小鼠颈部异位心脏移植模型的初步探索

目的 探讨初学者使用袖套法建立小鼠颈部异位心脏移植模型的技术要点与难点。方法 第1阶段选用C57BL/6小鼠随机分为供、受体,完成手术建模。术后供心复跳,小鼠活动正常,持续3天以上视为手术成功,3天内供心停跳或小鼠死亡视为手术失败,记录失败原因。第2阶段分为同系组(C57BL/6小鼠为供、受体)与模型组(BALB/c小鼠为供体、C57BL/6小鼠为受体),术后每天观察供心活动状态记录移植物存活时间(n=9);术后第7天移植心脏取材固定,HE染色,记录供心排斥反应病理分级(n=9)。结果 第1阶段解决了麻醉意外、手术操作不当、血管套管外翻失败、供心结扎口出血、静脉连接处淤血、环境温度过低和术后感染等问题后成功建模;第2阶段模型组较同系组移植物生存期明显缩短(P<0.01),排斥反应病理分级显著升高(P<0.01),模型组移植物心肌细胞损伤、间质水肿、出血,大量炎性细胞浸润,呈中到重度急性排斥反应表现。结论 使用袖套法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,省去了血管吻合这一技术难点,大大降低手术难度,其中0.4mm×0.5mm、0.8mm×1.0mm套管的选用值得推广与学习。     

CVF联合小剂量CsA对大鼠同种异体心脏移植急性排斥反应的影响

目的 探讨小剂量环孢素A(cyclosporine,CsA)联合眼镜蛇毒因子(cobra venom factor,CVF)对大鼠同种异体心脏移植急性排斥反应的影响.方法 采用改良Ono's 方法建立大鼠心脏移植排斥反应动物模型,将实验动物分为5组,每组9 只.A 组:对照组;B 组:半量CsA组;C 组 :全量CsA组;D组:CVF组;E组:半量CsA联合CVF组.分别在1、3、5、7 d从各组中取1只处死,其余5只观察移植心脏存活天数,应用HE染色进行供心排斥反应病理分级,免疫组织化学检查CD3 、CD4 、CD8 T淋巴细胞浸润情况,RT-PCR法检测供心IL-2、IL-10 mRNA表达水平.结果 A、B、C、D和E组大鼠移植心脏存活时间分别为(7.88±0.99)、(14.94±1.43)、(20.76±0.94)、(14.96±2.29)d和(31.10±3.36) d,与A组相比,各治疗组大鼠心脏存活时间均明显延长(P＜0.01),E组移植心脏存活时间较B、C、D组明显延长(P＜0.01).各实验组免疫排斥发生时间延后,排斥反应分级减轻,CD3 、CD4 、CD8 T淋巴细胞浸润减少,尤其C、E两组明显(P＜0.01).A与D组IL-2 、IL-10 mRNA含量无明显差异(P＞0.05),E组与B、C组比较,IL-2 、IL-10 mRNA含量也无明显差异(P＞0.05).结论 CsA和CVF在抗急性排斥反应上具有协同效应,小剂量CsA联合使用 CVF 能增强抗排斥反应疗效,优于大剂量CsA单用组,CVF能单独或者协同CsA抑制T细胞的浸润,但CVF对排斥相关细胞因子的分泌无明显作用,也不加强CsA抑制细胞因子分泌的效应,其抗排斥反应的机制还需进一步探讨.     

同种小鼠颈部异位心脏移植模型的建立与观察

目的:建立简便易行的同种小鼠颈部异位心脏移植模型,探讨小鼠颈部异位心脏移植模型的建立与手术方式的改进。方法 在显微镜和低温条件下切取供心;分离受体右侧的颈外静脉及颈总动脉。采用供心主动脉与受体颈总动脉侧壁长度相近的切口行端一侧间断缝合,供心肺动脉与受体颈外静脉后壁连续缝合、前壁间断缝合的吻合方法进行小鼠颈部异位心脏移植。术后通过触摸检测供心动跳,供心心跳停止时切取供心,病理学检查确定排斥情况。结果:应用该方法进行移植模型40次,成功36次,成功率达90％,平均存活8.75天。结论:这种移植术式降低了手术难度,易于暴露,手术时间短,创伤小、污染少,观察方便,成功率高,是一种简单、实用的方法。     

供体特异输注对同种异体小鼠心脏移植生存期的影响

目的：探讨供体特异输注（ＤＳＴ）对同种异体小鼠心脏移植生存期的影响。方法：实验共分５组：ＰＢＳ组、环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）组、ＣｓＡ组／全血组、ＣｓＡ／红细胞组、ＣｓＡ／周围淋巴细胞组，比较各组生存时间，心肌病理改变。结果：术前１天应用ＤＳＴ与低剂量ＣｓＡ具有协同作用。ＤＳＴ对同种异体小鼠心脏移植生存期影响中，以淋巴细胞作为特异输注效果最佳。结论：本实验研究为ＤＳＴ的临床应用提供了基础     

