中国人群ABO血型系统基因分型研究与应用

背景ABO血型是输血医学中最重要的血型系统,血型血清学定型技术具有简单实用的特点已广泛应用于ABO血型中的鉴定中,但是血清学试验存在局限性,而基因技术在某种程度上克服了血清学试验的缺点.目的研究中国人群ABO基因多态性,并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题.设计随机选取样品,与常规血型血清学结果相比较,分析基因型结果.单位一所市级血液中心输血医学研究所.对象选择2002-03/2002-12在深圳市血液中心参加捐血的无血缘关系的中国汉族无偿献血者个体260人为研究对象,其中男110人,女150人,年龄18～50岁.1例血清学技术正反定型不符的标本来自本血液中心并调查其家系,6例血清学疑为A2型的标本来自第二人民医院等4个本市医院输血科.方法快速盐析法提取外周血中的DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性引物基因方法对ABO血型定型,并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用聚合酶链反应-序列特异性引物法扩增ABO血型的等位基因.主要观察指标260人份样品ABO血型系统的基因型及疑难血型样品的血清型与基因型.结果在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(260人)中,检出O1,B,A1O1(A467C)和A1O2/1O3(A467T)4种等位基因,其基因频率分别为0.582 7,0.184 6,0.009 6,0.223 1.在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中,只有2例基因分型确定为A2O1O1,其余均为A1O2/A1O3O1型,在一家系疑难血型鉴定中,兄弟3人均为类孟买型,ABO基因分型分别为A1O2B,A1O2B,A1O2O1.结论ABO聚合酶链反应-序列特异性引物基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,可以弥补血型血清学鉴定方法的不足.     

疑难ABO血型标本的表型与相应等位基因的检测

目的探讨分析疑难ABO血型标本与其等位基因的检测,为临床遇到的疑难ABO血型标本提供可靠的血型鉴定方法。方法选取2013年8月到2014年8月期间在笔者就职医院各科室送检的临床病人血液样本9例,首先按照常规血型检测技术进行ABO血型血清学试验,确定ABO正反定型,再采用盐酸胍/蛋白酶K裂解提取法对ETDA抗凝处理后的静脉外周血进行DNA提取,再使用聚合酶链反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)对9例血样进行ABO血型基因分型检测。结果 9例临床病人血清学表型为:AxB 2例、AB亚1例、A亚B亚1例,Ax 2例,B亚3例,9例患者基因型分别为为:A/B 4例,A/O 2例,B/O 3例,通过PCR-SSP检测所得基因型与血清学表型结果相一致。结论利用聚合酶链反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)对血清学方法鉴定ABO血型结果为正反不定型的疑难血型标本进行基因型检测,能准确地确定患者的血型抗原,为临床疑难ABO血型患者制定安全有效的用血方案提供保障。     

中国汉族人群ABO血型系统基因分型研究与应用

目的研究中国汉族人群ABO基因多态性,并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题.方法快速盐析法提取外周血中的DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)基因方法对ABO血型定型,并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用PCR-SSP法扩增疑难ABO血型的等位基因.结果在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(260人)中,检出O1、B、A101(A267c)和A102/103(A467r)四种等位基因,其基因频率分别为0.5827、0.1846、0.0096、0.2231.在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中,只有2例基因分型确定为A201O1,其余均为A102/A103O1型,在一家系疑难血型鉴定中,兄弟三人均为类孟买型,ABO基因分型分别为A102B、A102B、A102O1.结论ABO RCR-SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,与血型血清学相比有着显著优势.研究发现中国汉族人群A2等位基因构成与国际报道的基因构成存在差异.     

血型血清学和PCR-SSP方法在ABO疑难血型鉴定中的互补性应用

目的探讨血型血清学技术和聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法在ABO疑难血型鉴定中的互补性应用。方法采用血型血清学方法对14例ABO疑难血型标本做正反定型(必要时进一步做吸收放散试验),同时采用PCR-SSP方法对其做ABO基因分型。结果 14例ABO疑难血型标本的血清学检测:Bx型3例,B(A)、AB3型各2例,Bend、B3、AxB、ABx和Bel型各1例;另有2例为AB型伴抗原减弱(不排除疾病等因素影响)。PCR-SSP方法分型:得到7例ABO亚型基因,分别为Bx02O01、B(A)02O02、AB305、AB303、ABw12、Bw12O02和Bw12O01;7例正常的ABO基因,AB1、B1O01各3例,B1O02型1例。结论 PCR-SSP方法在疑难血型鉴定中的应用有助于输血前检查中ABO血型血清学结果的补充。     

