PTEN基因及其相关因子HIF-1α在急性髓性白血病骨髓基质细胞中的表达及意义

目的 探讨PTEN基因及其相关因子HIF-1α在急性髓性白血病(AML)骨髓基质细胞中的表达及意义.方法 取30例急性髓性白血病患者(AML组)和30例非AML患者(对照组)骨髓基质细胞分离纯化后培养,以RT-PCR检测其中PTEN mRNA的表达,并通过凝胶图像分析系统分析其相对含量.同时以Western免疫印迹技术检测骨髓基质细胞中PTEN和HIF-1α蛋白表达.结果 急性髓性白血病患者骨髓基质细胞中PTEN基因和蛋白的表达率及相对含量均显著低于对照组(P<0.01,P<0.05),HIF-1α蛋白表达率及表达水平显著高于对照组(P<0.01,P<0.05).HIF-1α在骨髓基质细胞中的表达上调与PTEN的低表达相关联(P<0.05).结论 PTEN基因可能是抑制白血病异常骨髓造血形成的重要因子,而PTEN表达缺失或下调可能诱导其下游因子HIF-1α的高表达.     

人参皂苷Rg3对急性髓细胞性白血病THP-1、HL-60细胞的干预作用

目的:探讨人参皂苷Rg3对急性髓细胞性白血病的干预机制。方法:体外培养急性单核细胞性白血病细胞系(THP-1)、急髓白血病M3细胞系(HL-60),采用人参皂苷Rg3对细胞系进行干预,采用MTS法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法分析相关蛋白表达。结果:人参皂苷Rg3对THP-1、HL-60细胞均有不同程度的抑制生长效果,IC50分别为3.5、3.02 g·L~(-1)。人参皂苷Rg3作用24 h、48 h均可抑制急性髓细胞性白血病细胞增殖,且抑制作用与药物剂量呈依赖关系;人参皂苷Rg3对THP-1以及HL-60细胞的凋亡可起到诱导作用,细胞凋亡会随药物浓度升高而增加,且干预时间延长同样会增加细胞凋亡率,细胞凋亡率呈现时间、剂量依赖性。在作用48 h后,凋亡相关因子PARP出现了降解分裂条带,THP-1出现了Caspase-8条带轻度减弱,HL-60细胞出现了p-Akt明显减弱。结论:人参皂苷Rg3可以对Caspase-8及PARP相关蛋白的表达以及凋亡过程起到激活作用,使p-Akt表达水平降低,从而对肿瘤细胞的增殖以及凋亡起到抑制以及诱导作用。     

低氧刺激THP-1细胞炎症因子的表达及其相关通路的研究

目的观察低氧是否促进人单核细胞炎症因子的分泌,以及探讨其是否通过PI3K/Akt和低氧诱导因子(HIF-1α)信号通路而发挥作用。方法 1体外低氧(1%O2)培养人源单核细胞系THP-1,24 h;2分别加入PI3K抑制剂(LY294002)和HIF-1α抑制剂(KC7F2)预处理THP-1细胞后再进行低氧干预;3在常氧下,分别加入Akt激动剂(胰岛素)和HIF-1α激动剂(二甲氧乙二酰甘氨酸,DMOG)对THP-1细胞进行干预。Western blot检测p-Akt和HIF-1α蛋白表达的水平,ELISA法检测IL-1β和TNF-α分泌的变化。结果与对照组(常氧培养)比较,低氧干预后THP-1细胞p-Akt、HIF-1α的蛋白表达增加,IL-1β、TNF-α分泌增加,差异有统计学意义(P0.05);与低氧组(低氧培养)比较,PI3K抑制剂预处理能显著降低p-Akt、HIF-1α的蛋白表达,HIF-1α抑制剂预处理能降低HIF-1α的蛋白表达,但不影响p-Akt表达水平,两种药物预处理都能减少IL-1β和TNF-α分泌,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,Akt激动剂能增加p-Akt、HIF-1α的蛋白表达,HIF-1α激动剂能增加HIF-1α的蛋白表达,但不影响p-Akt表达水平,两种药物预处理都能增加IL-1β和TNF-α分泌,差异有统计学意义(P0.05)。结论低氧可能是通过激活PI3K/Akt/HIF-1α信号通路,促进THP-1细胞炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌,从而促进慢性炎症的发展。     

