生长抑素类似物诱导胆管癌细胞凋亡和bcl-2/bax表达的研究

目的探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995 (SMS)对人胆管癌SK ChA 1细胞凋亡和凋亡调控基因bcl 2和bax的影响。方法用DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测AnnexinV标记凋亡细胞、免疫组化和原位杂交方法研究SMS(10 0ng/ml)处理 6、12和 2 4h后人胆管癌SK ChA 1细胞凋亡和bcl 2 /bax表达的变化。结果SMS作用SK ChA 1细胞 6h对DNA无明显影响 ,作用 12和 2 4h后DNA凝胶电泳出现呈典型梯状条带。SMS作用 6、12和 2 4h后 ,AnnexinV标记的凋亡细胞分别为 (2 2±5 ) % ,(39± 7) %和 (5 8± 10 ) %。同时 ,SMS可使细胞bcl 2蛋白表达下降 ,使bax蛋白和mRNA表达升高。结论SMS能诱导SK ChA 1细胞发生凋亡 ,bax和bcl 2凋亡基因介导了SMS对SK ChA 1细胞凋亡的发生     

腹主动脉瘤动脉壁血管平滑肌细胞增殖及凋亡的研究

目的研究腹主动脉瘤 (abdominalaorticaneurysm ,AAA)在发病不同时期动脉壁平滑肌细胞 (smoothmusclecells,SMC)增殖与凋亡的改变。方法建立大鼠AAA模型 ,分别于术后 3d、1、2、3、4周切取腹主动脉 ,应用原位DNA片段末端标记 (TUNEL)和免疫组织化学方法检测腹主动脉壁中SMC凋亡和相关基因bcl 2、bax蛋白以及增殖细胞核抗原 (PCNA)、α 血管平滑肌肌动蛋白(α actin)的表达。结果TUNEL及PCNA表达高峰时段分别为术后 2～ 3周和 1周 ;术后 3d至 1周凋亡细胞少于PCNA阳性SMC ,2～ 4周多于PCNA阳性SMC且SMC数量明显减少 ;bcl 2与bax蛋白表达分别于术后 1、3周达到峰值 (P <0 0 1)。结论动脉壁SMC增殖和凋亡的失衡与AAA发病密切相关 ;bcl 2与bax基因参与了对AAA动脉壁中SMC凋亡的调控。     

阻塞性黄疸大鼠肝组织细胞凋亡及相关基因bcl-2、bax的表达

目的　探讨阻塞性黄疸肝损害的调控机制。方法　用末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记(TUNEL)技术和免疫组织化学方法检测 4 0只阻塞性黄疸大鼠肝脏组织细胞凋亡状态及凋亡相关基因bcl 2和bax蛋白的表达。结果　胆总管结扎后 ,随结扎时间的延长细胞凋亡增加 ,结扎 14d后细胞凋亡达高峰 ,凋亡指数 (AI)达 5 8.2 3± 1.5 8,各组AI差异有显著性 (P <0 .0 5 )。在阻塞性黄疸过程中 ,bcl 2蛋白表达越强 ,bax蛋白表达越弱 ,AI亦越少。结论　bcl 2和bax蛋白均参与了阻塞性黄疸肝组织中细胞凋亡的调节。     

反义寡核苷酸抑制结肠癌细胞bcl-2基因的表达并增强凋亡的研究

目的　观察反义寡核苷酸抑制结肠癌细胞bcl 2基因的表达并诱导凋亡和增强化疗的敏感性。方法　应用反义硫代寡核苷酸 (bcl 2SON)和顺铂共同处理结肠癌细胞系SW62 0 ,通过流式细胞仪观察其bcl 2蛋白表达的变化 ,并通过原位末端标记法 (TUNEL)染色和流式细胞仪检测细胞凋亡指数。结果　用bcl 2SON处理过的SW62 0细胞其bcl 2蛋白平均荧光强度 (MFI)为(40 .3± 8.7) %与空白对照及随机链对照组相比 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 1 ) ,表明导入反义bcl 2后可明显抑制结肠癌细胞的bcl 2蛋白的表达。经bcl 2SON和 1 0mg/L顺铂共同处理的SW62 0细胞凋亡指数为 (64 .7± 8.4) % ,显著高于单纯顺铂处理组的 (2 3 .6± 6 .3) % (n =5 ,P <0 .0 1 )以及单纯bcl 2SON处理组的 (2 7.5± 5 .1 ) % (n =5 ,P <0 .0 1 )。而未经处理的对照组SW62 0细胞凋亡指数则为 (8.5± 1 .2 ) % ,显著低于后两组 (n =5 ,P <0 .0 5)。结论　bcl 2SON可通过抑制结肠癌细胞 (SW 62 0 )bcl 2蛋白的表达 ,诱导其凋亡 ,增强对化疗药物的敏感性     

