过氯酸铵对大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞影响的研究

目的通过探讨过氯酸铵(AP)对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)损伤及对肺成纤维细胞(FB)增殖的影响,研究AP的致肺纤维化作用。方法用AP浓度分别为0.5,1.0,2.0 mg/ml和SiO2浓度为0.1 mg/ml 的培养液培养AM,对照组采用RPMI1640培养液培养,24 h 后收集培养上清液,分别检测AM内MDA含量、GSH-Px活力以及上清液中LDH活力。并用AM上清液培养FB,检测FB增殖活力和FB内羟脯氨酸含量.结果 1.0,2.0 mg/ml AP组及SiO2组MDA含量(2.21,2.58,2.32 nmol/ml)均比对照组(1.97 nmol/ml)增加,差异有显著性或非常显著性(P＜0.05或P＜0.01); 2.0 mg/ml AP组及SiO2组GSH-Px活力(29.47,30.79 U/106 AM)比对照组(26.70 U/106 AM)明显增强,差异有显著或非常显著性(P＜0.05或P＜0.01); 0.5,1.0,2.0 mg/ml AP组和SiO2组LDH活力(151.03,252.31,446.50,583.88U/106 AM)均明显高于对照组(77.06U/106 AM,P＜0.05或P＜0.01), 且随AP染毒剂量的增加而升高。SiO2组AM上清液使FB羟脯氨酸含量(0.900 μg/ml)及增殖活力(0.165)明显高于对照组(0.379 μg/ml,0.138,P＜0.05或P＜0.01)。结论 AP对肺泡巨噬细胞具有一定的细胞毒作用,而AP染毒的AM上清液未发现有促进FB的增殖和胶原合成的作用。     

肺泡巨噬细胞培养上清液对肺成纤维细胞的作用

肺泡巨噬细胞培养上清液对肺成纤维细胞的作用张尚明罗玲户万秘曹兆丰徐建余矽肺患者易合并肺结核病可能与肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）过多耗损、补体功能降低、肺部淋巴管网堵塞及矽肺利于结核菌繁殖有关［１］。矽肺合并肺结核后，结核又反过来促进矽肺的发展和恶化，其机制...     

石英对人胚肺成纤维细胞DNA损伤作用

目的探讨石英粉尘对DNA及染色体的损伤作用,为尘肺病防治提供理论依据。方法标准α石英刺激人胚肺成纤维细胞(HELF),采用免疫荧光技术检测H2AX磷酸化(γH2AX)水平以及分析中性彗星实验Olive矩,作为DNA双链断裂(DSBs)损伤程度的指标,微核实验观察染色体损伤情况。结果依次用0、100、200、400μg/mL石英刺激HELF细胞,γH2AX水平呈增高趋势,半定量结果分别为(521.9±233.1)、(823.3±201.5)、(1 375.5±311.5)、(1 545.6±145.7);Olive矩亦呈增高趋势,分别为(1.74±0.24)%、(2.67±0.36)%、(9.23±0.72)%、(14.16±1.05)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。相同剂量的石英刺激下,微核率增加,但差异无统计学意义。结论石英粉尘可引起DNA双链断裂,且存在剂量-效应关系。     

过氯酸铵对肺成纤维细胞的作用研究

[目的]探讨过氯酸铵(ammoniumperchlorate ,AP)对肺成纤维细胞(fibroblast ,FB)纤维化作用。[方法]原代培养小鼠胚胎肺FB ,稳定传代3次后台盼蓝染色,以细胞成活率>95 %确定0～40 0mg/L作为染毒浓度,以不同浓度的AP(0、5 0、10 0、2 0 0、40 0mg/L)染毒肺FB 48h后,测定各组细胞总蛋白质含量、增殖指标(MTT法测培养细胞D值)及羟脯氨酸(HYP)含量。本试验同时以石英(3 0 0mg/L)对肺FB染毒作为阳性对照。[结果]各AP染毒组肺FB蛋白质含量为5 3 5 9～5 8.69μg/ml,D值为0 .13 6～0 .14 6,HYP含量为0 .610～0 .688μg/ml,各AP染毒组之间比较差异均无显著性。石英组蛋白质含量为63 .19μg/ml,与各AP染毒组比较差异无显著性,但其D值0 .194、HYP含量1.182 μg/ml与各AP染毒组比较差异有显著性(P <0 .0 1)。[结论]肺FB在AP直接染毒作用下,未见肺FB增殖和肺胶原纤维增生等改变。     

