺进行HCC原代培养,对HCC进行HE染色并行免疫细胞化学检查,计数酪氨酸羟化酶阳性细胞;用2%海藻酸钠经微囊技术包裹HCC并进行培养,在光镜下观察;每48h更换和收集HCC和ME-HCC培养液,-20℃保存;采用放射免疫测定技术检测培养液及烟碱刺激试验后培养液中CA和M-ENK水平.结果(1)ME-HCC形态圆整,体外培养生长良好,与HCC相似;(2)HCC和ME-HCC培养液中CA及M-ENK水平无显著性差异(P＞0.05);(3)低水平烟碱刺激能提高培养液中HCC和ME-HCC释放CA及M-ENK量,且二者CA及M-ENK增加量无显著性差异(P＞0.05).结论本包膜材料和制囊技术对HCC无损伤,ME-HCC体外培养的活性和释放功能良好,适合移植.     

输注转染IL-2基因同源短发夹型RNA的淋巴细胞抑制大鼠肝移植急性排斥反应

目的 探讨输注转染白细胞介素2(IL-2)基因同源短发夹型RNA(shRNA)的受者淋巴细胞对大鼠肝移植后急性排斥反应的影响.方法 构建针对大鼠活化T淋巴细胞IL-2基因编码区的shRNA表达质粒,体外转染受者(BN大鼠)淋巴细胞.以Lewis大鼠为供者、BN大鼠为受者,进行肝移植,干扰组的受者于移植术中经门静脉回输转染IL-2-shRNA的BN大鼠淋巴细胞;环孢素A组(CsA组)的受者移植术中经门静脉输入生理盐水,肝移植后应用CsA肌肉注射;生理盐水对照组的受者移植术中经门静脉输入生理盐水;空载体对照组的受者移植术中经门静脉输入转染空载体的BN大鼠淋巴细胞.术后第7天,处死BN大鼠,取移植肝组织,观察组织和细胞超微结构改变情况以及肝细胞凋亡情况,同时测定肝功能指标、肝组织中IL-2基因的表达以及血清IL-2、肿瘤坏死因子a(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)水平.计算各组受者1周存活率.结果 移植后第7天,生理盐水对照组和空载体对照组的移植肝组织中可见中、重度急性排斥反应改变,而干扰组和CsA组病理切片中无或仅有轻度急性排斥反应征象.干扰组凋亡肝细胞数为(23±3.2)/mm2,CsA组为(26±4.0)/mm2,均明显低于生理盐水对照组和空载体对照组(P＜0.05).干扰组和CsA组的IL-2mRNA表达明显低于生理盐水对照组和空载体对照组(P＜0.05);干扰组和CsA组的血清IL-2、TNF-α和IFN-γ水平较空载体对照组和生理盐水对照组分别有不同程度降低(P＜0.05).干扰组和CsA组的丙氨酸转氨酶和总胆红素均明显低于空载体对照组和生理盐水对照组(P＜0.05).而白蛋白则高于空载体对照组和生理盐水对照组(P＜0.05).干扰组受者1周存活率为87.5%(7/8),明显高于生理盐水对照组的37.5%(3/8)和空载体对照组的37.5%(3/8,P＜0.05).结论 输注转染IL-2-shRNA的受者淋巴细胞可抑制大鼠肝移植后的急性排斥反应,但这种作用是短期的.     

治疗性高碳酸血症减少大鼠肺移植后中性粒细胞弹性蛋白酶的分泌

目的 探讨治疗性高碳酸血症对大鼠左肺移植后中性粒细胞功能的影响.方法 雄性Wistar大鼠28只,按随机数字表法分为两组,每组中随机选择7只分为供体和受体实施左肺原拉移植.移植前受体均给予50%N2+50%O2通气15 min,移植后,对照组给予50%O2通气;治疗组给予5%O2和一定浓度的CO2,维持动脉血二氧化碳分压在80 mm Hg～100 mmHg (1mm Hg=0.133kPa),两组移植再灌注后观察90 min.记录平均动脉压变化并采集动脉血行血气分析,测量血清及肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)中的中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)及IL-8浓度,BALF中总蛋白含量,计算BALF中的中性粒细胞百分比.结果 治疗组的动脉血氧分压、血压明显高于对照组(P<0.05);治疗组血清中NE的含量明显低于对照组(13±4 vs 27±12);移植后对照组血清中IL-8含量在移植后显著升高(1.08±0.17 vs 0.63±0.18,P<0.01),治疗组则变化不明显;治疗组BALF与对照组BALF相比,蛋白含量(2.78±0.25 vs 3.29±0.47)、IL-8浓度(0.97±0.08 vs 1.75±0.48)以及NE浓度(16±4 VS 26±9)均显著低于对照组;治疗组BALF中的中性粒细胞百分比显著低于对照组(27±12 vs 40±9,P<0.05).结论 高碳酸血症能够减少大鼠肺移植后NE的分泌,对肺移植后的缺血/再灌注损伤起到保护作用.     

