熟地黄对D-半乳糖衰老模型大鼠脑细胞周期蛋白表达的影响

目的：从脑细胞周期的角度揭示熟地黄防治脑衰老的作用机制。方法：36只SD大鼠随机分为正常组、模型组、天保宁组和熟地黄组，采用D-半乳糖造模同时服用相应药物45d。在检测大鼠行为学、脑组织生化指标、细胞衰老特异代谢产物SA-β-gal阳性表达细胞数的基础上，采用流式细胞术检测细胞周期、免疫组化法检测海马CA1区P53，P21，P16的表达。结果：熟地黄能一定程度促进细胞周期从G0／G1期向S期进展，抑制海马CA1区CDK抑制基因蛋白P53，P21，P16的表达。结论：熟地黄能调控细胞周期相关基因P53，P21，P16表达。     

淫羊藿总黄酮通过抑制MAPK/NF-κB信号通路减轻自然衰老大鼠脑组织炎症反应

目的探讨淫羊藿总黄酮(total flavonoids of Epimedium,TFE)对自然衰老大鼠脑组织中MAPK/NF-κB信号通路影响及其抗炎作用。方法 HE染色观察各组大鼠海马CA1、CA3和DG区神经元形态的变化。Western blot法检测各组大鼠海马组织中衰老相关蛋白p21、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达,核转录因子NF-κB p65及其下游炎症因子TNF-α、IL-1β和COX-2的表达,以及MAPK信号通路相关蛋白的表达。结果 TFE可明显改善自然衰老组大鼠海马神经细胞形态结构,神经细胞排列整齐紧密。同时,TFE可明显下调自然衰老组大鼠海马组织中p21、Bax蛋白表达水平,上调Bcl-2蛋白表达水平及Bcl-2/Bax的比值,且可明显降低NF-κB p65核蛋白及其下游炎症因子TNF-α、IL-1β和COX-2的表达,以及MAPK信号通路相关蛋白(p-ERK1/2、p-JNK、p-p38 MAPK)的表达。结论 TFE对自然衰老大鼠炎症反应具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制MAPK信号通路的激活,从而抑制NF-κB的核易位及其下游炎症细胞因子表达,进而延缓脑衰老。     

红花注射液对脑复苏大鼠神经元凋亡相关基因的影响

目的：观察红花在大鼠脑复苏时对海马CA1区神经细胞凋亡相关基因的影响。方法：将实验大鼠随机分为手术对照组,心肺复苏组,心肺复苏＋红花组。采用呼气末夹闭气管法造成大鼠窒息心跳停止,制备大鼠动物模型,利用免疫组化法、原位末端标记法检测大鼠脑复苏不同时间内Fas、p53蛋白表达的水平及凋亡细胞数的变化。结果：（1）脑复苏10min再灌注6h,海马CA1区有少量p53蛋白表达的阳性细胞,再灌注12h后增多。（2）脑复苏10min再灌注3h,Fas蛋白表达的阳性细胞,再灌注12h,Fas蛋白表达的阳性细胞达高峰,后下降。（3）神经细胞凋亡数随脑复苏时间延长而增加。（4）给予红花治疗后,上述变化均减轻。结论：红花注射液对脑复苏的作用机制之一可能是抑制或延迟脑缺血时细胞凋亡、调控基因Fas、p53的表达而起到脑保护作用。     

复方首乌软胶囊对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠p16基因表达的影响

目的:研究复方首乌软胶囊对衰老小鼠p16基因表达的影响,探讨复方首乌软胶囊的抗衰老机制。方法:用D-半乳糖建立衰老小鼠模型,以复方首乌软胶囊治疗,实时荧光定量PCR法观察小鼠脑海马p16基因的mRNA表达。结果:复方首乌软胶囊组p16基因mRNA表达降低。结论:复方首乌软胶囊能降低p16基因的表达,从而起到抗衰老作用。     