染煤尘肺泡巨噬细胞上清液对成纤维细胞磷酸肌醇的影响

目的探讨染不同浓度煤尘的肺泡巨噬细胞(染煤尘-AM)上清液作用成纤维细胞不同时点对肌醇-1,4-二磷酸(IP2)和肌醇-1,4,5-三磷酸(IP3)信号物质的影响.方法应用细胞培养技术,用小鼠胸腺细胞增殖法和放射免疫分析法,分别测定染煤尘-AM上清液中白细胞介素1(IL-1)、前列腺素E2(PGE2)的含量;用Dowex-1×8阴离子交换柱层析法,分析染煤尘-AM上清液作用于3H-肌醇标记成纤维细胞后IP2和IP3的液闪计数值(cpm).结果 AM培养上清液中IL-1,PGE2含量随染煤尘浓度的增加而增高,与对照组比较差异有显著性.用这种含细胞因子的染煤尘-AM上清液作用成纤维细胞,在不同的作用时点,对IP2的影响不同,在10,20 s 时点,上清液中IL-1和PGE2对IP2显示有上调作用,随着作用时间的延长,IP2出现了下调现象.对IP3的影响表现为,在不同的作用时点均随上清液中细胞因子的增加IP3呈现增加趋势.煤尘组与对照组比较,在不同的观察时点显示有不同的差异显著性.结论染煤尘-AM培养上清液中含有高于对照组的IL-1和PGE2细胞因子,用这种上清液作用于成纤维细胞后,可影响成纤维细胞中磷酸肌醇信号物质的含量,影响程度与细胞因子的浓度和作用时间有关.     

煤尘刺激肺泡巨噬细胞对人胚肺成纤维细胞的作用

目的了解煤尘对肺成纤维细胞增殖的影响。方法采用不同浓度煤尘刺激兔肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）,观察其上清液对体外培养的人胚肺成纤维细胞（ＨＥＬＦ）的作用,测定ＨＥＬＦ的增殖程度、培养液上清中羟脯氨酸（Ｈｙｐ）含量,了解胶原合成能力。结果空白对照、ＰＡＭ、煤尘组和阳性对照组（二氧化硅）ＨＥＬＦ的增殖程度均数分别为０．２８５、０．３６８、０．３９８、０．７６８,Ｆ＝９３．９２,Ｐ＜０．０１。其中２００ｍｇ／Ｌ煤尘作用于ＰＡＭ后,其上清液对ＨＥＬＦ有显著刺激增殖作用（Ｐ＜０．０１）;１００、２００ｍｇ／Ｌ煤尘对ＨＥＬＦ的增殖率分别为９．７４％、１７．００％。１００ｍｇ／Ｌ组Ｈｙｐ含量为（３０．３９±０．２７）ｍｇ／Ｌ,明显高于ＰＡＭ对照组［（２７．５８±１．４６）ｍｇ／Ｌ］,Ｐ＜０．０５。结论一定浓度煤尘体外作用于ＰＡＭ,可刺激成纤维细胞增殖,同时伴有胶原合成能力的增加。     

二氧化硅诱导的巨噬细胞活性因子对成纤维细胞生物合成的影响

本文报告了经二氧化硅粉尘作用过的大鼠腹腔巨噬细胞的培养介质对2BS成纤维细胞的生物合成的多方面影响。实验结果表明二氧化硅粉尘诱导巨噬细胞释放的活性物质不仅能在数量上刺激成纤维合成胶原、DNA、GAG,而且在质的方面促进成纤维细胞合成的前胶原向胶原转化,影响胶原和GAG各类型的构成比,因而有利于胶原的稳定和聚集。这些结果有助于对二氧化硅致纤维化作用的机理的认识。     

石英对肺泡巨噬细胞脂类过氧化物的作用

用豚鼠肺泡巨噬细胞测定石英颗粒在体外对脂类过氧化速率的作用。用不接触粉尘和接触金刚砂颗粒的豚鼠肺泡巨噬细胞作为对照。粉尘颗粒皆<5微米。各样品在37℃保温1小时后,用硫代巴比妥酸试验测定丙醛。丙醛是不饱和脂肪酸过氧化反应的主要产物之一。结果表明接触石英使肺泡巨噬细胞过氧化反应代谢增高,与对照相比有显著差别。作者认为,对脂类过氧化反应的刺激可能是因石英与膜的多不饱和脂肪酸的作用     

硒降低石英对巨噬细胞的毒性作用

本文以细胞活性、粘附、移动和脂质过氧化物释放作为细胞和膜完整性的指标,研究了硒对石英引起的巨噬细胞毒性的影响。实验结果表明,亚硒酸钠能部分地拮抗石英对巨噬细毒胞的性作用,培养细胞用     