治疗性高碳酸血症对大鼠肺移植术时炎性反应的影响

目的 探讨治疗性高碳酸血症对大鼠肺移植术时炎性反应的影响.方法 雄性Wistar 大鼠48只,体重300～400 g,随机分为肺移植术组(M组)和治疗性高碳酸血症组(H组),每组24只.M组再灌注期间吸入50%O_2-50%N_2混合气体;H组再灌注期间吸入N_2-CO_2混合气体,调节3种气体吸入浓度,维持动脉血二氧化碳分压80～100 mm Hg,吸入氧浓度48%～50%.于机械通气15 min时记录平均动脉压和动脉血氧分压作为基础值,再灌注期间每30 min记录1次.于再灌注1、2和4 h时各组随机取8只大鼠,采集外周动脉血样,采用酶联免疫吸附法测定血清TNF-α、IL-1和IL-8的浓度;取移植肺组织,测定弹性蛋白酶含量,计算肺湿/干重比,并行组织学观察.结果 再灌注时H组平均动脉压和动脉血氧分压高于M组(P<0.05);与基础值比较,再灌注时M组TNF-α及IL-8的浓度升高(P<0.05);与M组比较,再灌注时H组TNF-α及IL-8的浓度降低(P<0.05),再灌注2和4 h时弹性蛋白酶含量、移植肺湿,干重比降低(P<0.05);H组移植肺组织肺泡内出血、巨噬细胞和中性粒细胞浸润及肺水肿较M组明显减轻.结论 治疗性高碳酸血症可明显抑制大鼠肺移植术时的炎性反应.     

脂肪间充质干细胞与胰岛联合移植对术后免疫状态及移植效果的影响

目的研究同系脂肪间充质干细胞(AMSC)与同种异体胰岛联合移植对胰岛移植术后免疫状态及移植效果的影响。 方法选择Lewis大鼠建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型作为胰岛移植受体,AMSC＋胰岛移植组经左肾包膜下联合移植Lewis大鼠AMSC及Wistar大鼠胰岛,单纯胰岛移植组经左肾包膜下单独移植Wistar大鼠胰岛,单纯AMSC移植组经左肾包膜下单独移植Lewis大鼠AMSC,阳性对照组为未进行移植的Lewis糖尿病大鼠,阴性对照组为正常Lewis大鼠。ELISA法检测血清细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度,流式细胞技术检测外周血CD4^＋、CD8^＋ T细胞比例,HE染色观察移植胰岛淋巴细胞浸润情况,观察血糖、胰岛素水平及胰岛移植物存活时间。采用单因素方差分析比较5组大鼠外周血淋巴细胞亚群比例和血清细胞因子水平,采用LSD法进行组间两两比较;血糖及血清胰岛素变化采用重复测量资料方差分析;采用独立样本t检验比较AMSC＋胰岛移植组与单纯胰岛移植组胰岛移植物淋巴细胞计数。采用Kaplan-Meier法绘制AMSC＋胰岛移植组与单纯胰岛移植组胰岛移植物生存曲线,并采用log-rank检验进行比较。P<0.05为差异有统计学意义。 结果AMSC＋胰岛移植组胰岛移植物平均生存时间为(26.8±3.0) d,长于单纯胰岛移植组的(19.0±1.3) d,两组大鼠胰岛移植物生存曲线差异有统计学意义(χ²＝4.494,P<0.05)。胰岛移植后各时间点,AMSC＋胰岛移植组大鼠移植后血糖和胰岛素水平均优于单纯胰岛移植组(P均<0.05)。胰岛移植前,5组大鼠外周血CD4^＋、CD8^＋ T细胞比例以及细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10差异均无统计学意义(F＝0.425、0.476、0.256、0.418、0.281和0.313,P均>0.05)。胰岛移植后第7、14、28天,AMSC＋胰岛移植组大鼠外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞比例均低于单纯胰岛移植组(P均<0.05),血清IFN-γ和IL-2浓度均低于单纯胰岛移植组(P均<0.05),IL-4和IL-10浓度均高于单纯胰岛移植组(P均<0.05)。胰岛移植第7天,AMSC＋胰岛移植组胰岛移植物平均淋巴细胞计数为(142±21)个/mm²,低于单纯胰岛移植组的(311±36)个/mm²(t＝8.245,P<0.05)。 结论与胰岛联合移植的AMSC能够提高胰岛移植的效果,可调节糖尿病大鼠体内IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10表达及抑制同种异体胰岛刺激的T细胞增殖,减轻胰岛移植物的免疫损伤。     