二甲双胍调节自噬保护亚急性衰老大鼠睾丸功能的作用

目的:研究二甲双胍(Met)对D-半乳糖构建的亚急性衰老模型大鼠睾丸功能的影响及其分子调控机制。方法:颈部皮下注射D-半乳糖制备亚急性衰老大鼠模型。次月予以Met溶液灌胃治疗,每周监测大鼠的体重,测定大鼠睾丸重量、睾丸指数;ELISA法检测大鼠血清睾酮(testosterone, T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二醇(E₂)水平;HE染色法观察睾丸形态;免疫组化染色检测衰老相关蛋白[β-半乳糖苷酶(β-gal)、p16和p21]、睾丸自噬相关蛋白[磷酸酶张力蛋白同源物诱导激酶1(PINK1)、Parkin、自噬效应蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和p62]和睾酮合成关键酶[类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素侧链裂解酶(CYP11A1)和17-β-羟基类固醇脱氢酶3(HSD17β3)]的表达情况,并用Western blot检测上述蛋白的表达量。结果:与对照组相比,衰老模型组和Met组大鼠体重整体呈下降趋势;衰老模型组睾丸重量及指数下降(P<0.01),Met干预后显著上升(P<0.001)。衰老模...     

人参皂苷Rg1对细胞光老化模型中p53信号转导途径的影响

目的观察人参皂苷Rg1对光老化p53信号转导途径中相关基因损伤及蛋白表达水平的影响。方法采用8-MOP/UVA(8-methoxypsoralen and subsequent ultraviolet A irradiation)联合处理人皮肤成纤维细胞建立光老化模型,用流式细胞周期分析、SA-β-半乳糖苷酶(senescence associatedβ-galactosidase)化学染色,免疫荧光及Western blot等方法检测人参皂苷Rg1对培养真皮成纤维细胞多项细胞衰老指标及p53信号途径中蛋白表达的影响。结果人参皂苷Rg1可明显抑制细胞和组织老化的指标表达(包括SA-β-Gal表达减少及细胞周期G1阻滞率降低);减少基因氧化应激损伤产物8-oxo-dG及老化相关蛋白p53,p21WAF-1及p16INK-4a的表达。结论人参皂苷Rg1可能通过缓解基因的氧化应激损伤,抑制相关信号转导,从而缓解细胞光老化进程。     

氯化锂对沙土鼠全脑缺血后神经细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的观察氯化锂对沙土鼠全脑缺血时海马CA1区神经细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响。方法54只沙土鼠,随机分为假手术组（SH组）、缺血再灌注组（IR组）、氯化锂预处理组（LI组）,每组18只。依术后处死动物时间的不同,各组再分别分为1、3、7d亚组。采用免疫组化、TUNEL染色法观察海马CA1区肿瘤抑制基因p53蛋白、核因子-κB（NF-κB）的表达和细胞凋亡情况。结果（1）脑缺血再灌注后3、7d,LI组各亚组海马CA1区TUNEL阳性细胞明显少于相对应的IR各亚组（P〈0．01）;（2）脑缺血再灌注后1、3、7d,LI组各亚组p53蛋白的表达显著低于相对应的IR组各亚组（P〈0．01）。（3）脑缺血再灌注后3d,LI组NF-κB阳性细胞表达明显低于相对应的IR组（P〈0．01）。结论氯化锂预处理能显著减轻沙土鼠短暂全脑缺血后海马CA1区神经元凋亡;下调促凋亡基因p53蛋白及NF-κB蛋白的表达可能是氯化锂产生脑保护作用的机制之一。     