人参皂苷 Rg3对人鼻咽癌 CNE -2细胞血管生成拟态及迁移能力的影响

目的：探讨人参皂苷 Rg3对人低分化鼻咽癌细胞系 CNE -2体外血管生成拟态及迁移能力的影响。方法用不同浓度（0、38、76和114μmol/ L）的 Rg3处理 CNE -2细胞后,体外管道形成抑制实验检测 Rg3对CNE -2细胞管道形成能力的影响;Transwell 小室法检测 Rg3对 CNE -2细胞迁移能力的影响;Western blot 法检测 Rg3对 CNE -2细胞中 COX -2、HIF -1α、VEGF 和 Fascin1蛋白表达的影响。结果人参皂苷 Rg3能抑制 CNE -2细胞体外管道形成的能力,其管状结构数量与 Rg3浓度呈负相关（P ＜0.01）;Rg3浓度大于76μmol/ L 时可以抑制 CNE -2细胞的迁移能力,与0μmol/ L Rg3比较差异有统计学意义（P ＜0.05）;且 Rg3对 COX -2、HIF -1α、VEGF 和 Fascin1蛋白表达的影响趋势分别与 Rg3对血管生成拟态和迁移能力的变化趋势呈正相关（ P ＜0.05）。结论人参皂苷 Rg3能抑制 CNE -2细胞体外血管生成拟态及迁移能力,其分子机制可能与抑制 CNE -2细胞中COX -2、HIF -1α、VEGF 和 Fascin1蛋白的表达有关。     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的 探讨低氧环境下PI3K抑制剂2-(4-吗啉基)- 8-苯基- 4氢-1-苯并吡喃- 4-酮(LY294002)对人胃癌SGC-7901细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路、细胞生长、细胞凋亡及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA表达的影响.方法 应用LY294002作用于低氧环境中的人胃癌SGC-7901细胞(低氧+LY294002组),采用CCK-8试剂盒检测SGC-7901细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比;Western blotting检测PI3K和p-Akt蛋白表达;RT-PCR检测HIF-1α mRNA表达.以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照(低氧组).结果 LY294002能抑制低氧环境中SGC-7901细胞增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显(P＜0.05),低氧+LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组(P＜0.01).LY294002能明显抑制PI3K、p-Akt蛋白以及HIF-1α mRNA的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 LY294002能抑制低氧环境中人胃癌SGC-7901细胞生长,促进细胞凋亡,抑制PI3K/Akt信号通路及其下游HIF-1α mRNA的表达.     

人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的探讨传统中药人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）所诱发心肌肥大的影响。方法采用酶消化法分离新生大鼠心室肌细胞,培养心肌细胞随机分为3组：正常对照组、Ang Ⅱ组、AngⅡ＋Rg1组。在接受药物处理24h后,检测心肌细胞总蛋白含量,β-MHC、TNF-α和IL-1β的mRNA表达量。结果 Ang Ⅱ处理导致培养心肌细胞的总蛋白含量以及β-MHC mRNA表达量显著增加,提示心肌肥大的发生;人参皂苷Rg1显著抑制了Ang Ⅱ的促心肌细胞肥大作用。同时,AngⅡ增加心肌细胞对TNF-α和IL -1βmRNA表达的效应也被人参皂苷Rg1所抑制。结论人参皂苷Rg1抑制了 AngⅡ诱导的心肌细胞肥大以及心肌细胞对炎性介质TNF-α、IL-1β的释放,这可能是人参皂苷Rg1对心脏疾病具有保护作用的细胞学基础。     