靶向OX40基因的siRNA抑制大鼠肝脏移植排斥反应的研究

目的 探讨RNA干扰阻断OX40-OX40L共刺激通路对大鼠移植肝存活时间的影响.方法 制作原位肝脏移植物大鼠模型,供体DA大鼠,受体Lewis大鼠.移植术毕时将5 ml含5×109pfu的pLVTHM-OX40-siRNA重组慢病毒经阴茎背静脉在10秒内注射受鼠体内,术后观察受鼠存活时间,移植肝脏进行组织病理学检查,采用ELISA法检测大鼠外周血IL-2、IFN-γ的水平,并进行受者大鼠脾细胞对供者大鼠脾细胞的混和淋巴细胞反应(MLR). 结果转染组大鼠肝脏移植物的存活时间为(74.0±9.3)d,明显长于对照组(7.3±0.5)d和未转染组(7.5±0.5)d;转染组移植肝组织炎细胞浸润、间质水肿、肝组织坏死程度较对照组和未转染组减轻;耐受组大鼠脾脏中T淋巴细胞刺激T淋巴细胞增殖的能力较对照组降低(t=25.1,P＜0.01);移植术后第7 d,转染组血清IL-2浓度为(46±8.4)pg/ml,IFN-γ浓度为(202.7±14.6)pg/ml,均显著低于对照组和未转染组(分别t=176.4,45.5,P＜0.01).结论 转染靶向OX40的siRNA,可通过阻断OX40-OX40L共刺激通路,抑制大鼠肝脏移植后的排斥反应,延长大鼠移植肝的存活时间.     

偏侧帕金森病样大鼠脑内移植微囊化牛嗜铬细胞的行为和组织学研究

目的 观察微囊化牛嗜铬细胞(BCC)大鼠脑内移植的效果及微囊的作用.方法 将微囊化或非微囊化BCC和空微囊分别移植于帕金森病(PD)样大鼠脑纹状体内,观察术后阿朴吗啡诱发大鼠异常旋转行为的变化;用蔗糖一磷钾酸-乙醛酸(SPG)荧光染色和HE染色观察脑组织中植入的BCC及微囊的状态.结果 空囊组PD样大鼠异常旋转行为改变不明显(n=6,P>0.05);非微囊组16只PD样大鼠中9只大鼠移植后1周旋转圈数下降到移植前的44.0%～60.9%(P<0.01),移植6个月时仍有BCC在部分受体脑内存活,移植区有较明显的炎性反应,另有7只PD样大鼠移植后异常旋转行为无明显改善(P>0.05),其脑内未见存活的BCC,移植区有较明显的炎性反应;微囊组16只PD样大鼠移植后旋转圈数下降到移植前的17.6%～35.6%(P<0.01),移植后10个月时大鼠脑内仍存在大量存活的微囊化BCC,无明显的炎性反应.微囊化BCC移植改善PD样大鼠异常旋转行为的效果明显优于非微囊者(P<0.01).结论 BCC脑内移植可改善PD样大鼠的异常旋转行为;大鼠旋转行为的改善与BCC在脑内的存活状态有关;海藻酸钠及多聚赖氨酸制作的微囊可降低异种BCC移植的排斥反应发生率.     