补肾健脾方对阿尔茨海默大鼠脑组织中cdk-5/p35表达的影响

目的 研究中药补肾健脾方对阿尔茨海默病(AD)大鼠脑组织标本中细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5(cdk-5)复合物(cdk-5/p35)表达的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组,AD模型组,假手术组,AD大鼠补肾健脾方小剂量干预组及大剂量干预组,每组5只.采用鹅膏蕈氨酸毁损大鼠脑Meynert基底核制备AD动物模型,中药补肾健脾方分别以3.6 g·kg-1·d-1、7.2 g·kg-1·d-1灌胃.30 d后以水迷宫测试大鼠学习及记忆能力,以RT-PCR、Western blot方法分别检测脑组织中cdk-5/p35基因和蛋白的表达.结果 AD大鼠模型脑组织中cdk-5/p35基因和蛋白的表达显著高于正常对照组;大剂量及小剂量干预组大鼠脑组织中cdk-5/p35基因和蛋白的表达较AD模型组显著下降.结论 补肾健脾方可显著改善大鼠学习记忆功能,同时下调cdk-5/p35基因和蛋白的表达,提示cdk-5/p35可能参与了补肾健脾方治疗AD的作用机制.     

在烟碱诱导的大鼠海马CA1区长时程增强形成中p42/44促细胞分裂剂活化的蛋白激酶通路被激活

目的：研究p42/44 MAPK通路在烟碱诱导大鼠海马CA1区长时程增强（LTP）形成中的作用。方法：细胞外场电位启示离体海马脑片CA1区锥体细胞层群体峰电位;蛋白质印迹检测p42/44 MAPK磷酸化程度及其总蛋白表达。结果：PD98059 25μmol/L和50μmol/L呈剂量依赖性抑制烟碱（10μmol/L）诱导大鼠海马CA1区LTP的形成;在烟碱诱导LTP形成的海马CA1区组织内p42和p44 MAPK磷酸化均明显增强并有p42和p44 MAPK总蛋白表达量的增加。结论：p42/44 MAPK通路参与烟碱诱导大鼠海马CA1区LTP形成的信号转导过程。     

补肾活血方对大鼠血管内皮细胞p16基因表达的影响

目的：观察补肾活血方对大鼠血管内皮细胞p16基因表达的影响。方法将健康雄性SD大鼠24只随机分为中药组、黄芪组及0.9%氯化钠溶液组,每组8只,分别给予每组大鼠等量补肾活血方、黄芪、0.9%氯化钠溶液灌胃。提取含药血清培养人脐静脉内皮细胞,采用β-半乳糖苷酶（β-gal）染色鉴定细胞衰老;流式细胞术分析细胞周期变化,RT-PCR法检测p16基因的表达。结果中药组、黄芪组血清培养细胞与0.9%氯化钠溶液组比较, G0/G1期细胞比例均减少（P〈0.05）,且中药组G0/G1期细胞比例低于黄芪组（P〈0.05）。中药组、黄芪组血清培养细胞p16基因表达较0.9%氯化钠溶液组下调（ P〈0.05）,且中药组血清培养细胞p16基因的表达较黄芪组下调（P〈0.05）。结论补肾活血方具有延缓大鼠血管内皮细胞衰老的作用,其分子作用机制可能为通过调控血管内皮细胞p16的表达而使细胞周期停滞于G1期。     

七氟烷后处理对大鼠心肌缺血再灌注时细胞凋亡的影响

目的探讨七氟烷后处理对大鼠在体心肌缺血再灌注时细胞凋亡的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为5组(n=8):假手术组(S组);缺血再灌注组(IR组);1%、2%、3%七氟烷后处理组(SP1、SP2、SP3组),建立心肌缺血再灌注模型,再灌注结束时测定血清LDH浓度、心肌p53蛋白表达水平和细胞凋亡。结果与S组比较,各组血清LDH浓度、心肌p53蛋白表达和细胞凋亡升高(P<0.05);与IR组比较,各SP组血清LDH浓度、心肌p53蛋白表达和细胞凋亡降低(P<0.05);与SP2组比较,SP1组和SP3组血清LDH浓度、心肌p53蛋白表达和细胞凋亡升高(P<0.05)。结论七氟烷后处理可通过下调p53蛋白表达抑制细胞凋亡,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,2%七氟烷后处理的效果更显著。     

