体内转染基因在帕金森病治疗中的应用前景

近年来，帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）的基因治疗动物实验已经取得可喜成果，尽管尚无被认可的临床资料，但灵长类动物的实验成果已开始逼近临床应用，尤其是基因治疗所获得的神经支持和神经再生效果，具有不可低估的应用前景。ＰＤ的基因治疗主要通过两种途径实现，一是体外转染细胞的脑内移植（ｅｘｖｉｖｏ），二是通过脑内注射在体转染靶细胞（ｉｎｖｉｖｏ），两种途径的转染过程不同，而分子生物学基础基本一致。现就体内转染途径和方法作一综述。　　一、目的基因　　针对ＰＤ的治疗基因包括两大类：一是…     

微泡造影剂在左心超声中的应用

左心超声造影在评估心功能,诊断心尖部血栓和心肌致密化不全,鉴别真、假室壁瘤等方面可提供重要的信息,其准确性和可重复性好。心肌超声造影采用"微泡爆破技术"实时观测心肌区域内微泡的充填,可间接反映心肌灌注状态。微泡介导的靶向造影剂还可为基因或药物的靶向治疗提供重要载体。该文介绍微泡造影剂在左心超声显像中的应用进展。     

超声照射增加PTEN基因在小鼠肺脏中的表达

目的探讨超声照射增强PTEN基因在小鼠肺脏中表达的可能性。方法构建p-PTEN-luc载体,由尾静脉注射入小鼠体内,注射同时对小鼠右侧胸壁进行超声照射。实验结束24h检测小鼠肺脏中荧光素酶的表达情况,Western blot检测PTEN蛋白的表达情况。结果实验结果提示实验组与对照组小鼠p-PTEN-luc质粒载体的表达量与对照组相比明显升高,Western blot检测也提示小鼠肺脏中有PTEN蛋白的表达。结论超声照射可以明显提高抑癌基因PTEN在小鼠肺脏中的表达,为肺癌的基因治疗提供了新的策略和思路。     

超声微泡介导靶向传输基因及其在心血管疾病中的应用

超声造影剂的临床应用已经在诊断超声心动图中被证实。近年来,随着超声造影剂不断发展,人们又着眼于将特异性配体连接到造影剂微泡表面使它到达感兴趣的组织和器官选择性地与相应受体结合,从而达到局部靶向治疗的目的。心血管疾病的防治虽已取得重大进展,但是仍有许多病人未得到安全,高效的治疗,如何改善这些病人局部心肌缺血的状况引起广泛关注。超声微泡介导靶向基因治疗的研究取得了很大进展,在心血管疾病中的应用也显示了很大的潜力,现就研究现状作一综述。     

超声微泡介导靶向传输基因及其在心血管疾病中的应用

超声造影剂的临床应用已经在诊断超声心动图中被证实。近年来，随着超声造影剂不断发展，人们又着眼于将特异性配体连接到造影剂微泡表面使它到达感兴趣的组织和器官选择性地与相应受体结合，从而达到局部靶向治疗的目的。心血管疾病的防治虽已取得重大进展，但是仍有许多病人未得到安全，高效的治疗，如何改善这些病人局部心肌缺血的状况引起广泛关注。超声微泡介导靶向基因治疗的研究取得了很大进展，在心血管疾病中的应用也显示了很大的潜力，现就研究现状作一综述。     

超声检查在肾脏疾病诊断中的应用和体会

我科从1986年开始应用超声造影诊断某些肾脏疾病，获得了一些经验，供读者参考。急性肾功能衰竭（ARF）二维声像图多数ARF患者肾脏体积不同程度增大，尤其前后径和左右径更明显（肾冠状位的纵切和横切）；肾实质增厚、回声增强或减低；肾锥体增大，回声明显减低；肾皮质和肾窦的分界清楚，压迹明显。     

超声微泡造影剂的安全性研究

超声造影能显著提高临床诊断能力,有广阔的应用前景。美国FDA在2007年对超声微泡造影剂提出黑框警告,促使人们深入探讨造影剂的安全问题。最新的大量临床研究显示,超声造影剂的严重不良事件发生率很低,总体上很安全,检查过程中发生死亡的个别病例均有严重基础心血管疾病,其死亡可能与超声造影无关。因此,超声图像质量低下的患者可考虑左心超声造影,获益远超过风险。     

超声微泡在治疗中的应用

近年来,有关超声造影剂靶向运载药物的研究日益增多.通过调整微泡本身的特性,可将药物或治疗性基因整合于微泡中,同时将高度特异的抗体或其他配体连接于微泡表面.经静脉注入携药的微泡后,用超声照射特定的部位,即可实现药物或治疗性基因的定向释放.本文着重介绍了超声微泡药物运载系统在基因治疗,溶栓治疗和抗肿瘤治疗方面的应用.     