微囊化异种肝细胞移植对大鼠爆发性肝衰竭治疗作用的研究

目的　探讨微囊化异种肝细胞移植对暴发性肝衰竭 (FHF)大鼠的治疗作用。方法　ACP微囊化处理原代豚鼠肝细胞 ,于诱发FHF前 2 4h移植到大鼠腹腔内大网膜附近 ,采用 90 %肝切除法诱发FHF。在FHF诱发后 2 4h取静脉血检测大鼠肝功能谷丙转氨酶 (ALT ) ,清蛋白 (ALb) ,总胆红素(TB) ,血糖 (BS)和凝血酶原时间 (PT)等指标 ;取腹腔移植入的微囊进行组织学检查观察细胞形态、功能及数量的变化 ;动态全程观察大鼠生活质量及存活时间并绘制生存曲线。结果　微囊化肝细胞移植组大鼠生活质量明显改善 ,出现共济失调等中枢神经系统症状及腹水的时间明显延长。微囊化肝细胞移植组大鼠的ALT ,Alb ,TB ,BS和PT均明显改善并且与对照组均有差异的显著性 (P <0 .0 5 )。微囊化肝细胞移植组大鼠平均生存时间为 60h ,空白对照组为 2 2h(P <0 .0 1)。组织学检查 :移植后 72h开腹 ,约有 80 %微囊呈无粘连游离状态 ,镜下见微囊周围纤维化率约为 8% ,囊内肝细胞形态正常。未微囊化肝细胞移植组则很少见到正常的肝细胞 ,且周围有大量淋巴细胞浸润。结论　对异种肝细胞进行微囊化处理后移植治疗FHF大鼠 ,可以减少移植排斥反应 ,提高治疗效果 ,是一种治疗FHF的较好方法。     

海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊生物相容性的研究

目的比较海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊(ACP微囊)和海藻酸-聚赖氨酸-海藻酸微囊(APA微囊)的生物相容性。方法(1)两种微囊(50、100和200个)与健康人血清共浴,检测微囊对补体的激活程度。(2)1000个APA和ACP微囊分别植入Wistar大鼠的腹腔,4d和3周时统计取出的微囊数和微囊的纤维化率。(3)Wistar大鼠胰岛用ACP微囊和APA微囊包裹,分别贯续置于含3.3mmol/L和16.7mmol/L葡萄糖的Hank's溶液中培养,测定培养液中胰岛素的浓度。结果(1)ACP微囊组残余补体活性高于APA微囊组。(2)4d时,ACP和APA微囊的取出数分别是845.0±40.4和807.6±45.7(P>0.05),囊周纤维化率分别是16.40%和65.68%(P<0.05);3周时两种微囊的取出数分别为715.0±133.0和367.5±105.6(P<0.05),囊周纤维化率为27.8%和83.9%(P<0.05)。(3)在含3.3mmol/L葡萄糖的Hank's液中,未微囊胰岛组、APA和ACP微囊化胰岛组的胰岛素浓度分别是(123.48±4.70)mIU/L、(110.11±12.18)mIU/L和(110.90±11.95)mIU/L,当葡萄糖浓度为16.7mmol/L时,胰岛素浓度分别是(754.75±13.81)mIU/L、(689.30±27.71)mIU/L和(684.28±70.10)mIU/L。结论海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊的生物相容性要优于海藻酸-聚赖氨酸-海藻酸微囊,前者更适合应用于微囊化胰岛移植。     

阻断B7诱导大鼠心脏移植免疫耐受的实验研究

目的　研究阻断B7方法诱导大鼠心脏异位移植的免疫耐受。　方法　采用Ono法建立大鼠异位心脏移植模型 ,实验组腹腔注射B7阻断剂CTLA 4Ig,观察大鼠移植的心脏存活天数 ,病理改变和术后IL 2 ,IgG以及IgM含量的变化。　结果　实验组移植的心脏存活时间为 :(31 6 0± 1 82 )d ,对照组 (7 2 5± 0 71)d ,差异有显著性意义 (P <0 0 1)。组织学改变 :实验组见局灶性血管周围或间质内淋巴细胞浸润和局灶性心肌损伤 ,病理分级Ⅰ～Ⅱ级。对照组可见大量淋巴细胞浸润 ,心肌细胞损伤和坏死 ,间质内出血水肿 ,病理分级Ⅳ级。术后IL 2含量实验组比对照组明显下降 ,有显著性差异 ,P <0 0 1。IgG和IgM含量差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。　结论　阻断B7能诱导大鼠心脏移植免疫耐受 ,为移植排斥反应提供了新的治疗方法     