芦荟多糖对脑缺血大鼠p53蛋白表达的影响

目的观察芦荟多糖（AP）对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用,并进一步探讨其作用机制。方法采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉（MCAO）,制备局灶性脑缺血模型,观察芦荟多糖对MCAO模型大鼠脑缺血后神经功能缺损导致的行为学变化,通过免疫组化法检测其对大脑皮质细胞凋亡相关蛋白p53表达的影响,以此探讨芦荟多糖对脑缺血的神经保护作用。结果芦荟多糖能明显降低神经功能缺损评分和抑制MCAO模型大鼠大脑皮质p53蛋白表达。结论芦荟多糖对急性脑缺血具有神经保护作用,其机制可能与芦荟多糖影响凋亡相关蛋白p53的表达有关。     

托瑞米芬联合顺铂对p53缺失型肺癌细胞株H1299生长抑制作用的研究

目的 探讨托瑞米芬联合顺铂对人肺癌细胞株H1299细胞生长抑制作用及其机制,了解P糖蛋白在H1299细胞中的表达情况.方法 本研究设空白组、对照组(单细胞悬液100μl)、实验组(单细胞悬液100μl+不同药物及浓度),实验组又分为托瑞米芬、顺铂和该2种药物联合组.用四甲基偶氮唑兰比色法检测托瑞米芬及与顺铂联用后H1299细胞的细胞增殖抑制率,分析其细胞周期的变化,检测P糖蛋白在H1299中的表达.结果 托瑞米芬的浓度为20和40 μmol/L时的细胞增殖抑制率分别为(0.307±0.011)％和(0.634±0.007)％,与对照组(0.068 ±0.031)％比较,组间差异均有统计学意义(P＜0.01).低剂量的托瑞米芬(5、10 μmol/L)联合不同浓度顺铂后的细胞增殖抑制率均高于单用顺铂组,并呈现浓度依赖性,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).托瑞米芬与顺铂联用促进H1299细胞凋亡,呈现浓度依赖性.托瑞米芬与顺铂联用后,与单用顺铂组相比,H1299细胞周期发生明显变化,G0/G1期比例增加,S期细胞比例下降,检测出44.9％的H1299细胞有P糖蛋白的存在.结论 低浓度的托瑞米芬(5、10μmol/L)与顺铂联用对H1299细胞有明显的协同抗肿瘤效应,其机制可能与抑制细胞增殖、改变细胞周期分布、促进细胞凋亡有关,且这种作用不依赖于p53基因和雌激素受体.     

p27蛋白在牙龈癌和癌前病变组织中的表达及临床病理学意义

目的探讨细胞周期相关蛋白027在牙龈癌及口腔黏膜癌前病变组织中的表达及其临床病理学意义。方法应用sP免疫组化法检测21例正常黏膜组织、26例癌前病变（白斑、红宽）组织及46例牙龈癌组织中p27蛋白的表达水平,分析p27蛋白与牙龈癌的病理分级和临床分期的关系。结果p27蛋白在正常口腔黏膜组织与癌前病变及牙龈癌组织中的阳性率和阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．05）,在正常口腔黏膜组织中的表达高于另2组p27蛋白的表达与患者性别、年龄等因素无相关性（P〉0．05）,但与病变的临床分级及病理分期密切相关（P〈0．05）。结论p27蛋白与癌前病变和牙龈癌的发生发展有密切关系,并与牙龈癌的临床分期成反比关系,与牙龈癌的病理分级成正比关系。     

Grape juice concentrate modulates p16 expression in high fat diet-induced liver steatosis in Wistar rats

Purpose: The goal of this study was to investigate whether subchronic treatment with grape juice concentrate is able to protect the liver from high fat diet injury in rats. The effects of grape juice concentrate treatment on histopathological changes, and immunohistochemistry for p53, p16 and p21 were evaluated.