两种小鼠异位心脏移植模型的复制及比较

目的 :研究两种小鼠心脏移植模型的优缺点 ,为不同实验中选择术式提供依据。　方法 :应用放大 16倍的显微镜和显微外科手术器械 ,单人操作完成同品系或者同种异体小鼠腹部和颈部异位心脏移植两种术式 ,比较手术成功率、手术时间以及移植心脏存活时间。　结果 :腹部和颈部异位心脏移植手术成功率分别为 85 %和 6 0 % ,前者失败原因主要为出血 ,后者主要为吻合口狭窄。两种术式同种异体移植心脏存活时间无明显差异〔(7.6±0 .9)天vs(7.5± 1.0 )天 ,P >0 .0 5〕 ,二者均明显短于同系移植心脏存活时间 (平均 >10 0天 ) ;两种术式手术时间存在明显差异 ,颈部异位心脏移植术的受者准备、动脉和静脉吻合以及总手术时间上均比腹部异位心脏移植短。结论 :应根据实验需要选择 ,如注重手术成功率时 ,应选择腹部异位心脏移植 ;注重缩短手术时间时则应选用颈部异位心脏移植。     

小鼠腹部异位心脏移植模型的建立与改进

【】目的 建立并改进小鼠腹部异位心脏移植模型,为研究器官移植免疫学提供支持。方法 结合国内外文献报道的手术方法,将供者心脏的升主动脉和肺动脉分别与受者腹主动脉和下腔静脉行端侧吻合,建立小鼠异位心脏移植模型,并在传统方法的基础上对受体准备和供体心脏摘取、修整以及血管吻合技术加以改良,观察改进后的手术效果并分析其优势。结果 预实验完成50对。正式实验同系间移植完成20对,成功17对,成功率为85%。同种间移植完成15对,成功13对,成功率为86.7%。模型总成功率为85.7%。受体血管吻合前准备时间平均为11.2 ± 2.5分钟,供体心脏摘取、修整时间平均为13.6 ± 3.3分钟,供、受体血管吻合时间平均为21.7 ± 3.5分钟。改良后的心脏移植模型简化了手术操作,降低了手术难度。结论 改进的小鼠腹部异位心脏移植模型具有简便、成功率高等优势,为进一步进行移植免疫学研究奠定基础。     

小鼠颈部异位心脏移植模型的改进

0 引言随着移植免疫研究对供、受体间种系纯化程度要求的日益提高,小鼠正成为器官移植的理想动物. 我们在成功建立大鼠腹部、颈部异位心脏移植模型的基础上,对已建立的小鼠颈部心脏移植模型加以改进[1,2].     

同种异体原位肝移植中免疫抑制剂的应用(附1例报告)

目的 探讨肝移植术中免疫抑制剂的应用。方法 对1例肝炎后肝硬化、肝功能失代偿患者，施行同种异体转流式经典原位肝移植术。对其免疫抑制剂的应用做一总结。结果 病人经同种异体转流式经典原位肝移植治疗后近10个月，病情稳定，肝功能恢复正常，无排斥反应等并发症。结论 同种异体肝移植是治疗终末期肝病的有效的方法，肝移植术中免疫抑制剂的应用应个体化。     

FTY720预防小鼠同种异体胰岛移植的排斥反应

【目的】探讨FTY720在小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用及其机制。【方法】36只链脲霉素诱导的糖尿病小鼠(C57BL/6)随机分为3组,移植供体(Balb/c小鼠)胰岛后分别连续口服不同剂量的FTY720或双蒸水(对照组),FTY720剂量分别为0.5mg/(kg·d)(F0.5组)和1.0mg/(kg·d)(F1.0组)。术后连续测定血糖,行组织学检查对比淋巴细胞浸润程度,比较各组移植物中位存活时间(MST)。观察各组用药后不同时间外周血和肠系膜淋巴结(MLN)、腋窝淋巴结(ALN)中淋巴细胞数量的变化。【结果】F0.5组(84.5d)、F1.0组(>100d)MST明显长于对照组(10d)(P<0.01),F1.0组MST长于F0.5组(P<0.01)。用药组移植物中淋巴细胞浸润减轻并与剂量相关。F0.5组、F1.0组PBL变化趋势略有不同,分别在用药后8h、10h降至对照组的23.81%和12.59%(P<0.01),之后略有回升并趋于稳定。用药组连续口服FTY7205d后MLN、ALN中淋巴细胞数量明显高于对照组(P<0.05),连用14d后其淋巴细胞数量减少并低于对照组,尤以MLN明显。【结论】连续口服FTY720可有效延长小鼠同种异体胰岛移植物存活时间并呈一定的剂量相关性。FTY720可促进外周血淋巴细胞归巢至肠系膜和外周淋巴结,并诱导组织中淋巴细胞的凋亡,来减轻移植物中淋巴细胞浸润。     