硒对石英致巨噬细胞毒性的作用

已知硒有对抗过氧化物对细胞膜的破坏作用,而石英的细胞毒性和对肺组织损害的机制可能与脂质过氧化有关。所以,作者用不同浓度系列的亚硒酸盐、石英和石英 亚硒酸盐孵育豚鼠腹腔巨噬细胞,以细胞活力、粘附性、移动性和脂质过氧化物含量为指标,一方面了解硒的无毒性剂量,另一方面观察硒对石英致巨噬细胞毒性的保护作用。结果:1.亚硒酸盐对细胞活力的无毒性剂量为10~(-6)M,对细胞移动抑制无作用剂量为     

石英对肺泡巨噬细胞膜结构的影响

用支气管肺泡冲洗方法与扫描电镜技术观察石英对大鼠肺泡巨噬细胞表面结构的影响。结果表明,石英能激发细胞的吞噬活性,加速细胞崩解,被激活细胞的表面皱摺或指状突起变粗大,继而减少,表面光秃,失去细胞表面特征。有的细胞表面皱摺减少或消失,指状突起变细短卷曲,出现空洞样膜缺损,整个细胞呈蜂窝结构。这种细胞可能是石英引起肺泡巨噬细胞表面结构破坏的特征性改变。     

纳米二氧化硅诱导巨噬细胞焦亡对肺成纤维细胞的影响

目的 探讨纳米二氧化硅(SiNPs)诱导巨噬细胞焦亡对原代肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的影响。方法 构建SiNPs致巨噬细胞焦亡模型后,采用纳米高光谱定位巨噬细胞中SiNPs、光学显微镜观察巨噬细胞SiNPs暴露后形态、Western blot检测焦亡相关蛋白表达。通过胰酶和Ⅳ型胶原酶消化法提取小鼠原代肺成纤维细胞;以光学显微镜和免疫荧光技术表征并鉴定原代肺成纤维细胞;体外构建SiNPs诱导巨噬细胞焦亡与原代肺成纤维细胞共培养模型。以正常巨噬细胞上清干预原代肺成纤维细胞作为MF组,焦亡巨噬细胞上清干预原代肺成纤维细胞作为PF组,采用qRT-PCR、Western blot技术分别检测原代肺成纤维细胞中MMP2、MMP9的mRNA水平和蛋白表达,免疫荧光、免疫细胞化学染色检测肌成纤维细胞标志物α-SMA蛋白表达。结果 纳米高光谱、形态学观察和Western blot检测结果显示, SiNPs 成功诱导J774A.1 巨噬细胞发生焦亡,光学显微镜观察发现,与胰酶消化法相比,Ⅳ型胶原酶法提取小鼠原代肺成纤维细胞的纯度更高;免疫荧光结果提示Ⅳ型胶原酶法获得的成纤维细胞波形蛋白呈现典型的微丝结构,细胞骨架结构完整。qRT-PCR 结果显示,PF组MMP2 和MMP9 mRNA水平较MF组增加(P<0.05), Western blot结果显示,PF组MMP2和MMP9蛋白表达水平较MF组升高(P<0.05), 免疫荧光结果显示,与MF组相比,PF组α-SMA红色荧光强度增加,免疫细胞化学染色为强阳性。结论 SiNPs诱导巨噬细胞焦亡能够促进原代肺成纤维细胞MMP2和MMP9表达水平上调,并促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化。     

BCG刺激的肺泡巨噬细胞培养上清液对肺成纤维细胞影响

７．５～６０ｍｇ／Ｌ卡介苗（ＢＣＧ）刺激的肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）培养上清液能显著促进肺成纤维细胞（ＰＦＢ）增殖和胶原合成。发现该上清液中含较高水平的肿瘤坏死因子（ＴＮＰ），且其促ＰＦＢ增殖作用与ＴＮＦ水平成正相关，提示ＢＣＧ在体外能刺激ＰＡＭ产生ＴＮＦ，ＴＮＦ为该上清液促ＰＦＢ增殖的主要因素；５０ｍｇ／ＬＳｉＯ２刺激的ＰＡＭ上清液亦能促进ＰＦＢ增殖和胶原合成，但上清液中几乎检测不到ＴＮＦ，说明其促ＰＦＢ增殖和胶原合成的成分是不同于ＴＮＦ的其它物质；ＴＮＦ能协同该物质促ＰＦＢ增殖和胶原合成。上述结果提示，结核菌刺激ＰＡＭ产生ＴＮＰ可能是矽肺结核病较单纯矽肺发展迅速的一个重要原因。     