人参皂苷Rg1激活PI3K/Akt信号通路对6-OHDA毒性作用的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对抗6-羟基多巴胺(6-OHDA)毒性作用的信号通路.方法 MES23.5细胞常规培养,免疫印迹法观察人参皂苷Rg1预处理对6-OHDA诱导的磷酸化蛋白激酶B (Akt) 表达的影响,MTT法观察细胞的存活率.结果 6-OHDA可时间依赖性地降低MES23.5细胞磷酸化Akt的表达(F=24.51,P<0.01),人参皂苷Rg1预处理可明显增强磷酸化Akt的表达(t=471.60,P<0.01);人参皂苷Rg1预处理可明显降低6-OHDA对MES23.5细胞的损伤作用,此作用可以被磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002所阻断(F=25.12,P<0.01).结论 人参皂苷Rg1通过激活PI3K/Akt信号通路对抗6-OHDA对MES23.5神经细胞的毒性作用.     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨低氧环境下PI3K抑制剂2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮（LY294002）对人胃癌SGC-7901细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）／丝氨酸苏氨酸激酶（Akt）信号通路、细胞生长、细胞凋亡及低氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA表达的影响。方法应用LY294002作用于低氧环境中的人胃癌SGC-7901细胞（低氧＋LY294002组）,采用CCK-8试剂盒检测SGC-7901细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比;Western blotting检测P13K和p-Akt蛋白表达;RT—PCR检测HIF-1α mRNA表达。以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照（低氧组）。结果LY294002能抑制低氧环境中SGC-7901细胞增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显（P〈0．05）,低氧＋LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组（P〈0．01）。LY294002能明显抑制PI3K、p-Akt蛋白以及HIF-1α mRNA的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论LY294002能抑制低氧环境中人胃癌SGC-7901细胞生长,促进细胞凋亡,抑制PI3K／Akt信号通路及其下游HIF-1α mRNA的表达。     

人参皂甙20（R）-Rg3对人胶质瘤U87细胞凋亡的影响

目的探讨人参皂甙20（R）-Rg3对人胶质瘤U87细胞凋亡作用的影响。方法应用MTT法及流式细胞术观察不同浓度的Rg3对U87细胞凋亡的影响,采用细胞吖啶橙／溴乙锭荧光观察凋亡形态学改变,采用WesternBlot技术检测细胞Bcl2、Bax、p-Akt及tAkt蛋白表达。结果Rg3显著抑制U87细胞增殖,Rg3呈剂量依赖性诱导肿瘤细胞凋亡。不同浓度Rg3作用U87细胞24h,U87细胞中Bax表达逐渐增高,Bcl-2表达降低．Bax／Bcl-2呈浓度依赖性升高,细胞p-Akt蛋白表达降低,而t—Akt蛋白未见改变。结论Rg3通过抑制P13K／Akt信号转导通路中的Akt磷酸化,影响胶质瘤U87细胞系Bcl-2蛋白表达降低,促凋亡Bax蛋白表达增加,调控胶质瘤细胞的凋亡。     

人参皂苷Rg3和PEG-PLGA-Rg3纳米微粒对人血管内皮细胞侵袭和微管形成能力的影响

目的 观察人参皂苷Rg3(Rg3)和PEG-PLGA-Rg3纳米缓释微粒(Rg3-N)在体外对人血管内皮细胞侵袭和微管形成能力的影响,并比较两者之间的差异.方法 选用EA.hy926人血管内皮细胞株,通过transwell法、tube formation法观察Rg3和Rg3-N对其侵袭和微管形成能力的影响,比较两者作用的差异,并通过实时定量PCR法、Western blot法检测E-钙黏素(E-cad)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)等相关基因和蛋白表达来探索其内在分子机制.结果 Rg3和Rg3-N处理可使EA.hy926细胞的侵袭能力和微管形成能力显著下降(P ＜0.05);Rg3和Rg3-N处理后VEGF的蛋白和基因表达未受明显影响,MMP-9和E-cad的表达显著降低,各组均未检测到HIF-1α蛋白的表达.结论 Rg3和Rg3-N可抑制内皮细胞的侵袭能力和微管形成能力,这些作用可能是通过抑制E-cad和MMP-9的表达来实现的;PEG-PLGA纳米载体包埋Rg3能提高其在体外抗EA.hy926细胞侵袭和微管形成的能力.     