环孢素A转换为雷帕霉素对大鼠移植肾功能和组织学的作用

目的：研究并比较环孢素A（CsA）转换为雷帕霉素（Rapa）与CsA持续使用对大鼠移植肾的长期作用。方法：建立大鼠慢性移植肾肾痛模型并分组：CsA转换为Rapa组（第1组,n=10）、CsA持续使用组（第2组,n=10）、CsA撤离组（第3组,n=8）和控制对照组（第4组,n=8）予以安慰剂至第24周。另6只Lewis→Lewis同系移植作为同系移植组（T组）。每4周查24h尿蛋白定量,24周时处死动物,获取移植肾标本行组织学和免疫组化研究并检测转换生长因子B1和血小板源性生长因子A链的表达。结果：对比控制对照组（第4组）,CsA和Rapa的使用（第1,2,3组）均显著地降低了尿蛋白的排泄量;CsA转换为Rapa（第1组）较CsA的持续使用（第2组）进一步降低了尿蛋白的排泄,在第24周差异有统计学意义（P=0．006）。CsA和Rapa的使用（第1,2,3组）大体保护移植肾组织学破坏;而对比CsA持续使用或撤离（第2、3组）,CsA转换为Rapa（第1组）则进一步地降低了移植肾组织学Banff评分、显著地减少了肾组织中浸润的炎性细胞数、TGF—β1和α-SMA的染色强度以及转换生长因子β1和血小板源性生长因子A链的mRNA的表达量。结论：CsA转换为Rapa减少了移植肾远期尿蛋白的排泄,减缓远期移植肾组织学的损害并下调了纤维相关基因的表达,可能改善临床移植肾的远期成功率。     

围孕期高血清叶酸水平雌性小鼠模型的建立及高血清叶酸水平对胚胎心脏发育的影响

目的 通过高叶酸含量的配方饲料结合血清叶酸检测,建立围孕期高血清叶酸的雌性小鼠模型,并利用该模型开展围孕期增补叶酸导致血清叶酸水平升高及影响后代发育的相关研究。方法 根据普通小鼠饲料中叶酸以及其它营养成分组成,设计了叶酸含量分别为2mg/kg（正常叶酸）和10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg （高叶酸）的配方饲料。30只6周龄雌性BALB/c小鼠随机分成5组（每组6只）,其中1组继续使用普通饲料喂养,其余4 组分别使用不同的配方饲料喂养。为了排除不同个体叶酸生物利用度差异巨大的影响,喂养2周后,根据血清叶酸水平按照以下标准对4组配方饲料喂养的雌鼠进行重新分组：正常血清叶酸组（NF,血清叶酸水平<2000pg/mL）、高血清叶酸组（HF1,2000 pg/mL <血清叶酸水平<3000pg/mL）、超高血清叶酸组（HF2,血清叶酸水平>3000pg/mL）。重新分组后的雌鼠继续使用相应的配方饲料饲养,并与普通饲料喂养的雄鼠合笼,以发现阴道栓当天作为孕 0.5天（E0.5）计算孕龄。手术获取不同孕龄的胎鼠心脏组织样本,通过组织学、免疫组织化学方法,对心脏发育多个重要时间点（E10.5、E11.5、E13.5）胎鼠心脏发育相关指标进行检测。 结果 随着饲料中叶酸含量的增加,不同组小鼠的平均血清叶酸水平呈现逐渐升高的趋势,但是由于同组雌鼠的血清叶酸水平变异巨大,导致不同组间血清叶酸水平的差异并不显著（P=0.163）。重新分组后,相对于NF 组和HF1组,HF2组胎鼠的心脏表现出间叶组织缺乏（E10.5）、心肌细胞数量显著减少且增殖不活跃（E10.5）、心肌壁厚度减少（E11.5）、磷酸化组蛋白H3（PHH3）阳性细胞比率显著降低（E11.5）、背侧间充质突出（DMP）缺失（E13.5）以及右心耳、心室流出道结构异常和原发孔缺损等房室间隔缺损（AVSD）表现（E13.5）。结论 本研究构建围孕期增补叶酸导致高血清叶酸水平小鼠模型的方法有效。利用所构建模型发现围孕期雌性小鼠增补叶酸导致的血清叶酸水平剧烈升高可能与后代心脏发育异常相关。     