大鼠脑损伤后脑神经细胞内bcl-2和bcl-xL水平的变化及意义

目的　观察大鼠急性脑损伤后脑神经细胞内bcl 2、bcl xL的表达状况及意义。　方法55只大鼠采用弥漫性脑损伤模型制成轻、重度 2组大鼠脑损伤模型 ,以免疫组化方法 ,检测脑神经细胞中bcl 2、bcl xL的表达水平 ;以原位细胞凋亡 (TUNEL)法检测神经细胞凋亡水平。　结果　正常大鼠神经细胞中很少有bcl 2表达 (额顶区 4 40± 1 67,海马区 3 2 0± 1 30 ) ;但可见bcl xL表达 (额顶区45 60± 4 34 ,海马区 50 2 0± 3 50 )。大鼠大脑遭受打击后 ,神经细胞bcl 2表达明显增高 ,以伤后第 1天最为明显 (轻度组 :皮层 :30 0± 4 3 ,海马 :46 6± 3 2 ) ,轻度组高于重度组。各观测时间点bcl 2表达水平与神经细胞凋亡水平呈负相关 (r在 - 0 847～ - 1 0 0 0之间 ,P <0 0 1 ,n =1 0 )。bcl xL表达变化不明显。　结论　大鼠急性脑损伤后脑神经细胞内bcl 2表达增高 ,而bcl xL在损伤后变化不大 ,两者可能与急性脑损伤后保护神经细胞避免凋亡有关     

骨关节炎软骨细胞凋亡调控基因的研究

目的　比较分析正常人及老年性骨关节炎患者软骨细胞bax和bcl 2的表达及细胞凋亡状况。　方法　取 9例骨关节炎患者的关节软骨做实验标本 ,以 6例无骨关节炎病史的意外死亡者关节软骨作为正常对照 ;采用逆转录 /聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测bax和bcl 2mRNA表达 ,免疫组化检测bax和bcl 2蛋白 ;应用TUNEL方法进行凋亡细胞原位检测。　结果　骨关节炎患者和正常对照软骨细胞都能表达bax和bcl 2mRNA ;骨关节炎关节软骨细胞baxmRNA表达量较正常对照显著增高 (P <0 0 1) ,bcl 2mRNA表达量也高于正常对照组 (P <0 0 5 ) ,两组间bax/bcl 2表达量的比值差异无显著性意义 (P >0 0 5 ) ;免疫组化可检测到相应表达水平的蛋白 ;骨关节炎软骨细胞凋亡 (4%～ 14% )多于正常对照 (0～ 2 % )。　结论　软骨细胞凋亡受bax和bcl 2共同调节 ;bax和bcl 2的共同调节结果可能是OA患者软骨细胞凋亡增加 ,但凋亡率不高、病理过程进展缓慢的一个重要的原因     

重组人红细胞生成素对大鼠心肌梗死的治疗作用

目的　观察重组人红细胞生成素 (rHu EPO)治疗心肌梗死大鼠心功能和心肌细胞凋亡情况 ,探讨其机制。方法　 3 2只SD大鼠分空白组 (Sham )、心肌梗死组 (MI)和治疗组 (MI EPO) ,结扎左冠前降支制备心肌梗死的模型 ,治疗组每天腹腔注射 5 0 0 0IU /kg体重rHu EPO共 7d ,14d后所有大鼠检测血流动力学指标 ,心脏切片原位末端标记 (TUNEL)检测凋亡 ,免疫组织化学检测bcl 2、bax表达。结果　心肌梗死组凋亡指数 (AI)为 1.65 % ,bcl 2及bax蛋白阳性表达指数 (PEI)分别为 0 .96%和 1.3 4% ,均明显高于空白组 (P <0 .0 5 ) ;治疗组心功能保存较好 ,AI与bax蛋白PEI分别为 0 .84%和 0 .68% ,均下降 (P <0 .0 5 ) ,而bcl 2蛋白PEI增高 (P <0 .0 5 )为 1.43 %。结论　rHu EPO可抑制心肌细胞凋亡 ,保存心功能。可能是通过下调bax表达和上调bcl 表达实现的。     