HIF-2α-VEGF-Notch信号通路在高强度聚焦超声不完全消融后肝癌中的作用

目的 探讨HIF-1α、HIF-2α、VEGF、Notch等基因在高强度聚焦超声不完全消融肝癌血管新生中的表达及其作用.方法 实验共分5组,HIFU残留肝癌细胞亚系为实验组,未处理肝癌细胞为对照组,转染HIF-2α基因沉默重组慢病毒残留肝癌细胞为抑制HIF-2α组,转染VEGF基因沉默重组慢病毒残留肝癌细胞为抑制VEGF组,转染空载慢病毒残留肝癌细胞为空载组.免疫荧光检测实验组与对照组的VEGF表达.低氧(1％O2)处理实验组与对照组细胞0、6、12、24 h,荧光定量PCR和Westernblot检测HIF-1α、HIF-2α、VEGF mRNA和蛋白表达水平.荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞HIF-1α、HIF-2α、VEGF、Notch、DLL4 mRNA和蛋白表达水平.结果 VEGF蛋白在对照组与实验组细胞中均有表达.HIF-1α在低氧处理12 h达到顶峰,随后下降,而HIF-2α、VEGF随着低氧处理时间增加而呈上升趋势,且实验组HIF-2α、VEGF表达较对照组明显增高(P＜0.05).转染慢病毒后,抑制HIF-2α组HIF-2α、VEGF mRNA和蛋白表达均较实验组显著下调(P＜0.05),抑制VEGF组VEGF、Notch、DLL4mRNA和蛋白表达均较实验组显著下调(P＜0.05),实验组HIF-2α、VEGF、Notch、DLL4mRNA和蛋白表达均高于对照组(P＜0.05).结论 HIF-2α-VEGF-Notch信号通路参与调控高强度聚焦超声残余肝癌血管新生.     

人参皂苷Rg3对常氧和缺氧条件下 Eca-109和786-0细胞VEGF、HIF-1α和COX-2表达的影响

目的:探讨人参皂苷Rg3对常氧和缺氧条件下Eca-109和786-0细胞血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和环氧合酶-2(COX-2)表达的影响.方法:Eca-109和786-0细胞分别于常氧和缺氧条件下培养,并分别给予不同浓度的Rg3处理.采用MTT法检测Rg3对2种细胞增殖的影响,Re...     

人参皂苷Rg1对大鼠急性缺血心肌血管再生的促进作用

目的 研究人参皂苷Rg1对急性心肌缺血大鼠心肌血管再生的分子机制.方法 建立大鼠急性心肌缺血模型,48只大鼠随机抽签法分为急性心肌缺血模型组,阳性药组(美托洛尔4.5 mg/kg),人参皂苷Rg1 5、10、15 mg/kg组,假手术组,每组各8只.连续腹腔注射14 d后取材.TTC法测定心肌梗死面积,免疫组化染色法测定心肌梗死边缘区微血管密度,心肌梗死边缘区VEGF、VEGFR1、VEGFR2和p-Akt表达,Griess法测定大鼠心肌组织NO水平.结果 与模型组比较,人参皂苷Rg1 10、15 mg/kg组心肌梗死面积明显减小(P＜0.01),微血管密度显著增加(P＜0.01).人参皂苷Rg1 10 mg/kg组VEGF、VEGFR1、VEGFR2及p-Akt表达均为次强阳性,Rg1 15 mg/kg组VEGF、VEGFR1、VEGFR2及p-Akt表达则均为强阳性,结果与阳性药物作用相当,其中以Rg1 15 mg/kg剂量效果最佳.此外,与模型组比较,人参皂苷Rg110、15 mg/kg组心肌组织NO水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 人参皂苷Rg1可促进大鼠急性缺血心肌血管再生,该作用与人参皂苷Rg1增加心肌组织VEGF、VEGFR、p-Akt以及NO的表达有关.     

人HIF-1αRNA干扰质粒构建及其转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞

目的 构建人HIF-1α的miRNA干扰表达载体并转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞.方法 设计合成针对人HIF-1α基因的miRNA前体寡核苷酸,通过退火成为双链DNA片段,以T4 DNA连接酶与线性化pcDNA(tm)6.2-GW/EmGFP-miR质粒连接,构建含HIF-1α前体miRNA的重组质粒.经测序鉴定后,通过脂质体介导转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞.结果 经测序鉴定针对人HIF-1α基因的miRNA干扰质粒构建成功,并能够成功转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞.结论 成功构建针对人HIF-1α基因的miRNA干扰质粒并转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞,为后续研究HIF-1α基因在人急性髓性白血病骨髓基质的功能奠定基础.     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶、磷酸肌醇3-激酶和缺氧诱导因子2α表达的变化