Ag43／FGFR-1嵌合蛋白疫苗抗小鼠纤维肉瘤血管生成的实验研究

目的：利用Antigen43（Ag43）／成纤维细胞生长因子I型受体（FGFR一1）重组嵌合蛋白作为疫苗,了解其是否具有抑制小鼠肿瘤生长的作用,并初步探讨其作用机理。方法：40只BALB／c雌性小鼠接种MethA细胞后第7天,随机分为Ag43／FGFR．1蛋白免疫组（AF组）、A酗3蛋白免疫组（Ag43组）、FGFR—1蛋白免疫组（FGFR一1组）和生理盐水对照组（NS组）4组,每组10只,观察免疫治疗后的荷瘤小鼠肿瘤体积和生存曲线,分别用免疫组织化学方法检测肿瘤组织微血管密度（MVD）,免疫印迹（Western blot）方法检测抗自身FGFR—1的抗体,酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测分泌抗自身FGFR-1抗体的B淋巴细胞的数量。结果：Ag43／FGFR-1组与FGFR-1蛋白、A甜3蛋白、生理盐水对照组肿瘤组织MVD计数分别为11．9±2．3、59．6±3．8、60．6±1．2和61．9±3．4（P〈0．01）;与对照组相比,Ag43／FGFR-1组肿瘤体积明显变小（P〈0．01）,存活时间明显延长（P〈0．01）,血清中发现含有抗自身FGFR-1的抗体且发现小鼠脾脏中分泌抗自身FGFR-1抗体的B淋巴细胞数目明显增多（P〈0．01）。结论：Ag43／FGFR-1蛋白质疫苗能够诱导荷瘤鼠产生特异性免疫反应,从而抑制肿瘤血管生成和肿瘤的生长。     

新型气体信号分子硫化氢对左向右分流大鼠一氧化氮/一氧化氮合酶体系的影响

目的探讨内源性硫化氢(H2S)对左向右分流大鼠一氧化氮(NO)/一氧化氮合酶(NOS)体系的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为分流组,分流+炔丙基甘氨酸(PPG)组,假手术组和假手术组+PPG组,每组8只。分流组及分流+PPG组大鼠经腹主动脉-下腔静脉穿刺建立左向右分流动物模型。术后4周,测量大鼠平均肺动脉压(MPAP);测定血浆NO、肺组织H2S、NO含量及NOS活性;用Western印迹方法测定肺组织eNOS含量。结果分流术后4周,分流组与假手术组比较,大鼠MPAP无明显变化;分流组与假手术组比较血浆NO(23·2μmol/L±3·6μmol/Lvs17·9μmol/L±3·4μmol/L,P<0·05)、肺组织H2S(37·6μmol/mg±2·1μmol/mgvs14·4μmol/mg±1·8μmol/mg,P<0·05)、肺组织NO(38·5±6·5μmol/μgvs31·8±6·5μmol/μg,P<0·05)、肺组织NOS活性(15·1U/mg±2·4U/mgvs12·0U/mg±1·4U/mg,P<0·05)及肺组织eNOS含量(0·3±0·1vs0·2±0·1,P<0·05)均明显升高。分流+PPG组大鼠MPAP较分流组及假手术组分别升高了15·82%和20·55%(19·5mmHg±1·7mmHgvs16·4mmHg±1·7mmHg和19·5mmHg±1·7mmHgvs15·5mmHg±1·3mmHg,P<0·05),肺组织H2S含量降低(28·8μmol/mg±2·2μmol/mgvs37·6μmol/mg±2·1μmol/mg,P<0·05),而血浆NO(27·8μmol/L±4·8μmol/Lvs23·2μmol/L±3·6μmol/L,P<0·05)、肺组织NO(46·0μmol/μg±6·0μmol/μgvs38·5μmol/μg±6·5μmol/μg,P<0·05)、NOS活性(20·9U/mg±3·9U/mgvs15·1U/mg±2·4U/mg,P<0·05)及eNOS含量均明显升高(0·4±0·1vs0·3±0·1,P<0·05)。结论内源性H2S可能通过抑制NO/NOS体系调节左向右分流大鼠肺动脉压力。     

2型糖尿病线粒体基因变异的研究

目的：探索中国人２型糖尿病与线粒体变异的关系。方法针对已经报道的线粒体基因的高发突变区（ｍｔ３１５３－３５５１）近４００ｂｐ的片段在中国人正常人群、２型糖尿病群体及１２个母系遗传的２型糖尿病系中进行聚合酶链反应－单链构象多态性（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ－ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）研究,发现异常构象再进