幼儿罕见Ax14亚型血清学及基因检测结果分析

目的对ABO正反定型不符的幼儿标本进行血清学鉴定和基因检测分析。方法常规血清学检测,PCR-SSP进行ABO基因初步分型,再使用ABO血型-A亚型基因分型试剂盒进行A亚型分型鉴定。结果血清学结果显示标本正定型为A型(抗A:1+~W),反定为O型(Ac2+,Bc4+);PCR-SSP A亚型分型鉴定结果显示标本基因型为Ax14/O2型。结论疑难血型鉴定有时需要结合血清学和分子生物学方法才能准确定型,此例血清学正反定型不符标本表型为Ax,其基因型为Ax14/O2。     

中国汉族人群ABO血型系统基因分型研究与应用

目的 研究中国汉族人群ABO基因多态性，并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题：方法 快速盐析法提取外周血中的DNA，采用聚合酶链反应—序列特异性引物(PCR—SSP)基因方法对ABO血型定型，并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上，用PCR—SSP法扩增疑难ABO血型的等位基因：结果 在中国汉族符合Hardy—Weeinberg平衡的随机群体(260人)中，检出O1、B、A101(A267c)和A102／103(A467r)四种等位基因，其基因频率分别为、0.5827,0．1．846、0.0096、0.2231：在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中，只有2例基因分型确定为A201O1，其余均为A102／A103O1型，在一家系疑难血型鉴定中，兄弟三人均为类孟买型，ABO基因分型分别为A102B、A102B、A102O1.结论 ABO RCR—SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术，与血型血清学相比有着显著优势：研究发现中国汉族人群A2等位基因构成与国际报道的基因构成存在差异。     

PCR-SSP基因分型技术在ABO疑难血型定型中的应用

目的 研究聚合酶链式反应-特异性序列引物(PC-SSP)基因分型技术在ABO疑难血型鉴定中的应用.方法 收集8例来自广东省肇庆市无偿献血者的ABO疑难血型样本,采用正反定型实验、吸收放散试验等一系列血型血清学方法进行检测;提取基因组DNA,并用PCR-SSP基因分型技术,特异性扩增ABO基因片段,根据有无PCR产物以及产物长度,判断样本的基因型.结果 通过凝胶电泳检测PCR反应的特异性产物,判断样本1～6号ABO基因型为A/O型,样本7,8号为B/O型.8例疑难ABO基因分型结果与其血型的血清学分型结果吻合.结论 ABO疑难血型定型的解决是一个复杂的难题,而PCR-SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,对于解决ABO疑难血型鉴定非常有用.     

基因分型技术在肿瘤患者ABO疑难血型鉴定中的应用

目的探讨基因分型技术辅助肿瘤患者ABO疑难血型的鉴定以有效避免疾病干扰。方法采用血清学方法与序列特异性引物-聚合酶链式反应(PCR-SSP)法、基因测序技术,对于20例ABO血型正反定型不符的肿瘤患者(其中10名为血液系统恶性肿瘤患者)疑难标本做鉴定;同时对这些患者的输血效果做回顾性分析。结果本组肿瘤患者的疑难血型标本中,25%(5/20)为A和(或)B抗原减弱,原发病分别为2例MDS、1例前列腺癌,2例AL;45%(9/20)A或B抗体减弱,分别为4例原发病为MM、1例WM、1例AGL、1例肝癌、1例右半结肠癌、1例食管癌;30%(6/20)为ABO亚型:1例Bel09/O02、1例B(A)04/O2、1例B(A)02/B、2例Bel03/O;1例为新的A亚型等位基因:测序结果为797位置发生突变,根据其他位点的突变判断具有A102/O01特点。基因型和血清学表型结果一致率75%(15/20)。60%(12/20)患者接受过输血治疗,均未发生溶血性输血反应,75%(9/12)患者达到了预期输血疗效。结论基因分型技术结合血清学方法应用于肿瘤患者ABO疑难血型鉴定结果准确,且可正确区分血型抗原抗体减弱或亚型。疾病导致ABO抗原抗体减弱的患者输血时可同型输血。     

ABO疑难血型的基因型鉴定与序列分析

目的 研究20例ABO疑难血型标本的基因型并鉴定其分子生物学特性。方法 应用标准血型血清学鉴定技术分析标本的血清学表型。应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增标本ABO基因7个外显子，对PCR产物进行直接测序，分析ABO疑难血型的基因分型和序列。结果 20例ABO疑难血型标本的血清学表型分别为：A抗原减弱5例、A抗原减弱合并抗-A15例、A抗原正常合并抗-A12例、B抗原减弱8例，基因型分别为：Ax02/O01 3例、Ael07/O01 2例、B313/O01 2例、A204/O02、A220/O01、Ael07/O02、Ael02/O01、Ael02/O02、Ax03/O01、Ax03/O02、B313/O02、B302/O01、B302/O02、Bw19/O02、A102/B313、A101/Bw37各1例。结论 ABO基因分型技术可精准鉴定疑难标本的血型，提供明确的血型遗传学信息，保障临床用血安全。     