SIRS发展在胰腺坏死、继发感染致胰腺炎病变加重中的作用

目的 探讨全身炎症反应综合征（SIRS）在胰腺坏死、继发感染致胰腺炎病变加重中的作用.方法 健康雄性SD大鼠46只,随机分为四组：SO组仅翻动胰腺,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组经胰管逆行注射1％、3％、5％牛磺胆酸钠＋104/mL大肠杆菌混合液.8 h后处死大鼠,检测胰腺组织细菌培养、脂肪酶、磷脂酶A2、c反应蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,进行胰腺组织病理学检查及Schmidt评分.结果 ①SO、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组胰腺组织细菌培养阳性率分别为0 （0/10）、0（0/12）、25％ （3/12）、90％ （9/10）,其中Ⅲ组与SO、Ⅰ、Ⅱ组比较有统计学差异（P＜ 0.01）.②SO、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清脂肪酶、C反应蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、Schmidt评分逐渐升高,各组间差别有统计学意义（P＜0.05）.③Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组血清磷脂酶A2水平较SO组有显著性升高（P＜0.01）,Ⅲ、Ⅱ组比Ⅰ组亦有显著性升高（P＜0.01）.④病理学检查结果：SO组未见明显病变;Ⅰ组可见胰腺水肿,炎性细胞浸润;Ⅱ组腺泡水肿,炎性细胞浸润,血管内充血,散在坏死灶与出血点;Ⅲ组可见凝固性坏死灶,大量炎性细胞浸润,微血管破裂,片状出血,甚至可见微脓肿.结论 ①胰腺坏死程度越重,其继发感染的概率越大;②SIRS可能是胰腺坏死、继发感染致胰腺炎病变加重的共同机制,抑制SIRS有助于SAP的治疗.     

One-year monkey heart xenograft survival in cyclosporine-treated baboons. Suppression of the xenoantibody response with total-lymphoid irradiation.

The shortage of cadaveric human organs for transplantation could be alleviated by the use of xenografts. Long-term (> one-year) survival of xenografts in humans or experimental animals has not been achieved with previous immunosuppressive protocols. Poor results in xenotransplantation compared with allotransplantation have been attributed to a more potent antibody response rather than to cell-mediated responses. To investigate these issues a concordant heterotopic cardiac xenograft model was developed in conjunction with cyclosporine and/or total-lymphoid irradiation. Concordant models permit examination of xenoantigen induced antibody and cell-mediated responses since preformed humoral factors (in discordant models) do not cause hyperacute rejection. Four groups of baboon recipients received cervical heart transplants from cynomolgous monkeys. Group I (n = 2), untreated, mean survival (MS) = 6 days; group II (n = 5), CsA and methylprednisolone, MS = 25 days; group III (n = 3), preoperative TLI, MS = 29 days; group IV (n = 6), preoperative TLI and CsA+MP, MS = 255 days (> 77, > 108, > 142, 184, > 480, 540 days). Heart xenografts of CsA-MP-treated recipients appear to be destroyed predominantly by antibody (IgM)-mediated processes whereas cell-mediated rejection is likely the major reaction in TLI-treated recipients. CsA-MP-treated recipients had early immunohistochemical evidence of antibody and complement-mediated rejection (deposition of IgM and complement but not IgG on heart xenografts). In contrast IgM and complement deposits were not detected on heart xenografts in TLI- and TLI-CsA-treated recipients. IgG xenoantibodies were only detected on the two rejected heart grafts of TLI-CsA-treated recipients. CsA-MP-treated recipients rapidly developed high xenoantibody titers (1:256 to 1:512) that immediately preceded rejection. In contrast, TLI-treated animals developed lower levels of xenoantibody (< or = 1:8) and TLI-CsA-treated recipients had no detectable xenoantibody during the initial three months after transplantation (and titers no greater than 1:8 thereafter.) The lack of xenoantibody was likely not due to a generalized inhibitory effect of the immunosuppressants on B cell function since all classes of serum immunoglobulins were in the normal range. Intragraft cytolytic lymphocyte activity was detected in rejecting TLI- and TLI-CsA-treated recipients but could not be detected in xenografts of CsA-MP-treated recipients. One explanation for these data is that TLI (either directly or indirectly) induces a state of specific B cell unresponsiveness to monkey xenoantigens, thereby preventing IgM mediated rejection in the third week after transplantation.(ABSTRACT TRUNCATED AT 400 WORDS)     