过氯酸铵对小鼠肺成纤维细胞的形态学影响

目的研究过氯酸铵(ammonium perchlorate,AP)对肺脏成纤维细胞(FB)形态学的影响。方法原代培养小鼠胚胎肺FB,稳定传代3次,用AP染毒肺FB,染毒剂量分为50、200、500 mg/L,同时以石英(300 mg/L)染毒肺FB作为阳性对照组;以正常培养的肺FB作为阴性对照组。染毒48 h后,对肺FB进行HE染色和胶原纤维特殊染色,观察其形态学变化。结果FB细胞HE染色和胶原纤维特殊染色可见,各AP染毒组细胞形态、细胞大小、核浆对比、胶原纤维密集度、粗细程度与阴性对照组比较,差别均无统计学意义,而阳性对照组细胞出现胞体变大、数目增多、细胞胞浆更加丰富,细胞之间界限不清,胶原纤维更加密集、粗大等纤维化表现。结论在AP 50~500 mg/L直接染毒作用下,肺FB未见增殖和肺胶原纤维增生等形态学上的变化。     

矿物粉尘诱导的肺泡巨噬细胞因子对肺成纤维细胞作用的研究

了解矿物粉尘诱导的肺泡巨噬细胞因子在肺纤维化中的作用。方法用肺泡灌洗法获取兔ＡＭ，经体外培养，取其上清注，分别用同位素掺入法和四甲基偶氮唑盐比色法测定上清液中肿瘤坏死因子和白细胞介素的活性，并将此上清液与人胚肺成纤维细胞培养，用氟－胸腺嘧啶     

肺泡巨噬细胞在石棉所致肺纤维化过程中对肺成纤维细胞的作用

近年来,人们对肺泡巨噬细胞(AM_s)在尘肺发病中的作用越来越感兴趣,并对其相互间的关系作了大量的研究,从而推进了对尘肺发病的认识。但国内对石棉肺发病的研究却不多,如石棉纤维如何引起肺纤维化、AM_s在此过程中又起什么作用等问题均所知甚少,本文     

石英对肺泡巨噬细胞脂质过氧化物的体外作用

本文中用豚鼠肺泡巨噬细胞测定了脂质过氧化物的比值对石英颗粒体外的作用。要知道肺从外环境中吸入大量的有害物质,首先出现巨噬细胞的数量和分配的反应,伴随着生物化学的改变,这些改变包括增加氧耗量葡萄糖变换为二氧化碳及过氧化物的形成,然而过氧化物过度的产生肯定是有毒的,一般通过游离基团复杂的机理损害生物系统的脂质过氧化物。     

青石棉处理的肺泡巨噬细胞上清液对人胚肺成纤维细胞的作用

为了探讨青石棉对肺损伤的机理,用兔肺泡巨噬细胞(AM)和人胚肺成纤维细胞(HEPF)组成体外模型,采用MTT颜色反映法测定青石棉处理兔AM24h后的培养上清液刺激HEPF细胞增殖情况,同时用标准石英作为阳性对照,二氧化钛作为阴性对照,以不用粉尘处理的AM培养上清液作为正常对照.结果发现青石棉能明显刺激HEPF增殖,呈剂量效应关系(P<0.01).青石棉浓度在100μg/ml时,青石棉组HEPF的净增殖率达60.91%,是正常对照组的348倍,高于阳性对照和阴性对照100μg/ml青石棉处理兔AM的培养上清液的不同稀释度对HEPF增殖的影响不同,随稀释度的加大,其促细胞增殖的能力越弱,以1:2稀释度作用最强,明显高于阳性对照和阴性对照(P<0.01).提示青石棉处理肺泡巨噬细胞的培养上清液中存在有促进肺成纤维细胞增殖的生物活性物质,若能阻止这些生物活性物质的合成和分泌将对石棉相关疾病的预防和治疗具有重要意义.     

粉尘对巨噬细胞超微结构及功能的影响

近年来,对于肺泡巨噬细胞在矽肺发病中的作用进行了大量的研究,这些研究推进了对矽肺发病的认识,为矽肺防治研究提供了理论基础。本文用电子显微镜观察了石英、二氧化钛对体外培养的肺泡巨噬细胞超微结构的影响,以了解其对细胞器的损伤作用;同时用氚标记亮氨酸掺入巨噬细胞的方法,观察了石英、石棉、石墨、二氧化钛粉尘对细胞合成蛋白功能的影响。 材料与方法 1.肺泡巨噬细胞(PAM)在无菌操作下,以肺灌洗法取健康雄性豚鼠PAM,用RPMI—1640培养液以贴壁培养方法提纯PAM,加不同浓度的石英、二氧化钛粉尘     

石英粉尘对豚鼠肺泡巨噬细胞膜蛋白的影响

本文观察了离体的豚鼠肺泡巨噬细胞膜与石英粉尘相互作用时,膜蛋白所发生的变化。结果表明,石英盼尘表面可以吸附膜蛋白,并存在着剂量效应和时间效应的关系。在石英粉尘的作用下,膜蛋白的空间构象发生了改变;随着石英粉尘剂量的增大,膜蛋白的α-螺旋量逐渐减少。提示,在石英粉尘对细胞膜的损伤过程中,对膜蛋白的影响是一个重要因素。