槐耳清膏诱导人直肠癌HR8348细胞凋亡的实验研究

目的　探讨槐耳清膏在体外对人直肠癌HR83 48细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用及其作用机理。方法　将处于对数生长期的HR83 48细胞用含槐耳清膏的培养基培养 3 6h ,用四氮唑蓝 (MTT )比色法检测吸光度 (OD)值 ,计算抑制率 ;用甲基绿 派若宁染色法及TUNEL法检测细胞凋亡指数 ;用免疫组织化学方法检测bcl 2、bcl xl、bax、bak及 p5 3基因表达的情况。 结果　槐耳清膏对HR83 48细胞的抑制率随浓度增加而上升 ,浓度为 4.0mg/ml时抑制率最大 (71.1% ) ,与 5 FU组 (浓度为 10 μg/ml)相比差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。甲基绿 派若宁染色法和TUNEL法均可见到典型的细胞凋亡、凋亡小体或出泡现象 ,凋亡指数随槐耳清膏浓度的增加而增加 ,当浓度达 4.0mg/ml时 ,凋亡指数迅速上升 ,甲基绿 派若宁法为 0 .162 0± 0 .0 12 8,TUNEL法为 0 .2 612± 0 .0 15 8,均大于 5 FU组的凋亡指数(0 .0 780± 0 .0 0 95和 0 .10 2 8± 0 .0 13 1) ,P<0 .0 5。槐耳清膏组bcl 2、bcl xl、bak、p5 3蛋白表达较空白对照组明显增强(P<0 .0 5 ) ,而bax变化不明显 (P>0 .0 5 )。槐耳清膏组bak/bcl 2和bak/bcl xl比值显著大于空白对照组。结论　槐耳清膏在体外对人直肠癌HR83 48细胞具有显著的抑制作用和凋亡诱导作用。槐耳清膏     

生长激素对短肠大鼠残留小肠形态及生长代谢的影响

目的　探讨单纯肠外营养 (PN)与添加生长激素 (GH)的PN对短肠大鼠残留小肠代偿的作用及作用机制。方法　将 2 0只短肠SD大鼠随机分成PN组及PN rhGH组。行细胞增殖核抗原 (PCNA)测定、原位末端标记 (TUNEL)染色及bcl 2、BaxmRNA测定。结果　PN组残留小肠粘膜明显萎缩 ,PN rhGH组肠萎缩显著改善。PCNA表达在PN组降低 [(8.37± 2 .2 3)个 /视野 ],PN rhGH组增高 [(19.2 8± 3.2 5 )个 /视野 ],差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。凋亡指数在PN组增高 [(2 2 .32± 3.84)个 / 10 0细胞 ],PN rhGH组降低 [(8.0 6± 2 .2 3)个 / 10 0细胞 ],差异有非常显著性(P <0 .0 1)。bcl 2mRNA表达在PN组降低 (0 .2 0± 0 .0 3) ,在PN rhGH组增高 (0 .44± 0 .0 6 ) ,BaxmRNA表达则相反。结论　单纯PN使短肠大鼠残留小肠粘膜明显萎缩 ,rhGH通过促进肠粘膜上皮细胞增生与抑制肠粘膜上皮细胞凋亡 ,显著促进残留小肠的代偿适应。     

5-氟尿嘧啶诱导直肠癌HR8348细胞凋亡作用的研究

目的　探讨 5 氟尿嘧啶 (5 fluorouracil ,5 FU )体外诱导直肠癌HR83 48细胞凋亡的作用及细胞凋亡与bcl 2、bcl xl、bax及 p5 3表达的关系。 方法　经 5 FU处理HR83 48细胞 2 4h后 ,用甲基绿 派若宁染色法和TUNEL法检测细胞凋亡情况 ,并用SP免疫组织化学法检测HR83 48细胞中bcl 2、bcl xl、bax和 p5 3的表达。 结果　HR83 48细胞经 5 FU作用 2 4h后 ,细胞凋亡指数 (AI)明显高于对照组 ,差异有显著性意义 (P<0 .0 1)。 5 FU作用不同时相bcl 2的表达评分结果与对照组比较差异均无显著性意义 ;不同时相bcl xl的表达评分结果与对照组比较稍降低 ;而bax的表达评分结果随时间延长明显增加 ,2 4h、3 6h的表达评分结果明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,而 p5 3在 5 FU组和对照组各时相均未见表达。结论　 5 FU具有诱导HR83 48细胞凋亡的作用 ;5 FU可能通过上调bax的表达并改变bax/bcl xl的比值而诱导HR83 48细胞凋亡。