体内心肌基因转染技术的研究进展

心力衰竭是各种心血管疾病的终末阶段,至今死亡率仍居高不下。近年来心力衰竭的基因治疗取得了很大的进步,有望成为心力衰竭新的治疗途径。然而,潜在治疗靶基因的选择、向大动物模型的过渡以及提高病毒转染技术的效率仍是目前难以克服的困难。本文仅就目前体内心肌基因转染技术的进展作一综述。     

反义寡核苷酸并超声微泡造影剂转染联合超声照射逆转肝癌多药耐药

目的探讨体内、体外mdr1、mrp、lrp反义寡核苷酸(AODNs)并超声微泡造影剂转染联合低强度超声照射逆转肝癌多药耐药的可行性,寻找逆转肿瘤多药耐药有效和靶向的方法。方法利用超声微泡造影剂包载肿瘤耐药基因mdr1、mrp、lrp的AODNs进行转染,联合低强度超声照射,以肝癌细胞多药耐药细胞模型(HepG2／ADM) 为研究对象,通过逆转录聚合酶链反应、western blot和四甲基偶氮唑盐法,从体外细胞培养及动物实验,研究 AODNs并超声微泡造影剂转染联合超声照射逆转癌细胞多药耐药及降低肿瘤恶性表型和成瘤能力的作用。结果 HepG2／AMD细胞增殖被抑制,其mdr1和mrp的mRNA、蛋白质表达水平明显降低;裸鼠皮下移植瘤生长受抑制。结论体外、体内AODNs并超声微泡造影剂转染联合低强度超声照射能有效逆转人肝癌细胞HepG2／ADM的多药耐药, 该技术可能为肝癌临床治疗提供新的思路。     

甲状腺癌细胞系方波电脉冲基因转染条件的探讨

目的：探讨方波脉冲基因电转染对人甲状腺癌细胞系的转染条件和效果。方法：选用pEGFP-Cl作为外源基因与方波电脉冲相结合，以人甲状腺癌细胞系TA-K为导入对象，探讨方波脉冲基因电转染对人甲状腺癌细胞系转染的脉冲幅度，脉冲时值，脉冲次数和反应体系大小。结果：当脉冲幅度在60V／mm时，开始出现阳性细胞，脉冲时值20ms时，基因转染效率可高达35％，细胞生存分数55％，脉冲时值20ms、次数1次转染效率高、细胞死亡率低。200μl混合液电转染后观察，对细胞生存影响不大。结论：脉冲幅度在60V／mm，脉冲时值20ms，脉冲次数1次，反应体系200μl，可以为人甲状腺癌细胞系的转染提供良好效果。     

超声微泡在治疗中的应用

近年来，有关超声造影剂靶向运载药物的研究日益增多。通过调整微泡本身的特性，可将药物或治疗性基因整合于微泡中，同时将高度特异的抗体或其他配体连接于微泡表面。经静脉注入携药的微泡后，用超声照射特定的部位，即可实现药物或治疗性基因的定向释放。本文着重介绍了超声微泡药物运载系统在基因治疗，溶栓治疗和抗肿瘤治疗方面的应用。     

重组大鼠pAT153+IGF-1基因单独转染及其与pcDNA3+TGF-β1基因共同转染兔软骨细胞的实验研究

目的通过对比重组大鼠胰岛素样生长因子l基因(pAT153+IGF-1)单独转染及其与重组大鼠转化生长因子β1基因(pcDNA3+TGF-β1)共转染兔软骨细胞后细胞增生及TGF-β1因子、IGF-1因子、Ⅱ型胶原含量的变化,探讨pAT153+IGF-1、pcDNA3+TGF-β1转染对兔软骨细胞分裂增生及分泌合成功能的影响,为将来可能的骨关节炎(OA)基因治疗提供理论基础.方法提取重组大鼠基因pAT153+IGF-1和pcDNA3+TGF-β1,将体外培养的兔膝关节软骨细胞分别用pAT153+IGF-1单转染、pAT153+IGF-1和pcDNA3+TGF-β1共转染,筛选阳性克隆后,对软骨细胞及其所分泌的TGF-β1、IGF-1、Ⅱ型胶原进行原位杂交、免疫组织化学、免疫荧光检测、流式细胞仪检测、3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)检测.结果基因转染组与空白组相比,TGF-β1、IGF-1、Ⅱ型胶原的含量均明显提高,DNA合成记数及细胞周期S期的比例也明显高于空白组(P＜0.05);基因共转染组的上述指标较pAT153+IGF-1单转染组高,差异有显著性(P＜0.05).结论基因pAT153+IGF-1、pcDNA3+TGF-β1转染软骨细胞后,TGF-β1、IGF-1及Ⅱ型胶原含量显著增高,细胞增生及细胞数量明显增多,上述基因转染有助于软骨细胞活力的提高;pAT153+IGF-1和pcDNA3+TGF-β1双基因共转染兔软骨细胞后对软骨细胞分裂增生及分泌合成的促进优于pAT153+IGF-1单基因转染.     