目的 探讨大鼠低氧性肺动脉高压(HPH)形成过程中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和缺氧诱导因子2α(HIF-2α)表达的变化.方法 40只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和低氧3天、7天、14天、21天组(H3、H7、H14、H21组),每组8只,低氧组复制HPH大鼠模型.测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥大指数(RVHI)、管壁面积与血管总面积比值(WA%)、管腔面积与血管总面积比值(LA%);免疫组织化学或Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化P38(p-P38)、磷酸化Akt(p-Akt);原位杂交和免疫组织化学检测HIF-2α的表达.结果与对照组比较,H7组大鼠mPAP开始上升 (P<0.05),H14组达高水平并维持于此水平.缺氧14天后出现肺血管重塑,RVH I改变.与对照组比较,p-ERK和p-Akt在H3组表达上升 (P＜0.05),且在H3组、H7组、H14组和H21组肺小动脉内膜、中膜表达均为阳性.而p-P38、p-JNK蛋白在对照组与低氧组表达均不明显.HIF-2α mRNA在对照组表达弱阳性,在H14组表达升高.HIF-2α蛋白在对照组表达不明显,H7组表达达高峰,H14组和H21组维持在高水平.相关分析表明p-ERK和p-Akt均与HIF-2α蛋白(内膜)和mPAP、RVHI呈正相关(P＜0.01).结论 p-ERK、p-Akt与HIF-2α均在大鼠HPH的发病机制中发挥作用.p-ERK和p-Akt可能通过在蛋白表达水平上调HIF-2α,进而上调下游目标基因,从而参与HPH发生发展.     

人参皂苷Rg3调控ERK通路抑制Lewis小鼠肺癌生长的研究

目的:通过人参皂苷Rg3对Lewis肺癌小鼠模型及其细胞模型的抑制研究,探讨ERK信号通路及相关基因在抗肿瘤中的作用。方法:建立Lewis肺癌小鼠荷瘤动物模型,通过口饲法给予定量人参皂苷,连续3周,处死动物后,比较各组荷瘤小鼠肿瘤体积。含药动物血清作用于Lewis肺癌细胞,MTT法检测各组细胞抑制效率。Realtime-PCR法检测荷瘤鼠Dusp6,Bax,Bcl-2基因表达变化,Western blot法检测荷瘤鼠ERK,p-ERK蛋白表达变化。结果:人参皂苷Rg3对Lewis肺癌细胞及荷瘤小鼠的肿瘤生长均有明显抑制作用（P <0.01）。Western blot显示ERK在Rg3处理组中的表达明显比对照组低,Realtime-PCR结果显示,在动物肿瘤标本中,Dusp6,Bax基因药物处理组比对照组高表达（P <0.01）,Bcl-2基因药物处理组比对照组低表达（P <0.01）。结论:人参皂苷Rg3在Lewis肺癌体内外模型中具有一定的肿瘤抑制效果,ERK信号通路及Dusp6基因与Rg3的抑制作用有关,Rg3诱导的细胞凋亡也参与了抗肿瘤的作用。     

人HIF-1αRN干扰质粒构建及其转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞

目的构建人HIF-1α的miRNA干扰表达载体并转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞。方法设计合成针对人HIF-1α基因的miRNA前体寡核苷酸,通过退火成为双链DNA片段,以T4 DNA连接酶与线性化pcDNA（tm）6.2-GW/EmGFP-miR质粒连接,构建含HIF-1α前体miRNA的重组质粒。经测序鉴定后,通过脂质体介导转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞。结果经测序鉴定针对人HIF-1α基因的miRNA干扰质粒构建成功,并能够成功转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞。结论成功构建针对人HIF-1α基因的miRNA干扰质粒并转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞,为后续研究HIF-1α基因在人急性髓性白血病骨髓基质的功能奠定基础。     