Ael亚型血清学及基因型分析一例

目的对本血站正反定型不符的1例献血者标本进行血清学疑难血型鉴定和分子生物学机制分析。方法常规血清学检测;PCR-SSP做ABO基因初步分型,并直接测序;单克隆测序检测标本DNA序列的单体型。结果血清学结果显示标本正定型为O型,反定为A型;PCR-SSP结果显示标本基因型为O1/A型;直接测序和单体型测序结果显示标本基因型为Ael05/O102。结论疑难血型鉴定有时需要结合血清学和分子生物学方法才能准确定型,此例血清学正反定型不符标本表型为Ael,其基因型为Ael05/O102。     

基因分型结合血清学方法鉴定ABO血型亚型

目的准确鉴定红细胞ABO亚型。方法采用血清学方法鉴定12例ABO血型正反定型不符标本,结合PCR-SSP基因定型方法作检测鉴定,并对其中9例作基因测序确定基因型。结果 ABO基因分型结果与血型血清检测结果一致率为66.67%(8/12);其余不相符的4例:2例为B(A),1例为Cis AB,1例为新基因(新基因血型血清学结果不确定,PCR-SSP结果为A1/O02,测序结果为A102/O02型)。结论 ABO血型基因分型技术结合血清学定型可用于ABO亚型鉴定及ABO血型的正确定型。     

新生儿脐血AB0血型鉴定结果质量控制方法探讨

本研究探讨一种新生儿脐带血ABO血型鉴定的质量控制方法。采用血型血清学试验对脐血标本作ABO血型鉴定,对不能定出结果的疑难血型采用聚合酶链反应-序列特异性引物（Sequence Specific Primer PCR,PCR—SSP）作进一步确认。结果表明：在76120例脐血AB0血型正定型鉴定中,检出78例ABO血型弱抗原反应和难以判定血型结果的疑难标本（1％。）,经复查排除了弱凝集反应30例。检测260例脐血ABO血型反定型,相符血型148例（56．92％）,不相符血型112例（43．08％）。PCR—SSP基因分型检测58例中45例血清学表型结果与基因分型结果一致,3例表型结果与基因定型结果不相符,10例正反定型不相符标本,基因分型结果与正定型完全一致。结论：采用红细胞抗原（正定型）方法结合DNA基因分型技术检测新生儿脐带血抗原反应弱、抗体效价低的ABO血型质控效果好,是一种高效、灵敏的质量控制方法,适用于新生儿脐血AB0疑难血型的鉴定。     

罕见B(A)血型的鉴定

目的观察2例罕见B(A)血型的血清学特征并研究其分子机制。方法用血型血清学鉴定2例献血者标本ABO血型,用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)基因分型和直接测序确定其基因型。结果 2例献血者血型血清学检测结果均表现为B(A)亚型的特点。标本1基因分型为BO2,测序结果为第7外显子B基因发生640AG突变,符合B(A)04/O02的基因型特点;标本2基因分型为BO1,测序结果为第7外显子B基因发生700CG突变,符合B(A)02/O01的基因型特点。结论2例标本均为B(A)表现型,基因型分别为B(A)04/O02和B(A)02/O01。     

聚合酶链式反应-特异性序列引物基因定型在新生儿溶血病ABO血型定型中的应用

目的研究聚合酶链式反应-特异性序列引物(PCR-SSP)基因定型在新生儿溶血病(CHDN)ABO血型定型中的应用。方法收集20例来自广东省肇庆市第一人民医院新生儿溶血病(HDN)的样本,对这些样本进行ABO血型鉴定等一系列血型血清学方法进行检测,然后用PCR-SSP基因定型技术进行样本的基因分型。结果与其血型的血清学分型结果进行比较,新生儿溶血病ABO血型的定型是新生儿输血的必要保障,而PCR-SSP基因分型较血型血清学方法更快捷、准确。结论 PCR-SSP基因正型技术将不再局限于疑难血型的鉴定中,并会越来越多地应用于HDN的鉴定中。     

对1例罕见CisAB01/B血型的基因学研究

目的 探讨ABO血型系统中血型血清学定型正反定不一致的情况下,采用PCR-SSP技术与ABO基因测序技术对CisAB血型进行直接鉴定.方法 采用常规血型血清学技术检测ABO血型,采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法进行CisAB血型的基因鉴定,然后经核酸测序分析其ABO基因EXON6,EXON7序列及突变位点.结果 血型血清学鉴定表明患者血型为A亚B,用PCR-SSP基因分型确定为CisAB01/B,其ABO位点的第6、第7外显子序列分析发现该标本EXON6测序结果2条等位基因261没出现碱基G缺失,说明不存在0基因,出现的有:297G/A.EXON7测序结果467C ＞T;803G＞C结果鉴定是CisAB01;526C＞ G;657C＞ T;703G＞ A796C＞A;803G＞C,930G＞A结果鉴定是B101.结论 基因学鉴定可对血清学试验结果进行确认.     