微囊豚鼠肝细胞培养及其细胞免疫屏障作用的观察

目的 观察海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊化肝细胞的生物学功能及对免疫细胞的隔离效应。方法 用胶原酶门腔静脉灌注法分离豚鼠肝细胞,测定微囊化肝细胞及游离肝细胞培养上清白蛋白水平,用自然杀伤细胞(NK)细胞的细胞毒实验来评价微囊的免疫隔离效应。结果 微囊包裹对肝细胞的活率无明显影响,微囊化肝细胞与裸露肝细胞白蛋白分泌水平差异无显著性(P>0.05),NK细胞对K562靶细胞的细胞毒实验表明微囊可有效地保护囊内细胞不受NK细胞的杀伤作用。结论 APA微囊化肝细胞可保持良好的生物活性,APA微囊对细胞免疫具有免疫隔离作用。     

The alginate-poly-L-lysine-alginate membrane: Evidence of a protective effect on microencapsulated islets of Langerhans following exposure to cytokines

Abstract: In past experiments, we demonstrated that allografts and xenografts of pancreatic islets encapsulated in alginate-polylysine-alginate (APA) microcapsules were protected from immunorejection and that in both streptozotocin-induced and spontaneously diabetic animals diabetes was reversed for extended periods of time. Because of growing evidence that cytokines may play an important role in graft rejection, it is important to determine whether the APA capsular membrane can also provide a protective barrier against cytotoxic actions of cytokines. In this study, free and encapsulated rat islets were exposed in vitro to interleukin 1, 2, and 6 (IL-1, IL-2, and IL-6) to tumor necrosis factor (TNF) and interferon (INT), then challenged with 20 mM glucose for 24 hr to evaluate physiological response in terms of insulin secretion. Although IL-2 and 6 were found to have no effect on the pancreatic islets (free or encapsulated), IL-1, TNF, and INT were shown to interfere with the physiological pattern of insulin secretion from the free islets; microencapsulated islets' function was not affected. Transmission electron microscopy (TEM) of the rat islets exposed to the five types of cytokines revealed that IL-1, TNF, and INF exerted morphological changes to the free islets while encapsulated islets were not affected. No changes were detected in free or encapsulated islets exposed to IL-6 or IL-2. In addition, encapsulated islets were transplanted into normal BALB-c mice and into spontaneously diabetic NOD mice for 3 to 5 months and then recovered. The recovered islets were shown to continue to respond to glucose challenge in a physiological manner. The results of this study showed that, although exposure of some cytokines to free islets results in changes in the normal physiological response of the islets to glucose challenge as well as in ultrastructural changes within the cells, microencapsulated islets were not impaired by the exposure to the same cytokines.     