人参皂苷Rg1 对阿霉素引起的血管内皮细胞 损伤的作用及机制研究

目的 探讨人参皂苷Rg1 对阿霉素损伤后血管内皮细胞的作用及其机制。方法 该研究分为 正常组、阿霉素组（0.5μg/ml）、阿霉素+Rg1 组（0.5μg/ml 阿霉素+200μg/ml Rg1）。通过MTT 法、划 痕及小管形成实验检测人参皂苷Rg1 对阿霉素损伤后血管内皮细胞增殖、迁移及小管形成的影响。通过 Hochst33342 染色和流式细胞术检测人参皂苷Rg1 对阿霉素损伤后血管内皮细胞凋亡的影响。采用Western blotting 检测人参皂苷Rg1 对阿霉素损伤后血管内皮细胞Bcl-2、p-Akt、p-ERK 及p-eNOS 蛋白表达的影 响。结果 与正常组比较,阿霉素组细胞活性降低（P <0.05）;与阿霉素组比较,阿霉素+Rg1 组能提高血管 内皮细胞的细胞活性（P <0.05）。与阿霉素组比较,阿霉素+Rg1 组能够改善血管内皮细胞的迁移及小管形 成状态（P <0.05）。与阿霉素组比较,阿霉素+Rg1 组减少阿霉素引起的细胞凋亡（P <0.05）。与阿霉素组比较, 阿霉素+Rg1 组阿霉素损伤后血管内皮细胞NO 升高（P <0.05）,ROS 减少（P <0.05）。阿霉素组Bcl-2、 p-ERK、p-Akt 及p-eNOS 蛋白相对表达量较正常组低（P <0.05）,阿霉素+Rg1 组较阿霉素组高（P <0.05）。 结论 人参皂苷Rg1 可减轻阿霉素引起的血管内皮细胞损伤,从而为人参皂苷Rg1 治疗阿霉素引起的心脏损 伤提供新的靶点。     

Ruxolitinib对人红白血病HEL细胞VEGF、HIF-1α表达的影响

目的 探讨JAK2抑制剂Ruxolitinib对人红白血病HEL细胞血管内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）分泌的影响。方法 用不同浓度Ruxolitinib（1、5、10、50、100、500 nmol/L）处理HEL细胞24、48、72 h,通过CCK-8法观察其对HEL细胞增殖的抑制作用;不同浓度Ruxolitinib处理细胞24、48、72 h,RT-PCR检测Jauns激酶2基因（JAK2） mRNA水平,Western blot检测p-JAK2、VEGF、HIF-1α蛋白表达;鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）体内血管生长实验检测Ruxolitinib对血管生成的影响。结果 不同浓度Ruxolitinib（除外1 nmol/L作用24 h）均可抑制HEL细胞增殖。不同浓度Ruxolitinib处理HEL细胞24、48、72 h 后,RT-PCR结果显示JAK2 mRNA表达较对照组降低（P<0.01）;Western blot结果显示p-JAK2、VEGF、HIF-1α蛋白表达较对照组亦均降低（P<0.05）;CAM实验结果显示Ruxolitinib处理细胞72 h后血管数目明显减少。结论 Ruxolitinib可能通过抑制JAK2通路,抑制HEL细胞VEGF、HIF-1α表达进而抑制血管新生。     

低氧诱导因子1α在肝癌细胞不同缺氧时间的表达情况及其与血管生成和细胞凋亡的关系

目的：为了探讨低氧诱导因子-α（Hypoxiainducible factor-α．HIF-h）在不同缺氧时间的肝癌细胞中的表达情况及其与血管生成和细胞I鼠亡的关系。方法；用氯化钴处理HepG2肝癌细胞模拟缺氧环境。用RT—PCR技术检测缺氧0．1，2,4．6，8h肝癌细胞中的HIF-1α,VEGF,bcl-2的表达。用western blot方法检测caspase-3蛋白的表达情况．。结果：细胞在氯化钴处理后4小时。HIF-1α．VEGF。bcl-2 mRNA达到高峰，随后下降；caspase-3蛋白的表达与前三者正好相反。结论：HIF-1a通过促进VEGF,bcl-2的表达。抑制caspase-3的表达，从而抑制肝癌细胞凋亡。且与缺氧程度有关。HIF-1α在肝癌的发生发展中发挥重要作用。