非离子型造影剂与离子型造影剂在肝脏肿瘤CT扫描中的应用比较

目的探讨非离子型造影剂与离子型造影剂在肝脏肿瘤CT扫描中的应用。方法选取行CT扫描的肝脏肿瘤患者90例,根据使用造影剂的不同分为两组。对照组予离子型造影剂,实验组予以非离子型造影剂,扫描后比较两组患者的扫描效果、不良反应情况以及造影后肾功能。结果与对照组相比较,实验组的扫描效果更显著(P0.05),不良反应降低(P0.05),造影后2、7 d的肾功能影响较低(P0.05)。结论非离子型造影剂较离子型造影剂在肝脏肿瘤的扫描效果更显著,不良反应发生率低,且对患者的肾功能损伤小,值得临床推广。     

PUMA基因转染对胰腺癌细胞生长的影响

目的探讨PUMA基因转染抑制胰腺肿瘤生长的体内外效果。方法利用脂质体转染法将表达PUMA的质粒转染导入胰腺癌细胞株PC-3中,G418筛选出阳性克隆,Western和RT-PCR法检测PUMA转染后PC-3PUMA的表达,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率;分别将转染PUMA的PC-3细胞(实验组)和未转染的PC-3细胞移植到裸鼠体内,比较裸鼠移植肿瘤的大小和重量以及PUMA表达。结果PUMA表达质粒转染的PC-3细胞(PC-3/PUMA)稳定表达PUMA,其细胞凋亡率为(5.50±0.90)%,明显高于未转染组的(1.073±0.248)%和空载体转染组的(1.08±0.35)%(P<0.05);裸鼠接种4周后PC-3/PUMA细胞成瘤率为70%,PC-3细胞和空载体PC-3细胞成瘤率为100%(P>0.05),PC-3/PUMA细胞形成的肿瘤体积比PC-3细胞和空载体PC-3细胞明显减小(P<0.05),并且形成的肿瘤组织中PUMA高表达。结论胰腺癌细胞中缺失PUMA基因表达,PUMA转染胰腺癌细胞后表达PUMA,并能促进细胞凋亡。     

骨髓干细胞介导的人肝细胞生长因子基因转染在兔心肌梗死组织中的表达

目的:观察以骨髓干细胞(BMSCs)介导的人肝细胞生长因子(hHGF)基因转染在兔心肌梗死组织中能否稳定表达.方法:家兔16只,复制急性心肌梗死(AMI)模型.随机分为2组:移植组:BMSCs加hHGF移植,对照组.另外随机选取8只兔作为假手术组.AMI术后3 d,抽取股骨骨髓1.5 ml,分离BMSCs培养.于对数生长期加入5-溴脱氧尿苷孵育24 h,以标记移植细胞.构建pcDNA3.1-hHGF重组表达载体,移植前用脂质体包裹表达载体转染BMSCs,孵育24 h.AMI术后14 d,行自体细胞移植,对照组接受等量的无血清培养基注射,假手术组只开胸,不注射.细胞移植后28 d,检测左心室血流动力学指标;取心肌组织,RT-PCR检测hHGFmRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测定心肌组织中HGF的含量.结果:与假手术组比较,心肌梗死后28d,对照组左心室功能降低,但BMSCs加hHGF组左心心室功能有改善;RT-PCR结果显示移植组有hHGFmRNA表达,ELISA测定HGF含量移植组高于对照组.结论:AMI组织中HGF含量降低,转染HGF的BMSCs能在AMI组织中生存并能表达分泌HGF,其左心室功能有改善.     

抗氧化酶基因转染治疗心血管疾病的研究进展

<正>氧化应激损伤是多种心血管疾病的主要发病机制,运用抗氧化剂或氧自由基清除剂的抗氧化应激作用能够预防和治疗多种心血管疾病。随着基因技术的发展,理论上通过抗氧化剂基因转染高表达抗氧化剂产物来清除氧自由基可能会取得更优越的效果,且这种方法已在多种动物模型中实验     

WWOX基因转染抑瘤效应的实验研究

目的建立肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体，观察其瞬时转染对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法，从正常人胚肾细胞HEK-293中钓取WWOX基因，将其克隆至pMD18-T载体上，测序正确后克隆到真核表达载体pcDNA4／myc-His中；采用脂质体介导法体外瞬时转染人肺腺癌A549细胞；RT—PCR法和Western印迹法分别检测WWOX基因mRNA和蛋白表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡率；克隆形成试验观察肿瘤细胞克隆形成能力的变化。结果成功构建了WWOX的真核表达载体，体外转染的A549细胞凋亡率明显高于未转染和空载体转染细胞，且细胞克隆形成能力下降，形成率为35．43％，明显低于未转染细胞和空载体转染细胞。结论所构建的pcDNA4／myc-WWOX真核表达载体转染肿瘤细胞能够抑制肿瘤生长并诱导细胞凋亡。     

声学造影剂历史和现状

本文就声学造影剂研究及现状进行了回顾性综述。