CisAB血型的血清学鉴定及分子遗传学研究——附1例报告

目的通过分子生物学方法鉴定1例罕见的CisAB血型,并调查其家系,以期探讨稀有血型CisAB的血清学特点,遗传学特性和输血策略。方法采用血型血清学方法筛查该家系3代共6例标本的血型,运用聚合酶链式反应序列特异性引物(PCR-SSP)法进行基因定型,采用ABO基因直接测序的方法作DNA序列的分析。结果血型血清学检测发现6名家系成员中,正反定型不相符3例:先证者表型为A_2B_x,其母亲为A_2B,其胎血为AB型;基因型分型结果分别为CisAB01/O01,CisAB01/B101,CisAB01/O01。DNA序列分析:CisAB01/O01第6外显子261缺失G,第7外显子467C>T、803G>C;CisAB01/B101第6外显子297A>G,第7外显子467C>T、796C>A、803G>C。结论对ABO血型血清学正反定型不符的标本,可以用家系调查和分子生物学方法进行辅助验证,基因测序更能准确确定患者的血型。     

肿瘤患者疑难血型鉴定和基因分型的相关探讨

血液病和恶性肿瘤的部分患者,尤其是白血病和多发性骨髓瘤患者,常因病情及治疗导致ABO血型正反定型不符,表现为ABO血型的抗原或抗体减弱。本研究分析正反定型不一致的原因,进行正确的红细胞分型和基因分型,对12份肿瘤患者正反定型不一致血液样本进行的血型血清学试验和吸收放散试验。对存在疑问的标本进行PCR扩增第6、7外显子和5-7内含子,对外显子序列进行基因测序。结果表明,9例标本通过血型血清学、吸收放散定型,6例为A型,2例为O型,1例为B型;3例血型血清学和吸收放散无法鉴定其血型的标本,经测序分别定型为O46,B108和A102型,其中有2例因为PCR扩增效果差或者测序结果矛盾,未能给出ABO基因型。结论：对ABO血型正反定型不一致无法定型的肿瘤患者的血液样本,可以采用血型血清血方法、基因分型及吸收放散的方法正确鉴定ABO血型,以保证输血的安全性和有效性。     

A_(205)B亚型伴抗-A_1抗体致配血不合1例

<正>输血已成为临床治疗疾病的重要手段,特别适用于急慢性出血性疾病、外伤出血等疾病的治疗。输血具有风险性,ABO错型输注会引起严重的溶血性输血反应,所以输血前进行正确的ABO血型定型是保证临床输血安全的重要手段[1]。作者在工作中发现1例交叉配血不合的患者血液标本,经血清学检查发现其血型正反定型不符合一般的血型表型规律。因此采用聚合酶链反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)基因分型技术     

ABO血型基因变异体引起正反定型不合1例

目的采用分子生物学技术分析ABO血型鉴定正反定型不合1例,为保障患者的输血安全提供依据。方法 ABO血型血清学鉴定采用微柱凝胶法。提取全血DNA,用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)进行ABO基因分型;用PCR法扩增ABO基因1~7号外显子进行直接测序,测序结果与A101序列进行比较。结果患者血型表现为正反定型不符,正向鉴定为O型,反向鉴定仅发现有抗-B凝集素,结果为A型。患者红细胞和抗-AB单克隆抗体有微弱的凝集。ABO PCRSSP基因分型表明患者为杂合O1/A基因型,进一步对外显子扩增测序发现ABO第6外显子存在248AG误义突变,导致糖基转移酶83位天冬氨酸被甘氨酸替代(Asp83Gly)。用自行设计的引物采用PCR-SSP法对350例献血者进行248AG突变频率调查,未发现阳性。结论 ABO基因248AG变异体和缺乏抗-A凝集素以及A抗原极低水平表达相关。     

ABO血型正反定型不一致原因分析及对策探讨

目的探讨ABO血型定型中正反定型不一致的原因和解决方法。方法对正反定型不一致血液标本进行不同的血型血清学试验,对存在疑问的标本进行基因分型、测序,分析正反定型不一致的原因,进行正确的红细胞分型。结果共检查ABO血型正反定型不一致标本45例,其中冷自身抗体5例、亚型11例、抗体缺失及减少7例、抗原性减弱10例、因输血或妊娠发生同种抗体5例,自身免疫性贫血7例。对其中9例血型血清学难鉴定标本和亚型标本进行PCR扩增,测序,确定其基因型。结论对ABO血型正反定型不一致无法定型的血液标本,可以采用基因分型及其他辅助手段正确鉴定ABO血型,以保证输血安全性和有效性。