Methods: Male Wistar rats (n?=?18) were distributed into three groups: group 1: negative control; group 2: cholesterol at 1% (w/w) in their diet, treated during 5 weeks; and group 3: cholesterol at 1% in their chow during 5 weeks, and grape juice concentrate at 222?mg per day in their drinking-water in the last week only.

Results: The results pointed out that treatment with grape juice concentrate did not show remarkable differences regarding liver tissue in the cholesterol-exposed group when compared to group 2. However, grape juice concentrate was able to modulate p16 immunoexpression when compared to high fat diet group. p53 and p21 did not show any significant statistical differences among groups.

Conclusion: Taken together, our results suggest that subchronic grape juice concentrate administration was able to modulate cell cycle control by downregulation of p16 immunoexpression in high fat diet-induced liver steatosis in rats.     

拓扑异构酶Ⅱβ抑制剂XK469对肿瘤细胞生长的抑制效应

目的研究人工合成的喹喔啉苯氧丙基的酸性衍生物XK469对于肿瘤细胞生长的影响及其机制。方法分别使用Northernblot和Westernblot法检测p53和p21在mRNA和蛋白水平的表达;结晶紫比色法检测细胞的生长情况;流式细胞术分析细胞周期。结果①在XK469处理人肺癌细胞H460后,在第8小时即出现明显的G2/M期阻滞,同时能够在一定剂量范围内对其有剂量依赖性生长抑制作用;能够分别在mRNA和蛋白水平诱导p53及其下游靶分子p21的表达;②以XK469处理HCT116p53+/+、p53-/-、p21+/+和p21-/-细胞后,虽然HCT116p53-/-细胞缺少p21的表达,但是和HCT116p53+/+相比对于XK469的敏感性却基本相同;和HCT116p21+/+相比HCT116p21-/-对XK469比较不敏感。结论XK469可以分别通过p53依赖和非依赖途径抑制肿瘤细胞的生长。由于肿瘤组织的p53突变的发生率很高,XK469的这种p53非依赖性G2/M周期阻滞和拓扑异构酶Ⅱβ抑制作用的多重机制或许可以解释其广泛的肿瘤抑制作用。     

p53基因蛋白在宫颈上皮内瘤样变的表达及意义的研究

目的探讨p53基因蛋白在宫颈上皮内瘤样变（CIN）的表达及意义。方法随机选取2010年3月。2012年9月在本院治疗的100例患者的手术标本为研究对象,实验组60份宫颈上皮内瘤样变标本采用免疫组化染色检测,依据CIN的级别分成3组,对照组40份标本采用TUNEL法检测各组细胞的凋亡情况,分成阳性组（宫颈癌）和阴性组（正常宫颈鳞状上皮）;分析5组间的p53阳性表达率。结果正常宫颈鳞状上皮的p53蛋白表达率为0,而宫颈癌p53蛋白表达率为40％,且CIN分级越高,p53阳性表达率也越高,且十＋＋的概率也越高;宫颈癌的细胞分级越高,p53蛋白表达率也越高,即癌细胞的分化率越差,p53蛋白表达率越高,CINI与CINⅡ、Ⅲ比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论p53基因蛋白表达与CIN的发生、发展有密切关系,是宫颈癌发生的早期事件。     

Survivin在非小细胞肺癌中的表达及其与p53的相关性

目的探讨凋亡相关基因survivin在NSCLC中的表达及其与p53的关系。方法选取52例NSCLC患者组织。检测survivin及p53蛋白的表达。结果正常肺组织中survivin的阳性表达率为0.00%,NSCLC中表达率为65.39%;survivin在p53阳性表达组和阴性表达组中的表达率分别为80%和35.29%,二者比较差异有统计学意义。结论 survivin过度表达提示NSCLC预后不良;p53的失活和survivin的过度表达可能在NSCLC癌变中起协同作用。