同种异体大鼠气管腹腔移植后闭塞性细支气管炎发生机制探讨

目的建立肺移植后闭塞性细支气管炎动物模型,对其发病机制进行初步探讨。方法新鲜SD大鼠气管（每段5环）异位移植到SD大鼠（Ⅰ组）和Wistar大鼠（Ⅱ、Ⅲ组）腹腔并用大网膜包裹,Ⅰ、Ⅱ组不接受环孢菌素A（CsA）,Ⅲ组全程接受CsA10mg·kg^-1·d^-1。分别在3、14、28d后取出移植气管检测形态学改变和Th1（IL-2、IFN-γ）／Th2（IL-4、IL-10）细胞因子表达,并观察CsA对上述指标的影响。结果术后3d时3组气管形态学变化差异无统计学意义（P〉0．05）。14d时Ⅰ组气管形态基本恢复;Ⅱ、Ⅲ组上皮细胞几乎全部缺失,差异无统计学意义（P〉0．05）,与Ⅰ组区别明显（P〈0．01）;Ⅱ组管腔阻塞（28．5±5．0）％,淋巴细胞密集浸润,Ⅲ组阻塞（19．4±2．9）％,较多淋巴细胞分布,3组差异有统计学意义（P〈0．01）。28d时Ⅰ组形态正常,Ⅱ组管腔阻塞（94．8±3．6）％,浸润淋巴细胞有所减少,Ⅲ组阻塞（36．6±7．6）％,淋巴细胞分布减少,3组差异有统计学意义（P〈0．01）。Ⅱ组Th1／Th2细胞因子表达比Ⅰ组明显升高。与Ⅰ组相比,Ⅱ组Th1细胞因子表达比Th2细胞因子升高更为显著。Ⅲ组IL-2表达比Ⅱ组明显减少,但2组IFN-γ、IL-4、IL-10表达差异没有统计学意义。结论同种异体移植物在上皮细胞损害、纤维性细胞增生以及淋巴细胞浸润等方面较同系移植物有明显变化。Th1／Th2促进了同种异体大鼠异位移植气管闭塞性细支气管炎（OB）的发生,其细胞因子可能介入了OB的发病机制。CsA减少管腔阻塞和淋巴细胞浸润,但对于移植物上皮没有明显保护作用。CsA抑制IL-2基因转录,在一定程度上减少了OB病理性损害。     

Inhibition of cellular immune responses to encapsulated porcine islet xenografts by simultaneous blockade of two different costimulatory pathways

BACKGROUND: Transplantation of human islets has been successful clinically. Since human islets are scarce, we are studying microencapsulated porcine islet xenografts in nonobese diabetic (NOD) mice. We have evaluated the cellular immune response in NOD mice with and without dual costimulatory blockade. METHODS: Alginate-poly-L-lysine-encapsulated adult porcine islets were transplanted i.p. in untreated diabetic NODs and NODs treated with CTLA4-Ig to block CD28/B7 and with anti-CD154 mAb to inhibit CD40/CD40-ligand interactions. Groups of mice were sacrificed on subsequent days; microcapsules were evaluated by histology; peritoneal cells were analyzed by FACS; and peritoneal cytokines were quantified by ELISA. Controls included immunoincompetent NOD-Scids and diabetic NODs given sham surgery or empty microcapsules. RESULTS: Within 20 days, encapsulated porcine islets induced accumulation of large numbers of macrophages, eosinophils, and significant numbers of CD4 and CD8 T cells at the graft site, and all grafts were rejected. During rejection, IFNgamma, IL-12 and IL-5 were significantly elevated over sham-operated controls, whereas IL-2, TNFalpha, IL-4, IL-6, IL-10, IL-1beta and TGFbeta were unchanged. Treatment with CTLA4-Ig and anti-CD154 prevented graft destruction in all animals during the 26 days of the experiment, dramatically inhibited recruitment of host inflammatory cells, and inhibited peritoneal IFNgamma and IL-5 concentrations while delaying IL-12 production. CONCLUSIONS: When two different pathways of T cell costimulation were blocked, T cell-dependent inflammatory responses were inhibited, and survival of encapsulated islet xenografts was significantly prolonged. These findings suggest synergy between encapsulation of donor islets and simultaneous blockade of two host costimulatory pathways in prolonging xenoislet transplant survival.     

跟骨骨折3种治疗方法比较

[目的]探讨跟骨骨折治疗方法。[方法]对123例143足跟骨骨折采用3种不同方法进行治疗。按Sanderg分型：Ⅰ型35例38足，Ⅱ型25例26足，Ⅲ型27例35足，Ⅳ型36例44足。随访6个月～8年，平均5．3年。[结果]按Marland足评分评价，石膏固定组Ⅰ型38足，Ⅱ型17足，优良率分别为92．1％、88．2％。骨圆针撬拨固定组Ⅱ型6足，Ⅲ型22足，Ⅳ型31足，优良率分别为83．3％、45．5％、22．6％。跟骨钛钢板内固定组Ⅱ型3足，Ⅲ型13足，Ⅳ型13足，优良率分别为：100％、92．3％、84．6％。[结论]Ⅰ、Ⅱ型骨折石膏固定或骨圆针撬拨固定疗效满意。Ⅲ、Ⅳ骨折骨圆针撬拨固定疗效差。切开复位跟骨钛钢板内固定是治疗跟骨骨折的有效方法。